CZ20021644A3 - Aryloxypropanolaminy pro zlepąení produkce hospodářských zvířat, způsob jejich přípravy, jejich pouľití a farmaceutický prostředek s jejich obsahem - Google Patents

Description

Aryloxypropanolaminy pro zlepšeni produkce hospodářských zvířat, způsob jejich přípravy, jejich použití a farmaceutický prostředek s jejich obsahem

Oblast techniky

Předložený vynález se týká zemědělské chemie, konkrétně substituovaných aryloxypropanolaminů, jejich fyziologicky přijatelných solí a způsobu podpory růstu, účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa u užitkových zvířat. Způsob zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více výše uvedených sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Důležitý úkol pěstitelství zvířat je vyvinout biologicky účinná činidla, která mohou zvýšit množství a zlepšit kvalitu masa získaného z užitkových zvířat.

Zvýšení množství potravy získané z užitkových zvířat se týká mezi jiným podpory růstu užitkových zvířat, zvýšení účinnosti krmivá používaného při chování užitkových zvířat a/nebo zlepšení produkce libového masa užitkových zvířat. Biologicky účinná činidla, která způsobují tyto účinky jsou obecně označována jako anabolická činidla.

0 0 • 000 • 0 • * , ‘•0 00 • 0 0 0 «0

0 0 0 ·

0 0 0 0 0 «

0 0 0 0 0 0 » 0 «0 * · * “

Zlepšení kvality krmivá, získaného z užitkových zvířat, se týká mezi jiným snížení množství podkožního tuku v mase současně se zachováním nitrosvalového tuku. Podkožní tuk, obecně označovaný za trim tuk, může způsobit zvýšené hladiny cholesterolu a/nebo triglyceridů u jednotlivců, kteří konzumují velká množství masa, má minimální výživnou hodnotu a snižuje celkový výtěžek masa. Proto je žádoucí snížení nebo eliminace tohoto typu tuku z masa. Na druhé straně nitrosvalový tuk, obecně označovaný za prorostlý, přispívá příznivě k chuti masa a udržuje vysoký stupeň kvality. Prorostlý tuk je proto žádoucí pro kvalitu. Biologicky účinná činidla, která jsou mírně lipolytická, mohou snížit množství podkožního tuku při zachování nitrosvalového tuku.

Objevily se jisté publikace, které obecně popisuji arylpropanolaminy, jako je například U.S. Patent 5,013,761 a WO 97/1025. Přesto však přetrvává potřeba biologicky účinných činidel, které jsou současně silně anabolická a mírně lipolytická. Biologicky účinná činidla s těmito vlastnostmi mohou být podávána užitkovým zvířatům pro zlepšení ekonomie produkce masa zvýšením výtěžku masa (zlepšený stupeň výtěžnosti). Biologicky účinná činidla s těmito vlastnostmi může také zvýšit rentabilitu produkce masa tím, že by se produkovalo maso s vysokým stupněm kvality, protože je zdravější pro spotřebu při zachování jeho chuti, což může přinést vyšší cenu masa od zpracovatelů a konzumentů.

9

9 9 • 9 • 99 « 9 9 β· 9 9

9999

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká substituovaných aryloxypropanolaminů a jejich fyziologicky přijatelných solí a způsobu podpory růstu účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa užitkových zvířat.

Bylo zjištěno, že přítomnost karboxamidové skupiny v poloze dva kruhu B v aryloxypropanolaminů strukturního vzorce (I) , uvedeného dále, dává sloučeniny, které jsou silně anabolické. Odpovídající regioisomer s karboxamidovou skupinou v poloze čtyři je významně méně anabolický. Například procento poklesu hladiny dusíku močoviny v krvi (sérum urea nitrogen - SUN), což je indikátor anabolického účinku, u dobytka Ošetřovaného 2-karboxamidovými regioisomery je větší než u zvířat ošetřovaných odpovídajícími 4-karboxamidovými regioisomery (viz Tabulka 1 v Příkladu 17). Kromě toho dobytek ošetřovaný 2-karboxamidovými regioisomery vykazuje mírné zvýšení hladin neesterifikovaných mastných kyselin (non-esterified fatty acid levels - NEFA), což je indikátor lipolytických účinků, zatímco dobytek ošetřovaný 4-karboxamidovými regioisomery obecně vykazuje daleko silnější zvýšení (viz Tabulka 1 v Příkladu 17).

Kromě toho bylo zjištěno, že přítomnost karboxamidové skupiny v poloze dva kruhu B v aryloxypropanolaminů strukturního vzorce (I), uvedeného dále, vede na

4» sloučeniny, které významně zvyšují přírůstek hmotnosti u > ·» • · « • ·· > ·· » t · » ·· <«· ·· ·· • · · 1 i : ,* • · ·

4· ···« kohoutů broilerové drůbeže, pokud jsou podávány v průběhu 28-denního krmného období, obzvláště ve dnech 35-49 jejich životního cyklu (viz Tabulka 4 v Příkladu 20) . Kromě toho byl pozorován trend vedoucí ke zlepšení účinnost krmení v průběhu celého 28-denního krmného období.

Nakonec u ošetřovaných ptáků došlo k významnému zvýšení vzhledem ke kontrole následujících tělesných parametrů: čerstvé jateční hmotnosti; hmotnosti stehna s kostí a kůží; a hmotnosti prsou s kostí a kůží; (viz Tabulka 4 v Příkladu 20) .

Na základě těchto výsledků jsou zde popsány nové sloučeniny a nové způsoby zlepšení produkce masa užitkových zvířat.

Jedno provedení předloženého vynálezu je sloučenina strukturního vzorce (I):

CONR4R5 a její fyziologicky přijatelné sole; kde

R1 je substituovaná nebo nesubstituovaná arylová skupina,

• 4

4 4 • 4 · i

avšak za podmínky, že pokud -X- je -CH-, potom R1 není substituovaná nebo nesubstituovaná karbazolylová skupina;

R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H, C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H, C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh;

X je -N- nebo -CH-; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty.

Dalším provedením předloženého vynálezu je sloučenina strukturního vzorce (II):

OH

R1

CONR4R5 a její fyziologicky přijatelné sole • · · ΦΦΦΦ ♦ ♦ φ » φ··· · φ ·· «φ · • β ··· · · · · ώ * * «φφ φφ ·* »* *» φφφφ

R1 ve strukturním vzorci (II) je . substituovaná nebo nesubstituované arylová skupina; a R2-R5 a kruhy A-B ve strukturním vzorci (II) mají stejný význam jako bylo uvedeno výše pro strukturní vzorec (I) .

Další provedení předloženého vynálezu je způsob zvýšení množství a zlepšení kvality masa získávaného z užitkových zvířat. Způsob zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin strukturního vzorce (I) nebo (II) nebo fyziologicky přijatelné sole sloučeniny strukturního vzorce (I) nebo (II).

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou silně anabolické a mírně lipolytické. V důsledku toho mohou tyto sloučeniny být podávány dobytku pro zvýšení množství masa získaného ze zvířat. Sloučeniny také mohou zlepšit kvalitu masa snížením množství podkožního tuku při současném zachování nitrosvalového tuku. Sloučeniny podle předloženého vynálezu proto mohou být použity pro produkci většího množství masa, které je zdravější pro spotřebitele a uchovává si normální chuť, to jest uchovává prorostlý tuk a vysoký stupeň kvality a tím může zvýšit ziskovost produkce masa. Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou zamýšleny pro ošetřování zdravých zvířat.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 je graf ukazující průměrný denní přírůstek hmotnosti po dvaceti osmi dnech ošetřování dobytka: a) 0,0 mg

• · ·· ·· • · · » ♦ ·· • · · ·· »···

Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 2 je graf ukazující poměr účinnosti krmení po dvaceti osmi dnech pro ošetřovaný dobytek: a) 0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 3 je graf ukazující čerstvou jateční hmotnost pro dobytek ošetřovaný po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 4 je graf ukazující upravenou tloušťku tuku dvanáctého žebra dobytka ošetřovaného po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 5 je graf ukazující průměrný oblast dvanáctého žebra dobytka ošetřovaného po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 6 je graf ukazující jateční složení měkké tkáně dobytka ošetřovaného po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0, 0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 7 je graf ukazující vypočtený výtěžek masa získaného z dobytka ošetřovaného po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0, 0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Obr. 8 je graf ukazující konformační skóre masa získaného z dobytka ošetřovaného po dobu dvaceti osmi dnů: a) 0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně; a 0,5 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti denně.

Detailní popis předloženého vynálezu

Předložený vynález se týká sloučeniny strukturního vzorce (I) nebo (II) . Předložený vynález se také týká způsobu zlepšení produkce hospodářských zvířat podáváním jedné nebo více sloučenin podle předloženého vynálezu hospodářským zvířatům.

Ve výhodném provedení sloučeniny podle předloženého vynálezu mají strukturní vzorec (III):

OH

R1

CONH ² (III)

R1 je jak bylo definováno výše pro strukturní vzorec (II). Výhodně má R1 strukturní vzorec (IV), (V), (VI), (VII) nebo (VIII):

4 ·« ·· 4 • ···	• · 44 • · · 4 4 4 44	44 4· • «9 4 ♦ 4 4
• · 4 4 ·	44 44	•» 4444

(VIII)

Kruhy C až I jsou nezávisle na sobě nesubstituované. Výhodně jsou kruhy C až substituované nebo I nesubstituované.

Arylové skupiny zahrnují karbocyklické aromatické skupiny jako je fenyl, 1-naftyl, 2-naftyl, 1-anthracyl a 2-anthracyl a heteroarylové skupiny jako je N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 2-thienyl, 3-thienyl, 2-furanyl, 3-furanyl, 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl, 2-pyrimidyl, 4-pyrimidyl, 2-pyranyl, 3-pyranyl, 3-pyrazolyl, 4-pyrazolyl,

5-pyrazolyl, 2-pyrazinyl, 2-thiazolyl, 4-thiazolyl,

5-thiazolyl, 2-oxazolyl, 4-oxazolyl a 5-oxazolyl.

Arylové skupiny také zahrnují kondenzované polycyklické aromatické systémy kruhů, ve kterých karbocyklický aromatický kruh nebo heteroarylový kruh je kondenzován k jednomu nebo více dalších heteroarylových kruhů. Příklady zahrnují 1-benzimidazolinyl, 2-benzimidazolonyl, • *

1-benzimidthioazolinyl, 2-benzimidthioazolonyl,

1- karbazolyl, 2-karbazolyl, 3-karbazolyl, 4-karbazolyl,

3-indazolyl, 4-indazolyl, 5-indazolyl, 6-indazolyl,

2- benzothienyl, 3-benzothienyl, 2-benzofuranyl,

3- benzofuranyl, 2-indolyl, 3-indolyl, 2-chinolinyl,

3-chinolinyl, 2-benzothiazolyl, 2-benzooxazolyl, 2-benzimidazolyl, 2-chinolinyl, 3-chinolinyl,

1- isochinolinyl, 3-chinolinyl, 1-isoindolyl a 3-isoindolyl. Do rozsahu výrazu arylová skupina, tak je zde používán, také spadají skupiny, ve kterých jeden nebo více karbocyklických aromatických kruhů a/nebo heteroaromatických kruhů jsou kondenzován na cykloalkylový nebo nearomatický heterocyklický kruh. Nearomatické heterocyklické kruhy jsou nearomatické karbocyklické kruhy, které obsahují.jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané ze souboru, zahrnujícího atom dusíku, atom kyslíku a atom síry v kruhu, které dávají stabilní strukturu. Tyto kruhy mohou být pěti-, šesti-, sedmi nebo osmi-členné. Příklady zahrnují 2-tetrahydrofuranyl, 3-tetrahydrofuranyl,

2- tetrahydrothiofenyl, 3-tetrahydrothiofenyl, 2-morpholino,

3- morpholino, 4-morpholino, 2-thiomorpholino,

3- thiomorpholino, 4-thiomorpholino, 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, 3-pyrrolidinyl, 1-piperazinyl, 2-piperazinyl, 1-piperidinyl, 2-piperidinyl, 3-piperidinyl,

4- piperidinyl a 4-thiazolidinyl.

Jak je zde používán, výraz alifatická skupina zahrnuje C1-C20 uhlovodíky, které mají přímý řetězec, jsou rozvětvené nebo jsou cyklické a které jsou úplně nasycené nebo obsahují jedno, dvě nebo tři místa nenasycení.

»ί · * «**··**· · *··· » ··» · <··.·♦ « *

Φ ··· ·

Vhodné substituenty alifatických skupin, arylových skupin (karbocyklických a heteroarylových), nearomatických heterocyklických kruhů nebo benzylových skupin jsou takové, které významně nesnižuji anabolické účinky ani nemění lipolytické účinky sloučenin. Příklady zahrnují -OH, atom halogenu (-Br, -Cl, -I a -F) , -OR, -O-COR, -CN, -NO₂, COOH, -NH₂, -NHR, -NR2, -COOR, -COR, -CHO, -CONH₂, -CONHR, -CONR2, -SH, -SR a -NH-C(=NH)-NH₂. R je C1-C6 alkyl, benzyl nebo fenyl.

Substituovaný .nearomatický heterocyklický nést skupinu =0, =S, =NH nebo =NR, kde definováno výše, jako substituent. alifatický, substituovaný aromatický, nearomatický heterocyklický kruh nebo benzylová skupina mohou mít jeden, substituenty.

kruh může také R je jak bylo

Substituovaný substituovaný substituovaná dva nebo tři

Předložený vynález se také týká fyziologicky přijatelných solí sloučenin zde popsaných, které zahrnují sloučeniny strukturních vzorců (I), (II) a (III) a sloučeniny uvedené v Tabulce 1. Sole mohou být vytvořeny ze sloučenin, které zahrnují kyselé funkční skupiny, reakcí s vhodnými bázemi. Takové sole zahrnují ty, které byly odvozeny z anorganických bází jako jsou hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhličitany amonné a odvozené od alkalických kovů a kovů alkalických zemin a podobné sloučeniny, stejně tak jako sole odvozené od bazických organických aminů, jako jsou alifatické a aromatické aminy, alifatické diaminy, • 4 « *4 4 • · ··

4 1 «44 44 hydroxyalkaminy a podobně. Takové báze, použitelné pro přípravu solí podle tohoto vynálezu, zahrnují hydroxid amonný, uhličitan draselný, hydrogenuhličitan sodný, hydroxid vápenatý, methylamin, diethylamin, ethylendiamin, cyklohexylamin, ethanolamin a podobně.

V důsledku aminové skupiny mohou být sole sloučenin podle předloženého vynálezu také připraveny reakcí s vhodnou kyselinou. Kyseliny obvykle používané pro vytváření takových solí zahrnují anorganické kyseliny jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová a kyselina fosforečná, stejně tak jako organické kyseliny jako je kyselina paratoluensulfonová, methansulfonová, oxalová, parabromfenylsulfonová, uhličitá, jantarová, citrónová, benzoová, octová a příbuzné anorganické a organické kyseliny. Takové fyziologicky přijatelné sole tady zahrnují sírany, pyro sírany, hydogensírany, siřičitany, hydrogensiřičitany, fosforečnany, mono-hydrogenfosforečnany, dihydrogenfosforečnany, metafosforečnany, pyrofosforečnany, chloridy, bromidy, jodidy, octany, propionáty, dekanoáty, kapryláty, akryláty, mravenčany, isobutyráty, heptanoáty, propioláty, šťavelany, malonáty, jantarany, suberáty, sebakáty, fumarany, maleinany, 2-butin-l,4-dioáty, 3-hexin2,5-dioáty, benzoáty, chlorbenzoát, hydroxybenzoáty, methoxybenzoáty, ftaláty, xylensulfonáty, fenylacetáty, fenylpropionáty, fenylbutyráty, citronany, mléčnany, hipuráty, β-hydroxybutyráty, glykoláty, maleáty, vínany, methansulfonáty, propansulfonáty, naftalen-l-sulfonáty, naftalen-2-sulfonáty, mandlany a podobné sole. Sole jako *9 9 ♦ 9 9 · » 9 «

99·· « 9 ·· 9 · « • 9 4 4 9·« «·<

«·· ·· 9 9 * · 9 · ·9 9· chlorid amonný, šťavelan amonný, octan amonný a

4-hydroxybenzoát amonný jsou výhodné. Obzvláště výhodné jsou sole sloučeniny 6 odvozené od octanu amonného a

4-hydroxybenzoátu amonného.

Ve strukturních vzorcích zde uvedených je vazba, kterou se chemická skupina nebo část molekuly připojuje ke zbytku molekuly nebo sloučeniny, označena následujícím symbolem:

Například odpovídající symbol ve strukturních vzorcích (IV)-(VIII) označuje vazbu, kterou se fenylový kruh bicyklického kruhového systému váže k atomu kyslíku v poloze 3 molekuly strukturního vzorce (I), (II) nebo (III).

Předložený vynález zahrnuje solváty sloučenin strukturního vzorce I a jejich fyziologicky přijatelné sole. Konkrétní sloučenina podle předloženého vynálezu nebo její fyziologicky přijatelná sůl může vytvářet solváty s vodou nebo běžnými organickými rozpouštědly. Takové solváty spadají do rozsahu sloučenin podle předloženého vynálezu.

Kromě toho je zřejmé, že pro sloučeniny strukturního vzorce I existují diastereomery a, v závislosti na substituentech, mohou existovat další diastereomery. Sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují směsi dvou nebo více diastereomerů stejně tak jako každý jednotlivý stereoisomer.

► 4 4 « ·· *♦

Je také zřejmé, že některé heterocykly mohou existovat v tautomerních formách. Všechny takové formy spadají do rozsahu předmětu předloženého vynálezu.

Užitková zvířata jsou zvířata pěstovaná pro produkci potravy. Přežvýkavci, jako jsou krávy, býci, jalovice, býčci, ovce, buvoli, bizoni, kozy a antilopy, jsou příklady hospodářských zvířat. Další příklady hospodářských zvířat zahrnují prasata a ptáky (například drůbež), jako jsou kuřata, kachny, krocani a husy. Ještě dalšími příklady hospodářských zvířat jsou ryby, měkkýši a korýši pěstovaní v akvakultuře. Spadají sem také exotická zvířata používaná pro produkci potravy, jako jsou aligátoři, vodní bizoni a bezkřídlí ptáci (například emu, nandu nebo pštros). Způsob podle předloženého vynálezu je výhodně prováděn s přežvýkavci jako jsou krávy, jalovice, býci a býčci a s ptáky jako jsou kuřata, krocani a kachny.

Účinné množství sloučeniny podle předloženého vynálezu je množství, které, pokud je podáváno užitkovému zvířeti, zvýší množství masa a/nebo kvalitu masa získaného ze zvířete.

Zvýšení množství získaného masa znamená vyvolání většího růstu u zvířete ošetřeného ve srovnání se zvířetem bez ošetření. Alternativně zvýšení množství získaného masa znamená podporu vytváření libového masa. Vytváření libového masa je podporováno například pokud dochází k vyššímu poměru svaloviny k tuku jako výsledek ošetření ve srovnání

99 99 99 99 99

9 9· 9 9 9 999 ♦ ··· · * 99 99 ·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

999 99 99 9· ·· ·-··· se zvířetem bez ošetření. Alternativně zvýšení množství získaného masa znamená zlepšení účinnosti využití krmivá. Využití krmivá je účinnější, pokud dochází ke zvýšení přírůstku tělesné hmotnosti na dané množství krmivá, spotřebovaného zvířetem, jako výsledek ošetření ve srovnání se zvířetem bez ošetření.

Zvýšení kvality masa se týká zlepšení jateční kvality zvířete. Zlepšená jateční kvalita se vztahuje například k vytváření méně tučné tkáně (podkožní tuk) a/nebo libovější tkáně (zlepšený stupeň výtěžnosti) , zatímco je uchováván nitrosvalový tuk (stupeň kvality). Zlepšená jateční kvalita tedy obecně vede k produkci masa, které je zdravější pro konzumenta, například je méně pravděpodobné, že způsobí zvýšené hladiny triglyceridů a/nebo cholesterolu a to při zachování chuti.

Jak je zde používán, výraz mírně lipolytické činidlo znamená sloučeninu, která umožňuje změnu hladiny neesterifikovaných mastných kyselin v krvi z přibližně 1 na přibližně 500, výhodně z přibližně 1 na přibližně 300.

Účinné množství pro podávání se poněkud mění v závislosti na konkrétním druhu zvířete, které má být ošetřováno a na konkrétní používané účinné složce, ale obecně bude v rozmezí od přibližně 0,2 do přibližně 1000 částí na milion (ppm: miligramů sloučeniny na jeden kilogram krmivá) celkového denního příjmu krmivá. Takové množství poskytne dávkování od přibližně 0,002 do přibližně 50 mg na jeden kilogram tělesné hmotnosti. Výhodné provedení používá od tt

0 * • · 0 ** · · 0 0· »· • 0 00 0 ♦ · » · · • 0 0

0« • * 00 0 0 přibližně 0,5 do přibližně 200 ppm a výhodněji od přibližně 1 do přibližně 40 ppm. Například pokud se způsob podle předloženého vynálezu aplikuje na zvířata jako jsou přežvýkavci nebo vepři, sloučenina bude přidávána do denní dávky krmivá v množství od přibližně 1 do 100 ppm denní dávky krmivá.

Způsob podle předloženého vynálezu se výhodně provádí orálním podáváním účinného množství sloučeniny podle předloženého vynálezu užitkovému zvířeti. Mohou být použity i další způsoby podávání, například do vejce, intranasální (například intranasální sliznice) nebo podkožní, intramuskulární nebo intravenózní injekce; takovéto způsoby jsou však méně praktické.

Pro orální podávání se sloučenina podle předloženého vynálezu výhodně smíchává s vhodnými nosiči nebo ředidly, běžně používanými v pěstitelství zvířat. Zvířecí krmivo obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu představuje další provedení předloženého vynálezu. Typické nosiče nebo ředidla, běžně používaná v takových krmivech, zahrnují kukuřičnou moučku, mletá vřetena kukuřičných klasů, sójovou moučku, vojtěškovou moučku, rýžové slupky, mletou sóju, moučku z bavlníkového semene, kostní moučku, mletou kukuřici, moučku z vřeten kukuřičných klasů, pšeničný šrot, vápenec, fosforečnan vápenatý, chlorid sodný, močovinu, lihovarnické sušené zrno, vitaminy a/nebo minerální směsi, třtinovou melasu nebo další tekuté nosiče a podobně. Takové nosiče podporují stejnoměrné rozdělení

• · ·	0 0	00	• 0	00
00 0	0 0	0 0	♦ ·	0 ·
• · · 0	·' 0	0 0	0 0	•
				«
• 0 »	* 0	0 0	0 0	0
• 0 · 0 0	• ·	» ·	0 ·	00 0 0

účinné složky a typicky obsahují od přibližně 20 do přibližně 98 hmotnostních procent krmivá.

Zatímco výhodný způsob orálního podávání sloučeniny podle předloženého vynálezu je prostřednictvím denních dávek krmivá, sloučeniny mohou také být zahrnuty do solných bloků a minerálních látek určených k lízání, stejně tak jako mohou být přidávány přímo do nádrží nebo do pitné vody způsobem vhodným pro orální konzumaci. Sloučeniny mohou také být navíc upraveny s polymorfními materiály, vosky a podobně pro dlouhodobé kontrolované uvolňování a být podávány zvířatům jako bolus nebo tablety pouze tak, jak je tomu třeba pro udržování požadovaného denního přísunu účinné složky. Sloučeniny mohou také být podávány orální sondou a/nebo aplikovány transdermálně.

Pro parenterální podávání mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu smíchány a obvyklými nosiči jako je voda, propylenglykol, polyethylenglykoly, n-methyl pyrrolidon, glycerol formal, kukuřičný olej, sezamový olej, stearan vápenatý, polymerní materiály a podobně. Takové přípravky mohou být odlity to pelet a podávány jako injekce nebo jako podkožní implant s pomalým uvolňováním, podávači zařízení s trvalým uvolňováním do bachoru nebo intranasální zařízení. Taková podávání mohou být prováděna s frekvencí podle potřeby pro zajištění správného dávkování účinné složky pro dosažení požadované podpory rychlosti růstu a zlepšení poměru libového masa a účinnosti krmení.

• · ' 9 9 • 4 4 4 • ·· · 4 •4« 99 9 9 ·· ······

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny způsoby, které jsou popsány ve WO 97/10825, autoři Bell a kol., WO 98/09625 , autoři Crowell a kol., U.S. patent č. 5,808,080 a U.S. patent č. 6,046,227. Veškerý obsah těchto dokumentů je zde zahrnut jako reference. Reakční schémata pro přípravu těchto sloučenin jsou ukázána dále ve Schématech I a II:

Schéma I

CONR4R5 • · • 44

4« 44

4 4 • .· 4 4 • 4 44 · 4 4

4 ·

4 4 4 4 4 4 •4 44 444444

Schéma II

Ve Schématech I a II mají R1-R5, význam jako bylo uvedeno výše.

X a kruhy A-B stejný

Amínace epoxidů ve Schématech I a II se provádí za podmínek známých v oboru pro tento typ reakce. Například může být epoxid kombinován s aminem v alkoholu, výhodně v ethanolu, při teplotě okolí až teplotě zpětného toku reakční směsi. Například se reakce provádí za podmínek obecně popsaných v Atkins a kol., Tetrahedron Letters 27:2451 (1986), který je zde celý zahrnut jako reference. Příklad specifických podmínek pro reakci epoxidu s aminem je uveden v Příkladu

5.

·· 44 ·♦ ·· • ' · · * · *44« •44 · ··· 4 4 · • 4 4444 444 • 4 44 44 44 ··«·

Reakce hydrolýzy, ukázaná ve Schématu II, může být prováděna způsoby známými v oboru, používajíce například kyselinu polyfosforečnou, H₂O₂ a K₂C0₃ v dimethylsulfoxidu, H₂O₂ a hydroxid amonný, H₂O₂ a hydroxid sodný, hydroxid draselný a terč.-butanol nebo vodu a HCl. Příklad specifických podmínek pro hydrolýzu nitrilu je uveden v Příkladu 6.

Výhodný způsob přípravy Sloučeniny 6 v Tabulce 1 zahrnuje aminaci epoxidu představovaného následujícím strukturního vzorcem

aminem představovaným následujícím strukturním vzorcem

ve kterém R6 je methyl nebo ethyl, s následným přidáním skupiny COOR6 s amoniem pro vytvoření Sloučeniny 6. Příklady specifických podmínek pro syntézu Sloučeniny 6 tímto způsobem jsou uvedeny v Příkladech 13-15.

• 4·

4 4

4 4

4444

Substituenty, které interferují s reakcemi ukázanými ve Schématech (I) a (II) mohou být přítomny za podmínky, že jsou nejprve převedeny na jejich chráněnou formu. Vhodné ochranné skupiny jsou známy odborníkům oboru a jsou popsány v monografii Green a Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley a Sons, 1991, která je zde celá zahrnuta jako reference.

Individuální opticky aktivní isomery sloučenin podle předloženého vynálezu mohou být připraveny z jejich opticky aktivních prekurzorů způsoby popsanými výše nebo separací racemických směsí. Tato separace může být prováděna derivatizací pomocí chirálního reagentu následovanou chromatografii nebo opakovanou krystalizací. Odstranění chirálních dodatečných složek standardními způsoby poskytuje v zásadě opticky čisté isomery sloučenin podle předloženého vynálezu nebo jejich prekurzorů. Další detaily týkající se separace mohou být získány z monografie Jacques a kol., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons, 1981.

Sloučeniny, používané jako počáteční výchozí materiály syntézy sloučenin podle předloženého vynálezu, jsou dobře známy a pokud nejsou komerčně dostupné, jsou snadno syntetizovatelné standardními způsoby běžně používanými odborníky v oboru.

Předložený vynález je ilustrován následujícími příklady, které nejsou zamýšleny jako omezující jakýmkoli způsobem.

4* ·· ·· • 4 · · · · • 4 ··

4·· ·· · 4 ·· ······

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava 4-[(2S)-oxiranylmethoxy]-lH-indolu

Práškový K2CO3 (40 gramů, 289 mmolů, 300 mesh) byl přidán do dimethylsulfoxidu (DMSO) (200 ml) obsahujícího H₂O (4 ml) pod atmosférou N₂ při teplotě okolí a směs byla míchána po dobu 30 minut. Do směsi byl přidán 4-hydroxyindol (25,2 gramů, 189 mmolů) (mírná exotherma na teplotu 27 °C) a směs byla míchána po dobu 10 minut. Byl přidán (S)-glycidyl nosylát (50,0 gramů, 193 mmolů, 98,5 % ee) (mírná endotherma). Kaše byla míchána po dobu 30 minut za teploty 20-25 °C a po dobu 23 hodin za teploty 25-27 °C dokud reakce nebyla ukončena. Směs byla zředěn acetonem (400 ml) a filtrována. Koláč byl promýván acetonem (400 ml) a zkombinované filtráty byly koncentrovány na objem přibližně 250 ml za vakua udržujíce teplotu pod 35 °C. Teto koncentrát byl přidán po kapkách, v průběhu asi 2 hodin, do deionizované H₂O (650 ml) udržované na teplotě 15-20 °C pomocí lázně led/voda. Výsledná kaše byla míchána po dobu 1 hodiny za této teploty a po dobu 30 minut za teploty 5-10

f *4	44 44	44 44
«4 4	4 4 4 4	4 4 4	4
4 4 44	4 4 «4	4 4	4
• 44 44	4 4 44	4 4 4 44	4

°C. Pevná látka byla izolována filtrací a promývána studenou deionizovanou H₂O (150 ml). Pevná látka byla sušena za vakua za teploty 35 °C pro získání 30,3 gramů produktu.

Silikagel 62 (1,6 gramů, 0,05 % hmotn.) byl přidán do roztoku surového produktu získaného výše (30,3 gramů, 171 mmolů) v CH₂C1₂ (100 ml) při teplotě okolí a kaše byla míchána po dobu 1 hodiny pod atmosférou N₂. Směs byla potom vakuově filtrována a koláč byl proplachován CH₂C1₂ (20 ml). Do filtrátu byl přidán po kapkách heptan (500 ml) v průběhu 1 hodiny při teplotě okolí pro precipitaci produktu. Výsledná kaše byla míchána po dobu 30 minut při teplotě okolí a po dobu 30 minut za teploty 0-5 °C. Směs byla filtrována, proplachována studeným heptanem (150 ml) a vakuově sušena za teploty 35 °C a tlaku 5 Torrů pro získání

26,5 gramů produktu (79 % výtěžek), teplota tání 72,4-74,0 °C, který potom tuhnul a znovu tál za teploty 79,8-81,3 °C.

Příklad 2 - Příprava 4-(2-methyl-2-nitropropyl)fenolu

O₂N

OH

Terč.-butoxid draselný (29,6 gramů, 264 mmolů) byl přidán do roztoku 2-nitropropanu (260 ml, 2,90 molů),

4-hydroxybenzyl alkoholu (65,0 gramů, 524 mmolů) v diglyme (260 ml) při teplotě okolí s mechanickým mícháním. V

		n	··
*· «	•	•	• ·	«		*	• ·
• · »·	•	•	··	9		•	9
i · ·	•	•	9 9	•		•	9
1» » · · ·	• *		··		»·		9999

průběhu přidávání se reakční teplota zvýšila z 25 °C na 39 °C. Reakční směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku a míchána po dobu 6 hodin za teploty přibližně 137 °C, používajíce Dean-Starkův lapač pro odstraňování vody, jakmile se vytvořila (celkový objem destilátu 28 ml, 7 ml vodné fáze). Po ochlazení na teplotu okolí byly do reakčního roztoku přidány deionizované H₂0 (325 ml) a ethylacetát (520 ml). Fáze byly separovány a organická fáze byla promývána deionizovanou H₂O (2 x 325 ml) .

Organická fáze byla koncentrována rotačním odpařováním za teploty 78 °C pro získání 181,2 gramů oleje. Tento olej byl rozpuštěn v methanolu (65 ml) pro použití v následující reakci. Koncentrace výsledného roztoku byla určena pomocí

NMR analýzy na 56,3% hmotn. (99,6 % výtěžek).

Příklad 3 - Příprava acetátové sole 4-(2-amino2-methylpropyl)fenolu

Do N₂-odplyněného roztoku 4-(2-methyl-2-nitropropyl)fenolu (45,0 gramů, 230 mmolů) v MeOH (450 ml) byla přidána 5 % Pd/C (13,5 gramů 50 % vodou navlhčeného katalyzátoru, 15 % hmotn. na základě suché hmotnosti) . Směs byla natlakována na 35-40 psi vodíkem a zahřívána na teplotu 60 °C s intenzívním mícháním. Když byla reakce ukončena (přibližně ·· ·· • ·· • * < ·

3« · ·· ·· e· ·* ·· • · © Λ * · 9 * • * ·9 · · · • «· » · · ♦ * « « · · · · · ·* ·· ♦· ·**· hodin), směs byla ochlazena na teplotu okolí a katalyzátor byl opatrně odstraněn filtrací přes filtrační pomůcku Hy-Flow. Koláč byl promýván methanolem o teplotě 50 °C (135 ml) a zkombinované filtráty byly koncentrovány rotačním odpařováním na čistou hmotnost přibližně 120 gramů. Koncentrát byl zředěn ethylacetátem (500 ml) a roztok kyseliny octové (14,2 gramů, 235 mmolů) v ethylacetátu (250 ml) byl přidán do výsledného roztoku během 30 minut. Výsledná kaše byla míchána po dobu 2 hodin při teplotě okolí. Kaše byla filtrována a pevná látka byla promývána ethylacetátem (2 x 100 ml) . Produkt byl vakuově sušen za teploty 65 °C a tlaku 5 Torrů po dobu 24 hodin pro získání 46,5 gramů (89,6) bílé krystalické pevné látky, teplota tání 209-215,9 (dekompozice).

Příklad 4 - Příprava 2-[4-(2-amino-2-methylpropyl)fenoxy]3-karbonitrilpyridinu

isooktan

Do 3 1 tříhrdlé baňky opatřené mechanickým míchačem, DeanStarkovým lapačem s kondenzátorem a termočlánkem, byla vložena acetátová sůl 4-(2-amino-2-methylpropyl)fenolu (50,78 g, 0,23 molů), 2-chlornikotinnitril (32,8 g, 0,24 molů) a práškový K₂CO₃ (77,7 g, 0,56 molů). Do pevných * * · · · »· ·· 9« • » · · « · · « « · φ látek byly přidány N,N-dimethylacetimid (609 ml) a isooktan (2,2,4-trimethylpentan, 122 ml). Dean-Starkův lapač byl naplněn isooktanem a systém byl proplachován N₂. Systém byl potom zahříván na teplotu zpětného toku s intenzívním mícháním a ponechán na teplotě zpětného toku po dobu 1 hodiny. Olivově zelená reakční směs byla potom ochlazena na teplotu 30 °C během jedné hodiny a směs byla filtrována přes papír. Filtrační koláč byl promýván DMAC (250 ml) a filtrát byl stripován za teploty 80 °C po dobu 1,5 hodiny za vakua pro získání hustého tmavě zeleného oleje. Olej byl vyjmut v dichlormethanu (580 ml) a promýván deionizovanou vodou (1160 ml) . Vrstvy byly separovány a organická vrstva byla promývána další vodou (250 ml). Organická vrstva byla potom smíchána s vodou (1 1) a pH bylo upraveno na přibližně 1 pomocí 25 ml koncentrované HCl. Vrstvy byly separovány a vodná/produktová vrstva promývána dichlormethanem (250 ml). Vodná fáze byla potom smíchána s dichlormethanem (1 1) a pH bylo upraveno na 12-13 pomocí 5N NaOH. Vrstvy byly separovány a organická vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, filtrována a stripována pro získání pevného hnědého produktu (53 g, 88 %, >99 % na základě HPLC: SB-C18 kolona, 40/60 isokratická směs acetonitrilu, 0,1 % TFA ve vodě, retenční doba produktu je 3,3 minuty). 20 gramová dávka byla rekrystalizována z toluenu (60 ml) a heptanu (200 ml) pro získání vzorku pro analytickou charakterizaci, teplota tání 91,0-94,5 °C.

Analýza: Vypočteno pro Ci₆Hi₇N3O: C, 71,89; H, 6,41; N, 15,72.

Nalezeno: C, 71,20; H, 6,38; N, 15,61.

¢.9 4 4 4« 44 4 4 • 44 · · 4 4 4 44 4

4444 4 444 4 4 · . · S · · · · * · · ··· ·· ·· «· ·· ····

Příklad 5 - Příprava (S)-2-[4-[2-(2-hydroxy-3-(ΙΗ-indol4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy]3-pyridinkarbonitrilu, hydrochloridová sůl

Do tříhrdlé baňky opatřené kondenzátorem, přívodem dusíku, mechanickým míchačem a termočlánkem byl vložen 4—[(2S)— oxiranylmethoxy]-lH-indol (8,5 gramů, 44,9 mmolů, 98,5 % ee) , 2-[4-(2-amino-2-methylpropyl)fenoxy]-3-karbonitrilpyridin (21,01 gramů, 78,6 mmolů) a isopropylalkohol (255 ml) . Reakční směs byla zahřívána za teploty zpětného toku (78 °C) po dobu 17 hodin pod atmosférou N₂. Roztok byl potom ponechán ochladit se na teplotu okolí a byl míchán po dobu jedné hodiny. Ochlazená směs byla filtrována přes filtrační pomůcku Hy-Flo (16,5 gramů) a filtrační koláč byl promýván ísopropanolem (43 ml). Filtrát byl koncentrován na čistou hmotnost 55 gramů za úplného vakua za teploty 50 °C. Do koncentrovaného roztoku byl přidán ethylacetát (85 ml) a výsledný roztok byl koncentrován za stejných podmínek na ·

·« »4 44 44 • «· 4 4 · 4 4 • **4 4 Γ 9 f· 4 4

4* 4444 čistou hmotnost 52 gramů. Koncentrát byl potom vyjmut v ethylacetátu (230 ml) a byl přidán 2,5 % hmot./obj. roztok NaCl (150 ml). Dvoufázový systém byl intenzívně míchán a pH bylo upraveno na hodnotu 7,2 pomocí ledové kyseliny octové. Fáze byly separovány a organická fáze byla extrahována pomocí 2,5 % solného roztoku (2 x 50 ml). Organická fáze byla promývána postupně roztokem NaOH/NaCl (50 ml, 0,89 gramů NaOH) a vodou (50 ml).

Tvorba soli: Organická fáze byla koncentrována na 40 gramů čisté hmotnosti za podmínek uvedených výše. Koncentrát byl zředěn ethylacetátem a stripován na 44,9 gramů pro azeotropní vysušení roztoku. Roztok byl potom rozdělen do tří stejných částí a jedna třetina roztoku byla koncentrována na 14 gramů (přibližně 6,83 gramů volné báze) . Do koncentrátu byly přidány přiměřené objemy ethylacetátu (40 ml) a ethanolu (18,7 ml) po uvedení roztoku do poměru 1/3,5 ethanol ku ethylacetátu, uvažujíce při tom reziduální rozpouštědlo v produktovém koncentrátu a ředící faktor 12,3 ml/gram produktu. Roztok byl zahřát na teplotu zpětného toku a pH bylo upraveno na hodnotu 3,5 pomocí 0,5 N roztoku HC1 v ethylacetátu (přibližně 30,7 ml). Roztok by v daný okamžik měl mít poměr přibližně 1/4,3 ethanol k ethylacetátu s ředícím faktorem přibližně 14,5 ml/gram produktu. Roztok byl ponechán ochladit se na teplotu okolí a byl míchán po dobu 15 hodin, po této době roztok byl ochlazen v ledové lázni a byl míchán za teploty 0 °C po dobu 3 hodin. Kaše byla potom filtrována a krystaly byly promývány studenou směsí 1:4 ethanol/ethylacetát (10 ml) . Produkt byl sušen přes noc za vakua za teploty 50 °C • r • 4 • 9

9 · • Λ · • · · · : i • · 9 « · • Λ *9 ·

· tf

Analýza: Vypočteno pro 7,19; N, 11,36. Nalezeno: C, 65,59; H,

Kyselý vodný extrakt pro získání 5,5 gramů (75 %) bílé krystalické pevné látky, teplota tání 188,8-191,0 °C.

C27H29CIN4O3: C, 65, 78; H, 5,93; Cl,

6,12; Cl, 7,25; N, 11,36.

z výše uvedeného zpracování byl upraven na pH 12-13 pomocí 1 N NaOH roztoku v intenzívně míchaném dvoufázovém systému s MTBE (80 ml) . Vrstvy byly separovány a organický extrakt byl sušen nad Na2SO₄, filtrován a koncentrován na pevnou látku s 80-90 % výtěžkem.

Příklad 6 - Příprava Sloučeniny 6 jako volné báze z (S)2-(4-[2-[2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]2-methylpropyl)-fenoxy]-3-pyridinkarbonitrilu, hydrochloridové soli

OH

30% H₂O₂

--- Sloučenina 6

K₂CO₃

Do tříhrdlé baňky opatřené přívodem míchačem a termočlánkem bvlv íku, mechanickým vloženy (S)2-[4-[2-[[2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propyl]amino]2-methylpropyl]fenoxy]-3-pyridinkarbonitril,

0 0 0

hydrochloridová sůl (10 gramů, 20,3 mmolů) a DMSO (70 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 30 minut pro zajištění úplného rozpuštění. Roztok byl vložen do chladicí vodní lázně a byl přidán 2,2 N NaOH (10 ml, 22 mmolů) během 10 minut, udržujíce teplotu pod 35 °C. Po míchání po dobu 30 minut byl přidán 30 % vodný H₂O₂ (2,71 ml) v sedmi stejných dávkách v průběhu 40 minut, udržujíce teplotu pod 35 °C. Reakce byla ukončena po uplynutí 30 minut. Vodný roztok Na₂SO₃ (1,60 gramů, 12,7 mmolů v 35 ml vody) byl přidán do reakční směsi ve 4 částech v průběhu 15 minut, udržujíce reakční teplotu pod 35 °C. Po 15 minutách hustý roztok vykázal negativní test na peroxid. Byl přidán ethylacetát (75 ml) a roztok byl míchán po dobu 30 minut. Byly přidány další ethylacetát (100 ml) a H₂O (100 ml) a fáze byly separovány. Organická fáze byla promývána pomocí H₂O (100 ml). Zkombinované vodné frakce byly zpětně extrahovány ethylacetátem (100 ml) a organická fáze byla zkombinována s předchozími organickými frakcemi. Část roztoku (10 %) byla uchována jako zásoba surové volné báze Sloučeniny 6, která byla získána odstraněním rozpouštědla. Sloučenina 6 byla analyzována elektrosprejovou ionizační hmotnostní spektrometrií; molekulární iontový pík byl 475,0 (vypočtená molekulová hmotnost byla 474,56).

Zbytek zkombinovaných organických extraktů byl koncentrován rotačním odpařováním za teploty 50 °C na čistou hmotnost 18-20 gramů. Residuum bylo rozpuštěno v ethylacetátu a ethanolu pro získání poměru 7:1 ethylacetát/ethanol s koncentrací 8 ml/gramů volné báze. Procento vody bylo určeno titrací podle Karla Fischera. Obsah vody by měl být mezi 1,0-2,0 % hmotn. pro maximální výtěžky při krystalizaci. Po zahřívání roztoku na teplotu zpětného toku byla přidána ledová kyselina octová (1,10 gramů, 18,3 mmolů) a roztok byl naočkován. Kaše byla ochlazena na teplotu okolí a míchána přes noc. Po ochlazování na teplotu 0 °C po dobu 2 hodin byl produkt filtrován, koláč byl promýván studenou směsí 7:1 ethylacetát/ethanol (20 ml) a pevná látka byla sušena na vzduchu po dobu 1 hodiny. Produkt byl vakuově sušen přes noc za teploty 70 °C pro získání 7,4 gramů (96 % čistota, 86 % výtěžek) produktu ve formě bílé krystalické pevné látky, teplota tání 137 (scvrkává se) 143,1-153,2 °C.

Analýza: Vypočteno pro C27H30N4O4 · C2H4O2: C, 65,15; H, 6,41; N, 10,48.

Nalezeno: C, 65,55; H, 6,37; N, 10,88.

Příklad 7 - Příprava solí Sloučeniny 6

Hydrochloridová sůl

Roztok HC1 v ethanolu (7,04 ml 0,6 M roztoku, 4,22 mmolů) byl přidán do roztoku zahřívaného na teplotu zpětného toku sloučeniny 6 jako volné báze (2,0 gramů, 4,2 mmolů) v ethanolu (9,0 ml). pH bylo opatrně upraveno na 3,0, přidávajíce triethylamin nebo HC1 podle potřeby. Roztok byl naočkován a ponechán ochladit se na teplotu okolí a poté byl míchán přes noc. Kaše byla chlazena na teplotu 0 °C po dobu 2 hodin, filtrována a filtrát byl promýván 3 ml studeného ethanolu. Bělavá pevná látka byl vakuově sušena přes noc za teploty 50 °C a tlaku 5 Torrů pro získání 1,90 gramů (88 % výtěžek) bělavé pevné látky, teplota tání

207,0-211,0 °C.

Analýza: Vypočteno pro C27H30N4O4 · HCl: C, 63,46; H, 6,11; N, 10,96.

Nalezeno: C, 63,00; H, 6,19; N, 11,04.

Acetátová sůl

Kyselina octová (278 mg, 4,6 mmolů) v ethanolu (2,0 ml) byla přidána do roztoku zahřívaného na teplotu zpětného toku sloučeniny 6 jako volné báze (2,0 gramů, 4,2 mmolů) v ethylacetátu (14,0 ml). Roztok byl naočkován a ochlazen pomalu na teplotu okolí a míchán přes noc. Kaše byla chlazena na teplotu 0 °C po dobu 2 hodin, filtrována a promývána studenou směsí 7:1 ethylacetát/ethanol (4 ml). Bílá pevná látka byla vakuově sušena přes noc za teploty 70 °C a tlaku 5 Torrů pro získání 1,94 gramů (86% výtěžek) bělavé pevné látky, teplota tání 148,7-154,2 °C.

Analýza: Vypočteno pro C27H30N4O4 · C2H4O2: C, 65,15; H, 6,41; N, 10,48. Nalezeno: C, 65,72; H, 6,30; N, 11,06.

Analýza rentgenové práškové difrakce dalších dávek připravených podobným způsobem prokázala, že se jedná o krystalické pevné látky.

4-hydroxybenzoátová sůl

Roztok kyseliny 4-hydroxybenzoové (12,53 gramů, 90,7 mmolů) v horkém ethanolu (171 ml) byl přidán do roztoku zahřívaného na teplotu zpětného toku volné báze (42,8 » 4« • 4 « » · 4« 4 • 4 · · · • ·

4 4 44

4 4 4 « 4 4 «

4 4

4*4 • 44 4 ·

4* · 4 4 4 gramů, 90,2 mmolů) v ethylacetátu (343 ml) a výsledný roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku po dobu 15 minut. Roztok byl usazováním oddělen od malého množství nerozpustného residua a naočkován. Roztok byl pomalu ochlazen na teplotu okolí a byl míchán přes noc. Kaše byla chlazena na 0 °C po dobu 2 hodin. Pevné látky byly filtrovány, promývány studenou směsí 2:1 ethylacetát/ethanol. a vakuově sušeny přes noc za teploty 70 °C a tlaku 5 Torrů pro získání 45,4 gramů (82% výtěžek) bělavé pevné látky, teplota tání 148,3-150,5, která potom tuhnula a znovu tála za teploty 159-186,9 °C (dekompozice). Pomocí rentgenové práškové difrakce bylo prokázáno, že jak vlhký koláč, tak i usušená pevná látka byly krystalické.

Šťavelanová sůl

Horký roztok kyseliny šťavelové (37,8 mg, 0,42 mmolů) v methanolu (2,5 ml) byl přidán do roztoku zahřívaného na teplotu zpětného toku volné báze (250 mg, 0,53 mmolů) v methanolu (2,5 ml). Roztok byl zahříván za teploty zpětného toku po dobu 1 hodiny. Roztok byl pomalu ochlazen na teplotu okolí a míchán přes noc. Kaše byla ochlazena na teplou 0 °C po dobu 2 hodin. Pevné látky byly filtrovány, promývány studeným methanolem a sušeny přes noc za teploty 70 °C a tlaku 5 Torrů pro získání ' 194 mg (65 %) bělavé pevné látky, teplota tání 214,9 (dekompozice). Pomocí rentgenové práškové difrakce bylo prokázáno, že jak vlhký koláč, tak i usušená pevná látka byly krystalické.

• 000

Příklad 8 - Syntéza ethylesteru kyseliny 2-[4-(2-amino2-methylpropyl)fenoxy]-3-pyridinkarboxyiové

COOEt

4-(2-amino-2-methylpropyl)fenol (55,18 gramů, 244,9 mmolů) byl přidán do 5,05 N KOH (97,2 mmolů, 2,0 ekvivalentů). Směs byla zahřívána na teplotu 50 °C pro získání homogenního žlutého roztoku. Byly přidány chlorbenzen (1104 ml) a N,N-dimethylacetamid (10,7 gramů, 122 mmolů) a směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku (přibližně 100 °C). Voda byl azeotropně odstraňována pomocí Dean-Starkova lapače. Za teploty přibližně 125 °C se začala vytvářet pevná látka. Když teplota v nádobě dosáhla 132 °C, byla odstraněna voda a reakční směs byla hustá, ale míchatelná kaše (bylo nutné mechanické míchání). Dean-Starkův lapač byl odebrán a bylo odebráno a odstraněno 100 ml chlorbenzenu. Do kaše byl přidán bezvodý chlorbenzen (50 ml), následovaný ethyl-2-chlornikotinátem (50,0 gramů, 269 mmolů) v chlorbenzenu (50 ml) . Kaše byla zahřívána za teploty zpětného toku, dokud reakce nebyla ukončena (přibližně 29 hodin). Jak reakce postupovala, kaše houstla a zabarvila se do béžová. Po ochlazení na teplotu okolí byla do směsi přidána voda (385 ml) a 1 N NaOH (25 ml, 0,1 ekvivalentů) a fáze byly separovány. Organická fáze byla promývána vodou (285 ml) a roztok byl koncentrován na

9 9 i

• 99 «·· ·» ·· čistou hmotnost 700 gramů (9,83% síla na základě HPLC, 89 % výtěžek) pro použití v následující reakci.

Příklad 9 - Příprava kyseliny 2-[4-(2-amino2- methylpropyl)fenoxy]-3-pyridinkarboxylové, ethylester, sůl kyseliny octové

Ethyl-2-(4-(2-amino-2-methylpropyl)fenoxy]-3-pyridinkarboxylát (10,3 gramů, 32,8 mmolů) byl rozpuštěn v ethylacetátu (52 ml) a heptanu (41 ml) a roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku. Byla přidána kyselina octová (1,97 gramů, 38,8 mmolů), roztok byl naočkován a pomalu ochlazen na teplotu okolí. Po uplynutí 30 minut při teplotě okolí byla kaše ochlazena na teplotu 0 °C a míchána po dobu 1,5 hodin. Produkt byl filtrován, promýván studenou směsí 1:1 ethylacetát/heptan (20 ml) a vakuově sušen za teploty 50 °C po dobu 18 hodin pro získání 10,29 g (97 % čistota, 81 % výtěžek), teplota tání 122,9-124,5 °C.

Příklad 10 - Příprava kyseliny (S)-2-[4-[2-[2-hydroxy3- (lH-indol-4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy]3- pyridinkarboxylové, ethylester, sůl kyseliny

4- hydroxybenzoové

4-[(2S)-oxiranylmethoxy]-iH-indol (9,00 gramů, 47,6 mmolů) byl přidán do roztoku ethyl-2-[4-(2-amino-2-methylpropyl)fenoxy)-3-pyridinkarboxylátu (162,8 gramů, 10,1 % hmotn.

roztok v chlorbenzenu, 52,3 mmolů) a výsledný roztok byl zahříván za teploty zpětného toku po dobu 37 hodin. Když byl epoxid zkonzumován, roztok byl ochlazen na teplotu 80 » «< ·· «· ·· ·· •4 · Φ Φ « φ » · φ

Φ Φ · · φ φ»· φ φ «

Φ* Φ Φ ΦΦ Φ φ Φφ Φ·· «Φ ΦΦ «Φ 4» ΦΦΦΦ °C a najednou byl přidán roztok o teplotě 50 °C kyseliny

4-hydroxybenzoové (6,57 gramů, 47,6 mmolů) v 2B-3 ethanolu (34 gramů). Homogenní roztok byl naočkován za teploty 70 °C a pomalu ochlazen na teplotu okolí za míchání. Po míchání po dobu 1 hodiny za teploty 0 °C kaše byla filtrována, promývána chlorbenzenem (3 x 50 ml) a vakuově sušena za teploty 70 °C po dobu 18 hodin pro získání 20,82 gramů (68 % výtěžek) produktu ve formě bělavé pevné látky, teplota tání 172,4-175 °C.

Analýza: Vypočteno pro C29H33N3O5 . C7H6O3: C. 67-38; H, 6,12; N, 6,54. Nalezeno: C, 67,18 ; H, 6,07 ; N, 6,77 .

Příklad 11 - Příprava ethylesteru kyseliny (S)2-[4-[2-[2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]2-methylpropyl]-fenoxy]-3-pyridinkarboxylové

Sůl 4-hydroxybenzoové kyseliny sloučeniny z názvu (17,1 gramů, 26,6 mmolů) byla přidána s mícháním do směsi methylterc.-butyletheru (200 ml, MTBE) a 1 N NaOH (75 ml). Když byla všechna výchozí pevná látka rozpuštěna, zůstalo malé množství tmavě zelené pevné látky, která byla snadno odstraněna filtrací (papír Whatman #1). Organická fáze byla promývána solným roztokem (2 x 30 ml) a sušena nad bezvodým MgSO₄. Sušící činidlo byl odstraněno filtrací. Rozpouštědlo MTBE bylo zaměněno methanolem, koncentrujíce roztok použitím rotačního odpařování, opětným rozpuštěním residua v MeOH a opětnou koncentrací. Tento proces byl opakován a residuum bylo rozpuštěno v bezvodém methanolu a použito přímo v následujících reakcích.

• 4 * • · 4

4 · 4 • 4 ·

• ·· «· •· 44 »· 44 » ♦ 4 * · « 4 · * 44 4 4 4 * · 44 4 · 4444

Příklad 12 - Příprava (S)-2-[4-[2-[2-hydroxy-3-(ΙΗ-indol4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy)3-pyridinkarboxamidu, soli kyseliny octové

Roztok ethyl-(S)-2-[4-[2-[2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy]-3-pyridinkarboxylátu (13,2 gramů, 26,1 mmolů) v methanolu (66 ml) byl vlit do nádoby, která byla potom třikrát natlakována 25 psig čpavku a vyústěna. Vnitřní tlak v nádobě byl potom zvýšen na 50 psig čpavku a žlutý roztok byl míchán za teploty 24 °C po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo a čpavek byly odstraněny rotačním odpařováním, až v nádobě zůstalo 25 gramů látky. Byl přidán ethanol (100 ml, 2B-3) a rozpouštědlo bylo znovu odstraněno rotačním odpařováním, dokud nezůstalo 26 gramů. Tato adice ethanolu a odpařování byla opakována ještě třikrát pro výměnu rozpouštědla do ethanolu a odstranění čpavku. Po posledním odpařování vážil obsah nádoby 25,0 gramů a bylo předpokládáno, že se skládá z teoretických • ·· · · 4 • ··

12,5 g volné báze a 12,5 gramů ethanolu. Byly přidány ethylacetát (87,7 ml) a H₂O (1,0 ml) a roztok byl zahřát na teplotu zpětného toku. Byla přidána kyselina octová (1,73 gramů, 28,8 mmolů) a roztok byl naočkován. Po uplynutí 1 hodiny přestala být bílá směs zahřívána. Po míchání za teploty 24 °C po dobu 1 hodiny byla bílá pevná látka izolována vakuovou filtrací a promývána dvakrát směsí 7:1 ethylacetát:ethanol (20 ml) a jednou směsí 7:1 ethylacetát:ethanol (10 ml). Vakuové sušení přes noc za teploty 50 °C a tlaku 5 Torrů dalo 11,6 g (96,9 % čistota,

97 % výtěžek) ve 157-158 °C.	formě bílé	pevné	látky,	teplota tání
Analýza: Vypočteno	pro C27H3oN404	: C,	65,15 ;	H, 6,41 ; N,
10,48.
Nalezeno: C, 65,01;	H, 6,28; N,	10,26.

Příklad 13 - Příprava kyseliny (S)-2-[4-(2-[2-hydroxy3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy]3- pyridinkarboxylové, ethylester, sůl kyseliny

4- hydroxybenzoové

4-[(2S)-oxiranylmethoxy)-lH-indol (8,00 gramů, 42,3 mmol byl přidán do ethyl-2-[4-(2-amino-2-methylpropyl)-fenoxy]3- pyridinkarboxylátu (14,4 gramů, 46,5 mmolů) v 2B-3 ethanolu (80 ml) a výsledný roztok byl zahříván za teploty zpětného toku po dobu 20 hodin, dokud epoxid nebyl spotřebován. Roztok byl ochlazen na teplotu 70-75 °C a v jedné dávce byl přidán roztok o teplotě 70-75 °C kyseliny

4- hydroxybenzoové (5,9 gramů, 42,3 mmolů) v 2B-3 ethanolu (20 ml) . Homogenní roztok byl naočkován a míchání

pokračovalo za teploty 70-75 °C po dobu 1 hodiny. Směs byla ochlazena na teplotu 26 °C a byla míchána po dobu 1 hodiny, potom ochlazena na teplotu 5 °C a míchána po dobu další hodiny. Pevná látka byl izolována filtrací, promývána 2B-3 ethanolem (45 ml) a vakuově sušena za teploty 50 °C po dobu 45 hodin pro získání 21,8 gramů (80,4 % výtěžek) produktu ve formě bělavé pevné látky, teplota tání 174-176 °C.

Příklad 14 - Příprava ethylesteru kyseliny (S)2-[4-[2-(2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]2-methylpropyl]-fenoxy]-3-pyridinkarboxylové

Do soli 4-hydroxybenzoové kyseliny sloučeniny z názvu (40,0 gramů, 62,3 mmolů) byly přidány za míchání methyl-terc.butylether (350 ml, MTBE) a methylalkohol (20 ml). Míchání pokračovalo po dobu 90 minut, dokud pevná látka nebyla dobře rozptýlena, potom byly přidány IN hydroxid sodný (160 ml) a deionizovaná voda (40 ml) . Jakmile pevná látka byla rozpuštěna, vrstvy byly separovány a organická fáze byla extrahována dvakrát roztokem deionizované vody (120 ml) a chloridu sodného (8,0 g) . Po ochlazení na teplotu 0-5 °C a filtrování přes papír ze skelných vláken byla organická vrstva koncentrována na 80 ml za teploty 40 °C a tlaku 24-28 palců Hg. Byl přidán methylalkohol (160 ml) a objem byl znovu snížen na 80 ml. Celkový objem byl upraven zpět na 240 ml methylalkoholem a tento roztok byl použit přímo v následujících reakcích.

Příklad 15- Příprava (S)-2-[4-[2-[2-hydroxy-3-(iH-indol4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl]-fenoxy]3-pyridinkarboxamidu, sůl kyseliny octové

Roztok ethyl-(S)-2-[4-[2-[2-hydroxy-3-(lH-indol-4-yloxy)propylamino]-2-methylpropyl)-fenoxy]-3-pyridinkarboxylátu (31,4 gramů, 62,3 mmolů) v methylalkoholu (264 ml) byl třikrát natlakován 5 psig čpavku a vyprázdněn. Vnitřní tlak v nádobě byl potom zvýšen na 5 psig čpavku a žlutý roztok byl míchán za teploty 40 °C po dobu 22 hodin. Objem byl koncentrován na 60 ml za teploty 30-40 °C a tlaku 25 palců Hg. Byl přidán methylethylketon (4 50 ml, MEK) a objem byl snížen na 60 ml za teploty 40-50 °C a tlaku 25 palců. MEK byl přidán znovu (200 ml) a objem byl snížen na 60 ml. Za teploty 15-20 °C byl obsah znovu zředěn na celkový objem 300 ml použitím MEK, filtrován použitím 20 mikronové fritové nálevky se skleněným filtrem, potom proplachován MEK pro získání celkového objemu filtrátu 310 ml. Roztok byl zahříván na teplotu 65 °C a za teploty 65 °C byl přidán roztok ledové kyseliny octové (3,75 g, 62,4 mmolů) v MEK (15 ml) . Po naočkování směs byla míchána za teploty 65 °C po dobu 90 minut, potom ponechán ochladit se na teplotu 25 °C za míchání v průběhu 14 hodin. Směs byla ochlazena na teplotu 3 °C a míchána po dobu 1 hodiny. Kaše byla izolována filtrací, promývána MEK (90 ml) a vakuově sušena za teploty 70 °C po dobu 46 hodin pro získání 30,3 gramů (90,9 % výtěžek) produktu ve formě bělavé pevné látky, teplota tání 156-158 °C.

Příklad 16 - Příprava 4-hydroxyindazolu a dalších Rl-OH sloučenin

4-hydroxyindazol může být připraven způsoby, které jsou popsány v Davies, J. Chem. Soc. 1955:2412 (1955) a H. D. Porter a W. D. Peterson, Organic Synthesis, Collective Volume III, str.660. Celkový obsah těchto prací je zde zahrnut jako reference. Specifické podmínky pro přípravu 4-hydroxyindazolu jsou uvedeny dále.

A. Příprava 4-nitroindazoiu z 2-methyi-3-nitroanilinu

Dusitan sodný (20 gramů, 0,29 molů) byl rozpuštěn v 50 ml vody. Tento roztok byl přidán najednou do 2-methyl3-nitroanilinu (20 gramů, 0,13 molů) v ledové kyselině octové za teploty blízké 0 °C. Reakční směs byla intenzívně míchána horním míchadlem. Došlo k okamžité precipitaci po přidání roztoku dusitanu sodného. Reakční směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí a byla míchána přes noc.

Precipitát byl odfiltrován a filtrát byl koncentrován ve vakuu. Tmavě oranžová pevná látka byla suspendována ve • ·· 99 ·· ·* 9999 vodě, filtrována a sušena, čímž se získalo 14-21 gramů tmavě oranžové pevné látky (99 % výtěžek).

B. Příprava 4-aminoindazolu z 4-nitroindazolu

4-nitroindazol (12 gramů) byl rozpuštěn v ethanolu (300 ml) se zahříváním v Parrově hydrogenační nádobě. Do nádoby bylo přidáno 5 % paládia na uhlí (12 gramů). Reakční nádoba byla natlakována na 50 PSI a třepána po dobu 1 hodiny. TLC indikovalo vytváření produktu a úbytek výchozího materiálu. Reakční směs byla filtrována přes Celit. Katalyzátor byl důkladně promýván methanolem, dokud nebyl veškerý produkt odplaven. Filtrát byl koncentrován na tmavě šedou pevnou látku, která byla rozpuštěna v ethylacetátu a filtrována přes vrstvu oxidu křemičitého. Filtrát byl koncentrován na hnědavou pevnou látku (9,6 gramů, 97 % výtěžek).

C. Příprava 4-hydroxyindazolu z 4-aminoindazolu • 4 · · 4φ··

4 44 4 4 4 ··♦ 44

4 4 4 4 4 » 44 44 444 4

4-aminoindazol (9,6 gramů, 0,072 molů) byl rozpuštěn ve skleněné reakční nádobě, obsahující 7,2 gramů koncentrované kyseliny sírové ve 7 5 ml vody. Tato směs byla uzavřena do autoklávu z nerezové oceli a zahřívána na teplotu 170 °C přes noc. Reakční směs obsahovala mnoho černého precipitátu. Reakční směs byla zředěna ethylacetátem a vodou do separační nálevky a rozdělena. Vodná vrstva byla extrahována několikrát ethylacetátem, dokud veškerý produkt nebyl mimo vodnou frakci. Zkombinované organické frakce byly promývány solným roztokem, sušeny nad síranem horečnatým, filtrovány a koncentrovány na tmavě hnědý nebo černý olej. Produkt byl čištěn promýváním přes vrstvu oxidu křemičitého směsí 50 % ethylacetát/hexan, což vedlo na bělavou pevnou látku (3,3 gramů, 33 % výtěžek).

Použitím zde popsaných obecných způsobů může odborník v oboru připravit další Rl-OH aryloxysloučeniny a jejich sole, jako jsou sloučeniny 2, 4 a 8-13 podle předloženého vynálezu (viz Příklad 17, Tabulka 1).

Sloučeniny 2, 4 a 8 byly připraveny výše uvedenými způsoby a analyzovány hmotnostní spektrometrií s elektrosprejovou ionizací. Molekulární iontový pík pro Sloučeninu 2 byl • ·· • 4

4

476,0 (vypočtená molekulová hmotnost 475,55); pro Sloučeninu 4 byl 508,0 (vypočtená molekulová hmotnost 507,61); a pro Sloučeninu 8 byl 492,24 (vypočtená molekulová hmotnost 492,01).

Příklad 17 - Intravenózní podávání sloučenin podle předloženého vynálezu dobytku

Intravenózní podávání sloučenin podle předloženého vynálezu dobytek zvyšuje hladinu sérových neesterifikovaných mastných kyselin a snižuje sérovou hladinu močoviny. V tomto Příkladu byla telata angus/angus, jalovice a býčci, s hmotností přibližně 282 liber (128 kg) na počátku a 788 liber (357,8 kg) ke konci této studie, chována v ohradách v počtu 5 telat v ohradě. Dobytek byl ponechán zvyknout si v ohradě po dobu alespoň 1 týden před započetím této studie.

Telata byla krmena ad libitum dvakrát denně (přibližně 6-15 liber (2,7-6,8 kg)/den). V průběhu dne ošetřování dopoledne, byly doby krmení rozloženy tak, aby zajistily, že všechna zvířata byly krmena přibližné jednu hodinu před podáním ošetření. V průběhu odpolední ošetřovací periody byl dobytek krmen okamžitě po obdržení odpolední injekce.

Po odebrání krevního vzorku před ošetřením (T=0) od každého zvířete byla podávána dávka 40 μg na jeden kilogram testované sloučeniny intravenózně z jugulární cévy v 6.30 hod a 14.30 hod. Každá testovaná sloučenina byla podávána v koncentraci 1,00 - 1,25 mg/ml v ošetřovacím vehikulu, kterým byla 50/50 směs polyethylenglykolu a 200/vody.

• · 4 4 · 4 4 4 4

444 4 4 ·4 4 4 4 • 44 «444 444

444 44 ·· *4 44 4444

Krevní vzorek byl odebrán patnáct minut po podání ošetření (T+15 min). Telata byla vrácena do jejich odpovídajících ohrad až do následujícího ošetření, přibližně osm hodin později. Následující ráno v 6.30 byl odebrán krevní vzorek od všech telat 24 hodin po ošetření (T+24h). Všechny krevní vzorky byly analyzovány hladinu neesterifikovaných mastných kyselin (NEFA) a sérovou hladinu močovinového dusíku (SUN). Hladiny NEFA a SUN po ošetření u každého jednotlivého zvířete byly porovnávány s hladinami nalezenými před ošetřením. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 1.

Tabulka 1

Struktura

Pouze vehikulum

ANEFA*

Min ~0

ANEFA** 24 Hodin ~0 asun*** 24 Hodin ~0

-28,7

-39,3 • 0 0 0 0 0

0 00

00 0 0 0 · 0 · ··

0 · 000 00

0 0 · 00 00

00 0 0 0 0

0 0 • 0 ·

0000

-38,2

-28,6

-9,7

« ·· • «·	·· • · • ·	• · ··	• Φ » · • ·	99 •
··	Λ <»	β·	99	···

Sloučenina 321,4 35,6 -14,2 * Zvýšení NEFA (pmol/litr) v krvi zvířat ošetřovaných uvedenou testovanou sloučeninou ve srovnání s výchozí úrovní (T=0) hodnot NEFA pro každé zvíře 15 minut po ošetření (ÁNEFA = hodnota NEFA T+15min - hodnota NEFA T=0). Uvedené hodnoty jsou střední hodnoty pro pět zvířat.

** Zvýšení NEFA (pmol/litr) v krvi zvířat ošetřovaných uvedenou testovanou sloučeninou ve srovnání s výchozí úrovní (T=0) hodnoty NEFA pro každé zvíře 24 hodin po ošetření (ÁNEFA - hodnota NEFA T+24h - hodnota NEFA T=0) . Uvedené hodnoty jsou střední hodnoty pro pět zvířat.

*** Procento poklesu SUN v krvi zvířat ošetřovaných uvedenou testovanou sloučeninou 24 hodin po ošetřeni ve srovnání s výchozí hodnotou (T=0) SUN pro každé zvíře. Uvedené hodnoty jsou střední hodnoty pro pět zvířat.

%ÁSUN = [ (T+24h SUN) - (T=0 SUN)] / (T=0 SUN) x 100 % # »· ·· ·► ·» *· ··» · · · ·» r « $ t • ·>· 9 9 99 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 • se ·* ** 99 99 9999

Anabolické účinky 3-karboxamidových regioisomerů (Sloučeniny 2, 4, 6 a 8) dvacet čtyři hodiny po podávání jsou významně větší než u odpovídajících 5-karboxamidových regioisomerů (Sloučeniny 1, 3, 5 a 7), jak ukazují změny hladiny sérového dusíku močoviny uvedené v Tabulce 1. Sloučeniny 2, 4, 6 a 8 mají také mírné lipolytické účinky, jak je ukázáno v Tabulce 1 na hladinách neesterifkovaných mastných kyselin patnáct minut a dvacet čtyři hodin po podávání.

Výše popsaný test byl opakován s 2-karboxamidovými regioisomery (Sloučeniny 9-13) uvedenými dále. Žádný 4-karboxamidový regioisomer Sloučenin 9-13 nebyl v tomto testu použit. Výsledky jsou ukázány dále v Tabulce 2:

Tabulka 2

STRUKTURA

ANEFA*	ANEFA**	A %SUN***
15 min	24 Hodin	24 Hodin

Sloučenina 9

-15,4

Sloučenina 10 52,7 -72,7

-20,7 •9 * ·4

Sloučenina 11 94

-39,4

-14,1

-30,1

Sloučenina 12 332,6 -63,7

Sloučenina 13 118,1 32,1

-36,7

Na základě dat uvedených v Tabulkách 1 a 2 bylo zjištěno, že přítomnost karboxamidové skupiny v poloze dva kruhu B v aryloxypropanolaminů strukturního vzorce (I), uvedeného výše, dává sloučeninu, která je silně anabolická.

Odpovídající regioisomer s karboxamidovou skupinou v poloze 5 je významně méně anabolický (Tabulka 1). Kromě toho bylo zjištěno, že přítomnost karboxamidové skupiny v poloze tři kruhu B v aryloxypropanolaminu strukturního vzorce (I), uvedeného výše, dává sloučeninu, která je mírně lipolytická. Odpovídající regioisomer s karboxamidovou skupinou v poloze pět vykazuje podstatně silnější lipolytický účinek.

Příklad 18 - Účinek Sloučeniny 6 na množství svalů a tuku

Bylo zjištěno, že množství Sloučeniny 6 zvyšuje objem svalů a snižuje obsah tuku v 28-denní studii dobytka. Třicet dva býčků Angus bylo rozděleno do bloků podle hmotnosti na těžké (4 nejtěžší bloky, střední tělesná hmotnost=1226 liber. (557 kg)) a lehké (4 nejlehčí bloky, střední tělesná hmotnost=1164 liber. (528 kg). Býčci v každém bloku byli přiděleni k jednomu ze čtyř způsobů ošetření (8 býčků/ošetření) pro studium účinků orálně podávané Sloučeniny 6 na růst a jateční parametry při krmení po dobu 28 dní bezprostředně před porážkou. Ošetření zahrnovalo Kontrolu (0,0 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti) a tři úrovně Sloučeniny 6 (Nízká, 0,125 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti; Střední, 0,250 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti; Vysoká, 0,500 mg Sloučeniny 6 na jeden kilogram tělesné hmotnosti). Sloučenina 6 byla smíchána s mletou kukuřicí a podávána býčkům jako část jejich denního krmivá. Býčci skupiny Kontrola dostávali podobné množství mleté kukuřice. Bylo vyžadováno, aby býčci zkonzumovali počáteční potravu • »99 · · »·« 9 9 ·« «9 • · ♦ 4 »9 9

9 «

9 9 • * 9 9 9 9 dříve, než jim bylo podáno zbývající množství krmivá. Základní dávka bylo komerčně dostupné krmivo (19,3 CP, DM základ). Krmivo i voda byly dostupné ad libitum. Býčci byli jednotlivě ustájeni v ohradách o rozměrech 12 stop X 48 stop, vybavených individuálními žlaby a automatickým napájením vodou. V den 28 byli býčci zváženi a byly jim odebrány krevní vzorky před jejich odesláním na porážku a následným ohodnocením jatečních parametrů.

Parametry výkonnosti za živa byly u dobytka zlepšeny při ošetřování sloučeninou 6. Skupiny Nízká, Střední a Vysoká vykazovaly 54 % až 73 % zvýšení středního denního přírůstku (average daily gain - ADG, liber/den) ve srovnání se skupinou Kontrola, konkrétně 6,31, 7,07, 6,74 a 4,08 liber/den (2,86, 3,21, 3,06 a 1,85 kg/den); P<0,0002; Obr. 1. Denní příjem sušiny se nelišil (P>0,47) mezi jednotlivými skupinami. Účinnost krmení (liber krmivá na jednu libru přírůstku) byla zlepšena (P<0,0006) ve skupinách Nízká, Střední a Vysoká ve srovnání se skupinou Kontrola (4,36, 4,19, 4,18 a 7,04; Obr. 2).

Zlepšený přírůstek hmotnosti byl udržen i jako jateční přírůstek prokázaný zvýšením (PC.0001) čerstvé jateční hmotnosti ve skupinách Nízká, Střední a Vysoká ve srovnání se skupinou Kontrola, konkrétně 848, 855, 854 a 781 liber (384, 388, 388 a 355 kg.). (Obr. 3). Procento opracování mělo také tendenci být vyšší (F-test P=.1138, ošetření P<.05) se sloučeninou 6 a ortogonální srovnávání vykázalo významné plato (Pc.0043) odezvy na přidávání Sloučeniny 6 v nízkých dávkách. Hustota tuku u dvanáctého žebra nebyla • ♦ ·· 4« *4 · • 9 · · · · « · • 4 · 4 · a «

Μ »

• ·’ odlišná (P>.78; Obr. 4), ale oblast svalu longissimus dorsi u dvanáctého žebra byla 10,7 až 18,9 % větší (PC.0068) ve skupinách Nízká, Střední a Vysoká ve srovnání se skupinou Kontrola (13,5, 14,3, 14,5, 12,2 čtverečních palců; Obr.

5) .

Jateční složení, zahrnující procento tuku, procento proteinů, procento tekutin a procento kosti bylo vypočteno použitím rovnic, které podali Hankins, O.G. a Howe, P.E. 1946. U.S. Department of Agriculture Technical Bulletin No. 926 str. 1-20 (Obr. 6) . Jateční složení se statisticky neodlišovalo (P>.12) mezi jednotlivými ošetřeními, ale procento tuku bylo numericky (~1,2 až ~2,7 %) nižší při ošetření sloučeninou 6 ve srovnání se skupinou Kontrola. Nicméně v důsledku vyšší jateční hmotnosti, pozorované ve skupinách Nízká, Střední a Vysoká, vypočtený výtěžek v librách proteinu a tekutin (Obr. 6) byly významně větší (P<.0036) ve srovnání se skupinou Kontrola (Protein 115,8, 115,1, 115,8, 103,1 liber, (52,6, 52,3, 52,6, 46,8 kg); tekutiny - 389,2, 384,7, 393,4, 345,3 liber, (176,7,

174,7, 178,6, 156,8 kg)).

Odborník na maso zhodnotil poražené kusy a určil stupeň kvality a prorostlost tukem podle United States Department of Agriculture (USDA). Ani stupeň kvality ani prorostlost tukem podle USDA se neodlišovaly mezi jednotlivými ošetřeními (P>.90). Hodnoty stupně výtěžnosti (yield grade - YG) (Obr. 7) byly vypočteny použitím měření potřebných složek. YG je indikátor množství podílu masa s nižší hodnotou, kde jeho nižší hodnota indikuje větší množství • · vysoce hodnoceného masa. YG měl tendencí (F-test P=.O632; ošetření PC.09) být nižší u tří skupin s ošetřením Sloučeninou 6 ve srovnání se skupinou Kontrola. Ortogonální analýza porovnávající skupiny Kontrola, Nízká, Střední a Vysoká indikovala, že YG se snižuje lineárně se zvyšováním dávek Sloučeniny 6 s konečným zastavením se pro skupiny Střední a Vysoká (P=.OO21; 3,14, 2,76, 2,52 a 2,46). Konformační skóre (Obr. 8), které je subjektivním ohodnocením svalstva bylo vyšší (P<.005) pro ošetření Sloučeninou 6 ve srovnání se skupinou Kontrola, což indikovalo, že ošetření sloučeninou 6 vedlo hustějšímu a výraznějšímu svalstvu ve srovnání s poraženými kusy skupiny Kontrola.

Kvalita masa byl zkoumána použitím několika různých měření steaků z longissimus dorsi. Nebyly zjištěny žádné rozdíly mezi ošetřenými zvířaty (P>.5) u barvy, měřené pomocí a*, b* a L* podle Huntera nebo u pH měřeného po 14 denní postmortem době. Subjektivní měření barvy, textury a pevnosti svalu longissimus dorsi u dvanáctého žebra přibližně 24 hodin post-mortem také nevykázaly odchylky pro ošetření (Ftest P>.07).

Warner-Bratzlerova střihová síla, (National Cattlemen's Association, Standardized Warner-Bratzler Shear Force Procedures for Genetic Evaluation (1994); viz také Wheeler a kol., J. Animal Sci., 75, 2423-2432, (1997)) a mechanický predikátor jemnosti (nižší hodnota je jemnější) byly měřeny pro steaky staré 14 dní. Ve srovnání skupin Kontrola, Nízká, Střední a Vysoká nebyly střihové síly pro • ♦ dní staré steaky odlišné (2,25, 2,92, 2,55 a 3,01 kg) (F-test P=.1O6). Ortogonální porovnání těchto čtyř způsobů ošetření vykázaly plato odezvy na nízké dávky (P=.O294). Ačkoli steaky z býčků ošetřovaných Sloučeninou 6 měly numericky vyšší střihové hodnoty, pozorované střihové hodnoty byly v rozmezí 2,27 až 3,58 kg, které Boleman a kol., 1997. J. Anim. Sci. 75:521-1524 považuje za jemné a byly menší než 5,90 kg potřebných k hodnocení tuhé.

Jako závěr lze uvést, že krmení těchto býčků Sloučeninou 6 vedlo ke zlepšení účinnosti vzhledem k o 54 až 73% většímu přírůstku hmotnosti při stejném množství krmivá. Vyšší živý přírůstek hmotnosti byl doprovázen i přírůstkem jatečních parametrů, jak ukázaly vyšší čerstvé jateční hmotnosti. Přírůstek jateční hmotnosti byl způsobem primárně zvýšeným množstvím svalů. Větší zvýšení množství svalů bylo pozorováno bez jakéhokoli pozorovatelného nepříznivého účinku na kvalitu maso, jak bylo určeno vyhodnocováním skóre jatečního množství prorostlého tuku a hodnocení barvy, pH a Warner-Bratzlerovy střihové síly pro čtrnáct dní staré steaky.

Příklad 19: Účinek Sloučeniny 6 na přírůstek hmotnosti a účinnost krmení v průběhu posledních 14 dní pěstitelské periody broilerů

Přibližně 1500 kohoutů Peterson-Hubbard ve stáří jeden den bylo použito v randomizovaném úplném blokovém designu se 4 ošetřeními (Kontrola, Clenbuterol o dávce 1 PPM a Sloučenina 6 o dávce 3 a 15 PPM (mg/kg krmivá)). Testovací zařízení obsahovalo 36 ohrad, rozdělených na 6 stejných bloků.

Způsoby ošetření byly náhodně rozděleny na ohrady v každém bloku. Každé ošetření zahrnovalo 6 ohrad s 10 ptáky v ohradě. Jeden den staří kohouti byli získáni z líhně Pine Manor v Goshen, Indiana. Přibližně 40 ptáků na jedno ohradu bylo rozděleno náhodně po jejich příjmu. V den 30 periody růstu byli všichni ptáci zváženi a bylo vybráno 15 ptáků nejbližších průměru v bloku. Tito ptáci byli ponecháni zvyknout si až do dne 35 jejich věku. V tento den byli všichni zbývající ptáci znovu zváženi a 10 ptáků v ohradě nejbližších průměru v bloku bylo zvoleno pro fázi ošetření. Ptákům byl ponechán ad libitum přístup k krmivu a vodě po celou dobu pokusu.

Všichni ptáci byli krmeni 23 % surovými proteinovými dávkami na bázi kukuřice a sóji ode dne 1 do dne 18 jejich věku. Krmivo bylo změněno na 20 % surové proteinové dávky na bázi kukuřice a sóji ode dne 18 do dne 49. Krmivo s testovanou látkou bylo namícháno použitím téže 20 % surové proteinové základní dávky. Ošetření bylo podáváno v krmivu ode dne 35 až do dne 49. Spotřeba krmivá byla vypočtena pro celou 14-denní dobu ošetřování. Ptáci byli zváženi po ukončení pokusu (den 49) a odvezeni do laboratoře pro zkoumání masa na Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907, U.S.A. na porážku a měření jatečních parametrů v den 50. Čerstvá jateční hmotnost, hmotnost tukového polštáře a vnitřností byly určeny pro všechny ptáky.

• *· ·· · • * · · • < » · 4

Výsledky studie jsou souhrnně uvedeny v Tabulce 3. Jak ukazují uvedená data, Sloučenina 6 má příznivé vlastnosti ve srovnání s clenbuterolem co se týče zvýšení přírůstku hmotnosti a zlepšení účinnosti krmení v průběhu posledních 14 dní růstové periody broilerů. Sloučenina 6 vykazuje zvýšení přírůstku hmotnosti 3,17 % (P=0,0987) ve srovnání s kontrolou při podávání 3 PPM a 3,17 % (P=0,0756) zvýšení ve srovnání s kontrolou při podávání 15 PPM. Ptáci ošetření clenbuterolem vykazují 2,38 % (P=0,1430) zvýšení ve srovnání s kontrolou v průběhu 14-denní periody ošetřování. Sloučenina 6 zlepšuje účinnost krmení o 2,50 % (P=0,2936) při úrovni 3 PPM a o 3,00 % (P=0,1957) při úrovni 15 PPM. Ptáci ošetření clenbuterolem vykazují zlepšení přeměny krmivá o 0,50 % (P=0,7320) ve srovnání s kontrolou.

Účinek vysokých dávek experimentální sloučeniny na přírůstek hmotnosti a účinnost krmivá vedl k hodnocení jatečních parametrů na Purdue University. Čerstvá jateční hmotnost, hmotnost vnitřností a tukového polštáře byly určeny pro všechna ošetření. Čerstvé jateční hmotnost byla zvýšena u obou ošetření experimentální sloučeninou ve srovnání se skupinou Kontrola. Ošetření Sloučeninou 6 zvyšuje čerstvou jateční hmotnost o 2,50 % (P=0,0174) a 2,82 %(P=0,0078) pro podávání 3 PPM respektive 15 PPM. Ošetření clenbuterolem zvyšuje čerstvou jateční hmotnost o

3,25 % (P=0,0027). Hmotnost vnitřností poklesla ve srovnání s kontrolou pro obě ošetření experimentální sloučeninou. Sloučenina 6 snížila hmotnost vnitřností o 1,50 % (P=0,3981) a 0,65 % (P=0,7279) pro 3 PPM respektive 15 PPM. Clenbuterol snížil hmotnost vnitřností o 0,66 % (P=0,7215).

• 44«

Byl také pozorován trend ke zvýšení hmotnosti tukového polštáře u obou ošetření. Ošetření Sloučeninou 6 zvýšilo hmotnost tukového polštáře o 9,68 % (P=0,1069) a 4,09 % (P=0,4814) pro 3 PPM respektive 15 PPM.

Tabulka 3: Růstová výkonnost a jateční parametry

Ošetření	Dávka	Počáteční hmotnost (kg)	Konečná hmotnost (kg)	Celkový 14 denní přírůstek hmotnosti (kg)	Příjem krmivá v ohradě (kg)	Účinnost krmivá (kg)
Kontrola	0 PPM	1,72	2,98	1,26	25,16	2,00
Clenbuterol	1 PPM	1,73	3,02	1,29	25,20	1, 99
Sloučenina 6	3 PPM	1,72	3,02	1,30	25,74	1,95
Sloučenina 6	15 PPM	1, 72	3,02	1,30	25,25	1,94

Ošetření	Dávka	Procento přísad	Čerstvá jateční hmotnost (g)	Hmotnost vnitřností (g)	Hmotnost tukového polštáře (g)
Kontrola	0 PPM	71, 83	2122,71	287,36	26,14
Clenbuterol	1 PPM	72,77**	2191,64**	285,45	26,86
Sloučenina 6	3 PPM	72,43*	2175,69*	283,04	28,67
Sloučenina 6	15 PPM	72,63**	2182,55**	285,49	27,21

- 59 10 ptáků/ohrada, (60 ptáků/ošetření) 6 ohrad/ošetření, kohouti Peterson x Hubbard denní doba ošetřování (den 35-49)

F/G je poměr příjmu krmivá na ohradu / v ohradě % surový protein diet (* PC.05) a (**P<.01) indikuje odchylku od kontroly

Příklad 20: Účinek Sloučeniny 6 na přírůstek hmotnosti, účinnost krmení a hmotnost prsou a stehen v průběhu posledních 28 dní růstové periody broilerů

Přibližně 1500 kohoutů Peterson-Hubbard ve stáří jeden den bylo použito v randomizovaném úplném blokovém designu se 3 ošetřeními (Kontrola, Sloučenina 6 o dávce 3 a 15 PPM (mg/kg krmivá)). Testovací zařízení obsahovalo dvě křidla, každé obsahující 30 ohrad. Ohrady v každém křídle byly rozděleny na 6 bloků o 5 ohradách. Každé ošetření zahrnovalo 12 ohrad s 10 ptáky na ohradu.

Jeden den staří kohouti byli získáni z líhně Pine Manor v Goshen, Indiana. Přibližně 40 ptáků na jednu ohradu bylo rozděleno náhodně po jejich příjmu. V den 16 periody růstu byli všichni ptáci zváženi a bylo vybráno 15 ptáků nejbližších průměru v bloku. Tito ptáci byli ponecháni celková hmotnost • ·

*♦· · · ** ft ♦ * 4 zvyknout si až do dne 21 jejich věku. V tento den byli všichni zbývající ptáci znovu zváženi a 10 ptáků v ohradě nejbližších průměru v bloku bylo zvoleno pro fázi ošetření. Ptákům byl ponechán ad libitum přístup k krmivu a vodě po celou dobu pokusu.

Všichni ptáci byli krmeni 23 % surovými proteinovými dávkami na bázi kukuřice a sóji ode dne 1 do dne 18 jejich věku. Krmivo bylo změněno na 20 % surové proteinové dávky na bázi kukuřice a sóji ode dne 18 do dne 49. Krmivo s testovanou látkou bylo namícháno použitím téže 20 % surové proteinové základní dávky. Ošetření bylo podáváno v krmivu ode dne 21 až do dne 49. Průběžná hmotnost byla měřena v den 25. Spotřeba krmivá byla vypočtena pro celou 28-denní dobu ošetřování. Ptáci byli zváženi po ukončení pokusu (den 49) a odvezeni do laboratoře pro zkoumání masa na Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907, U.S.A. na porážku a měření jatečních parametrů v den 50. Čerstvá jateční hmotnost, hmotnost tukového polštáře a vnitřností hmotnost prsou s kůží a kostí a hmotnost stehna s kůží a kostí byly určeny pro všechny ptáky.

Výsledky studie jsou souhrnně uvedeny v Tabulce 4. Ptáci ošetřovaní Sloučeninou 6 v dávce 3 PPM vykazovali 3,22 % (P=0,0395) zvýšení přírůstku hmotnosti ve srovnání s kontrolou v průběhu prvních 14 dní periody ošetřování. Ošetřování 15 PPM vykázalo 1,08 % (P=0,7600) zvýšení ve srovnání s kontrolou v průběhu téže periody. V průběhu posledních 14 dní ošetřování Sloučenina 6 vykázala zvýšenou odezvu 6,67 % (P=0,0064) a 1,90 % (P=0,5028) po dávky 3 PPM

4 respektive 15 PPM. V průběhu celé 28-denní periody ošetřování Sloučenina 6 dala 5,03 % (P=0,0051) a 1,01 % (P=0,5419) zvýšení přírůstku hmotnosti pro dávky 3 PPM respektive 15 PPM.

Účinnost krmení, měřená jako poměr krmivá a přírůstku, vykázala zlepšení u obou ošetření v průběhu 28-denní periody ošetřování. Sloučenina 6 vykázala zlepšení o 6,85 % (P=0, 1426) a 4,57 % (P=0,3594) pro dávku 3 PPM respektive 15 PPM ve srovnání s kontrolou.

Hodnocení čerstvé jateční hmotnosti vykázalo významné zvýšení ve srovnání s kontrolními zvířaty. Ptáci ošetřovaní Sloučeninou 6 vykazovali zvýšení o 6,50 % (P=0,0001) a 2,90 % (P=0,0434) pro dávky 3 PPM respektive 15 PPM. Tukový polštář (zahrnující jak abdominální tuk, tak tuk předžaludku) byl stažen z každého ptáka a zvážen pro určení účinku těchto sloučenin na množství tuku. Sloučenina 6 nevykázala významný účinek při ani jedné z dávek.

Každé z ošetření vykázalo trend ke snížení hmotnosti vnitřností ve srovnání se skupinou Kontrola. Sloučenina 6 vykázala 1,54 % (P=0,4004) a 3,29 % (P=0,0764) pokles pro dávky 3 PPM respektive 15 PPM.

Prsní sval byl zvážen spolu se související kůží a kostí. Bylo pozorováno zvýšení 4,00 % (P=0,0227) pro nízkou dávku Sloučeniny 6, zatímco vysoká dávka vykázala zvýšení 1,06 % (P=0,5351). Hmotnost stehna s kůží a kostí také vykázala vysoce významné zvýšení při ošetření Sloučeninou 6 (10,63 %

*· ·· • · · a < ·· • · · * • · · « «0 ·· ·· 00 • 0 · 0 *0 0 •00 »«0 • » »··0 (P=0,0002) a 5,60 % (P=0, 0003) pro dávky 3 PPM respektive 15 PPM).

Celkový závěr je, že orální podávání Sloučeniny 6 nezvyšuje významně přírůstek hmotnosti kohoutů broilerů, pokud je podávána ve dnech 21-35 jejich životního cyklu. Sloučenina 6 v dávce 3 PPM však významně zvyšuje (P < 0,01) přírůstek hmotnosti v průběhu dní 35-49. Zvýšení bylo také významné (P < 0,01), pokud bylo zkoumáno v průběhu celého 28-denního krmného období. Byl pozorován trend ke zlepšení účinnosti krmení u všech ošetření v průběhu celého 28-denního krmného období. Všechny dávky vykazovaly významné (P < 0,05) zvýšení čerstvé jateční hmotnosti. V obou dávkách Sloučenina 6 vykazovala vysoce významné zvýšení hmotnosti stehna s kostí a kůží (P<0,01). Sloučenina 6 vykazovala významné zvýšení hmotnosti prsou s kostí a kůží (P<0,05) v dávce 3 PPM.

4 4 • 4a • · 4 • 444 • 4 • « · · « · *· 44 • * · « • · 44

4 4 « • 4 » « ·· 44

4» a

Tabulka 4: Růstová výkonnost a jateční parametry

Účin-	nost	krmení	F/G	σ> rd CM	2,04	2,09
g	03		>φ
0)	>		τ>		00	CM	σι
-ΓΊ	Ή		03	.—.	σι	CM	ο
Ή	g		β	to	S		<
>β	β		μ	μ	σ	rd	σ
a	μ	>	ο		οο		00
	μ	•Η
	Φ	μ		σι		-κ
	4-1	CO				«X
>	to	0		1	σι	σ
O	«3	β		ι—1	σ>	ο	ο
μ	β	μ	χ—X	CM
	Ή	Ο	tn	Ό		CM	<Μ
a)	>β	2
u	Oj
		CM
μ	-Η			χ~>
Φ	μ			σ
μ	CO	β
cn	0	Ό		1		-κ
	β	0		μ		*
β	μ	•Η	χ~>	η	LD	CM	Γ-
Ή	o	β	σ		ο	ί—1	Ο
>β	g	φ	μ	•ο	*»		•κ
CM	Λ	μ			rd	τ—1	T~Í
		τ—1
μ	Ή			χ—X,
a;	μ			μ
μ	CO	οί		00
w	ο	Ό		1
•β	β	Ο		r~1		*
β	μ	•Η	X—	CM	ΟΟ	kD
Ή	ο	β	to		σ	σι	σ
>β	ρ	φ	μ	τ)	κ	»»
a	£	a			ο	ο	ο
Ό3						-Je
a				σ		*
>u	1				00	00	ο
φ	μ	μ	χ—».		CO	Γ-	r-
β	Ο	C0	to	β	κ
0	£	ο	μ	φ	CM	CM	CM
		β		Ό
'03	μ
β	C0
>N	ο		LO
>CI)	β		00			•Je
Λ	μ	χ-χ			CM	kD	οο
•β	ο	tn	β		kD	kD	kD
β	g	μ	φ			κ	κ
a			Ό		rd	rd	rd
*rd
β >o φ	μ to ο		rd		69	ΟΊ kD	σ kD
-P '05	β μ		CM		Ο	Ο	O
>υ	ο	to	β
o	g	μ	(1)
a	ϋ		Ό
(ϋ
μ	g
>	a				ο	00	μ
ό3	0-1
a
						<0	tn
						β	β
						β	β
Ή					οί	•Η	•Η
a					rd	β	β
φ					ο	φ	φ
>β					β	>υ	>υ
μ					μ	β	β
φ					β	ο	ο
>co					ο	r-d	Γ—I
ο						ω	ω

Hmotnost	stehna s	a kůží	601,67	•Je * kD LO kD kD	* * kD οο Lf) co kD
kostí i	tn
	Ή
	μ
	C0
	ο
	μ
μ
C0	co				*
ο				00	00	m
β	β	>M		CM	O	m
μ	0	»β		*»	s.	*»
ο	C0	μ			00	o
	β		tn	σ>	i—1	o
ad	a	03		lD	kD	kD
μ	ο	φ
C0	μ	>β
ο	'Φ	'05		rd	Γ
β	>	μ		C**	kD	kD
μ	ο	>cn		**	*.	rd
0	μ		χ^	o	rd	K
	β	ο	a	LQ	LO	σ
rd	μ	a
	Ή
	μ
μ	β
C0	ο
ο	α			r~	CM	00
β	)β			σ	00	o
μ	μ			K	*»	s
ο				σ	lT)	rd
		tn		kD	kD	kD
ad	>			CM	CM	CM
					-Je
		μ			*	*
'03	Ή	cn		ϊ—l	00	Γ-
>	β	o		00	U0	rd
μ	>υ	β		h.
C0	φ	μ		00	μ	00
β	μ	O	X-^.	o	σ	CM
φ	05		tn	00	σ	σ
>υ	•ΓΊ			rd	rd	rd
	Ή
	β
ο	'03
μ	>				*	-Je
β	ο				*	•Je
φ	ο			μ	’ζί’	kD
ο	03			00	rd	rd
0	β			K	K
β	a			σ	rd	i—1
a	ο			kD		Γ*
03
μ	?!
>	a
'β	a					μ
μ				o	PO	rd
					kD	kD
					β	β
					β	β
Ή				03	•id	•rd
β				rd	β	β
φ				o	φ	φ
>β				β	>0	>υ
μ				μ	β	β
Φ				β	ο	ο
>β				o	r—I	ι—1
Ο				W	ω	tn

• 44 • 44

4

- 64 44 44 ♦ 4 · · 4

4 4 •44 · · • 4 4 4 ·♦ 4444 (120 ptáků/ošetření) 12 ohrad/ošetření, 10 ptáků/ohradu, kohouti Peterson x Hubbard denní perioda ošetřování (dny 21-49)

F/G je příjem krmivá v ohradě / celkový hmotnost přírůstku v ohradě pro 20 % surovou proteinovou dietu na bázi kukuřice a sóji (* PC.05) a (**P<.01) indikuje rozdíl ve srovnání s kontrolou

Následující příklady přípravků jsou pouze ilustrativní a nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu předmětu předloženého vynálezu jakýmkoli způsobem. Účinná složka znamená přirozeně sloučeninu strukturního vzorce I nebo její fyziologicky přijatelnou sůl nebo solvát.

Příklad 21: Směs pro kuřata

Složka % hmotn.

Účinná složka 25

Kukuřičný šrot 74

Chlorid sodný_1

100

• · · ·

• · · ·♦ · ···

Příklad 22: Směs pro přežvýkavce

Složka % hmotn.

Účinná složka 30

Žlutý kukuřičný šrot 60

Vojtěšková moučka_10

100

Příklad 23: Směs pro vepře

Složka % hmotn.

Účinná složka 10

Rozemletá sója 88

Minerální olej_2

100

Výše uvedené složky jsou smísí do homogennosti pro získání suché sypké směsi, která může být smíchána s krmnou dávkou typickou pro dané zvíře pro získání přibližně 20 ppm účinné složky ve výsledné krmivové dávce. Například může být směs přidána do následující růstové dávky pro vepře pro výhodné orální podávání účinné složky vepři.

Složka % hmotn.

Kukuřice, žlutá, mletá 76,70

Sójová olejnatá moučka, 19,35 extrahovaná rozpouštědlem, loupaná Uhličitan vápenatý 1,20

Fosforečnan vápenatý, 1,20 krmivová kvalita liber/tunu

1534

387 • ·*

Sůl (Chlorid sodný) 0,50

Směs stopových prvků, 0,10

AN-03^{* 1}

Vitaminová směs pro prasata, 0,65

SW-03²

Směs vitaminu A, 0,05

3M USP jednotek/lb³

Methionin, Hydroxy Analog, 93 % 0,20

Selenová směs^{4 5}_0,005

100,00

2000 ¹Jeden kg směsi obsahuje: 50 g manganu ve formě síranu manganu; 100 g zinku ve formě uhličitanu zinečnatého; 50 g železa ve formě síranu železitého; 5 g mědi ve formě oxidu měďnatého; 1,5 g jodu ve formě jodidu draselného a 150 g maximálně a 130 g minimálně vápníku ve uhličitanu vápenatého.

²Jeden kg směsi obsahuje: 77,161 IU vitaminu D2; 2,205 IU vitaminu E; 411 mg riboflavinu; 1,620 mg kyseliny pantothenové; 2,205 mg niacinu; 4,4 mg vitaminu B12; 441 mg vitaminu K; 19,180 mg cholinu; 110 mg kyseliny listové; 165 mg pyridoxinu; 110 mg thiaminu; 22 mg biotinu.

³Jeden kg směsi obsahuje 6,613,800 IU vitaminu A.

⁵ Jeden kg směsi obsahuje 200 mg selenu ve formě seleničitanu sodného.

·· ·· ·· ·· ·· ···· · · · · ·· · « ·· · · ' • * · * · · · 0 • · · · ·· ·· ·· · ·

Příklad 24: Krmná dávka pro ovce

Složka	Procento	Liber/tunu
Žlutá kukuřice	61,00	1220,0
Kukuřičné bochníky	20, 00	400, 0
Vojtěšková moučka, dehydratovaná	5, 40	108,0
Sójová olejnatá moučka	8,00	160,0
Močovina, krmivová kvalita	0,50	10,0
Třtinová melasa	3,00	60,0
Fosforečnan vápenatý	0,43	8,6
Sůl	0,30	O
Uhličitan vápenatý	0,14	2,3
Směs stopových prvků1	0,03	0, 6
Směs2 vitaminů A + D3	0,10	2,0
Směs3 vitaminu E	0,10	2,0
Účinná složka	1, 00	20,0
	100,00	2000,0

¹Směs stopových prvků obsahuje: 2,5 % manganu ve formě oxidu manganičitého, 0,07 % jodu ve formě jodidu draselného, 0,3% kobaltu ve formě uhličitanu kobaltnatého, 0,5 % mědi ve formě oxidu měďnatého a 20,0 % zinku ve formě síranu zinečnatého.

²Jedna libra směsi vitaminů A a D3 obsahuje 2000000 USP jednotek Vitaminu A a 225750 USP jednotek vitaminu D3.

³Jedna libra směsi vitaminu E obsahuje 20000 IU vitaminu E.

• 4 4

444 4 4

Příklad 25: Závěrečná krmivová dávka pro broilery

Složky	% hmotn.	Lbs/T
Žlutý kukuřičný škrob	66, 40	1328,00
Zvířecí-rostlinný tuk	1,53	30, 60
Kukuřičná glut. moučka (60 %)	4,00	80, 00
Sójová moučka (48 %)	19,19	383,80
Rybí moučka-menhaden	2,50	50, 00
Fosforečnan vápenatý	1,01	34,20
Moučka z peří-hydr.	2,50	50, 00
Mletý vápenec	0,83	16, 60
Sůl	0,30	6,00
Vitaminová směs1	0,50	10, 00
Směs stopových prvků2	0,10	2,00
Methionin, hyd. anal.	0,15	3,00
Lysin HCl	0,29	5,80
	100,00	2000,00

^xVitaminová směs obsahuje 3000 IU vitaminu A, 900 ICU vitaminu D3, 40 mg vitaminu E, 0,7 mg vitaminu K, 1000 mg cholinu, 70 mg niacinu, 4 mg kyseliny pantothenové, 4 mg riboflavinu, 100 μς vitaminu B_i2, 100 gg biotinu a 12 5 mg ethoxychinu na jeden kilogram úplného krmivá.

² Směs stopových prvků obsahuje 75 mg manganu, 50 mg zinku, 25 mg železa a 1 mg jodu na jeden kilogram úplného krmivá.

·♦ ·· ·4 ·· ···· · · · · • · ·· · · · • · · · · · · • · ·· ·· ·» · ·

Ekvivalenty

Odborník v oboru je schopen poznat nebo být schopný se ujistit, že použitím pouhého rutinního experimentování lze vytvořit mnoho specifických provedení předloženého vynálezu. Takové ekvivalenty jsou zahrnuty do následujících patentových nároků.

Zastupuje:

dr. 0. Švorčík

JUDr. Otakar Švorčík advokát

Hálkova 2, 120 00 Praha 2

Claims (42)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina následujícího strukturního vzorce:

   a její fyziologicky přijatelné sole, kde:

   Rl je substituovaná nebo nesubstituované arylová skupina;

   R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

   R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty.

   ·« «φ

   99 99 • 9 9 ·

   9 9 9 • 99

   9 9 9

   99 9999
2. 2. Sloučenina podle nároku 1 následujícího strukturního vzorce:

   OH

   R1 J o· JQ conh₂ 3. Sloučenina podle nároku 2, kde R1 má strukturní vzorec

   vybraný ze souboru, zahrnujícího ♦ *·

   99 9 •

   ♦ · · · • 9 9 *·* ·· • «9 • ·

   C · · • 9 * • tf <

   *r *

   • · o

   9· r · • 9 · tf 9 • 9 • 9

   99 4 « kde kruhy C až I jsou nezávisle na sobě substituovány nebo nesubstituovány.
3. 4. Sloučenina následujícího strukturního vzorce:

   a její fyziologicky přijatelné sole, kde

   Rl má strukturní vzorec vybraný ze souboru, zahrnujícího;

   < 0 0 • · 0 0 • 0 00 • · o • 0 • 0 0 • 0 0 • 0 0 0 • « • 0 0 0 0 • « « 0 0 0 0 0 • • « 0 0 0 0 0 • • 0 0 0 0 0 0 0
4. 5. Sloučenina následujícího strukturního vzorce:

   a její fyziologicky přijatelné sole.
5. 6. Sůl sloučeniny podle nároku 5 s chloridem amonným, šťavelanem amonným, octanem amonným nebo 4-hydroxybenzoátem amonným.
6. 7. Sloučenina následujícího strukturního vzorce:

   CONR4R5 a její fyziologicky přijatelné sole, kde:

   R1 je substituovaná nebo nesubstituované arylová skupina;

   R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

   » o* 0 0 · • 0 · 0 ·· 0· 0 0 0 · 0 · 0 0 00 00 0 0 0 0 0 0 · — 74 — ··· ·· 00 00 » · 00 0 0

   R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh;

   X je -CH- nebo -N-; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty, za podmínky, že pokud X je -CH-, R1 není substituovaná nebo nesubstituovaná karbazolylová skupina.
7. 8. Způsob podpory růstu, účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa u užitkových zvířat, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

   CONR4R5 a jejich fyziologicky přijatelných solí, kde:

   R1 je substituovaná nebo nesubstituovaná arylová skupina;

   • 4

   4> · ·

   R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

   R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh;

   X je -CH- nebo -N-; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty, za podmínky, že pokud X je -CH-, R1 není substituovaná nebo nesubstituovaná karbazolová skupina.
8. 9. Způsob podpory růstu, účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa u užitkových zvířat, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

   a jejich fyziologicky přijatelných solí, kde:

   • · · · 4 · · 4 • · 4 4 4 4 · • 44« · · · • 4 · · 4 4 4444

   R1 je substituovaná nebo nesubstituovaná arylová skupina;

   R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

   R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty.
9. 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že zvíře je přežvýkavec.
10. 11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že přežvýkavec je kráva, býk, jalovice nebo býček.
11. 12. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že zvíře je pták.
12. 13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že pták je kuře, krocan nebo kachna.
13. 14. Způsob podpory růstu, účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa u užitkových zvířat, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství sloučeniny následujícího strukturního vzorce:

    • 4· 4« 44 4 4 4 4 « 9 4 · · 4 »4 A 4 4 4 4 · 44 44 • * «4 4 4 «4 44 444

    a její fyziologicky přijatelné sole, kde:

    R1 má strukturní vzorec vybraný ze souboru, zahrnujícího:
14. 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že zvíře je přežvýkavec.
15. 16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že přežvýkavec je kráva, býk, jalovice nebo býček.
16. 17. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že zvíře je pták.
17. 18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že pták je kuře, krocan nebo kachna.
18. 19. Způsob podpory růstu, účinnosti využití krmivá a/nebo produkce libového masa u užitkových zvířat, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství sloučeniny následujícího strukturního vzorce:

    HN conh₂ a její fyziologicky přijatelné sole.
19. 20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že zvíře je přežvýkavec.
20. 21. Způsob podle nároku 20, vyznačující se tím, že přežvýkavec je kráva, býk, jalovice nebo býček.
21. 22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sole sloučeniny s chloridem amonným, šťavelanem amonným, octanem amonným nebo 4-hydroxybenzoátem amonným.
22. 23. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že zvíře je pták.
23. 24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že pták je kuře, krocan nebo kachna.
24. 25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sole sloučeniny s chloridem amonným, šťavelanem amonným, octanem amonným nebo 4-hydroxybenzoátem amonným.
25. 26. Způsob zvýšení množství masa nebo zlepšení kvality masa získaného z užitkového zvířete, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

    R1

    CONR4R5 a jejich fyziologicky přijatelných solí, kde:

    R1 je substituovaná nebo nesubstituované arylová skupina;

    R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

    R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty.
26. 27. Způsob zvýšení množství masa nebo zlepšení kvality masa získaného z užitkového zvířete, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

    Rl má strukturní vzorec vybraný ze souboru, zahrnujícího:

    » ·· 44 4« ·· 44 »4 φ 4 4 4 4 ««··

    4444 4 444 4 4 ·

    4 4 » · · 44 444 4 4

    4« 4 4 «4 4 4 44 »·4 44 44 ·* 44 «444 a
27. 28. Způsob zvýšení množství masa nebo zlepšení kvality masa získaného z užitkového zvířete, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

    a jejích fyziologicky přijatelných solí.
28. 29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sole sloučeniny s chloridem amonným, šťavelanem amonným, octanem amonným nebo 4-hydroxybenzoátem amonným.
29. 30. Způsob zvýšení množství masa nebo zlepšení kvality masa získaného z užitkového zvířete, vyznačující se tím, že • 4 ί· ·* 99

    9 9 9 9 · 4 4 4 • · 44 · 4 · •4 «· ·* 44·* zahrnuje podávání zvířeti účinného množství jedné nebo více sloučenin následujícího strukturního vzorce:

    a jejich fyziologicky přijatelných solí, kde:

    R1 je substituovaná nebo nesubstituovaná arylová skupina;

    R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

    R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh;

    X je -CH- nebo -N-; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty, za podmínky, že pokud X je -CH-, R1 není substituovaná nebo nesubstituovaná karbazolová skupina.

    • 99

    9 9 9 99

    9· 99·9
30. 31. Farmaceutická kompozice obsahující farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo a jako účinnou složku sloučeninu strukturního vzorce (II):

    OH

    R1

    CONR4R5 _{II) a její fyziologicky přijatelné sole, kde:

    Rl je substituovaná nebo nesubstituovaná arylová skupina;

    R2 a R3 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem;

    R4 a R5 jsou nezávisle na sobě -H a C1-C4 alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo vytvářejí společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, nearomatický heterocyklický kruh; a kruh A a kruh B jsou nezávisle na sobě dále popřípadě substituovány jedním nebo dvěma substituenty.
31. 32. Sloučenina obecného vzorce (II), v zásadě jako sloučenina zde popsaná s odvoláním na libovolný z Příkladů 1 až 20.

    • · «· * * · · * 4 t * 4 · · » * * 4 ·
32. 33. Farmaceutická kompozice obsahující jako účinnou složku sloučeninu podle libovolného z nároků 1 až 7 spolu s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
33. 34. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 7 pro použití jako anabolické činidlo.
34. 35. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 7 pro použití jako mírně lipolytické činidlo.
35. 36. Použití sloučeniny obecného vzorce (II) podle nároku 1, nebo její fyziologicky přijatelné soli pro výrobu léčiva pro zvýšení množství masa nebo zlepšení kvality masa získaného z užitkového zvířete.
36. 37. Způsob přípravy sloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že zahrnuje aminaci epoxidu následujícího strukturního vzorce

    R1 aminem následujícího strukturního vzorce ve kterém Rl, R2, R3, definováno v nároku 1;

    R4,

    X,

    A a B jsou jako bylo následovanou popřípadě přeměnou na fyziologicky přijatelnou sůl.
37. 38. Způsob přípravy sloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že zahrnuje:

    (a) aminaci epoxidu následujícího strukturního vzorce aminem následujícího strukturního vzorce • 4 4 · • 4

    HgN (b) hydrolýzu kyanové skupiny pro vytvoření amidové skupiny;

    kde Rl, R2, R3, X, a B jsou jako bylo definováno v nároku následovanou popřípadě přeměnou na fyziologicky přijatelnou sůl.
38. 39. Způsob přípravy sloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že zahrnuje (a) aminaci epoxidu následujícího strukturního vzorce aminem následujícího strukturního vzorce • « • · • ·· kde R6 je methyl nebo ethyl; a (b) amidaci skupiny COOR6 čpavkem;

    kde R2, R3, A a B jsou jako bylo definováno v nároku 1 a R6 je methyl nebo ethyl;

    následovanou popřípadě přeměnou na fyziologicky přijatelnou sůl.
39. 40. Krmivová směs pro zvířata, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu strukturního vzorce I, jako byl definován v nároku 1, nebo její fyziologicky přijatelnou sůl nebo solvát, společně s vhodným nosičem.
40. 41. Krmivová směs pro zvířata podle nároku 40, vyznačující se tím, že sloučenina strukturního vzorce I, jako byl definován v nároku 1, je Sloučenina 6 nebo její fyziologicky přijatelná sůl nebo solvát.
41. 42. Kompozice krmivá pro zvířata, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu strukturního vzorce I, jako byl

    9 4

    9 4 9 44 * · · 4 4 9 «* 99 >9 9444 definován v nároku 1, nebo její fyziologicky přijatelnou sůl nebo solvát, společně s vhodným nosičem.
42. 43. Kompozice krmivá pro zvířata podle nároku 42, vyznačující se tím, že sloučenina strukturního vzorce I, jako byl definován v nároku 1, je Sloučenina 6 nebo její fyziologicky přijatelná sůl nebo solvát.