CS265558B1 - Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek - Google Patents
Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek Download PDFInfo
- Publication number
- CS265558B1 CS265558B1 CS873176A CS317687A CS265558B1 CS 265558 B1 CS265558 B1 CS 265558B1 CS 873176 A CS873176 A CS 873176A CS 317687 A CS317687 A CS 317687A CS 265558 B1 CS265558 B1 CS 265558B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- weight
- concentration
- water
- fraction
- heparin
- Prior art date
Links
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- -1 Polythio Polymers 0.000 title description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 26
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- JYLNVJYYQQXNEK-UHFFFAOYSA-N 3-amino-2-(4-chlorophenyl)-1-propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(CN)C1=CC=C(Cl)C=C1 JYLNVJYYQQXNEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 abstract description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003011 chondroprotective effect Effects 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 10
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 10
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 8
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 230000002456 anti-arthritic effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 2
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002402 anti-lipaemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N manganese dioxide Chemical compound O=[Mn]=O NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000693530 Staphylococcus aureus Staphylokinase Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- NWWQJUISNMIVLJ-UHFFFAOYSA-N cyclotetrasulfur Chemical class S1SSS1 NWWQJUISNMIVLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006190 sub-lingual tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 201000005060 thrombophlebitis Diseases 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Řešení se týká polysírového esteru
glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli,
významného léčiva s antiartrotickým a chondroprotektivním
účinkem. Rovněž se týká
způsobu výroby tohoto léčiva, a to frakcionací
tzv. S-heparinu etanolem, čímž se získá
žádaná substance, charakterizovaná rozpětím
molekulové hmotnosti od 7 000 do
11 000 daltonů, obsahem síry od 7 do 14 S
hmot. a antikoagulační účinnosti do 90 IU/mg.
Description
(57) Řešení se týká polysírového esteru glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli, významného léčiva s antiartrotickým a chondroprotektivním účinkem. Rovněž se týká způsobu výroby tohoto léčiva, a to frakcionací tzv. S-heparinu etanolem, čímž se získá žádaná substance, charakterizovaná rozpětím molekulové hmotnosti od 7 000 do 11 000 daltonů, obsahem síry od 7 do 14 S hmot. a antikoagulační účinnosti do 90 IU/mg.
CS 265 558 B1
Vynález se týká polysírového esteru glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli a způsobu výroby tohoto esteru, resp. jeho sodné soli.
Tato nová látka, v dalším označovaná pro stručnost heparon, má význam jako léčivo s antiarthrotiokým a ohondroprotektivnim účinkem. Získá se z pólysacharidu, odpadajícího při výrobě heparinu z hovězích plic, který má nízký obsah síry a je dodatečně sulfatován chemickou cestou a je znám pod označením S-heparin jako účinné antikoagulans. Tento sulfatovaný polysacharid se vyznačuje širokým rozmezím molekulové hmotnosti. Etanolovou frakcíonaoí se z S-heparinového komplexu oddělí heparon, sulfatovaný polysacharid s relativně nízkou průměrnou molekulovou hmotností a žádoucí nízkou antíkoagulační účinností. Zbývající frakce S-heparinu po oddělení nízkomolekulárního heparonu se tím naopak úměrně obohatí na antíkoagulační účinnosti. Vynález tedy v důsledku prakticky bezztrátové technologie poskytuje nový typ žádaného léčiva a. tim inovuje a značnou měrou i ekonomizuje celou výrobu heparinu a S-heparinu, jak je podrobněji popsáno níže.
Jak je známo, charakterizuje E. Jorpes v monografii Heparin in the Treatment of Thrombošic, Oxford Press, 1946, přirozený heparin syntetizovaný organismem savců, jako nehomogenní směs mono- až tetrasírovýoh esterů polysacharidu (s obsahem síry 6,36 až 15,81 % hmot.), uvažuje-li se disaoharidová jednotka jako základ heparinové makromolekuly. Vedle této směsi sírových esterů existuje v organismu ještě síry prostý heparinový polysacharid, konjugát uranové kyseliny s glukosaminem. Oměrně se zvyšujícím se obsahem síry stoupá antíkoagulační účinnost, síry prostý polysacharid je antikoagulačně neúčinný. Průměrná molekulová hmotnost heparinu s převahou podílu výše sulfatovaných esterů je asi 16 000 daltonů.
Při výrobě heparinu z hovězích plic (čs. pat. spis č. 91 903) se získá jednak frakce obsahující vysoce účinný heparin a jednak frakce polysacharidů s nízkým obsahem síry a nízkou antíkoagulační účinností, která tvoří odpad. Podíl této frakce je asi 6 až 8násobek hmotnosti čistého heparinu.
Uvedenou odpadní polysacharidovou frakci se podařilo výhodně zužitkovat dodatečnou chemickou sulfatací na antikoagulačně účinný produkt (čs. AO č. 217 193). Z výchozí suroviny, tj. z odpadní frakce s obsahem síry pod 3 % hmot. se tak získal produkt s obsahem síry až 13 % hmot., analogický heparinu a s antíkoagulační a antilipemickou aktivitou srovnatelnou s čistým heparinem. Tento produkt, v dalším označovaný pro stručnost S-heparin, byl zaveden do léčebné praxe jako účinná součást externě aplikovaných přípravků k léčení tromboflebitidy, hematomů apod., popřípadě sublinguálních tablet s antilipemickým účinkem.
Výsledkem dalších výzkumů v této oblasti bylo zjištění, že S-heparin, definovaný jako polysulfát glykosaminoglykanu (GAGPS), je z hlediska molekulové hmotnosti směsí frakcí asi od 5 000 do 17 000 daltonů, přičemž stupeň sulfatace je téměř rovnoměrný bez ohledu na velikost polyméru. Tento poznatek vedl k vypracováni postupu izolace určitých frakcí s poměrně úzkým rozpětím molekulových hmotností a umožnil tak získat materiály s různými biochemickými a farmakologickými vlastnostmi. Jednou z látek takového typu je frakce S-heparinu s molekulovou hmotností pod 11 000 daltonů a s obsahem síry 8 až 14 % hmot. Způsob frakoionace S-heparinu, vedoucí k izolaci jmenované frakce, označovaná jako heparon (viz výše), jsou předmětem tohoto vynálezu.
Svými vlastnostmi patří heparon mezi antiarthrotika, resp. chondroprotektiva, která jsou používána k léčení artrozy kyčelních a koleních kloubů, ďegenerativních onemocnění páteře, bolestivé ztuhlosti kloubů apod. Přesná chemická struktura heparonu není určitelná, nebot GAGPS jsou aniónické heteropolysacharidy, složené z konjugovaných hexuronových kyselin a aminocukrů. Charakteristickými rysy jsou relativně vysoký obsah síry a definované rozpětí molekulové hmotnosti.
Při studiu vlastností a biologické účinnosti byl heparon srovnáván s komerčním přípravkem z téže indikační oblasti (IX, Europáischer Kongress fiir Rheumatologie, Wiesbaden, 1979,
Internationales Arzneimittelsymposium ARTEPARON).
Antiartrotický a chondroprotektivní účinek GAGPS je výsledkem celé řady jejich nespecifických i specifických interakcí. Příkladem nespecifického působení je ínhibice proteolytických enzymů, které jsou nejvýraznějším faktorem degradace základní hmoty kloubní chrupavky. Jde zejména o kolagenázy a neutrální proteinázy serinového a thiolového typu. Příkladem specifického působení heparonu je kompetitivní ínhibice beta-glukuronidázy, která se podílí na rozkladu polysacharidových řetězců proteoglykanů chrupavky. Specifická složka antiartrotiokého účinku heparonu se projevuje zejména přímím ovlivněním artrotických chondrocytů ve smyslu narušeného metabolismu a zvýšeni biosyntézy kolagenu a proteoglykanů.
ínhibice hydrolytických enzymů in vitro heparonem ve srovnání s komerčním přípravkem byla s pomocí příslušných substrátů prokázána u kolagenázy, elastázy, katepsinu B 1, papainu, chymotrypsiiju a beta-glukuronidázy. ínhibice všech testovaných proteináz měla u obou látek velmi podobný průběh, přičemž 50 % ínhibice proteolytických enzymů bylo dosaženo při koncentracích 10 ^molárních, které odpovídají hladinám in vivo, jakých je dosahováno v lidské artrotické chrupavce i po nitrosvalové aplikaci komerčního přípravku.
Při studiu vlivu heparonu a komerčního přípravku na metabolismus kolagenu a proteoglykanů lidské osteoartrotioké chrupavky in vitro byly jako radioaktivní prekurzory použity
3
D-l( C)-glukosamin a L-(5- H)-prolin. V kolagenní frakci byl stanoven hydroxyprolin a izolován 3H-hydroxyprolin. Z frakce proteoglykanové byly izolovány proteoglykany a stanoven
3 obsah bílkovin, hexosaminu a zjištována radioaktivita- C-glukosaminu a H-prolinu jako míra inkorporace radioaktivních prekurzorů do bílkovinné a polysacharidové složky proteoglykanů. Ze získaných výsledků vyplynulo, že v přítomnosti obou preparátů se výrazně zvýšila inkorporace radioaktivních prekurzorů do kolagenní a proteoglykanové (bílkovinné i polysacharidové) frakce osteoartrotioké chrupavky o 40 až 100 %. Tento jev byl už popsán a detailně studován řadou autorů (již citováno). Bylo prokázáno, že GAGPS obecně jednak inhibují katabolické procesy chondrocytů v chrupavce a jednak přímo stimuluji biosyntézu proteoglykanů a kolagenu těmito chondrocyty. Celkový účinek se tak projevuje normalizací metabolické aktivity chondrocytů a tento děj je jedním z nejdůležitějších předpokladů antiartrotické a chondroprotektivní účinnosti GAGPS a tedy heparonu in vivo.
Dále bylo pomocí značeného Tc-heparonu a komerčního přípravku sledováno rozdělení radioaktivity v různých tkáních krys ve 24 hodině po nitrosvalové aplikaci. Významné z terapeutického hlediska je zjištění vysokých koncentrací v kloubní tkáni v blízkém sousedství místa aplikace, přičemž rozdíly mezi oběma přípravky jsou statisticky nevýznamné.
Podle vynálezu lze tedy heparon charakterizovat jako polysírový ester glykosaminoglykanu (GAGPS), resp. jeho sodnou sůl, obsahující 8 až 14 % hmot. síry, nejvýše 3 % hmot. dusíku, s molekulovou hmotností Mr 7 000 až 11 000, s antikoagulační účinností nejvýše 90 ÍU/mg (vyšší účinnost je nežádoucí z důvodů vedlejších účinků).
Vynález se dále týká způsobu výroby polysírového esteru glykosaminoglykanu - heparonu - a jeho sodné soli. Podstata tohoto způsobu spočívá v tom, že se vodný roztok s-heparinu o hmotnostní koncentraci 4 až 5 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 9, při teplotě 10 až 20 °C, sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem, do koncentrace 27 až 32 % obj., po oddělení vyloučené sraženiny 1 frakce se supernatant při teplotě 10 až 20 °C sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem, do koncentrace 50 až 60 % obj., vyloučená sraženina 2 frakce se po oddělení a dehydrataci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci 8 až 12 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, jenž se po úpravě pH na hodnotu 9 až 10 při teplotě 70 až 100 °C odbarvuje působením manganistanu sodného v množství 0,5 až 1 í hmot., vztaženo na hmotnost 2 frakce, vyloučená sraženina se oddělí z filtrátu po ochlazení na teplotu 15 až 25 °C přidáním organického s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, nejméně ve dvojnásobném objemovém přebytku, vyloučená 2 frakce se po izolaci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci až 6 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 10, při teplotě 10 až 20 °C, k němuž se přidá organické, s vodou mísitelné rozpouštědlo, zejména etanol, do koncentrace 27 až 32 % obj., popřípadě vzniklá sraženina se oddělí a spojí s 1 frakcí, načež se ze supernatantu zvýšením koncentrace organického, s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, na 50 až 60 % obj., vyloučí žádaný produkt heparonu ve formě sraženiny, která se izoluje.
Získaná substance sodné soli heparonu, jako definovaná frakce GAGPS, je bílý amorfní prášek, rozpustný ve vodě, nerozpustný v organických rozpouštědlech, netaje, rozkládá se.
K průkazu totožnosti slouží metachromatická reakce s toluidinovou modři, která je charakteristická pro GAGPS. Obsah dusíku dle Kjeldahla je nejvýše 3 % hmot. v sušině, obsah síry dle Schónigera minimálně 8 Ϊ hmot. v sušině, antikoagulační účinnost nejvýše 90 IU/mg. Molekulová hmotnost, Mr, stanovená gelovou permeační chromatografií je 7 000 až 11 000. K léčebným účelům se heparon aplikuje Injekčně v podobě 5 % vodného roztoku (váhově) a to nitrosvalově nebo nitrokloubně v 15 individuálních dávkách po 1 ml v průběhu 8 týdnů. Léčebné kůry se mohou po 6 měsících opakovat.
Vynález je blíže ilustrován následujícím příkladem provedení, přičemž ovšem není omezen pouze na podmínky v něm uvedené.
kg S-heparinu z hovězích plic a 200 g chloridu sodného se za míchání rozpustí ve 20 litrech demineralizované vody a pH vzniklého roztoku se upraví 20% roztokem hydroxidu sodného na pH 8. Za stálého míchání se při teplotě do 20 °C přidává etanol do koncentrace 27 až 30 % obj. V míchání se pokračuje ještě 10 minut a pak se nechá v klidu 24 hodin sedimentovat. Potom se supernatant oddělí a sraženina (1 frakce) se zpracuje na antikoagulačně vysoce účinný přípravek - S-heparin se zvýšenou antikoagulační účinností.
K supernatantu po oddělení 1 frakce se za stálého míchání při teplotě do 20 °C přidává etanol do koncentrace 55 až 58 % obj. a po 10 minutách mícháni se odstaví na 48 hodin k sedimentaci. Supernatant je odpad a získaná sraženina 2.frakce se dehydratuje etanolem, filtruje a suší.
100 g 2,frakce a 10 g chloridu sodného se rozpustí v 1 litru destilované vody, pH roztoku se uprav! 20% roztokem hydroxidu sodného na 9 až 10, zahřeje se na vodní lázni na 80 °C a přidá se 1 g manganistanu sodného. Roztok se za občasného zamíchání udržuje 30 minut při 80 °C. Vylučuje se voluminezní balastní sraženina hydratovaného oxidu manganičitého, nad kterou se odděluje čirý, prakticky bezbarvý roztok. Filtrací za horka přes asbestovou filtrační vložku se sraženina oddělí a promyje na filtru malým množstvím horkého 1% roztoku chloridu sodného. Filtrát se ochladí pod 20 °C a pomalým litím do pětinásobného objemu etanolu se vysráží produkt jako bílá dobře sedimentující sraženina. Supernatant se odtáhne do odpadu a sraženina se dehydratuje etanolem, filtruje a suší.
100 g tohoto produktu se rozpustí ve 2 litrech destilované vody s 20 g chloridu sodného a pH se upraví na 8. Za stálého míchání se přidává etanol až do koncentrace 30 % obj. Pokud se tvoří nějaká sraženina, nechá se 24 hodin sedimentovat, zpracuje dehydratací a sušená se spojí s 1 frakcí. Ze supernatantu se dalším zvýšením koncentrace etanolu až na 60 % obj. vysráží heparonová frakce jako konečný produkt. Po sedimentaci asi 24 hodin se sraženina dehydratuje etanolem, filtruje a na filtru promývá absolutním etanolem, eterem a suší nejprve volně a potom v exsikátoru.
Hmotnostní výtěžek konečného produktu, tj. heparonu, je asi 10 až 20 % hmotnosti výchozí substance S-heparinu.
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Polysírový ester glykosaminoglykanu, respektive jeho sodná sůl, obsahující 8 až14 % hmotnostních síry, nejvýše 3 % hmotnostních dusíku, s molekulovou hmotností Mr 7 000 až 11 000, s antikoagulační účinností nejvýše 90 IU/mg.
- 2. Způsob výroby polysírového esteru glykosaminoglykanu, respektive jeho sodné soli podle bodu 1, vyznačující se tím, že se vodný roztok S-heparinu o hmotnostní koncentraci 4 až 6 8, s přísadou 1 8 hmotnostního chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 9, při teplotě10 až 20 °C, sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem do koncentra ce 27 až 32 % objemových po oddělení vyloučené sraženiny 1 frakce se supernatant při teplotě 10 až 20 °C sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem, do koncenttrace 50 až 60 % objemových, vyloučená sraženina 2 frakce se po oddělení a dehydrataci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci 8 až 12 %, s přísadou 1 % hmotnostního chloridu sodného, jenž se po úpravě pH na hodnotu 9 až 10 při teplotě 70 až 100 °C odbarvuje působením manganistanu sodného v množství 0,5 až 1 % hmotnostní, vztaženo na hmotnost 2 frakce, vyloučená sraženina se oddělí, z filtrátu po ochlazení na teplotu 15 až 25 °C přidáním organického, s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, nejméně ve dvojnásobném objemovém přebytku, vyloučená 2 frakce se po izolaci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci 4 až 6 %, s přísadou 1 % hmotnostního chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 10, při teplotě 10 až 20 °C, k němuž se přidává organické, s vodou mísitelné rozpouštědlo, zejména etanol, do koncentrace 27 až 32 % objemových, popřípadě vzniklá sraženina se oddělí a spojí s 1 frakcí, načež se ze supernatantu zvýšením koncentrace organického, s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, na 50 až 60 i objemových vyloučí žádaný produkt ve formě sraženiny, která se izoluje.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (cs) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (cs) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS317687A1 CS317687A1 (en) | 1989-02-10 |
| CS265558B1 true CS265558B1 (cs) | 1989-10-13 |
Family
ID=5371088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (cs) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS265558B1 (cs) |
-
1987
- 1987-05-05 CS CS873176A patent/CS265558B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS317687A1 (en) | 1989-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5008253A (en) | Sulfoamino derivatives of chondroitin sulfates of dermatan sulfate and of hyaluronic acid and their pharmacological properties | |
| JP3287363B2 (ja) | 低分子量多糖類の混合物、及びその製造と利用 | |
| US4533549A (en) | Antithrombotic agent | |
| DE69016383T2 (de) | Supersulfatierte Heparine. | |
| US4816446A (en) | Heparin derivatives | |
| US5605891A (en) | Use of polysaccharides in acute peripheral neuropathies | |
| DE69838732T2 (de) | Heparinähnliche verbindungen, ihre herstellung und verwendung zur verhinderung arterieller thrombose, verbunden mit vaskulärer verletzung und eingriffen | |
| AU599638B2 (en) | Process for preparing high-purity dermatan sulphate, and pharmaceutical compositions which contain it | |
| EP0495116B1 (en) | Anti-human immunodeficiency virus agent | |
| RU2383554C2 (ru) | Сложные эфиры гиалуроновой кислоты с реином, способ их получения и композиции, содержащие эти эфиры | |
| US5948405A (en) | Fucans with low molecular weight having anticoagulant, antithrombinic and antithromobic activity | |
| JP4567942B2 (ja) | 破骨細胞形成抑制剤 | |
| KR0184260B1 (ko) | 항트롬보 활성을 지닌 황산화 글리코스아미노글리큐로난 | |
| RU2197238C2 (ru) | Способ профилактики и лечения остеоартроза, средство для его осуществления и способ получения средства для лечения остеоартроза | |
| RU2132688C1 (ru) | Способ изготовления биологически активных препаратов из эмбриональных тканей | |
| EP0489102A1 (en) | Pharmaceutical compositions containing aromatic polymers and therapeutic methods using the same | |
| CS265558B1 (cs) | Polysfrový ester glykoseminoglykanu, respektive jeho sodná sůl a způsob výroby těchto látek | |
| AU2003240190A1 (en) | Epimerized derivatives of k5 polysaccharide with a very high degree of sulfation | |
| JPH0273019A (ja) | 多環性芳香族化合物を含有する医薬品合成物 | |
| DE69121058T2 (de) | Salze von Glykosaminoglykanen mit Aminosäureester, ihre Herstellung sowie sie enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen | |
| CA1329136C (en) | Composition for topical use having hair stimulating, anti-dandruff and anti-seborrhoic activity | |
| RU2739746C9 (ru) | Фармацевтическое средство для лечения артрологических заболеваний | |
| JP4462826B2 (ja) | 骨疾患治療剤 | |
| JPH0670085B2 (ja) | コンドロイチン硫酸誘導体 | |
| Adam et al. | Effect of cartilage bone-marrow extract on articular cartilage collagen formation |