CZ20023577A3

CZ20023577A3 - Léčivo proti erektilní dysfunkci

Info

Publication number: CZ20023577A3
Application number: CZ20023577A
Authority: CZ
Inventors: John S. Whitaker; Tejada Inigo Saenz De; Kenneth M. Ferguson
Original assignee: Lilly Icos Llc
Priority date: 2000-04-26
Filing date: 2001-04-13
Publication date: 2003-06-18
Also published as: SK15392002A3; MXPA02010539A; NZ521869A; BR0110373A; KR20030007551A; CA2407519A1; WO2001080860A3; NO20025138L; IL152227A0; CN1446091A; US20030100478A1; NO20025138D0; AU2001253612A1; PL360186A1; EA200201011A1; US6451807B1; ZA200208776B; HUP0300477A3; EP1276481A2; WO2001080860A2

Description

•DennírÍbáčfea erektilní dysfunkci -i nhibi torom PDggVztah k příbuzným přihláškám

Tato přihláška je částečně pokračováním přihlášky US application sériové číslo 09/558911, zaregistrované 26. dubna 2000, která nárokuje prospěch dočasné patentové přihlášky se sériovým číslem 60/132036, zaregistrované 30. dubna 1999.

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká inhibitorů enzymu fosfodiesterázy (PDE) a jejich použití ve farmaceutických výrobních artiklech. Zejména se předkládaný vynález týká účinných inhibitorů cyklické guanosin 3',5'-monofosfát specifické fosfodiesterázy, typ 5 (PDE5), které, jsou-li začleněny do farmaceutického produktu, jsou užitečné pro léčbu sexuální dysfunkce.

Dosavadní stav techniky

Biochemické, fyziologické a klinické účinky inhibitorů cyklické guanosin 3',5'-monofosfát specifické fosfodiesterázy (cGMP-specifická PDE) naznačují jejich využití v celé řadě onemocnění, u kterých je žádoucí modulace funkce hladkého svalstva, ledvinných, hemostatických, zánětlivých a/nebo endokrinních funkcí. Typ 5 cGMP specifické fosfodiesterázy (PDE5) je hlavním cGMP hydrolyzujícím enzymem ve vaskulárním hladkém svalstvu a byla popsána jeho exprese v corpus cavernosum penisu (Taher et al., J Urol, 149-.285A (1993)).

PDE5 je atraktivním cílem v léčbě sexuální dysfunkce (Murray,

DN+P 6(3):150-56 (1993)).

Farmaceutický produkt, který poskytuje inhibitor PDE5 je v současnosti dostupný, a je na trhu prodáván pod ochrannou známkou VIAGRA^(r) . Aktivní složka v preparátu ,VIAGRA^(r) je sildenafil. Produkt je vyráběn jako výrobní artikl obsahující 25, 50 a 100 mg tablety sildenafilu a příbalový leták.

·· ·· ·· ·· ·· ···· ··· · · · · · · · ····· · · · · · · • · · · · · · · ·· · · _ ···· · · · ···· / ·· ·· ·· ···· ·· ··

Příbalový leták stanovuje, že sildenafil je účinnější inhibitor PDE5 než jiných známých fosfodiesteráz (větší než 80x pro inhibici PDE1, větší než lOOOx pro inhibici PDE2, PDE3 a PDE4). Hodnota IC50 pro sildenafil vůči PDE5 byla zaznamenána jako 3 nM (Drugs of the Future, 22(2), str. 128-143 (1997)), a 3,9 nM (Boolell et al., Int. J. of Impotence Res., 8 str. 4752 (1996)). Bylo popsáno, že sildenafil má 4000 x vyšší selektivitu pro PDE5 versus PDE3, a pouze ' lOx vyšší selektivitu pro PDE5 versus PDE6. Existuje teorie, že jeho relativní chybění selektivity pro PDE6 je základem abnormalit týkajících se barevného vidění.

Zatímco sildenafil získal významný komerční úspěch, problémy v léčbě erektilní dysfunkce (ED) stále existují. Zaprvé, léčba ED za použití sildenafilu je založena na léčbě závislé na požadavku (on-demand) nebo PRN léčbě. Dávkování on demand je definováno jako akutní podání léku pro léčbu erektilní dysfunkce před očekávanou sexuální aktivitou. Uživatel musí tedy plánovat dopředu a, jak v současnosti indikováno, požít relativně velkou perorální dávku (tj. alespoň 25 mg) sildenafilu alespoň jednu hodinu před zahájením sexuální aktivity. Začátek prospěšných účinků může být zpožděn, je-li sildenafil podán s jídlem.

Zadruhé, relativně velká on-demand dávka sildenafilu vede k významným nežádoucím vedlejším účinkům zahrnujících překrvení obličeje (10% incidence). Dokonce tedy i s dostupností sildenafilu zůstává potřeba identifikovat zlepšené farmaceutické produkty, které jsou užitečné a pohodlnější pro léčbu sexuální dysfunkce.

Předkládaný vynález farmaceutické použití perorální dávkovači poskytuje výrobní artikl pro obsahující příbalový leták, formu obsahující inhibitor lidské nádobku, PDE5 • · · · ·· ···· • · · · · · · • · · · · · • · · · · · · ·· ·· ·· ···· ·· ·· v jednotkových dávkách mezi zhruba 1 a zhruba 10 mg/dávkovací formu. Příbalový leták poskytuje dávkovači režim charakterizovaný chronickým podáváním inhibitoru PDE5. Prospěšné účinky chronického dávkovači režimu byly pozorovány v klinických studiích a prostřednictvím objevu, že podání inhibitoru PDE5 zlepšuje podmínky vaskulatury, takže tkáň hladkého svalstva corpus cavernosum odpovídá na léčbu v dávkách, které jsou pod dávkou vyžadovanou k dosažení stejné odpovědi při terapii on-demand nebo při akutní terapii. Prospěšnost nízké, chronické dávky inhibitoru PDE5 spočívá ve zlepšené vaskulární odpovědi k cGMP-stimulováné relaxaci v tkáni hladkého svalstva corpus cavernosum, nižší toxicitě z důvodu nižší dávky inhibitoru PDE5 a návratu k normálnímu stavu, tj. pacient nemusí plánovat sexuální aktivitu po podání inhibitoru PDE5. Dávkovači režim předkládaného vynálezu umožňuje spontánnost sexuální aktivity vyžadované pacientem.

Popis vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující příbalový leták, nádobku, perorální dávkovači formu obsahující inhibitor . PDE5 v jednotkových dávkách mezi zhruba 1 a zhruba 10 mg/dávkovací formu pro chronické a přednostně denní dávkováni.

Předkládaný vynález dále poskytuje způsob léčby mužské erektilní dysfunkce zahrnující podávání perorální dávkovači formy obsahující zhruba 1 až zhruba 10 mg inhibitoru PDE5 chronicky do celkové dávky 10 mg/den pacientovi potřebujícímu takovou léčbu.

Předkládaný vynález dále poskytuje způsob zlepšení relaxační odpovědi v tkáni hladkého svalstva corpus cavernosum, který zahrnuje chronické podávání dávky 1 mg/den až 10 mg/den inhibitoru PDE5.

··· · · · · ·· · • · · · · · · · ·· · • · • · • · · ·

Předkládaný vynález poskytuje výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující příbalový leták, nádobku, perorální dávkovači formu obsahující zhruba 1 a zhruba 10 mg inhibitoru PDE5, kde řečený příbalový leták popisuje chronické podávání inhibitoru PDE5 v léčbě pacienta trpícího erektilní dysfunkcí.

Předkládaný vynález poskytuje výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující příbalový leták, nádobku, perorální dávkovači formu obsahující selektivního inhibitoru PDE5; kde řečený příbalový leták popisuje chronické podávání inhibitoru PDE5 v léčbě pacienta trpícího erektilní dysfunkcí.

Předkládaný vynález dále poskytuje výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující:

a) perorální dávkovači formu obsahující zhruba 1 a zhruba 10 mg inhibitoru PDE5 majícího hodnotu IC50 menší než 10 nM a dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný v perorálních dávkách obsahujících zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotek.

b) příbalový leták, který popisuje, že inhibitor PDE5 je užitečný v léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu, a kterýžto inhibitor má chronický dávkovači režim od zhruba 1 do zhruba 10 mg/den, kde chronický dávkovači režim zlepšuje stav vaskulatury; a

c) nádobku.

a) perorální dávkovači formu obsahující zhruba 1 a zhruba 10 mg inhibitoru PDE5 majícího

i) hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM, a • ·

• · · · ii) dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný v jednotkových perorálních dávkách obsahujících zhruba 1 až zhruba 10 mg.

c) . nádobku.

Detailní popis vynálezu

Pro účely předkládaného vynálezu, jak je zde uveden a popsán, jsou následující termíny a zkratky definovány následovně.

Termín nádobka“ znamená jakoukoli nádobku a její uzávěr pro uschování, transport, přípravu a/nebo manipulaci s farmaceutickým produktem.

Termín IC50 je měřítkem účinnosti sloučeniny k inhibici konkrétního PDE enzymu (např. PDElc, PDE5 nebo PDE6). Hodnota IC50 je koncentrací sloučeniny, která vede k 50% inhibici enzymu v jednom experimentu s odpovědí závislou na dávce. Určení hodnoty IC₅₀ pro sloučeninu je snadno provedeno známými in vitro metodikami popsanými v Y. Cheng et al., Biochem. Pharmacol., 22, str. 3099-3108 (1973).

Termín příbalový leták znamená informaci doprovázející produkt, která poskytuje popis, jak podávat produkt spolu s údaji o bezpečnosti a účinnosti vyžadovanými, aby umožnily lékaři, farmaceutovi a pacientovi učinit informované rozhodnutí týkající se produktu. Příbalový leták je obecně míněn jako visačka farmaceutického produktu.

• 0 • · · ·

0 0*

00 • 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 θ 00 0· 00 0000 00 00

Termín perorální dávkovači forma je použit v obecném smyslu pro farmaceutické produkty podávané perorálně. Perorální dávkovači formy jsou rozpoznávány osobami znalými oboru a zahrnují takové formy, jako jsou tekuté preparáty, tablety, kapsle a želatinové kapsle.

Termín den a denní se týká podávání produktu jedenkrát nebo vícekrát, obecně třikrát, ještě přednostněji jedenkrát během zhruba 24-hodinového období. Zhruba 24-hodinové období se týká časového období od zhruba 20 do zhruba 28 hodin.

Termín chronický nebo chronicky se týká pravidelného podávání produktu v intervalech bez ohledu na začátek sexuální aktivity. Pro získání plného prospěchu z předkládaného vynálezu se chronické podání obecně týká pravidelného podávání po delší dobu, přednostně denně tři nebo více dnů a ještě přednostněji pokud pacient trpí erektilní dysfunkcí (při chybění terapie). Termín chronické podávání zahrnuje další režimy navíc k dennímu dávkování. Chronické podávání například zahrnuje podávání preparátu s chronickým uvolňováním, který poskytuje dostatečný inhibitor PDE5 na pravidelné bázi a bez vztahu k začátku sexuální aktivity. Na rozdíl od akutního a on-demand podávání chronické podávání neváže podávání inhibitoru PDE5 k začátku sexuální aktivity (například jednu hodinu před pohlavním stykem).

Termín inhibitor PDE5 se týká sloučenin majících hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM. Přednostní inhibitory PDE5 jsou selektivní pro inhibici PDE5, jako jsou například

inhibitory	maj ící:
1)	hodnotu	IC50 pro	inhibici	PDE5 alespoň	100	krát	menší, než
je	hodnota	IC50 pro	inhibici	PDE6;
2)	hodnotu	IC50 pro	inhibici	PDE5 alespoň	1000	krát	menší, než
je	hodnota	IC₅₀ pro	inhibici	PDElc; a

3) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menši než 10 nM.

Inhibitory PDE5 se liši významně v chemické struktuře a jejich použiti v předkládaném vynálezu není závislé, na této chemické struktuře, ale spíše na parametrech účinnosti zde uvedenými.

Termín abnormality vidění znamená abnormální vidění charakterizované modro-zeleným viděním, o kterém se domnívá, že může být způsobeno inhibici PDE6.

Termín volný lék“ znamená pevné částice ne těsně uložené do polymerního koprecipitátu.

Jak bylo uvedeno výše, je předkládaný vynález namířen na výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití, obsahující příbalový leták, nádobku a dávkovači formu obsahující zhruba 1 až zhruba 10 mg inhibitoru PDE5 na jednotkovou dávkovači formu. Inhibitor PDE5 užitečný v předkládaném vynálezu je inhibitor PDE5 mající, hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 menší než 10 nM, a je dostatečně biodostupný, aby byl účinný ve zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotkových dávkách.

Přednostní inhibitory PDE5 selektivně inhibují PDE5 versus PDE6 a PDElc. Selektivita je kvantifikována rozdílem v hodnotách IC50. Rozdíl je vyjádřen jako poměr PDE6/PDE5 hodnot IC50, tj. poměr hodnoty IC50 versus PDE6 k hodnotě IC50 versus PDE5 (PDE6/PDE5) a je větší než 100, přednostněji větší než 300 a nejpřednostněji větší než 500.

Podobně je poměr hodnoty IC₅₀ versus PDElc k hodnotě IC₅₀ versus PDE5 (PDElc/PDE5) větší než 1000. Přednostní inhibitory PDE5 mají více než 3000 krát větší diferenciál mezi inhibici PDE5 a PDElc, přednostněji více než 5000 krát vyšší rozdíl mezi hodnotou IC50 versus PDE5 a PDElc. Účinnost inhibitoru,

reprezentovaná hodnotou IC₅₀ versus PDE5, je menší než 10 nM, přednostně méně než 5 nM, přednostněji méně než 2 nM a nejpřednostněji méně než 1 nM.

Příbalový leták poskytuje popis, jak podávat farmaceutický produkt, spolu s bezpečnostními a účinnostními daty vyžadovanými lékařem, farmaceutem a pacientem k učinění informovaného rozhodnutí týkajícího se použití produktu. Příbalový leták začleněný do předkládaného výrobního artiklu indikuje, že inhibitor je užitečný v léčbě stavů, kde je požadována inhibice PDE5, obzvláště sexuální dysfunkce a obzvláště mužské erektilní dysfunkce a poruchy ženské pohlavní vzrušivosti.

Příbalový leták také poskytuje instrukce k podávání jedné nebo více zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotkových dávkovačích forem, chronicky, a přednostně denně, po dobu alespoň třech dnů, do maximální celkové dávky 10 mg na den. Podávaná dávka je zhruba 1 až zhruba 10 mg/den, přednostněji zhruba 2 až zhruba 10 mg a nejpřednostněji zhruba 5 mg až zhruba 10 mg dávkovači formy podávané denně.

Protože tento nárokovaný výrobní artikl poskytuje chronický dávkovači režim, který je účinnější, než je ekvivalent ondemand nebo akutní dávky, je znatelně snížena incidence vedlejších účinků. Přednostní výrobní artikl proto poskytuje příbalový leták mající hlášenou incidenci překrvení pod 2%, přednostně pod 1% a nejpřednostněji pod 0,5% u pacientů, kterým byla podávána dávkovači forma. Incidence překrvení demonstruje zvýšené zlepšení oproti předchozím farmaceutickým produktům obsahujícím inhibitor PDE5.

Nádobka použitá v předkládaném výrobním artiklu je konvenční ve farmaceutickém oboru. Nádobka je obecně plato, fóliové • 9 99 99 99

99« 9 9 9 9 ·· « • 9999 99 9 99 9 balení, skleněná nebo plastová lahvička a příslušné víčko nebo uzávěr nebo další takový artikl vhodný pro použití pacientem nebo farmaceutem. Nádobka má přednostně velikost, aby pojmula 1-1000 pevných dávkovačích forem, přednostně 1 až 500 pevných dávkovačích forem a nejpřednostněji 5 až 30 pevných dávkovačích forem.

Je rozeznáváno osobami znalými oboru, že perorální dávkovači formy zahrnují například takové formy, jako jsou tekuté preparáty, tablety, kapsle a želatinové kapsle. Dávkovači formy jsou přednostně pevné dávkovači formy, obzvláště tablety obsahující zhruba 1 až zhruba 10 mg inhibitoru PDE5. Jakékoli farmaceuticky přijatelné excipientní látky pro perorální použití jsou vhodné pro přípravu takových dávkovačích forem. Vhodné farmaceutické dávkovači formy zahrnují koprecipitátové formy popsané například v Butlerově US patentu č. 5985326, začleněným tímto jako reference. V přednostních formách vynálezu je jednotková dávkovači forma pevná forma inhibitoru PDE5 bez koprecipitátu, ale spíše obsahuje pevný inhibitor PDE5 jako volný lék.

Tablety obsahují přednostně farmaceutické excipientní látky obecně rozpoznávané jako bezpečné, jako jsou například laktóza, mikrokrystalická celulóza, škrob, uhličitan vápenatý, magnézium sterát, kyselina stearová, talek a koloidní silikon dioxid, a jsou připraveny standardními farmaceutickými výrobními technikami, jak jsou popsané v Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th vydání, Mack Publishing Co., PA (1990). Takové techniky zahrnují například vlhkou granulaci s následným sušením, mletím a kompresí do tablet s anebo bez potažení filmem; suché míšení s následnou kompresí do tablet s anebo bez potažení filmem; vlhkou granulaci, vysušení a naplnění do želatinových kapslí; nebo plnění suspenze nebo roztoku do želatinových kapslí. Pevné dávkové formy mají • · · · ··· · • · · · fcfc · · · · · · · · obecně identifikační značky, které jsou na těchto formách jako výstupky nebo jsou natištěny na povrch.

Perorální dávkovači forma může být také ve formě preparátu s trvalým uvol-ňováním, který chronicky poskytuje zhruba 1 až zhruba 10 mg/den inhibitoru PDE5 jedinci po dobu několika dnů.

Předkládaný vynález je založen na detailních experimentech a klinických studiích a na očekávaných pozorováních, že sexuální dysfunkce může být léčena za použití chronické, nízké dávky inhibitoru PDE5 majícího hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 méně než 10 nM.

Chronický, a přednostně denní, dávkovači režim se zhruba 1 až zhruba 10 mg inhibitoru PDE5 také poskytuje další prospěch zahrnující a) spontánnost sexuálních vztahů, b) neočekávanou účinnost takové nízké perorální dávky inhibitoru PDE5 zahrnující pozorování větší odpovědi na inhibitor PDE5 po nižší chronické dávce inhibitoru PDE5, než po běžně indikované 25 mg akutní on-demand dávce sildenafilu, a c) žádné nebo nízké nežádoucí účinky připisovatelné selektivnímu inhibitoru PDE5 a nízké dávce.

Celkově bylo. demonstrováno, že chronické dávkování inhibitoru PDE5 majícího vlastnosti vyjmenované výše poskytuje stejnou nebo vyšší účinnost při. zhruba 1 mg až 10 mg, než při vyšší akutní on-demand dávce v současnosti podávané. Zvýšená účinnost demonstrovaná nízkou denní dávkou inhibitoru PDE5 v léčbě erektilní dysfunkce není závislá na akumulaci léku, ale je spíše výsledkem zlepšené vaskulární odpovědi, je-li inhibitor PDE5 přítomen v plazmě kontinuálně, nebo v podstatě kontinuálně.

• fc fcfcfcfc • fcfcfc fcfc ·· • fcfc fcfcfcfc fcfc · fc fcfcfcfc · · · · · · fcfcfc···· fcfcfcfc fc • fcfcfc fcfcfc fcfcfcfc

..............

Efekt zlepšení vaskulatury nebyl dříve konkrétně u inhibitorů PDE5 popsán, ani u inhibitorů PDE obecně. Zlepšení vaskulatury nebylo pozorováno obzvláště u on-demand dávkování inhibitoru PDE5, nebo u jedinců užívající akutní dávku inhibitoru PDE5 po dobu 2 až 3 dnů. Je očekáváno, že ke zlepšení vaskulatury dochází po chronickém podání inhibitoru PDE5, například po zhruba 3 denních dávkách o až 10 mg, přednostně po 5 dnech denního dávkování. Navíc zhruba třídenní dávkování s intermitentně chybějící jednou chronickou dávkou může vést ke snížení zlepšení vaskulatury, ale ne k úplné ztrátě tohoto zlepšení.

Existuje teorie, ale nespoléhá se na to v této přihlášce, že zlepšení vaskulatury je způsobeno částečným nebo úplným zvratem cirkulačních dysfunkcí cirkulace penisu způsobených stavy, jako jsou například diabetes, ateroskleróza, kouření, hypertenze, nebo kombinace těchto faktorů. Tyto podmínky vedou ke ztluštění arteriální stěny, snížené arteriální poddajnosti a snížené odpovídavosti na endogenní vazodilatační látky, jako je například oxid dusnatý.

Inhibitory PDE5 se významně liší svojí chemickou strukturou, a použití inhibitoru PDE5, jak je definováno v předkládaném vynálezu není závislé na konkrétní chemické struktuře, ale spíše na kritických parametrech zde uvedených. Předkládané sloučeniny mající požadovanou účinnost a preferovanou selektivitu však mohou být snadno identifikovány testy zde popsanými ze sloučenin popsaných v Daugan et al. US Patent č. 5981527 a Daugan et al. US Patent č. 6001847, kde každý z těchto patentů je začleněn do této přihlášky jako reference.

• φ · · ·· · » ·» • · • · ·Φ

Přednostní sloučeniny z patentu Daugan US Patent č. 5859 006 a

Daugan et al. US Patent strukturálním vzorcem (I):

5981527 jsou reprezentovány

kde R° je vybrán ze skupiny obsahující vodík, halogen a Ci-₆alkyl;

R¹ je' vybrán ze skupiny obsahující vodík, ' Ci_₆ alkyl, C₂__ealkenyl, C₂_₆ alkynyl, halo Ci_6 alkyl, C₃_₈ cykloalkyl Ci_₃alkyl, aryl Ci_₃ alkyl, kde aryl je fenyl, nebo fenyl substituovaný jedním nebo třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, Ci__s alkyl, Ci_₆ alkoxy, metylendioxy a jejich směsi, a heteroaryl Ci_₃ alkyl, kde heteroaryl je thienyl, furyl, nebo pyridyl, každý volitelně substituovaný jedním až třemi* substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, Ci-6 alkyl, Ci-6 alkoxy a jejich směsi;

R² reprezentuje volitelně substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenu, furanu a . pyridinu, nebo volitelně substituovaný bicyklický kruh

• · ··· ·

připojený ke zbytku molekuly prostřednictvím uhlíkových atomů benzenového kruhu, a kde fúzovaný kruh A je 5- nebo 6- členný kruh, nasycený, částečně nebo plně nenasycený, a obsahuje uhlíkové atomy a volitelně jeden nebo dva heteroatomy vybrané ze skupiny obsahující kyslík, síru a dusík;

R³ reprezentuje vodík nebo Ci_₃ alkyl, nebo R¹ a R³ spolu reprezentují 3- nebo 4- členný alkylový nebo alkenylový řetězec; a jejich soli a solváty.

Další přednostní sloučeniny jsou sloučeniny definované vzorcem (I), kde

R° je vodík, halogen a Ci-6 alkyl;

R¹ je vodík nebo Ci-6 alkyl;

R² je bicyklický kruh který může být volitelně substituován jednou nebo dvěmi skupinami vybranými z halogenu a C1-.3 alkylu; a R³ je vodík nebo C1-6 alkyl.

Přednostní sloučeniny jsou:

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4metylendioxyfenyl) pyrazino [2',1':6,1] pyrido [3,4-b] indol 1,4- dion; a (3S, 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2,3-dimetyl -6- (3,4 — metylendioxyfenyl) pyrazino [2',1':6,1] pyrido [3,4-b] indol 1,4- dion;

• ·« · «« ·« #· ·« ·· ··· · · · · · · · • · ft ««····

Ί Λ · · · · · * · · · · *

J- Η ·· ·« ·φ ·«·· ·* ·· a jejich fyziologicky přijatélné soli a solváty (např. hydráty).

Obzvláště přednostním selektivním inhibitorem PDE5 užitečným v předkládaném vynálezu je (6R- trans)-6- (1,3- benzodioxol 5- yl) -2,3,6,7,12,12a- hexahydro -2- metylpyrazino [l',2':l,6] pyrido [3,4-b] indol -1,4- dion, který je uveden v Dauganově US patentu č. 5859006, a který je reprezentován strukturálním vzorcem (II):

Další exemplární sloučeniny užitečné v předkládaném vynálezu jsou uvedeny v Daugan et al US patent č. 6001847, WO 97/43287 a WO 00/15639, které jsou tímto zde začleněny jako reference.

Navíc mohou být pro denní dávkování použity jako inhibitory PDE5 sildenafil a vardanafil.

·««·

W· ·· 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 99 9999

sildenafil

vardenafil

S ohledem na sildenafil a vardenafil je dávka pro chronické podávání zhruba 1 až zhruba 25 mg/den a přednostně zhruba 1 až zhruba 25 mg/den.

0« 0000 • 0 ·· 00 0*

0 0 0 0*0 * · 0 • · 000 0 0 ·00« 0000000 0000 0 • 0 · 0 000 0000 16 ·· ·♦ ’· ···· »· ··

Další užitečné inhibitory PDE5, které mohou být použity v chronickém dávkovacím režimu předkládaného vynálezu, zahrnují, ale nejsou omezeny na:

5-(2-etoxy -5- morfolinoacetylfenyl) -1- metyl -3- n- propyl 1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5- (5-morfolinoacetyl -2-n- propoxyfenyl) -1- metyl -3- npropyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-[2-alyloxy -5- (4-metyl -1- piperazinylsulfonyl)-fenyl] -1metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(2-etoxy -5- [4- (2-propyl) -1- piperazinylsulfonyl]-fenyl)

-1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(2-etoxy -5- [4- (2-hydroxyetyl) -1- piperazinylsulfonyl]fenyl) -1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(5- [4- (2-hydroxyetyl) -1- piperazinylsulfonyl]- 2-npropoxyfenyl) -1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7Hpyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-[(2-etoxy -5- (4- metyl -1- piperazinylkarbonyl)-fenyl] -1metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on; a

5-[2-etoxy -5- (1- metyl -2- imidazolyl)-fenyl] -1- metyl -3n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on.

• 0 • 0 ·

0

Preparáty

Příprava lidské PDE5

Rekombinantní produkce lidské PDE5 byla provedena v podstatě způsobem popsaným v Příkladu provedení vynálezu 7 z US patentu č. 5702936 začleněného zde jako reference, s výjimkou, že použitý kvasničný transformační vektor, který je odvozen ze základního plazmidu ADH2 popsaném ve V. Price et al., Methods in Enzymology, 1985, str. 308-318 (1990), inkorporoval kvasničný ADH2 promotérové a terminační sekvence, spíše než ADH1 promotérové a terminační sekvence, a hostitel Sacharomyces cerevisiase byl proteáza deficientní kmen BJ2-54 deponovaný 31. srpna, 1998 v American Type Culture Collection, Manassas, Virginia pod přístupovým číslem ATCC 74465. Transformované hostitelské buňky byly kultivovány v 2x SC-leu médiu, pH 6,2, se stopovými prvky a vitaminy. Po 24 hodinách bylo přidáno YEP médium obsahující glycerol do finální koncentrace 2x YEP/3% glycerol. Přibližně o 24 hodin později byly buňky staženy, promyty a uloženy při -70° C. Buněčné pelety (29 g) byly rozpuštěny na ledu stejným objemem lytického pufru (25 mM Tris-Cl, pH 8,5, 5 mM MGCI2, 0,25 mM dithiotreitolu, 1 mM benzamidinu a 10 uM ZnSO₄) . Buňky byly lyžovány v mikrofluidizačním zařízení pomocí N2 při 20000 psi. Lyzát byl zcentrifugován a zfiltrován přes 0,45 um jednorázové filtry. Filtrát byl nanesen na 150 ml kolonu Q Sepharose Fast Flow (Pharmacia). Kolona byla promyta 1,5 objemy pufru A (20 mM Bis-Tris propan, pH 6,8, 1 mM MgCl2, 0,25 mM dithiotreitolu, 10 uM ZnSO₄) a eluován krokovým gradientem 125 mM NaCl v pufru A s následným lineárním gradientem 125-1000 mM v pufru A.

Aktivní frakce z lineárního gradientu byly naneseny na 180 ml hydroxyapatitovou kolonu v pufru B (20 mM Bis-Tris propan (pH 6,8), 1 mM MgCl2, 0,25 mM dithiotreitolu, 10 uM ZnSO₄ a 250 mM KC1) . Po nanesení byla kolona promyta 2 objemy pufru B a eluována lineárním gradientem 0-125 mM fosforečnanu draselného

v pufru B. Aktivní frakce byly sebrány, precipitovány 60% amonium sulfátem a resuspendovány v pufru C (20 mM Bis-Tris propanu, pH 6,8, 125 mM NaCl, 0,5 mM dithiotreitolu, 10 uM

ZnSO₄) . Sebrané frakce byly aplikovány na 140 ml kolonu Sephacrylu S-300 HR a eluovány pufrem C. Aktivní frakce byly naředěny na 50% glycerolem a uloženy při -20°C. Výsledné preparáty měly zhruba 85% čistotu podle SDS-PAGE.

Stanovení aktivity PDE

Aktivita PDE5 může být měřena standardními analýzami známými v oboru. Specifická aktivita jakékoli PDE může být určena například následovně. Stanovení PDE využívající separační techniku s aktivním uhlím byla provedena v podstatě, jak je popsáno v Loughney et al., (1996), The Journal of Biological Chemistry, 271: 796-806. V tomto stanovení konvertuje aktivita [³²P] cGMP na [³²P] 5' cGMP v poměru k množství přítomné aktivity PDE5. [³²P]5' cGMP je poté kvantitativně konvertována na volný [³²P] fosfát a neznačený adenosin působením hadího jedu 5'nukleotidázy. Tudíž množství uvolněného [³²P] fosfátu je proporcionální enzymové aktivitě. Stanovení je provedeno při 30°C ve 100 uL reakční směsi obsahující (finální' koncentrace) 40 mM Tris-Cl (pH 8,0, 1 uM ZnSO₄, 5 mM MgCl2 a 0,1 mg/ml bovinního sérového albuminu. PDE5 je přítomno v množstvích, která vedou k méně než 30% celkové hydrolýze substrátu (podmínky pro lineární stanovení). Stanovení je zahájeno přidáním substrátu (1 mM [³²P] cGMP a směs je inkubována 12 minut. Poté je přidáno 75 ug jedu z Crotalus atrox a v inkubaci je pokračováno další 3 minuty (celkem 15 minut). Reakce je zastavena přidáním 200 ml aktivovaného uhlí (25 mg/ml suspenze v 0,1 M NaH₂PO₄, pH 4). Po centrifugaci (750 g 3 minuty provedené, aby se stočilo aktivované uhlí, je odebrán vzorek supernatantu k určení radioaktivity ve scintilačním počítači a je vypočtena aktivita PDE5. Preparáty měly ·· ·· ·· • · · · · · • · · · · * · · · · · • · · · · • · · · specifické aktivity okolo 3 umolů cGMP hydrolyzovaných za minutu na mg proteinu.

Příprava bovinní PDE6 Bovinní PDE6 byla dodána dr. Virmauxem, INSERM U338,

Štrasburg. Bovinní sítnice byly připraveny podle postupu popsaného autory Virmaux et al., FEBS Letters, 12(6), str. 325-328 (1971) a viz také A. Sitaramayya et al., Exp. Eye

Res., 25, str. 163-169 (1977). Stručně řečeno byly všechny operace, ledaže je uvedeno jinak, prováděny v chladu a pod tlumeným červeným světlem. Oči byly udržovány v chladu a v temnu po dobu až 4 hodin po poražení.

Příprava bovinního retinálního zevního segmentu (ROS) v zásadě sledovala postupy popsané Schichim et al., J. Biol. Chem., 224:529 (1969). V typickém experimentu bylo 35 bovinních sítnic rozmělněno v hmoždíři s 35 ml 0,066 M fosfátového pufru, pH 7,0 připraveného se 40% sacharózou s následnou homogenizací v Potterově homogenizačním zařízení (20 zdvihů nahoru a dolů). Suspenze byla centrifugována při 25000 g po dobu 20 minut. Peleta byla homogenizována v 7,5 ml 0,006 M fosfátového pufru (40% sacharóza). Centrifugace byla provedena ve výkyvném rotoru při 45000 g po dobu 20 minut a došlo k vytvoření pelety, která byla černá naspodu a měla také červený proužek na rozhraní 0,066 M fosfát - 40% sacharóza/0,066 (hrubý ROS). Červený materiál na rozhraní byl vyjmut, naředěn 'fosfátovým pufrem, . stočen do pelety a redistribuován v pufrované 40% sacharóze, jak je popsáno výše. Tento postup byl opakován 2 nebo 3 krát, až se netvořila žádná peleta. Purifikovaný ROS byl promyt fosfátovým pufrem a nakonec stočen do pelety při 25000 g po dobu 20 minut. Všechny materiály byly uschovávány zamraženy až do rozmražení.

• · • · ··

Hypotonické extrakty byly připraveny suspenzací izolovaných ROS v 10 mM Tris-Cl pH 7,5, 1 mM EDTA a 1 mM dithitreitol s následnou centrifugací při 100000 g po dobu 30 minut.

Bylo zaznamenáno, že preparát má specifickou aktivitu okolo 35 nmolů cGMP hydrolyzovaných za minutu na miligram proteinu.

Příprava PDElc z buněk Spodoptera fugiperda (Sf9)

Buněčné pelety (5g) byly rozpuštěny na ledu 20 ml lytického pufru (50 mM MOPS pH 7,4, 10 uM ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM bezamidin HCI, 5 ug/ml pepstatinu, leupeptinu a aprotininu) . Buňky byly lyžovány průchodem přes zařízení French press (SLC-Aminco), zatímco teploty byly udržovány pod 10°C. Výsledný buněčný homogenát byl centrifugován při 36000 ot/min. při 4°C po dobu 45 minut v ultracentrifuze Beckman za použití rotoru typ TI45. Supernatant byl odstraněn a výsledná peleta byla resuspendována 40 ml solubilizačního pufru (lytický pufr obsahující 1M NaCl, 0,1 M MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 20 ug/ml kalmodulinu a 1% sulfobetainu SB12 (Z3-12) sonikací za použití ladičky Vibracell s mikrokoncem po dobu 3 x 30 sekund. Toto bylo prováděno ve směsi rozdrceného ledu/soli kvůli chlazení. Po sonikaci byla směs pomalu promíchávána 30 minut při 4°C k dokončení solubilizace membránově vázaných proteinů. Tato směs byla centrifugována v ultracentrifuze Beckman za použití rotoru typ TI45 při 36000 ot/min po dobu 45 minut. Supernatant byl naředěn lytickým pufrem obsahujícím 10 ug/ml calpainového inhibitoru I a II. Precipitovaný protein byl centrifugován 20 minut při 9000 ot/min v Rotoru Beckman JA-10. Získaný supernatant byl poté podroben chromatografii s Mimetic Blue AP Agarose.

Aby bylo možno provést chromatografii s Mimetic Blue AP Agarose,- byla pryskyřice překryta aplikací 10 objemy kolony 1% polyvinylpyrolidinu (tj., MW 40000) za účelem blokády • · · · *·· · · · ♦ · · ····· ·· · ·· • · · · · · · · ·· · ···· · · · ··· ’* ·· .........

nespecifických vazebných míst. Volně navázaný · PVP-40 byl odstraněn promytím 10 objemy kolony s 2M NaCl a 10 mM citrátu sodného, pH 3,4. Těsně před přidáním vzorku solubilizovaného PDElc byla kolona ekvilibrována 5 objemy kolony pufru A (50 mM MOPS pH 7,4, 10 uM ZnSO₄, 5 mM MgCl₂, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM DTT, 2 mM benzamidin HCI).

Solubilizovaný vzorek byl aplikován na kolonu při průtoku 2 ml/min s recyklací, takže celkový vzorek byl aplikován 4 až 5 krát za 12 hodin. Po dokončení nanášení byla kolona promyta 10 objemy kolony pufru A a následně 5 objemy kolony pufru B (pufr A obsahující 20 mM 5'-AMP) a následně 5 objemy kolony pufru C (50 mM MOPS pH 7,.4, 10 uM ZnSO₄, 0,1 mM CaCl₂, 1 mM dithiotreitol a 2 mM benzamidin HCI). Enzym byl eluován do třech po sobě jdoucích sebraných frakcí. První sebraná frakce obsahovala enzym z promytí 5 objemy řečiště pufrem C obsahujícím 1 mM cAMP. Druhá sebraná frakce obsahovala enzym z promytí 10 objemy řečiště pufrem C obsahujícím 1 M NaCl. Finální sebraná frakce obsahovala enzym z promytí 5 objemy řečiště pufrem C obsahujícím 1 M NaCl a 20 mM cAMP.

Aktivní sebrané frakce s enzymem byly sebrány a cyklický nukleotid byl odstraněn konvenční gelovou filtrací nebo chromatografií na hydroxyapatitových pryskyřicích. Po odstranění cyklických nukleotidů byly sebrané frakce enzymu dialyzovány proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 25 mM MOPS pH 7,4, 10 uM ZnSO₄, 500 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM dithiotreitolu, 1 mM benzamidin HCI s následnou dialýzou proti dialyzačnímu pufru obsahujícímu 50% glycerol. Enzym byl rychle zmražen suchým ledem a uložen při teplotě -70°C.

Výsledné preparáty měly více než 90% čistotu podle SDS-PAGE. Tyto preparáty měly specifické aktivity zhruba 0,1 až 1,0 umol cAMP hydrolyzovaného za minutu na miligram proteinu.

·« ·· ·· · • · ·

Stanovení hodnoty IC50

Parametrem zájmu pro hodnocení účinnosti kompetitivního enzymového inhibitoru PDE5 a/nebo PDElc a PDE6 je inhibiční konstanta, tj. Κ±. Tento parametr může být aproximován určením hodnoty IC50, která vyjadřuje koncentraci inhibitoru vedoucí k 50% inhibici enzymu v experimentu s odpovědí na jednu dávku za následujících podmínek.

Koncentrace inhibitoru je vždy mnohem větší než koncentrace enzymu, takže koncentrace volného inhibitoru (která je neznámá) je aproximována celkovou koncentrací inhibitoru (která je známá).

Je zvoleno vhodné rozmezí koncentrací inhibitoru (t j. koncentrace inhibitoru alespoň několikrát větší a několikrát menší, než je hodnota K± přítomna v experimentu). Koncentrace inhibitoru jsou typicky v rozmezí od 10 nM do 10 uM.

Koncentrace enzymu a substrátu jsou zvoleny tak, že méně než 20% substrátu je spotřebováno v nepřítomnosti inhibitoru (poskytujíce například maximální hydrolýzu substrátu od 10 do

15%), takže enzymová v průběhu stanovení.	aktivita	je	přibližně	konstantní
Koncentrace substrátu je	menší než	1/10	Michaelisovy konstanty
(K_m) . Za těchto podmínek se	bude	hodnota	IC50 blízce

přibližovat hodnotě K±. To je dáno Cheng-Prusoffovou rovnicí vztahu těchto dvou parametrů: IC50 = Ki (1+S/K_m), s (1+S/K_m) přibližně 1 při nízkých hodnotách S/Km.Hodnota IC₅₀ je odhadnuta z datových bodů proložením dat do vhodného modelu interakce enzymového inhibitoru. Je-li o této interakci známo, že zahrnuje jednoduchou kompetici inhibitoru se substrátem, může být použit dvouparametrový model

Y = A/(·1+χ/Β)

kde y	je enzymová aktivita měřená	při koncentraci	inhibitoru
x, A	je aktivita v	nepřítomnosti	inhibitoru a	B	je hodnota
IC50 ·	Viz Cheng et	al., Biochem.	Pharmacol.,	22:	3099-3108
(1973)	•
Účinky	inhibitorů,	které jsou	předmětem	předkládaného

vynálezu, na enzymatickou aktivitu preparátů PDE5 a PDE6, jak jsou popsány výše, byly analyzovány v jakékoli ze dvou analýz, které se lišily od sebe v zásadě na základě měřítka a poskytly v podstatě stejné výsledky co se týká hodnot IC50. Obě analýzy zahrnovaly modifikaci postupu autorů Wells et al., Biochim. Biophys. Acta, 384:430 (1975). První z analýz byla provedena v celkovém objemu 200 ul obsahujícím 50 mM Tris pH 7,5, 3 mM Mg acetátu, 1 mM EDTA, 50 ug/ml hadího jedu nukleotidázy a 50 nM [³H]-cGMP (Amersham). Sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, byly rozpuštěny v DMSO ve finální koncentraci 2% ve stanovení. Analytické směsi byly inkubovány 30 minut při teplotě 30°C a reakce byla zastavena přidáním 800 ul 10 mM Tris pH 7,5, 10 mM EDTA, 10 mM teofylinu, 0,1 mM adenosinu a 0,1 mM guanosinu. Směsi byly naneseny na 0,5 ml kolony QAE Sephadex a eluovány pomocí 2 ml 0,1 M formátu (pH 7,4). Eluovaná radioaktivita byla měřena scintilačním počítačem Optiphase Hisafe 3.

Druhá mikrodestičková PDE analýza byla vyvinuta za použití destiček Multiscreen a vakuového extraktoru. Analytická směs (100 ul) obsahovala 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM Mg acetátu, 1 mM EDTA a 250 ug/ml hadího jedu nukleotidázy. Další složky reakční směsi byly stejné, jako je popsáno výše. Na konci inkubace byl celkový objem analytických směsí nanesen filtrací na mikrokolonkovou destičku QAE Sephadex. Volná radioaktivita ·· ····

·· ·« ·· • · * ♦ · • · · · · · · • · · · · · · • · · · · · ···· · · byla eluována 200 ul vody, z čehož byly scintilačním počítačem analyzovány 50 ul alikvóty, jak je popsáno výše.

Následující příklady provedení vynálezu jsou prezentovány k další ilustraci preparátu nárokovaného vynálezu.. Rozsah předkládaného vynálezu není chápán jako pouze obsahující následující příklady provedení vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sloučenina se strukturálním vzorcem (I) byla připravena, jak je popsáno v US patentu 5859006 a formulována do tablet za použití vlhké granulace. Povidon byl rozpuštěn ve vodě, aby vznikl 10% roztok. Aktivní sloučenina, mikrokrystalická celulóza, kroskarmelóza sodná a laurylsulfát sodný byly přidány do vysokoúčinného mixéru a mixovány 2 minuty. Prášky byly za vlhka granulovány s roztokem povidonu a extra vodou, jak bylo vyžadováno k dokončení granulace. Výsledná směs byla vysušena ve vysoušeči tekutiny se vstupní teplotou vzduchu 70°C ± 5°C až do vysoušeči ztráty pod 2,5%. Granule byly protlačeny přes zařízení Comil s vhodným filtrem (nebo řešetem) a přidány do vhodného mixéru. Extragranulární kroskarmelóza sodná a laurylsulfát sodný, a koloidní bezvodá silika byly protlačeny přes vhodné síto' (například 500 mikronů) a přidány do mixéru a promíchávány 5 minut. Byl přidán magnézium stearát a směs byla promíchávána 2 minuty. Směs byla komprimována do cílové komprese/váhy 250 mg za použití 9 mm kruhovitého normálního konkávního zařízení.

Jádra tablet byla potažena vodnou suspenzí Opadry OY-S-7322 za použití zařízení Accelacota (nebo podobného zařízení na potahování tablet) za použití vstupní teploty 50°C až 70°C až do zvýšení přibližně 8 mg. Suspenze Opadry OY-S-7322 obsahuje metylhydroxypropylcelulózu Ph. Eur., titanium dioxid Ph. Eur., ·· ···· • · · * · · ·

• · • · • · • ·

Triacetin USP. Opadry zvyšuje váhu každé tablety na zhruba 258 mg. Množství filmového potahu aplikovaného na tabletu může být menší, než je uváděno v závislosti na účinnosti procesu.

Tablety jsou plněny do fóliových baleni s doprovodným příbalovým letákem popisujícím bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Složka	Složení (mg na tabletu)
Selektivní inhibitor EDE5¹¹	1	5
Hydroxypropylmetylcelulóza ftalát	1	5
Mikrokrystalická celulóza	221,87	213,87
Kroskarmelóza sodná	5, 00	5, 00
Laurylsulfát sodný	2,50	2,50
Povidon K30 sulfát	9,38	9,38
Purifikovaná voda, USP voda pro irigaci)	q.s.	q.s.
Kroskarmelóza sodná	5, 00	5,00
Laurylsulfát sodný	2,50	2,50
Koloidní bezvodá silika	0,50	0, 50
Magnézium stearát	1,25	1, 25
Mezisoučet celkového jádra tablety	250,00	250,00
(Filmový potah Opadry 0Y-S-7322)	Zhruba 8 mg	Zhruba 8 mg

¹⁵ Sloučenina se strukturálním vzorcem (I)

Příklad 2

Pro přípravu dokončené dávkovači formy obsahující 10 mg sloučeniny se strukturálním vzorcem (I) je použito následující složení.

9

9« 9··9 • 9 9 • » ··· • » · 9 · • · · 9 ·· 9« « 9 · * • 9 · • « » 9 « « 9 ·· ««··

Složka	Množství (mg)
Granulát
Selektivní inhibitor PDE5¹¹	10,00
Laktóza monohydrát	153,80
Laktóza monohydrát (vysušena sprej ováním)	25,00
Hydroxypropylcelulóza	4, 00
Kroskarmelóza sodná	9,00
Hydroxypropylcelulóza (EF)	1,75
Laurylsulfát sodný	0,70
	35, 00
Vnější prášky
Mikrokrystalická celulóza (granulární-102)	37, 50
Kroskarmelóza sodná	7,00
Magnézium stearát (rostlinný)	1,25
(Filmový potah Opadry OY-S-7322)	Celkově 250 mg
Filmový potah (přibližně) 11,25

Při výrobě tablet je použita USP purifikovaná voda. Voda je odstraněna během zpracování a minimální množství zůstává v dokončeném produktu.

Tablety jsou vyráběny za použití procesu vlhké granulace. Popis jednotlivých kroků postupu je následující. Lék a excipientní látky, které mají být granulovány, jsou prosívány přes bezpečnostní síto. Selektivní inhibitor PDE5 je za sucha promícháván s laktóza monohydrátem (vysušená sprej ováním), hydroxypropylcelulózou, kroskarmelózou sodnou a laktóza monohydrátem. Výsledná prášková směs je granulována s vodným roztokem hydroxypropyl celulózou a laurylsulfátem sodným za použití zařízení Powrex nebo jiného vysokoúčinného granulačního zařízení. K dosažení požadovaného výsledku může být přidána další voda. K hnětení vlhké granulace a usnadnění vysoušení může být použito mlecí zařízení. Vlhký' granulát je vysoušen za použití buďto vysoušeče tekutin nebo vysoušeči pece. Jakmile je materiál vysušen, může být rozřazen podle ·· ··«· aglomeráty.

a magnézium a ořidánv do • fc fc· fcfc • » fcfcfc • fcfcfc • ·· · ’· *· velikosti, aby se eliminovaly velké Mikrokrystalická celulóza, kroskarmelóza sodná stearát jsou prosívány přes bezpečnostní síta vysušených granulí rozřazených podle velikosti. Tyto excipientní látky a suchý granulát jsou smíšeny až do stejnoměrného promíchání za použití mísící nádoby, páskového mixéru nebo jiného mísícího zařízeni. Mísící proces může být rozdělen do dvou fází. Mikrokrystalická celulóza, kroskarmelóza sodná a suchý granulát jsou přidány do mixéru a promíchány během první fáze, s následným přidáním magnézium stearátu k tomuto granulátu a druhou mísící fází.

Smíšený granulát je poté zkomprimován do tablet za použití rotačního kompresního zařízení. Jádra tablet jsou potažena filmem vodnou suspenzí příslušné barevné směsi v potahovacím zařízení (např. Accela Cota). Potažená tableta může být lehce poprášena talkem, aby se zlepšily manipulační charakteristiky.

Tablety jsou plněny do plastových nádobek (30 tablet/nádobku) s doprovodným příbalovým letákem popisujícím bezpečnost a účinnost sloučeniny.

Příklad 3

Pro přípravu dokončené dávkovači formy obsahující 5 mg sloučeniny se strukturálním vzorcem (I) je použito následující složení.

Složka	Množství (mg)
Granulát
Selektivní inhibitor PDE5¹¹	2,50
Laktóza monohydrát	79,395
Laktóza monohydrát (vysušena sprej ováním)	12,50
Hydroxypropylcelulóza	2,00
Kroskarmelóza sodná	4,50
Hydroxypropylcelulóza (EF)	0, 875
Laurylsulfát sodný	0,35

Vnější prášky
Mikrokrystalická celulóza (granulami-102)	18,75
Kroskarmelóza sodná	3, 50
Magnézium stearát (rostlinný)	0,63
	Celkově 125 mg
Filmový potah (přibližně) 6,875

Dávkovači forma z Příkladu provedení vynálezu 3 byla připravena identickým způsobem jako dávkovači forma z Příkladu provedení vynálezu 2.

Příklad 4

Kapsle s roztokem
Složka	mg/kapsli	Procento (%)
Selektivní inhibitor PDE5¹'	10	2
PEG400 NF	490	98
Plnící váha	500	100

Želatinové kapsle jsou přesně plněny pumpováním přesného plnícího objemu předem rozpuštěného lékového preparátu do částečně utěsněné dutiny kapsle. Okamžitě po injekčním plnění lékového preparátu ve formě roztoku je kapsle kompletně utěsněna teplem.

·· ·· ·· ···· ··

Kapsle jsou plněny do plastových nádobek s přiloženým příbalovým letákem.

Příklad 5

Ve dvou randomizovaných, dvojitě slepých placebo kontrolovaných studiích byla podána sloučenina se strukturálním vzorcem (I) v rozmezí dávek pro denní dávkování i on demand léčbu pro sexuální setkání a pohlavní styk v domácím prostředí pacientům potřebujícím tuto léčbu. Dávky od 5 do 20 mg sloučeniny se strukturálním vzorcem (I) byly účinné a neprokázaly žádné překrvení ani abnormality vidění. Bylo zjištěno, že 10 mg dávka sloučeniny se strukturálním vzorcem (I) byla plně účinná a vedla k minimálním vedlejším účinkům (žádné překrvení ani modré vidění).

Erektilní funkce byla posuzována Mezinárodním Indexem Erektilní Funkce (IIEF) Rosen et al., Urology, 49, str. 822830 (1997)), záznamy pokusů o pohlavní styk a otázkou celkového uspokojení. Sloučenina se strukturálním vzorcem (I) významně zlepšila erektilní funkci, jak bylo zjištěno podle všech posuzovaných parametrů. V režimech on demand i denním dávkování zlepšila sloučenina se strukturálním vzorcem (I) významně erektilní funkci v dávkách.mezi 1 a 20 mg.

Příklad 6

Data z pěti klinických studií byla integrována, aby ukázala účinnost denní dávky 5 mg a 10 mg sloučeniny se strukturálním vzorcem (I) (Studiový lék). Jedna studie trvala 8 týdnů a další čtyři studie trvaly dvanáct týdnů. Studiový lék byl podáván denně pacientům s mužskou erektilní dysfunkcí. Erektilní dysfunkce (ED) je definována jako perzistentní neschopnost dosáhnout a/nebo udržet erekci dostatečnou k umožnění uspokojivého sexuálního provedení.

ttt» • · ··» ···· · · ·

9 9 99 99 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·· ·· ..........

Populace ve studii se skládaly ze čtyřech následujících podskupin: a) Studiový lék podáván méně než 30% z doby studie; b) Studiový lék podáván 30% až 50% z doby studie; c) Studiový lék podáván 50% až 70% z doby studie; a d) Studiový lék podáván více než 70% z doby studie.

Studiový lék byl perorálně podáván jako tablety koprecipitátu studiového léku vyrobených ve shodě s US patentem č. 5985326, autor Butler, a jako tablety obsahující studiový lék jako volný lék. Studiový lék byl podáván v 5 a 10 mg dávkách, denně, a ne více než jedenkrát za 24 hodin. Povolené byly další schválené nebo experimentální medikace, léčebné postupy, nebo zařízeni použité k léčbě ED.

Dvě primární účinnostní proměnné byly schopnost jedince penetrovat svoji partnrku a jeho schopnost udržet erekci během pohlavního styku, jak bylo měřeno Mezinárodním Indexem Erektilní Funkce (IIEF). Dotazník IIEF obsahuje 15 otázek a je stručným, spolehlivým měřítkem erektilní funkce. Viz R.C. Rosen et al., Urology, 49, str. 822-830 (1997).

Sekundární účinnostní proměnné byly IIEF doménové skóre pro erektilní funkci, orgasmické funkce, sexuální žádostivost, uspokojení z pohlavního styku a celkové uspokojení; pacientova schopnost dosáhnout erekci, schopnost inzerovat penis do vagíny partnerky, dokončení pohlavního styku s ejakulací, uspokojení s pevností své erekce a celkové uspokojení, kde všechny parametry byly měřeny podle záznamů Sexual Encounter Profile (SEP), obzvláště Dotazníku 2 a Dotazníku 3. SEP je diář pacienta dokumentující každé sexuální setkání během průběhu studie.

Analýza bezpečnosti studie zahrnovala všechny jedince zabrané do studie a byla posuzována hodnocením všech hlášených • · ·♦ ** ** ........

nežádoucích účinků a změn v klinických laboratorních hodnotách, vitálních známkách, výsledků fyzikálního vyšetření a výsledků elektrokardiogramu.

Integrace pěti studií celkově prokázala tendenci k lepší odpovědi se zvýšeným podáváním léku, v 5 mg i 10 mg skupině, a ve všech třech primárních účinnostních proměnných. Výsledky jsou sumarizovány v následujících Tabulkách 2-4.

Tabulka 2. Souhrn IIEF erektilní funkční domény

Procento času, kdy byl podáván lék během studie

Dávka	Statistika	Pod 30%	30%-50%	50%-70%	Nad 70%
5 mg	N	97	54	28	13
	Průmětná výchozí hodnota	13,2	13,5	14,1	13,1
	Průměrná koncová hodnota	17,4	17,5	20,9	22,1
	Průměrná změna	4,3	4,0	6,8	9,0
10 mg	N	164	75	41	43
	Průměrná výchozí hodnota	14,1	14, 4	13,9	14,8
	Průměrná koncová hodnota	20,0	21,4	21,5	22,2
	Průměrná změna	5,9	6,9	7,6	7,4

Tabulka 3. Souhrn Dotazníku 2 SEP (Schopnost inzerce penisu)

Procento času, kdy byl podáván lék během studie

Dávka	Statistika	Pod 30%	30%-50%	50%-70%	Nad 70%
5 mg	N	98	54	28	13
	Průměrná výchozí hodnota	42,7	40, 8	47,9	42, 8
	Průměrná koncová hodnota	57,2	57,2	69,3	68,2
	Průměrná změna	14,4	16,5	21,4	25,5
10 mg	N	164	76	41	45
	Průměrná výchozí hodnota	44,7	47,5	43, 6	45, 9
	Průměrná koncová hodnota	66,2	69, 0	73,4	75, 6
	Průměrná změna	21,5	21,5	29, 9	29,7

• · · ·

Tabulka 4. Souhrn Dotazníku 3 SEP (Dostatečně dlouhá erekce pro úspěšný pohlavní styk)

Procento času, kdy byl podáván lék během studie

Dávka	Statistika	Pod 30%	30%-50%	50%-70%	Nad 70%
5 mg	N	98	54	28	13
	Průměrná výchozí hodnota	21,8	16,7	18,7	18,4
	Průměrná koncová hodnota	38,2	40,4	53, 5	54,6
	Průměrná změna	16,4	23,7	33, 8	36,2
10 mg	N	1.64	76	41	4.5
	Průměrná výchozí hodnota	24, 6	26,5	20,2	25,3
	Průměrná koncová hodnota	53,5	56,3	63,2	63,9
	Průměrná změna	28,9	29,7	43,0	38,6

Příklad 7

Dvojitě slepá, placebo kontrolovaná studie posuzovala bezpečnost a účinnost denní léčby při použití sloučeniny definované vzorcem (I) (Studiový lék) u mužů ve věku 21-72 let s mírnou až středně závažnou erektilní dysfunkcí. Muži s anamnézou radikální prostatektomie nebo diabetů mellitu byli vyloučeni. V této studii byli jedinci po třítýdenním období bez léčby randomizováni do třítýdenní denní léčby s placebem nebo Studiovým lékem (10, 25, 50 nebo 100 mg). Všichni účastníci studie souhlasili s tím, že se pokusí o čtyři sexuální setkání během období bez léčby i léčebného období. Výchozí skóre Mezinárodního Indexu Erektilní Funkce (IEFF), údaje z deníku profilu Sexual Encounter Profile (SEP) a dotazník celkového hodnocení (GAQ) byly odebírány během léčebného období. Primárními parametry účinnosti byly změna od výchozí hodnoty v Dotazníku 3 (léčebný efekt na schopnost penetrace) a 4 (léčebný efekt na udržení erekce) skóre IEFF. Sekundární parametry účinnosti zahrnovaly změnu ve všech IIEF doménách a odpovědí v dotaznících SEP a GAQ. Výsledky ve skupině, které bylo podáváno 10 mg Studiového léku denně byly • · · · • · srovnatelné nebo lepší než výsledky ve skupinách, kterým bylo podáváno 25, 50 a 100 mg Studiového léku denně.

Ve srovnání s placebem zlepšil Studiový lék významně erektilní funkci, jak bylo posouzeno podle všech studiových parametrů účinnosti. Například ve studiích léčených Studiovým lékem byla změna v IIEF Dotazníku 3 zhruba 1,4 (ve srovnání s placebem) s denní 10 mg léčbou. Změna v Dotazníku 4 byla zhruba 1,8 (ve srovnání s placebem) s denní 10 mg léčbou. Procento úspěšného pohlavního styku při použití Studiového· léku, jak bylo zaznamenáno v denících SEP, bylo do 82% s 10 mg denní léčbou ve srovnání s 40,4% s placebem. Navíc byla u 90% jedinců na 10 mg denní dávce Studiového léku zaznamenána zlepšená erekce podle dotazníku GAQ ve srovnání s 30% jedinců, kterým bylo podáváno placebo. Nežádoucí účinky byly závislé na dávce, a zmírnily se na kontinuální denní léčbě. Nejběžnějšími nežádoucími účinky byly bolesti hlavy, bolesti v zádech, myalgie a dyspepsie. Bolesti hlavy závislé na léčbě, nejběžnější nežádoucí účinek, byly pozorovány u 13% až 46% jedinců, kterým byl podáván Studiový lék ve srovnání s 3% u placeba. Nebyly zjištěny žádné změny ve vitálních známkách, EKG nebo laboratorních parametrech závislé na léčbě.

Ve shodě s předkládaným vynálezem léčí účinně denní jednotková dávka od zhruba 1 do 10 mg, přednostně od zhruba 2 do zhruba 10 mg a nejpřednostněji od zhruba 5 do zhruba 10 mg, podávaných denně do maximální denní dávky 10 mg po dobu alespoň třech dnů, ED, minimalizuje nebo eliminuje výskyt nežádoucích vedlejších účinků a zlepšuje stav vaskulatury. Důležité je, že pacientovi je poskytnuta spontánnost s ohledem na sexuální aktivity a rychlejší návrat ke stavu před vzrušením. Navíc k léčbě ED u jedinců byla překvapivě pozorována větší odpověď při použití nízké denní dávky ve srovnání s vyšší dávku on demand inhibitoru PDE5 navíc

H 99 99 99 99 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 99 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

..............

k nižším případům nežádoucích účinků, které mohou být připsány nižší dávce.

Principy, přednostní formy vynálezu a způsoby činnosti předkládaného vynálezu byly popsány v předchozích specifikacích. Vynález je zamýšlen, aby byl tímto chráněn, avšak není chápán jako omezený konkrétními uvedenými formami, které jsou míněny jako ilustrativní spíše než restriktivní. Variace a změny mohou být učiněny osobami znalými oboru bez odchýlení od ducha vynálezu.

··

2M>2 • fr frfrfrfr ··· · · · · frfr · ····· frfr · frfr · • ••frfrfrfr frfrfrfr fr frfrfrfr ··· ···· ~ _r frfrfrfr frfr ···· frfr frfr

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující:

a) perorální dávkovači formu obsahující inhibitor PDE5 mající hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM a dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný v jednotkových perorálních dávkách obsahujících zhruba 1 až zhruba 10 mg.

b) příbalový leták, který popisuje, že inhibitor PDE5 je užitečný v léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu využitím chronického dávkovacího režimu; a

c) nádobku.
2. Výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující:

a) perorální dávkovači formu obsahující inhibitor PDE5 mající hodnotu IC50 menší než 10 nM, a dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný ve zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotkových perorálních dávkách;

b) příbalový leták, který popisuje, že inhibitor PDE5 je užitečný v léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu využitím chronického dávkovacího režimu, kde chronický dávkovači režim zlepšuje stav vaskulatury; a

c) nádobku.
3. Výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující:

a) perorální dávkovači formu obsahující inhibitor PDE5 mající hodnotu IC₅₀ menší než 10 nM, a dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný ve zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotkových perorálních dávkách;

b) příbalový leták, který popisuje, že inhibitor PDE5 je užitečný v léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu využitím chronického dávkovacího režimu, kde chronický dávkovači režim zlepšuje stav vaskulatury ve srovnání s akutním nebo on-demand dávkováním sildenafilu; a

c) nádobku.
4. Výrobní artikl pro lidské farmaceutické použití obsahující:

a) perorální dávkovači formu.obsahující inhibitor PDE5 mající hodnotu IC50 menší než 10 nM, a dostatečnou biodostupnost, aby byl účinný ve zhruba 1 až zhruba 10 mg jednotkových perorálních dávkách;

b) příbalový leták, který popisuje, že inhibitor PDE5 je užitečný v léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu využitím chronického dávkovacího režimu, kde chronický dávkovači režim zlepšuje stav vaskulatury ve srovnání s akutním nebo on-demand dávkováním vardenafilu; a

c) nádobku.
5. Výrobní artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde inhibitor PDE5 má dále

i) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 alespoň 100 krát menší, než je hodnota IC50 pro inhibici PDE6; a ii) hodnotu IC50 pro inhibici PDE5 alespoň 1000 krát menší, než je hodnota IC50 pro inhibici PDElc.
6. Výrobní artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde perorální dávkovači forma obsahuje zhruba 1 mg, zhruba 2 mg,

zhruba 5 mg, nebo zhruba 10 mg inhibitoru PDE5. 7. Výrobní artikl podle patentových nároků 1 až 4, chronický dávkovači režim je denní dávkovači režim. 8. Výrobní artikl podle patentových nároků 1 až 4, chronický dávkovači režim zahrnuje podání zhruba 1 mg/den

zhruba 10 mg/den inhibitoru PDE5.
9. Výrobní artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde podle příbalového letáku je poskytnuta maximální dávka inhibitoru PDE5 zhruba 10 mg za den.

• · · · • · ··· ·
10. Artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde inhibitor PDE5 je vybrán ze skupiny obsahující (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4— metylendioxyfenyl) pyrazino [2',l^z:6,l] pyrido [3,4—b] indol 1,4- dion;

(3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2,3-dimetyl -6- (3,4metylendioxyfenyl) pyrazino [2',1':6,1] pyrido [3,4-b] indol 1,4- dion;

5-(2-etoxy -5- morfolinoacetylfenyl) -1- metyl -3- n- propyl 1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5- (5-morfolinoacetyl -2-n- propoxyfenyl) -1- metyl -3- npropyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on; 5-[2-alyloxy -5- (4-metyl -1- piperazinylsulfonyl)-fenyl] -1metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(2-etoxy -5- [4- (2-propyl) -1- piperazinylsulfonyl]-fenyl)

-1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(2-etoxy -5- [4- (2-hydroxyetyl) -1- piperazinylsulfonyl]fenyl) -1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-(5- [4- (2-hydroxyetyl) -1- piperazinylsulfonyl]- 2-npropoxyfenyl) -1- metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7Hpyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on;

5-[(2-etoxy -5- (4- metyl -1- piperazinylkarbonyl)-fenyl] -1metyl -3- n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on; a

5-[2-etoxy -5- (1- metyl -2- imidazolyl) -fenyl] -1- metyl -3n- propyl -1,6- dihydro -7H- pyrazolo [4,3-d] pyrimidin -7-on.
11. Artikl podle patentového nároku 10, kde chronický dávkovači režim zahrnuje podání zhruba 1 mg/den až zhruba 10 mg/den inhibitoru PDE5.

00 »000

0 0 0 · · · · 0 0 0

00000 00 0 00 0

38 ······· · · · · ·· ·· ·· ···· ·· ··
12. Artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde inhibitor PDE5 je vybrán ze skupiny obsahující sildenafil. a vardenafil.
13. Artikl podle patentových nároků 1 až 4, kde inhibitor PDE5 má strukturu
14. Způsob léčby sexuální dysfunkce zahrnující použití výrobního artiklu podle patentových nároků 1 až 4.
15. Způsob léčby sexuální dysfunkce zahrnující chronické podání jedince potřebujícího tuto léčbu jedné nebo více perorálních dávkovačích forem* inhibitoru PDE5 v množství zhruba 1 mg/den až zhruba 10 mg/den po dobu alespoň třech dnů.
16. Způsob podle patentového nároku 15, kde chronické podávání inhibitoru PDE5 je denní podávání.
17. Způsob zlepšení relaxační odpovědi v hladkém svalstvu corpus cavernosum zahrnující chronické podávání inhibitoru PDE5 vybraného z (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4-metylendioxyfenyl) pyrazino [2',1':6,1] pyrido [3,4— b] indol -1,4- dionu pro alespoň tři dny.

·· ··0·
18. Způsob podle patentového nároku 17, kde chronické podávání zhruba 1 mg/den do zhruba 25 mg/den inhibitoru PDE5.
19. Použití inhibitoru PDE5 vybraného z (6R,12aR)~ 2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4-metylendioxyfenyl) pyrazino [2^Z,1^Z:6,1] pyrido [3,4—to] indol -1,4- dionu a vardenafilu pro výrobu léku majícího příbalový leták udávající, že inhibitor PDE5 je užitečný k léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu chronickým podáváním zhruba 1 až 10 mg inhibitoru PDE5 po dobu třech dnů.
20. Použití inhibitoru PDE5 vybraného z (6R,12aR)2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4-metylendioxyfenyl) pyrazino [2',1':6,1] pyrido [3,4-b] indol -1,4- dionu a vardenafilu pro výrobu léku majícího příbalový leták udávající, že inhibitor PDE5 je užitečný k léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu chronickým podáváním zhruba 1 až 10 mg inhibitoru PDE5 po dobu třech dnů, a že tato léčba je doprovázena zlepšeným stavem vaskulatury.
21. Použití inhibitoru PDE5 vybraného z (6R,12aR)2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3, 4-metylendioxyfenyl) pyrazino [2^Z,1^Z:6,1] pyrido [3,4-b] indol -1,4- dionu a vardenafilu pro výrobu léku majícího příbalový leták udávající, že inhibitor PDE5 je užitečný k léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu chronickým podáváním zhruba 1 až 10 mg inhibitoru PDE5 po dobu třech dnů, a že tato léčba je doprovázena zlepšeným stavem vaskulatury ve srovnání s chronickou léčbou nebo on-demand dávkováním sildenafilu.
22. Použití inhibitoru PDE5 vybraného z (6R,12aR)2,3,6,7,12,12a-hexahydro -2- metyl -6- (3,4-metylendioxyfenyl) pyrazino [2^Z,1^Z:6,1] pyrido [3,4-b] indol -1,4- dionu pro ·· · ··· ·· ♦· tt ttt 999· 99 9

9 9 999 9 9 9 9 9 9 výrobu léku majícího příbalový leták udávající, že inhibitor PDE5 je užitečný k léčbě sexuální dysfunkce u pacienta potřebujícího tuto léčbu chronickým podáváním zhruba 1 až 10 mg inhibitoru PDE5 po dobu třech dnů, a že tato léčba zlepšuje stav vaskulatury ve srovnání s chronickou léčbou nebo ondemand dávkováním vardenafilu.