CS272192B1 - Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy - Google Patents
Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy Download PDFInfo
- Publication number
- CS272192B1 CS272192B1 CS875216A CS521687A CS272192B1 CS 272192 B1 CS272192 B1 CS 272192B1 CS 875216 A CS875216 A CS 875216A CS 521687 A CS521687 A CS 521687A CS 272192 B1 CS272192 B1 CS 272192B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- catalytic concentration
- aminotransferase
- catalytic
- aspartate
- aspertate
- Prior art date
Links
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 title 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 title 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- HFKPAXQHQKDLSU-MCDZGGTQSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol;pyridine-3-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1.C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HFKPAXQHQKDLSU-MCDZGGTQSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 2
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036608 Aspartate aminotransferase, cytoplasmic Human genes 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Předmětem řešeni je stabilizované
činidlo pro stanoveni katalytické koncentrace
aspartátaminotransfsrasy na
bázi L-aspartátu, malátdehydrogenasy a
nikotinamidadanosinu, které obsahuje
určité množství kyseliny askorbové a
albuminu, činidlo se používá při stanoveni
katalytické koncentrace asparátaminotransferasy
v krevním séru nebo
plazmě a vyniká oproti doposud používaným
především vyšěl stabilitou.
Description
Stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy, tj. L-aspartát- 2-oxoglutarátaminogransferasy EC 2.6.1.1. v krevním séru nebo plazmě je velmi rozšířenou analýzou, umožňující znaěné zpřesnění diferenciální diagnostiky jaterních a srdečních chorob. Stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy je jednou ze základních analýz prováděných v klinické biochemii.
V současné době se připraví činidlo na stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy tak, že se k pufru obsahujícím L-aspartát a pyridoxal-5-fosfát přidá indikátorový enzym malátdshýdrogenasa a jeho substrát nikotinamidadenosindinukleotid. Tento roztok je etabilní v temnu při teplotě +4 °C asi tři týdny. Nízká stabilita zásobního roztoku je ekonomicky značně nevýhodná pro menší pracoviště a pro použití automatických analyzátorů, které pracují s velmi malými objemy pracovních činidel, a proto v tak krátké době nemohou zpracovat celý objem pracovních roztoků, které jsou připravovány z komerčně dostupných diagnostických souprav. Prodloužení stability připravovaných roztoků zmrazením, které je velmi hojně užívána, nelze v tomto případě použit, protože při zmrazení dochází k poškození indikátorového enzymu malátdehydrogenasy, a tím i k poklesu její katalytické aktivity.
Stabilita zásobních roztoků může být několikanásobně prodloužena, přidájí-li se do roztoku látky, které ochrání enzymy před jejich poškozením a antioxidanty zamezující nežádoucí oxidaci nikotinamidadenosindinukleotidu. Mnohé antioxidanty, jako je například propylgalát, ethylenglykol a kyselina citrónová hojně užívané v potravinářství a farmacii, mají nepříznivý vliv na katalytickou koncentraci indikátorového enzymu, malátdehydrogenasy· Proto je žádoucí nalézt takovou látku, která zabrání oxidaci nikotinamidadenosindinukleotidu a zároveň nebude mít nepříznivý vliv na katalytickou koncentraci enzymů.
Zmíněné nedostatky výrazně potlačuje stabilizované činidlo na stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferas podle vynálezu. Oeho podstata spočívá v tom, že činidlo obsahuje 0,5 /Umol.l-^ až 10 /Umol.l”^ kyseliny askorobové a 0,5 až 10 g.l^ albuminu.
Činidlo s kyselinou askorbovou a albuminem má následující přednosti. Albumin působí jako ochranné médium malátdehydrogenasy. Katalytická koncentrace malátdehydrogenasy za přítomností albuminu při teplotě +4 °C zůstává zachována po několik týdnů. Také koncentrace redukované formy nikotinamidadenosindinukleotidu v přítomnosti kyseliny askorbové zůstává téměř zachována více než Jeden týden.
Albumin a kyselina sskorbová jsou přitom kompatibilní s analytickými systémy nejčastěji užívanými pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy, na rozdíl od Jiných ochranných systémů.
Uvedeným poměrně velmi jednoduchým způsobem lze podstatně zvýšit stálost pracovního roztoku pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy tak, aby byl použitelný po dobu nezbytnou a výhodnou pro různé typy zdravotnických laboratoří.
Příklad 1
Κ 1 litru pufru e L-aspartátem se přidá 0,5 /umol kyseliny askorbové a k pevné enzymové směsi obsahující malátdshydrogenasu a nikotinamidadenosindinukleotid se přidá 10 g albuminu. Po smíchání obou komponent se získá stabilizované činidlo pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy.
Příklad 2
K enzymové směsi obsahující malátdehydrogenasu a nikotinamidadenosindinukleotid se přidá 5 /Umol kyseliny askorbové a 0,5 g albuminu. Po smíchání enzymové směsi s roztokem pufru obsahujícím L-aspartát se získá 1 litr stabilizovaného činidla pro stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy.
CS 272 192 81 2
Příklad použiti
K 1 ml stabilizovaného činidla na stanovení katalytické koncentrace asparátaminotransferasy obsahující 120 mmol.l”^ tris-(hydroximethyl)-aminomethanf 240 mmol.!-1 L-aspartát, 0,12 pyridoxal-5-fosfát, 0,216 mmo!.!”! niktinamidadenosindinukleotid, 8,4 /ukat.l malátdehydrogenasa, 0,5 /Umol.l”l kyselina askorbová a 10^0 g.l”^ albuminu připraveného podle příkladu 1 se přidá 0,1 ml analyzovaného séra. Po desetiminutové preinkubaci při 30 °C je anzymová reakce nastartována přídavkem 0,1 ml kyseliny 2-oxoglutarové o koncentraci 144 mmol.l”1. Zaznamenává se změna absorbance při 340 nm za časovou jednotku při teplotě 30 °C.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUStabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy na bázi L-aspartátu, malátdehydrogenasy a nikotinamidadenosinu, vyznačující ss tím, že obsahuje 0,5 yumol.l“^ až 10 /Umol.l-·'', kyseliny askorbové a 0,5 až 10 g.l! albuminu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS875216A CS272192B1 (cs) | 1987-07-09 | 1987-07-09 | Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS875216A CS272192B1 (cs) | 1987-07-09 | 1987-07-09 | Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS521687A1 CS521687A1 (en) | 1990-05-14 |
| CS272192B1 true CS272192B1 (cs) | 1991-01-15 |
Family
ID=5396631
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS875216A CS272192B1 (cs) | 1987-07-09 | 1987-07-09 | Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272192B1 (cs) |
-
1987
- 1987-07-09 CS CS875216A patent/CS272192B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS521687A1 (en) | 1990-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0034213B1 (en) | A stabilized aqueous coenzyme solution for use in a clinical assay, a method of stabilizing a labile coenzyme in an aqueous clinical assay solution and a kit for use in said clinical assay | |
| RU2054674C1 (ru) | Способ определения концентрации ионов калия в биологическом материале | |
| EP0072581B1 (en) | The stabilization of working reagent solutions containing enzymes, and the use of such stabilized reagents in enzyme or substrate assays | |
| Szasz et al. | Creatine kinase in serum: 6. Inhibition by endogenous polyvalent cations, and effect of chelators on the activity and stability of some assay components. | |
| JP2854995B2 (ja) | 尿酸測定用試薬組成物 | |
| EP0490286B1 (en) | Enzymatic composition for ethanol assay | |
| US5278044A (en) | Stable aqueous NADH reagent and kit | |
| US4465770A (en) | Stabilized enzymic solutions for determining urea | |
| JP3619865B2 (ja) | 液体の安定なチオール活性化剤 | |
| JP4639287B2 (ja) | 酵素的測定試薬の安定化方法 | |
| JP2619222B2 (ja) | 血液試料または血液由来の試料中のフルクトサミン含量を測定するための試薬と方法 | |
| CN1311335A (zh) | 可稳定还原性辅酶ⅰ和还原性辅酶ⅱ的试剂 | |
| EP0603831A1 (en) | Stable single liquid reagent for the determination of carbon dioxide in serum | |
| CS272192B1 (cs) | Stabilizované činidlo na stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy | |
| JP4022799B2 (ja) | 電解質測定用試薬組成物 | |
| EP1083235A2 (en) | Reduced coenzyme solution | |
| CN108486091A (zh) | 一种用于生化试剂复合酶的复合稳定剂及其应用 | |
| EP0721986A2 (en) | Creatine kinase reagent | |
| CS263028B1 (cs) | Stabilizovaná činidlo na stanovení katalytické koncentrace alaninaminotransferasy | |
| JP4798600B2 (ja) | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 | |
| Gerhardt et al. | EDTA effect on creatine kinase (CK) and on the SCE reagent | |
| US7300769B2 (en) | Stabilized coenzyme solutions for determining dehydrogenase activity | |
| EP0886139A1 (en) | A reagent for measurement and a measurement method | |
| JPS59159798A (ja) | 生体体液成分の測定法 | |
| JPH0195779A (ja) | 安定な酵素組成物および酵素組成物の安定化方法 |