CS269050B1

CS269050B1 - Myši lymfocytárny hybridům VU VIH7

Info

Publication number: CS269050B1
Application number: CS888955A
Authority: CS
Inventors: Gustav Rndr Csc Russ; Katarina Rndr Csc Polakova; Frantisek Rndr Csc Kostolansky; Pavol Rndr Csc Ragac; Marta Rndr Miklosova
Original assignee: Russ Gustav; Polakova Katarina; Frantisek Rndr Csc Kostolansky; Ragac Pavol; Miklosova Marta
Priority date: 1988-12-29
Filing date: 1988-12-29
Publication date: 1990-04-11
Also published as: CS895588A1

Description

CS 269 050 B1 1

Vynález ea týká myšieho lymfocytárneho hybridámu, t. j, hybrídného jedno-bunkovóho organizmu,· zoatrojeného buňkovou fúziou myšej myelomovej linie Sp2/0a myšej slezinovej buňky, produkujúceho protilátku proti virusu chřipky A,

Protilátky voči proteínom virusu chřipky sa doteraz pripravojú tak, že vi-rus resp, jeho izolované proteiny sa opakované lnjikujú ako antigán pokusným zvie-ratám, najčastějšie králikom, myšiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovanýchzvierat, odobrate po určitej době posobenia antigénu, slúží ako zdroj protilátok,používaných predošetkým pre kvantitativná alebo kvalitativnu analýzu antigénu - virusu chřipky - vo výskume a v ímunodiagnostickej praxi. f

Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekolko nevýhod, V sé-re imunizovaných zvierat sa nachádza heterogenná zmes protilátok, ktorých spek-trum Je v každom jednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spra-vidla vytvoří okrem protilátok voči žladanému antigénu i protilátky voči nečisto-tám antigenovóho preparátu, ktoré Je potřebné zo sér odstraňoval vysycovaním.Výrobné šarže konvenčných sér sa preto dajú lažko Standardizoval a bývajúv širokom rozmedzí kvality. Pre výrobu každej šarže třeba připravil čistý imu-nizačný antigón a 3alšie antigény na vysýtenie balastných protilátok proti ne-čistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a dosial používaného postupu odpadnu,ak je k dispozicii hybridám, produkujúcl monoklonélnu protilátku proti nukleoprotei-nu virusu chřipky A, uložený v zbierke hybridámov Virologického ústavu SAV v Bra-tislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VUVIH7,

Uvedený hybridám bol získaný spobobom známým z odbornej literatury (Kohler. G.,Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefinedspecificity. Nátuře, 256, (1975), 4951 Gerhard.W,: Fusion of cells in suspensionand outgrowth of hybrida in conditioned medium, In; Monoclonal antibodies, Hybrids: A New Oimension in Blological Analyses, R, H. Kennet, T.3. McKearn, K.B. Bechtol,eds. , Nex York, Plenům Press (1980), 370.) klonováním súboru hybridných buniekpo fúzii myšej myelomovej linie Sp2/0 a buniek, získaných zo sleziny myši kmeř.a BALB/c,imunizovaných virusom chřipky A/Dunadln/4/73 (H3N2), Výhodou hybrldámu podlá vynálezu je, ze produkuje homogennú protilátku, tzv,monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná specificky reagoval s nukleoproteinomchřipkového virusu typu A. Hybridám VU VIH7 možno kultivoval in vitro v médiachvhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmefla BALB/c, Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájil produkciu protilátky bezáelšej imunizácie antigónom. Přiklad

Pre účel pomnoženia hybridámových buniek in vivo sa aplikovalo 5 x 106 buniekdo peritoneálnej dutiny myši, Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bda myš

Claims

2 CS 269 050 Bl 15 dni před pranosoa bunlek hybridúmu premedikovsná parafinovým olejora (0,5 mllntraperitoneálne). Po 20 dííoch rastu hybridúmu v peritoneálnej dutina bole myšzabití a vyprodukované ascitická tekutina odobratá, CaIkon sa získalo 7 ml asci-tlckej tekutiny obsahujucej 4 mg/ml imunoglobullnu. Ascitická tekutina, obsahují-ce produkt hybridůau VU 315/4, vykazovala v radioimunoanalytickom taste speoi-fickú vazbu k virusom chřipky typu A (napr. eubtyp Hl, H2 , H3), ale nie voči ty-pu B, a v radioimunoprecipitacnotn teste sa viazala na nukleoprotein virusuchřipky A, In vitro rastů buňky hybridúmu ako polosuspenzná kultura. Majů tvar (gulatý)a velkosf charakteristická pře myelomová.buňky, obsahujú fúzovaná buňková Jadrá,sú aneuploidné, Bunký"hybridůmu VU VIH7 aajú ultraitrukturný obraz typickýchmyelomových buniek, kde převažujúcou organelou sú volna a na membrány vlažená po-lyribozomy. Základným kultivaSnym médiom Je Oulbeccova modifikácia Eaglovho mi-nimálneho esenclálneho média (Dulbecco.R, a Freeman.G., Virology 8 (1959), 396).Toto médium, označovaná ako DMEM, je pra kultiváclu hybridúmu doplněné genta-mycinom a inaktivovaným prekolostrálnym sarom (10 %, Biovata, Ivanovice na Hana),Hybridům Je kultivovaný při 37 °C - Jeho středná generačná doba Je přibližné24 h. Produkovaná protilátka Je moooklonálny imunoglobulin podtriedy IgG 2a. Hybridům VU VIH7 ea nože priemyselne využíval ako zdroj protilátky protinukleoproteinu (nukleokapaidovému proteinu) virusu chřipky A v metůdach analy-tických, preparativnych alebo diagnostických a to; 1. pri kvantitativnom a kvalitatívnom vyhodnocováni přítomnosti nukleoproteinuvirusu chřipky A vo vyáetrovanom materiéll (napr..klinické vzorky), 2. pri vyhodnocováni apidemiologickeJ situacie, 3. pri purifikácii nukleoproteinu virusu chřipky A, 4. ako zdroj protilátky Jedinej podtriedy (IgG 2a) pre přípravu sér ápeclfic-kých pre uvedenú podtriedu. PŘEĎME T VYNÁLEZU Myši lymfocytárny hybridem VU VIH7, produkujúci monoklonálnu protilátkupodtriedy IgG 2a proti nukleoproteinu virusu chřipky A.