CS272192B1

CS272192B1 - Stabilized agent to determine the catalytic concentration of aspartate aminotransferase

Info

Publication number: CS272192B1
Application number: CS875216A
Authority: CS
Inventors: Milan Rndr Maly; Vratislav Ing Csc Chromy
Original assignee: Maly Milan; Chromy Vratislav
Priority date: 1987-07-09
Filing date: 1987-07-09
Publication date: 1991-01-15
Also published as: CS521687A1

Abstract

Předmětem řešeni je stabilizované činidlo pro stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransfsrasy na bázi L-aspartátu, malátdehydrogenasy a nikotinamidadanosinu, které obsahuje určité množství kyseliny askorbové a albuminu, činidlo se používá při stanoveni katalytické koncentrace asparátaminotransferasy v krevním séru nebo plazmě a vyniká oproti doposud používaným především vyšěl stabilitou.The subject of the solution is a stabilized reagent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase based on L-aspartate, malate dehydrogenase and nicotinamide adenosine, which contains a certain amount of ascorbic acid and albumin. The reagent is used in determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase in blood serum or plasma and stands out compared to the assays used so far, primarily in terms of stability.

Description

Stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy, tj. L-aspartát- 2-oxoglutarátaminogransferasy EC 2.6.1.1. v krevním séru nebo plazmě je velmi rozšířenou analýzou, umožňující znaěné zpřesnění diferenciální diagnostiky jaterních a srdečních chorob. Stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy je jednou ze základních analýz prováděných v klinické biochemii.Determination of the catalytic concentration of aspartate aminotransferase, ie L-aspartate-2-oxoglutarate aminogransferase EC 2.6.1.1. in blood serum or plasma is a very widespread analysis, enabling significant refinement of the differential diagnosis of liver and heart diseases. Determination of the catalytic concentration of aspartate aminotransferase is one of the basic analyzes performed in clinical biochemistry.

V současné době se připraví činidlo na stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy tak, že se k pufru obsahujícím L-aspartát a pyridoxal-5-fosfát přidá indikátorový enzym malátdshýdrogenasa a jeho substrát nikotinamidadenosindinukleotid. Tento roztok je etabilní v temnu při teplotě +4 °C asi tři týdny. Nízká stabilita zásobního roztoku je ekonomicky značně nevýhodná pro menší pracoviště a pro použití automatických analyzátorů, které pracují s velmi malými objemy pracovních činidel, a proto v tak krátké době nemohou zpracovat celý objem pracovních roztoků, které jsou připravovány z komerčně dostupných diagnostických souprav. Prodloužení stability připravovaných roztoků zmrazením, které je velmi hojně užívána, nelze v tomto případě použit, protože při zmrazení dochází k poškození indikátorového enzymu malátdehydrogenasy, a tím i k poklesu její katalytické aktivity.Currently, a reagent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase is prepared by adding the indicator enzyme malate dihydrogenase and its substrate nicotinamide adenosine dinucleotide to a buffer containing L-aspartate and pyridoxal-5-phosphate. This solution is stable in the dark at + 4 ° C for about three weeks. The low stability of the stock solution is economically very disadvantageous for smaller workplaces and for the use of automated analyzers that work with very small volumes of working reagents and therefore cannot process the entire volume of working solutions prepared from commercially available diagnostic kits in such a short time. Prolongation of the stability of the prepared solutions by freezing, which is very widely used, cannot be used in this case, because during freezing, the indicator enzyme malate dehydrogenase is damaged, and thus its catalytic activity is reduced.

Stabilita zásobních roztoků může být několikanásobně prodloužena, přidájí-li se do roztoku látky, které ochrání enzymy před jejich poškozením a antioxidanty zamezující nežádoucí oxidaci nikotinamidadenosindinukleotidu. Mnohé antioxidanty, jako je například propylgalát, ethylenglykol a kyselina citrónová hojně užívané v potravinářství a farmacii, mají nepříznivý vliv na katalytickou koncentraci indikátorového enzymu, malátdehydrogenasy· Proto je žádoucí nalézt takovou látku, která zabrání oxidaci nikotinamidadenosindinukleotidu a zároveň nebude mít nepříznivý vliv na katalytickou koncentraci enzymů.The stability of stock solutions can be prolonged several times by adding substances to the solution that protect the enzymes from damage and antioxidants that prevent the undesired oxidation of nicotinamide adenosine dinucleotide. Many antioxidants, such as propyl gallate, ethylene glycol and citric acid, widely used in food and pharmacy, have an adverse effect on the catalytic concentration of the indicator enzyme, malate dehydrogenase. enzymes.

Zmíněné nedostatky výrazně potlačuje stabilizované činidlo na stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferas podle vynálezu. Oeho podstata spočívá v tom, že činidlo obsahuje 0,5 /Umol.l^-^ až 10 /Umol.l”^ kyseliny askorobové a 0,5 až 10 g.l^ albuminu.These shortcomings are significantly suppressed by the stabilized agent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferases according to the invention. The essence is that the reagent contains 0.5 .mu.mol ^-1 to 10 .mu.mol of ascorbic acid and 0.5 to 10 .mu.g of albumin.

Činidlo s kyselinou askorbovou a albuminem má následující přednosti. Albumin působí jako ochranné médium malátdehydrogenasy. Katalytická koncentrace malátdehydrogenasy za přítomností albuminu při teplotě +4 °C zůstává zachována po několik týdnů. Také koncentrace redukované formy nikotinamidadenosindinukleotidu v přítomnosti kyseliny askorbové zůstává téměř zachována více než Jeden týden.The reagent with ascorbic acid and albumin has the following advantages. Albumin acts as a protective medium for malate dehydrogenase. The catalytic concentration of malate dehydrogenase in the presence of albumin at + 4 ° C is maintained for several weeks. Also, the concentration of the reduced form of nicotinamide adenosine dinucleotide in the presence of ascorbic acid is almost maintained for more than one week.

Albumin a kyselina sskorbová jsou přitom kompatibilní s analytickými systémy nejčastěji užívanými pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy, na rozdíl od Jiných ochranných systémů.Albumin and scorbic acid are compatible with the analytical systems most commonly used to determine the catalytic concentration of aspartate aminotransferase, in contrast to other protective systems.

Uvedeným poměrně velmi jednoduchým způsobem lze podstatně zvýšit stálost pracovního roztoku pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy tak, aby byl použitelný po dobu nezbytnou a výhodnou pro různé typy zdravotnických laboratoří.In a relatively simple manner, the stability of the working solution for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase can be substantially increased so that it can be used for the time necessary and advantageous for various types of medical laboratories.

Příklad 1Example 1

Κ 1 litru pufru e L-aspartátem se přidá 0,5 /umol kyseliny askorbové a k pevné enzymové směsi obsahující malátdshydrogenasu a nikotinamidadenosindinukleotid se přidá 10 g albuminu. Po smíchání obou komponent se získá stabilizované činidlo pro stanovení katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy./ 1 liter of L-aspartate buffer is added 0.5 .mu.mol of ascorbic acid and 10 g of albumin are added to a solid enzyme mixture containing malate dehydrogenase and nicotinamide adenosine dinucleotide. After mixing the two components, a stabilized reagent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase is obtained.

Příklad 2Example 2

K enzymové směsi obsahující malátdehydrogenasu a nikotinamidadenosindinukleotid se přidá 5 /Umol kyseliny askorbové a 0,5 g albuminu. Po smíchání enzymové směsi s roztokem pufru obsahujícím L-aspartát se získá 1 litr stabilizovaného činidla pro stanoveni katalytické koncentrace aspartátaminotransferasy.To an enzyme mixture containing malate dehydrogenase and nicotinamide adenosine dinucleotide was added 5 .mu.mol of ascorbic acid and 0.5 g of albumin. After mixing the enzyme mixture with a buffer solution containing L-aspartate, 1 liter of a stabilized reagent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase is obtained.

CS 272 192 81 2CS 272 192 81 2

Příklad použitiExample of use

K 1 ml stabilizovaného činidla na stanovení katalytické koncentrace asparátaminotransferasy obsahující 120 mmol.l”^ tris-(hydroximethyl)-aminomethan_f 240 mmol.!^-1L-aspartát, 0,12 pyridoxal-5-fosfát, 0,216 mmo!.!”! niktinamidadenosindinukleotid, 8,4 /ukat.l malátdehydrogenasa, 0,5 /Umol.l”l kyselina askorbová a 10^0 g.l”^ albuminu připraveného podle příkladu 1 se přidá 0,1 ml analyzovaného séra. Po desetiminutové preinkubaci při 30 °C je anzymová reakce nastartována přídavkem 0,1 ml kyseliny 2-oxoglutarové o koncentraci 144 mmol.l”¹. Zaznamenává se změna absorbance při 340 nm za časovou jednotku při teplotě 30 °C.To 1 mL of the stabilized reagent for determining the concentration of catalyst containing 120 mM asparátaminotransferasy "^ tris (hydroximethyl) aminomethane 240 mmol _f.! ^-1 L-aspartate, 0.12 pyridoxal-5-phosphate, 0.216 mmol! ”! nicotinamide adenosine dinucleotide, 8.4 .mu.l of malate dehydrogenase, 0.5 .mu.mol of 1-ascorbic ascorbic acid and 10 .mu.g of albumin prepared according to Example 1 were added 0.1 ml of the serum to be analyzed. After a ten minute preincubation at 30 DEG C., the enzymatic reaction is started by adding 0.1 ml of 144 mmol / ^l 2-oxoglutaric acid. The change in absorbance at 340 nm per time unit at 30 ° C is recorded.

Claims

OBJECT OF THE INVENTION

Stabilized reagent for determining the catalytic concentration of aspartate aminotransferase based on L-aspartate, malate dehydrogenase and nicotinamide adenosine, characterized in that it contains 0.5 .mu.mol to 10 .mu.mol of ascorbic acid and 0.5 to 10 ^.mu.mol. gl! albumin.