CS265558B1 - Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them - Google Patents
Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them Download PDFInfo
- Publication number
- CS265558B1 CS265558B1 CS873176A CS317687A CS265558B1 CS 265558 B1 CS265558 B1 CS 265558B1 CS 873176 A CS873176 A CS 873176A CS 317687 A CS317687 A CS 317687A CS 265558 B1 CS265558 B1 CS 265558B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- weight
- concentration
- water
- fraction
- heparin
- Prior art date
Links
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- -1 Polythio Polymers 0.000 title description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 26
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- JYLNVJYYQQXNEK-UHFFFAOYSA-N 3-amino-2-(4-chlorophenyl)-1-propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(CN)C1=CC=C(Cl)C=C1 JYLNVJYYQQXNEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 abstract description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003011 chondroprotective effect Effects 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 10
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 10
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 8
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 230000002456 anti-arthritic effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 2
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002402 anti-lipaemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N manganese dioxide Chemical compound O=[Mn]=O NUJOXMJBOLGQSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000693530 Staphylococcus aureus Staphylokinase Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- NWWQJUISNMIVLJ-UHFFFAOYSA-N cyclotetrasulfur Chemical class S1SSS1 NWWQJUISNMIVLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006190 sub-lingual tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 201000005060 thrombophlebitis Diseases 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Řešení se týká polysírového esteru glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli, významného léčiva s antiartrotickým a chondroprotektivním účinkem. Rovněž se týká způsobu výroby tohoto léčiva, a to frakcionací tzv. S-heparinu etanolem, čímž se získá žádaná substance, charakterizovaná rozpětím molekulové hmotnosti od 7 000 do 11 000 daltonů, obsahem síry od 7 do 14 S hmot. a antikoagulační účinnosti do 90 IU/mg.The present invention relates to a polysulfate ester glycosaminoglycan, respectively. its sodium salts, an important drug with antiartrotic and chondroprotective properties effect. It also applies a method for producing the medicament by fractionation the so-called S-heparin by ethanol to obtain the desired substance, characterized by the spread molecular weight from 7,000 to 11 000 daltons, with a sulfur content of 7 to 14 S wt. and anticoagulant efficacy up to 90 IU / mg.
Description
(57) Řešení se týká polysírového esteru glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli, významného léčiva s antiartrotickým a chondroprotektivním účinkem. Rovněž se týká způsobu výroby tohoto léčiva, a to frakcionací tzv. S-heparinu etanolem, čímž se získá žádaná substance, charakterizovaná rozpětím molekulové hmotnosti od 7 000 do 11 000 daltonů, obsahem síry od 7 do 14 S hmot. a antikoagulační účinnosti do 90 IU/mg.(57) The solution concerns a polysulfuric ester of glycosaminoglycan, resp. its sodium salt, an important drug with an anti-arthritic and chondroprotective effect. It also relates to a process for the manufacture of this medicament by fractionating so-called S-heparin with ethanol to obtain the desired substance, characterized by a molecular weight range of 7,000 to 11,000 daltons, with a sulfur content of 7 to 14% by weight. and anticoagulant efficacy up to 90 IU / mg.
CS 265 558 B1CS 265 558 B1
Vynález se týká polysírového esteru glykosaminoglykanu, resp. jeho sodné soli a způsobu výroby tohoto esteru, resp. jeho sodné soli.The invention relates to a polysulfate ester of glycosaminoglycan, respectively. a sodium salt thereof; its sodium salts.
Tato nová látka, v dalším označovaná pro stručnost heparon, má význam jako léčivo s antiarthrotiokým a ohondroprotektivnim účinkem. Získá se z pólysacharidu, odpadajícího při výrobě heparinu z hovězích plic, který má nízký obsah síry a je dodatečně sulfatován chemickou cestou a je znám pod označením S-heparin jako účinné antikoagulans. Tento sulfatovaný polysacharid se vyznačuje širokým rozmezím molekulové hmotnosti. Etanolovou frakcíonaoí se z S-heparinového komplexu oddělí heparon, sulfatovaný polysacharid s relativně nízkou průměrnou molekulovou hmotností a žádoucí nízkou antíkoagulační účinností. Zbývající frakce S-heparinu po oddělení nízkomolekulárního heparonu se tím naopak úměrně obohatí na antíkoagulační účinnosti. Vynález tedy v důsledku prakticky bezztrátové technologie poskytuje nový typ žádaného léčiva a. tim inovuje a značnou měrou i ekonomizuje celou výrobu heparinu a S-heparinu, jak je podrobněji popsáno níže.This new substance, hereafter referred to as brevity heparone, is of importance as a drug with antiarthrotic and ohondroprotective action. It is obtained from polysaccharide, which is lost in the production of heparin from bovine lungs, which has a low sulfur content and is additionally sulfated by chemical means and is known as S-heparin as an effective anticoagulant. This sulfated polysaccharide is characterized by a wide molecular weight range. Heparone, a sulfated polysaccharide of relatively low average molecular weight and desirable low anti-coagulant activity, is separated from the S-heparin complex by ethanol fractionation. In contrast, the remaining S-heparin fractions after separation of the low molecular weight heparone are proportionally enriched for anti-coagulation activity. Accordingly, the invention provides a new type of drug of interest and virtually lossless technology, thereby innovating and largely economizing the entire production of heparin and S-heparin, as described in more detail below.
Jak je známo, charakterizuje E. Jorpes v monografii Heparin in the Treatment of Thrombošic, Oxford Press, 1946, přirozený heparin syntetizovaný organismem savců, jako nehomogenní směs mono- až tetrasírovýoh esterů polysacharidu (s obsahem síry 6,36 až 15,81 % hmot.), uvažuje-li se disaoharidová jednotka jako základ heparinové makromolekuly. Vedle této směsi sírových esterů existuje v organismu ještě síry prostý heparinový polysacharid, konjugát uranové kyseliny s glukosaminem. Oměrně se zvyšujícím se obsahem síry stoupá antíkoagulační účinnost, síry prostý polysacharid je antikoagulačně neúčinný. Průměrná molekulová hmotnost heparinu s převahou podílu výše sulfatovaných esterů je asi 16 000 daltonů.As is known, E. Jorpes, in Heparin in the Treatment of Thrombošic, Oxford Press, 1946, characterizes natural heparin synthesized by mammalian organisms as a non-homogeneous mixture of mono- to tetra-sulfur esters of polysaccharide (with a sulfur content of 6.36 to 15.81% by weight). if the disaoharide unit is considered to be the basis of a heparin macromolecule. In addition to this mixture of sulfur esters, there is also a sulfur-free heparin polysaccharide, a conjugate of uranoic acid with glucosamine, in the body. Proportionally with increasing sulfur content the anticoagulant activity increases, the sulfur-free polysaccharide is anticoagulant ineffective. The average molecular weight of heparin with a predominant proportion of the above sulfated esters is about 16,000 daltons.
Při výrobě heparinu z hovězích plic (čs. pat. spis č. 91 903) se získá jednak frakce obsahující vysoce účinný heparin a jednak frakce polysacharidů s nízkým obsahem síry a nízkou antíkoagulační účinností, která tvoří odpad. Podíl této frakce je asi 6 až 8násobek hmotnosti čistého heparinu.In the manufacture of heparin from bovine lung (U.S. Pat. No. 91,903), a fraction containing highly active heparin and a fraction of polysaccharides with a low sulfur content and a low anti-coagulant activity, which forms waste, are obtained. The fraction of this fraction is about 6 to 8 times the weight of pure heparin.
Uvedenou odpadní polysacharidovou frakci se podařilo výhodně zužitkovat dodatečnou chemickou sulfatací na antikoagulačně účinný produkt (čs. AO č. 217 193). Z výchozí suroviny, tj. z odpadní frakce s obsahem síry pod 3 % hmot. se tak získal produkt s obsahem síry až 13 % hmot., analogický heparinu a s antíkoagulační a antilipemickou aktivitou srovnatelnou s čistým heparinem. Tento produkt, v dalším označovaný pro stručnost S-heparin, byl zaveden do léčebné praxe jako účinná součást externě aplikovaných přípravků k léčení tromboflebitidy, hematomů apod., popřípadě sublinguálních tablet s antilipemickým účinkem.Said waste polysaccharide fraction was advantageously utilized by additional chemical sulphation to an anticoagulant active product (No. AO No. 217 193). From the feedstock, i.e. the waste fraction with a sulfur content below 3 wt. This gave a product with a sulfur content of up to 13% by weight analogous to heparin and with anti-coagulant and anti-lipaemic activity comparable to pure heparin. This product, hereinafter referred to as brevity S-heparin, has been introduced into medical practice as an effective component of externally applied preparations for the treatment of thrombophlebitis, hematomas and the like, or sublingual tablets with antilipemic action.
Výsledkem dalších výzkumů v této oblasti bylo zjištění, že S-heparin, definovaný jako polysulfát glykosaminoglykanu (GAGPS), je z hlediska molekulové hmotnosti směsí frakcí asi od 5 000 do 17 000 daltonů, přičemž stupeň sulfatace je téměř rovnoměrný bez ohledu na velikost polyméru. Tento poznatek vedl k vypracováni postupu izolace určitých frakcí s poměrně úzkým rozpětím molekulových hmotností a umožnil tak získat materiály s různými biochemickými a farmakologickými vlastnostmi. Jednou z látek takového typu je frakce S-heparinu s molekulovou hmotností pod 11 000 daltonů a s obsahem síry 8 až 14 % hmot. Způsob frakoionace S-heparinu, vedoucí k izolaci jmenované frakce, označovaná jako heparon (viz výše), jsou předmětem tohoto vynálezu.Further research in this field has revealed that S-heparin, defined as glycosaminoglycan polysulfate (GAGPS), is a mixture of fractions of about 5,000 to 17,000 daltons in terms of molecular weight, with the degree of sulfation being almost uniform regardless of polymer size. This knowledge has led to the elaboration of a process for the isolation of certain fractions with a relatively narrow molecular weight range, thus making it possible to obtain materials with different biochemical and pharmacological properties. One such type is the S-heparin fraction with a molecular weight below 11,000 daltons and a sulfur content of 8 to 14% by weight. A process for the fracoionation of S-heparin resulting in the isolation of said fraction, referred to as heparone (see above), is an object of the present invention.
Svými vlastnostmi patří heparon mezi antiarthrotika, resp. chondroprotektiva, která jsou používána k léčení artrozy kyčelních a koleních kloubů, ďegenerativních onemocnění páteře, bolestivé ztuhlosti kloubů apod. Přesná chemická struktura heparonu není určitelná, nebot GAGPS jsou aniónické heteropolysacharidy, složené z konjugovaných hexuronových kyselin a aminocukrů. Charakteristickými rysy jsou relativně vysoký obsah síry a definované rozpětí molekulové hmotnosti.Its properties include heparone among antiarthrotic agents, resp. chondroprotectives, which are used to treat arthrosis of the hip and knee joints, degenerative diseases of the spine, painful stiffness of the joints, etc. The exact chemical structure of heparone is not determinable since GAGPS are anionic heteropolysaccharides composed of conjugated hexuronic acids and amino sugars. The characteristics are a relatively high sulfur content and a defined molecular weight range.
Při studiu vlastností a biologické účinnosti byl heparon srovnáván s komerčním přípravkem z téže indikační oblasti (IX, Europáischer Kongress fiir Rheumatologie, Wiesbaden, 1979,To study properties and biological efficacy, heparone was compared with a commercial preparation from the same indication area (IX, Europáischer Kongress fi rheumatologie, Wiesbaden, 1979,
Internationales Arzneimittelsymposium ARTEPARON).Internationales Arzneimittelsymposium ARTEPARON).
Antiartrotický a chondroprotektivní účinek GAGPS je výsledkem celé řady jejich nespecifických i specifických interakcí. Příkladem nespecifického působení je ínhibice proteolytických enzymů, které jsou nejvýraznějším faktorem degradace základní hmoty kloubní chrupavky. Jde zejména o kolagenázy a neutrální proteinázy serinového a thiolového typu. Příkladem specifického působení heparonu je kompetitivní ínhibice beta-glukuronidázy, která se podílí na rozkladu polysacharidových řetězců proteoglykanů chrupavky. Specifická složka antiartrotiokého účinku heparonu se projevuje zejména přímím ovlivněním artrotických chondrocytů ve smyslu narušeného metabolismu a zvýšeni biosyntézy kolagenu a proteoglykanů.The antiarthritic and chondroprotective effect of GAGPS is the result of a number of their non-specific and specific interactions. An example of non-specific action is the inhibition of proteolytic enzymes, which are the most prominent factor in the degradation of the articular cartilage matrix. These are, in particular, collagenases and neutral proteinases of the serine and thiol type. An example of the specific action of heparone is the competitive inhibition of beta-glucuronidase, which is involved in the breakdown of polysaccharide chains of cartilage proteoglycans. The specific component of the antiarrotic effect of heparone is manifested mainly by a direct influence of arthritic chondrocytes in terms of disturbed metabolism and an increase in collagen and proteoglycan biosynthesis.
ínhibice hydrolytických enzymů in vitro heparonem ve srovnání s komerčním přípravkem byla s pomocí příslušných substrátů prokázána u kolagenázy, elastázy, katepsinu B 1, papainu, chymotrypsiiju a beta-glukuronidázy. ínhibice všech testovaných proteináz měla u obou látek velmi podobný průběh, přičemž 50 % ínhibice proteolytických enzymů bylo dosaženo při koncentracích 10 ^molárních, které odpovídají hladinám in vivo, jakých je dosahováno v lidské artrotické chrupavce i po nitrosvalové aplikaci komerčního přípravku.Inhibition of hydrolytic enzymes in vitro by heparone compared to a commercial preparation has been demonstrated with the aid of appropriate substrates for collagenase, elastase, cathepsin B1, papain, chymotrypsia and beta-glucuronidase. The inhibition of all proteinases tested was very similar for both substances, with 50% inhibition of proteolytic enzymes at concentrations of 10 µM, which correspond to in vivo levels achieved in human arthritic cartilage even after intramuscular administration of a commercial preparation.
Při studiu vlivu heparonu a komerčního přípravku na metabolismus kolagenu a proteoglykanů lidské osteoartrotioké chrupavky in vitro byly jako radioaktivní prekurzory použityIn vitro studies of the effect of heparone and a commercial preparation on the metabolism of collagen and proteoglycans of human osteoarthritis cartilage were used as radioactive precursors.
33
D-l( C)-glukosamin a L-(5- H)-prolin. V kolagenní frakci byl stanoven hydroxyprolin a izolován 3H-hydroxyprolin. Z frakce proteoglykanové byly izolovány proteoglykany a stanovenD1 (C) -glucosamine and L- (5H) -proline. The hydroxyproline was determined in the collagen fraction and 3 H-hydroxyproline was isolated. Proteoglycans were isolated from the proteoglycan fraction and assayed
3 obsah bílkovin, hexosaminu a zjištována radioaktivita- C-glukosaminu a H-prolinu jako míra inkorporace radioaktivních prekurzorů do bílkovinné a polysacharidové složky proteoglykanů. Ze získaných výsledků vyplynulo, že v přítomnosti obou preparátů se výrazně zvýšila inkorporace radioaktivních prekurzorů do kolagenní a proteoglykanové (bílkovinné i polysacharidové) frakce osteoartrotioké chrupavky o 40 až 100 %. Tento jev byl už popsán a detailně studován řadou autorů (již citováno). Bylo prokázáno, že GAGPS obecně jednak inhibují katabolické procesy chondrocytů v chrupavce a jednak přímo stimuluji biosyntézu proteoglykanů a kolagenu těmito chondrocyty. Celkový účinek se tak projevuje normalizací metabolické aktivity chondrocytů a tento děj je jedním z nejdůležitějších předpokladů antiartrotické a chondroprotektivní účinnosti GAGPS a tedy heparonu in vivo.3, the content of protein, hexosamine and the radioactivity of C-glucosamine and H-proline as a measure of incorporation of radioactive precursors into the protein and polysaccharide components of proteoglycans. The obtained results showed that in the presence of both preparations the incorporation of radioactive precursors into the collagen and proteoglycan (protein and polysaccharide) fraction of osteoarthritis cartilage significantly increased by 40 to 100%. This phenomenon has been described and studied in detail by a number of authors (already cited). In general, GAGPS has been shown to inhibit the catabolic processes of chondrocytes in cartilage and directly stimulate the biosynthesis of proteoglycans and collagen by these chondrocytes. Thus, the overall effect is manifested by normalization of the metabolic activity of chondrocytes, and this is one of the most important prerequisites for the antiarthritic and chondroprotective efficacy of GAGPS and thus of heparin in vivo.
Dále bylo pomocí značeného Tc-heparonu a komerčního přípravku sledováno rozdělení radioaktivity v různých tkáních krys ve 24 hodině po nitrosvalové aplikaci. Významné z terapeutického hlediska je zjištění vysokých koncentrací v kloubní tkáni v blízkém sousedství místa aplikace, přičemž rozdíly mezi oběma přípravky jsou statisticky nevýznamné.Furthermore, the distribution of radioactivity in various rat tissues was monitored by labeled Tc-heparone and a commercial preparation at 24 hours after intramuscular administration. Of great therapeutic significance is the finding of high concentrations in the articular tissue in close proximity to the site of application, the differences between the two products being statistically insignificant.
Podle vynálezu lze tedy heparon charakterizovat jako polysírový ester glykosaminoglykanu (GAGPS), resp. jeho sodnou sůl, obsahující 8 až 14 % hmot. síry, nejvýše 3 % hmot. dusíku, s molekulovou hmotností Mr 7 000 až 11 000, s antikoagulační účinností nejvýše 90 ÍU/mg (vyšší účinnost je nežádoucí z důvodů vedlejších účinků).Thus, according to the invention, heparone can be characterized as a polysulfate ester of glycosaminoglycan (GAGPS), respectively. % sodium salt thereof, containing 8 to 14 wt. % sulfur, not more than 3 wt. nitrogen, having a molecular weight M r of 7,000 to 11,000, with an anticoagulant activity of not more than 90 IU / mg (higher efficacy is undesirable due to side effects).
Vynález se dále týká způsobu výroby polysírového esteru glykosaminoglykanu - heparonu - a jeho sodné soli. Podstata tohoto způsobu spočívá v tom, že se vodný roztok s-heparinu o hmotnostní koncentraci 4 až 5 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 9, při teplotě 10 až 20 °C, sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem, do koncentrace 27 až 32 % obj., po oddělení vyloučené sraženiny 1 frakce se supernatant při teplotě 10 až 20 °C sráží organickým, s vodou mísitelným rozpouštědlem, zejména etanolem, do koncentrace 50 až 60 % obj., vyloučená sraženina 2 frakce se po oddělení a dehydrataci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci 8 až 12 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, jenž se po úpravě pH na hodnotu 9 až 10 při teplotě 70 až 100 °C odbarvuje působením manganistanu sodného v množství 0,5 až 1 í hmot., vztaženo na hmotnost 2 frakce, vyloučená sraženina se oddělí z filtrátu po ochlazení na teplotu 15 až 25 °C přidáním organického s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, nejméně ve dvojnásobném objemovém přebytku, vyloučená 2 frakce se po izolaci rozpustí ve vodě na roztok o hmotnostní koncentraci až 6 %, s přísadou 1 % hmot. chloridu sodného, s hodnotou pH 6 až 10, při teplotě 10 až 20 °C, k němuž se přidá organické, s vodou mísitelné rozpouštědlo, zejména etanol, do koncentrace 27 až 32 % obj., popřípadě vzniklá sraženina se oddělí a spojí s 1 frakcí, načež se ze supernatantu zvýšením koncentrace organického, s vodou mísitelného rozpouštědla, zejména etanolu, na 50 až 60 % obj., vyloučí žádaný produkt heparonu ve formě sraženiny, která se izoluje.The invention further relates to a process for the production of a polysulfuric ester of glycosaminoglycan - heparone - and its sodium salt. The essence of this method is that an aqueous solution of s-heparin having a concentration of 4 to 5% by weight is added, with the addition of 1% by weight. sodium chloride, pH 6 to 9, at 10 to 20 ° C, precipitates with an organic, water-miscible solvent, especially ethanol, to a concentration of 27 to 32 vol%, after separating the precipitate 1 fraction, the supernatant is at a temperature of 10 to 20 20 ° C is precipitated with an organic, water-miscible solvent, in particular ethanol, to a concentration of 50 to 60% by volume, the precipitated 2 fraction, after separation and dehydration, is dissolved in water to a solution of 8 to 12% by weight. . sodium chloride, which, after adjusting the pH to 9-10 at 70-100 [deg.] C., decolorizes with 0.5 to 1% by weight of sodium permanganate, based on the weight of 2 fractions, and the precipitate is separated from the filtrate after cooling to 15 DEG-25 DEG C. by addition of an organic water-miscible solvent, in particular ethanol, in at least twice the volume excess, the 2 fractions separated after isolation are dissolved in water to a concentration of up to 6% by weight with 1% by weight addition. sodium chloride, at a pH of 6 to 10, at a temperature of 10 to 20 ° C, to which an organic water-miscible solvent, in particular ethanol, is added to a concentration of 27 to 32% by volume; The desired heparone product is precipitated from the supernatant by increasing the concentration of the organic water-miscible solvent, especially ethanol, to 50-60% by volume, which is isolated.
Získaná substance sodné soli heparonu, jako definovaná frakce GAGPS, je bílý amorfní prášek, rozpustný ve vodě, nerozpustný v organických rozpouštědlech, netaje, rozkládá se.The obtained heparone sodium substance, as defined by the GAGPS fraction, is a white amorphous powder, soluble in water, insoluble in organic solvents, does not melt, decomposes.
K průkazu totožnosti slouží metachromatická reakce s toluidinovou modři, která je charakteristická pro GAGPS. Obsah dusíku dle Kjeldahla je nejvýše 3 % hmot. v sušině, obsah síry dle Schónigera minimálně 8 Ϊ hmot. v sušině, antikoagulační účinnost nejvýše 90 IU/mg. Molekulová hmotnost, Mr, stanovená gelovou permeační chromatografií je 7 000 až 11 000. K léčebným účelům se heparon aplikuje Injekčně v podobě 5 % vodného roztoku (váhově) a to nitrosvalově nebo nitrokloubně v 15 individuálních dávkách po 1 ml v průběhu 8 týdnů. Léčebné kůry se mohou po 6 měsících opakovat.Metachromatic reaction with toluidine blue, characteristic of GAGPS, is used for identification. The Kjeldahl nitrogen content is not more than 3% by weight. in the dry matter, the sulfur content according to Schóniger at least 8 Ϊ wt. In dry matter, anticoagulant activity not more than 90 IU / mg. The molecular weight, M r , as determined by gel permeation chromatography is 7,000 to 11,000. For therapeutic purposes, heparone is injected as a 5% aqueous solution (by weight) intramuscularly or intramuscularly in 15 individual doses of 1 ml over 8 weeks. The treatment courses can be repeated after 6 months.
Vynález je blíže ilustrován následujícím příkladem provedení, přičemž ovšem není omezen pouze na podmínky v něm uvedené.The invention is illustrated by the following example, but is not limited to the conditions set forth therein.
kg S-heparinu z hovězích plic a 200 g chloridu sodného se za míchání rozpustí ve 20 litrech demineralizované vody a pH vzniklého roztoku se upraví 20% roztokem hydroxidu sodného na pH 8. Za stálého míchání se při teplotě do 20 °C přidává etanol do koncentrace 27 až 30 % obj. V míchání se pokračuje ještě 10 minut a pak se nechá v klidu 24 hodin sedimentovat. Potom se supernatant oddělí a sraženina (1 frakce) se zpracuje na antikoagulačně vysoce účinný přípravek - S-heparin se zvýšenou antikoagulační účinností.kg of bovine S-heparin and 200 g of sodium chloride are dissolved with stirring in 20 liters of demineralized water and the pH of the solution is adjusted to pH 8 with 20% sodium hydroxide solution. Stirring is continued for 10 minutes and then allowed to settle for 24 hours. Then, the supernatant is collected and the precipitate (1 fraction) is processed to an anticoagulant high-potency preparation - S-heparin with increased anticoagulant activity.
K supernatantu po oddělení 1 frakce se za stálého míchání při teplotě do 20 °C přidává etanol do koncentrace 55 až 58 % obj. a po 10 minutách mícháni se odstaví na 48 hodin k sedimentaci. Supernatant je odpad a získaná sraženina 2.frakce se dehydratuje etanolem, filtruje a suší.Ethanol is added to the supernatant after separation of 1 fraction with stirring at a temperature of up to 20 ° C to a concentration of 55 to 58% by volume and after 10 minutes of stirring the mixture is allowed to settle for 48 hours. The supernatant is discarded and the 2nd fraction precipitate obtained is dehydrated with ethanol, filtered and dried.
100 g 2,frakce a 10 g chloridu sodného se rozpustí v 1 litru destilované vody, pH roztoku se uprav! 20% roztokem hydroxidu sodného na 9 až 10, zahřeje se na vodní lázni na 80 °C a přidá se 1 g manganistanu sodného. Roztok se za občasného zamíchání udržuje 30 minut při 80 °C. Vylučuje se voluminezní balastní sraženina hydratovaného oxidu manganičitého, nad kterou se odděluje čirý, prakticky bezbarvý roztok. Filtrací za horka přes asbestovou filtrační vložku se sraženina oddělí a promyje na filtru malým množstvím horkého 1% roztoku chloridu sodného. Filtrát se ochladí pod 20 °C a pomalým litím do pětinásobného objemu etanolu se vysráží produkt jako bílá dobře sedimentující sraženina. Supernatant se odtáhne do odpadu a sraženina se dehydratuje etanolem, filtruje a suší.100 g of 2, fraction and 10 g of sodium chloride are dissolved in 1 liter of distilled water, the pH of the solution is adjusted! 20% sodium hydroxide solution to 9-10, heated to 80 ° C in a water bath and 1 g of sodium permanganate is added. The solution is kept at 80 ° C for 30 minutes with occasional stirring. A volumetric ballast precipitate of hydrated manganese dioxide is precipitated, above which a clear, practically colorless solution separates. The precipitate was collected by hot filtration through an asbestos filter cartridge and washed on the filter with a small amount of hot 1% sodium chloride solution. The filtrate was cooled below 20 ° C and the product precipitated by slow pouring into a 5-fold volume of ethanol as a white, well-settling precipitate. The supernatant is withdrawn and the precipitate is dehydrated with ethanol, filtered and dried.
100 g tohoto produktu se rozpustí ve 2 litrech destilované vody s 20 g chloridu sodného a pH se upraví na 8. Za stálého míchání se přidává etanol až do koncentrace 30 % obj. Pokud se tvoří nějaká sraženina, nechá se 24 hodin sedimentovat, zpracuje dehydratací a sušená se spojí s 1 frakcí. Ze supernatantu se dalším zvýšením koncentrace etanolu až na 60 % obj. vysráží heparonová frakce jako konečný produkt. Po sedimentaci asi 24 hodin se sraženina dehydratuje etanolem, filtruje a na filtru promývá absolutním etanolem, eterem a suší nejprve volně a potom v exsikátoru.100 g of this product are dissolved in 2 liters of distilled water with 20 g of sodium chloride and the pH is adjusted to 8. Under stirring, ethanol is added to a concentration of 30% by volume. If any precipitate is formed, it is left to sediment for 24 hours. and dried combined with 1 fraction. The heparone fraction precipitates from the supernatant by further increasing the ethanol concentration up to 60% by volume. After sedimentation for about 24 hours, the precipitate is dehydrated with ethanol, filtered and washed on the filter with absolute ethanol, ether and dried first freely and then in a desiccator.
Hmotnostní výtěžek konečného produktu, tj. heparonu, je asi 10 až 20 % hmotnosti výchozí substance S-heparinu.The weight yield of the final product, i.e. heparone, is about 10 to 20% by weight of the starting substance S-heparin.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (en) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (en) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS317687A1 CS317687A1 (en) | 1989-02-10 |
| CS265558B1 true CS265558B1 (en) | 1989-10-13 |
Family
ID=5371088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS873176A CS265558B1 (en) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS265558B1 (en) |
-
1987
- 1987-05-05 CS CS873176A patent/CS265558B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS317687A1 (en) | 1989-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5008253A (en) | Sulfoamino derivatives of chondroitin sulfates of dermatan sulfate and of hyaluronic acid and their pharmacological properties | |
| JP3287363B2 (en) | Mixture of low molecular weight polysaccharides and their production and use | |
| US4533549A (en) | Antithrombotic agent | |
| DE69016383T2 (en) | Super sulfated heparins. | |
| US4816446A (en) | Heparin derivatives | |
| DE69838732T2 (en) | HEPARINARY COMPOUNDS, THEIR PREPARATION AND USE FOR THE PREVENTION OF ARTERIAL THROMBOSIS, ASSOCIATED WITH VASCULAR INJURY AND INTERVENTION | |
| CA2100197A1 (en) | Use of polysaccharides in acute peripheral neuropathies | |
| AU599638B2 (en) | Process for preparing high-purity dermatan sulphate, and pharmaceutical compositions which contain it | |
| RU2383554C2 (en) | Esters of hyaluronic acid with rhein, method of preparing said esters and composition containing said esters | |
| US5948405A (en) | Fucans with low molecular weight having anticoagulant, antithrombinic and antithromobic activity | |
| JP4567942B2 (en) | Osteoclast formation inhibitor | |
| KR0184260B1 (en) | Sulfated Glycosaminoglycuronan with Antithrombo Activity | |
| RU2197238C2 (en) | Method of prophylaxis and treatment of osteoarthrosis, agent for its realization and method of preparing agent for osteoarthrosis treatment | |
| RU2132688C1 (en) | Method of preparing biologically active preparations from embryonal tissues | |
| EP0489102A1 (en) | Pharmaceutical compositions containing aromatic polymers and therapeutic methods using the same | |
| CS265558B1 (en) | Polythio ester of glycosaminoglycane or natrium salt thereof and process for preparing them | |
| JPH0273019A (en) | Synthesized drug containing polycyclic aromatic compound | |
| DE69121058T2 (en) | Salts of glycosaminoglycans with amino acid esters, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| CA1329136C (en) | Composition for topical use having hair stimulating, anti-dandruff and anti-seborrhoic activity | |
| RU2739746C9 (en) | Pharmaceutical agent for arthritic diseases treatment | |
| JP4462826B2 (en) | Bone disease treatment | |
| JPH0670085B2 (en) | Chondroitin sulfate derivative | |
| Adam et al. | Effect of cartilage bone-marrow extract on articular cartilage collagen formation | |
| KR20030046810A (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of arthritis containing degraded chondroitin sulfate | |
| WO2013006906A1 (en) | Dermatan sulphate, pharmaceutical compositions and process for producing same |