CS264607B3 - Způsob výroby proteolytického krytu na rány - Google Patents
Způsob výroby proteolytického krytu na rány Download PDFInfo
- Publication number
- CS264607B3 CS264607B3 CS143087A CS143087A CS264607B3 CS 264607 B3 CS264607 B3 CS 264607B3 CS 143087 A CS143087 A CS 143087A CS 143087 A CS143087 A CS 143087A CS 264607 B3 CS264607 B3 CS 264607B3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- proteolytic
- drying
- buffer
- wound cover
- dried
- Prior art date
Links
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 18
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract description 3
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Řešení se týká nového způsobu výroby
proteolytického krytu na rány ve formě
zásypu, sloužícího k zakrytí, ošetřování
a zvláště čištění hnisavých a nekrotických
ran, kterým se podstatně zdokonaluje původní
způsob výroby podle čs. AO č. 249 311.
Místo sušení imibilizovaného enzymu lyofilizací
se zavádí sušení ve vznosu, případně
za zvýšené teploty. Na rozdíl od původního
postupu je možno použít jednodušší aparaturu.
Proces je méně energeticky náročný,
zkracuje výrobní časy a je celkově levnější.
Description
Vynález se týká způsobu výroby proteolytického krytu na rány ve formě zásypu, který slouží k zakrytí, ošetřováni a zvláště vyčištění dlouhodobě hnisajících a nekrotiokýoh ran.
V poslední době se k léčení nekrotických hnisavých ran osvědčuji zásypy na bázi hydrofilních polymerů, zvi. dextranu nebo celulózy v jemně zrnité sférické formě. Jejich účinek zpočátku pouze absorpční, tj. spočíval v odsávání tekuté složky z hnisající rány do inertní porézní hmoty hydrofilního polymeru a do kapilárních mezičástečkových prostorů vrstvy zásypu.
Účinnost krytů se podstatně zvýšila, když jejich absorpční účinek byl doplněn účinkem proteolytickým. Čs. AO 249 311 například popisuje proteolytický kryt připravený z perlové regenerované celulózy, (připravené podle čs. AO 172 640), v níž byl kovalentní vazbou, inobilizován chymotrypsin. Získaný produkt byl vyzkoušen v klinických podmínkách, kde vykazoval nejen proteolytickou aktivitu na nekrotickou tkáň, hnis a fibrin, ale ve shodě s hydrofilností a porézní strukturou celulózové matrice vynikal i vysokou absorpční schopnosti, tj. odsával z rány exsudát obsahující rozštěpené tkáňové nekrosy a bakterie. Kombinací obou principů, proteolytiokého i absorpčního, bylo dosahováno rychlého vyčištění infikovaných nekrotických defektů, vytváření čistých granulaci a rychlého hojení ran.
Ve srovnání se staršími absorbujícími kryty je sice proteolytický kryt významně účinnější, jeho příprava však je složitější a nákladnější. Komplikace se odvozují z přítomnosti aktivního enzymu ve struktuře nového přípravku. I když katalytická účinnost enzymu se obecně odvozuje ze struktury aktivního centra, tj. z určité vzájemné polohy několika sousedních aminokyselinových zbytků v molekule enzymu, je známo, že zcela záleží na konformaci polypeptidového řetězce v celé makromolekule. Aby byl enzym katalyticky aktivní, musí být zachována jeho nativní struktura ve vodném prostředí, tj. nejen jeho struktura primární (sekvence aminokyselin), ale i sekundární, terciární a případně kvarterní (určující nativní konformaci). Při manipulacích s enzymem je třeba se obávat především tepelné denaturace, která může vést k irreversibilním změnám struktury terciární i kvarterní, případně až k úplné destrukci nativní konformace a vzniku neuspořádaných statistických klubek polypeptidových řetězců.
Z těchto důvodů se provádějí veškeré operace s aktivními enzymy za poměrně nízkých teplot a při odseparování enzymu v tuhém stavu se s výhodou používá nejšetrnější známá metoda, tj. mrazová sublimace (lyofilizace). Také při přípravě proteolytického krytu na rány bylo třeba respektovat zvláštnosti enzymatických preparátů, vyvarovat se práce za vysokých teplot a k závěrečnému vysušení produktu doporučit lyofilizaci. Je to sice způsob bezpečný a osvědčený četnými zkušenostmi, výrobu však aparaturně komplikuje, prodlužuje a celkově prodražuje.
Odstranění těchto nedostatků byla věnována soustavná pozornost a po provedení v dalším popisovaných měření bylo s překvapením zjištěno, že je možno se nedostatků dosavadního postupu vyvarovat, pokud se použije nový způsob výroby proteolytického krytu podle předkládané ho vynálezu.
Předmětem vynálezu je způsob výroby proteolytického krytu na rány podle čs. AO 249 311, přičemž se perlová regenerovaná celulóza nabotnalá ve vodě, nikdy nesušená, o velikosti částic 0,07 až 0,4 mm, dokonale zbaví promýváním, případně destilací s vodní parou, toxických nečistot, aktivuje se pro vazbu enzymů, modifikuje imobilizací proteas za skupiny chymotrypsin, trypsin, subtilisin, střídavě se promývá pufrem o pH 8,5 až 9,6 a pufrem o pH 4 až 5 do nulové proteolytické aktivity promývacl kapaliny, vyznačený tím, že polymerní produkt promytý pufrem o pH 7,5 až 8,5 se v tomto prostředí suší na 1 až 15 i zbytkového obsahu vody ve vznosu v proudu vzduchu při 20 až 90 °C po dobu 10 až 150 minut.
Ukázalo se, že sušení ve vznosu je výhodnější než lyofilizace s ohledem na snadnější proveditelnost. Nevyžaduje vakuum (zdroje vakua, dokonale těsnou aparaturu), ani hluboké vychlazení sušeného produktu. Důsledkem těchto rozdílů je menší energetická náročnost procesu i jednodušší, tj. méně nákladná aparatura.
Odstraňování vody z perlového polymerního produktu ve fluidní vrstvě při sušení ve vznosu je účinnější než z nepohyblivé lyofilizované vrstvy. Příznivě se projevuje i vyšší teplota, takže doba sušení ve vznosu je podstatně kratší než v případě lyofilizaoe. Zatímco se v posledně jmenovaném případě pohybovala mezi 48 až 70 hodinami, podařilo se produkt vysušit do žádaného stupně za teploty místnosti za 2 hodiny a za teplot od 50 °C již za 20 minut.
Překvapující je možnost sušení za poměrné vysokých teplot při dokonalém zachování aktivity imobilizovaného enzymu. V odborné literatuře se sice uvádějí případy zvýšení stálosti aktivity enzymů jejich imobilizací na polymerní nosič, námi pozorovanou možnost krátkodobého vystavení teplotám 70 až 90 °C je však možno pokládat za mimořádnou. Poznaný jev je možno vysvětlovat velmi dobrou stabilizací proteasy v porézním celulózovém nosiči, pravděpodobně vzhledem k jeho biopolymerní struktuře a k dokonalé kovalentní imobilizací, jíž se v čs. AO 249 311 věnuje zvláštní pozornost.
Významným technickým účinkem nového způsobu výroby je podstatné zdokonalení přípravy proteolytiokého krytu na rány. Nový způsob poskytuje přípravek na léčení nekrotických hnisajících ran o stejné účinnosti jako původní postup podle čs. AO 249 311. Na rozdíl od původního způsobu však vyžaduje jednodušší, méně nákladnou aparuturu, je energeticky méně náročný a zkracuje výrobní časy, takže je levnější.
V dalším je nový způsob výroby blíže objasněn ne však omezen, příklady provedení.
V provedených pokusech byla věnována především pozornost porovnávání lyofilizace se sušením ve vznosu.
Sušení lyofilizaci bylo prováděno na třech různých aparaturách. První z nich (A) byla laboratorního typu, k sušení se navazovalo ca 100 g, vzorek byl namražen na -40 °C a v průběhu sušení se samovolným oteplováním ohříval až na teplotu místnosti. Druhá aparatura (B) byla provozního typu (typové označ. KS-30, chladicí agregát HZ 12/50). Pracovní režim sestával z podchlazení na -40 °C (2 hodiny) a sušení při 25 °C (48 hodin). Také třetí aparatura byla provozního typu (C) LZ 45 Prigera). Sušený produkt byl nejprve namražen na -40 °C a při vlastní operaci zahříván na 25 °C (celkem 70 hodin).
Sušení ve vznosu se provádělo na zařízeních typu Uniglatt (D, E, F), obvykle používaných ve farmaceutické výrobě. Aparatura (D) byla poloprovozní a byla plněna 100 až 1 000 g sušeného produktu. Aparatury (E, F) byly provozního typu a plněny 2 až 5 kg sušeného polymerního produktu.
Experimentální podmínky použité v jednotlivých příkladech a získané výsledky měření jsou uvedeny v tabulkách 1 a 2.
Tabulka 1
Porovnání sušení lyofilizaci a ve vznosu
| Příklad Čís. | šarže čís. | Typ a sušení | Aparatura^ | Vlhkost prod., % | Botnavostc g H^O/g suš. | Enzymat. ‘ aktivita |
| 1 | 28 | L | A | 7,3 | 2,0 | 1,6 |
| 2 | 29 | L | B | 11,4 | 2,1 | 1,8 |
| 3 | X | L | C | 12,2 | 1,4 | 1,3 |
| 4 | 29 | V | D | 8,9 | 2,4 | 1,8 |
| 5 | X | V | D | 13,5 | 1,5 ' | 1,8 |
| 6 | X | V | D | 14,5 | 1,4 | 1,5 |
| 7 | 29 | V | E | - | 1,7 | 1,8 |
Tabulka pokračování
| Příklad | Šarže | Typ a | Aparatura13 | Vlhkost | Botnavost0 | Enzymat. |
| čís. | čís. | sušení | prod., % | g H2O/g suš. | aktivita |
V F
V F
5,7 1,8 1 ,-2
9,9 2,1 1,6 asušení lyofilizací (L) a ve vznosu (V) ^viz popis použitých aparatur v textu cobsah vody v produktu po kontaktu s přebytečnou vodou a odstředění ^udána jako přírůstek absorbance při 280 nm za 1 min. na 1 g produktu na hemoglobin jako substrát (M. L. Ansen, Gen, Physiol. 22, 79, 1939).
Všechny pokusy ve vznosu byly provedeny za teploty místnosti, pouze příklad 6 při 40 °C. Doba lyofilizace byla průměrně 3 dny, sušení ve vznosu 120 minut.
Tabulka 2
Sušení ve vznosu za různých teplot
| Příklad čís. | Teplota °C | Botnavost g H2O/g suš. | Enzymat. aktivita |
| 10 | 25 | 1,6 | . 1,8 |
| 11 | 35 | 1,6 | 1,8 |
| 12 | 40. | 1,6 | 1,8 |
| 13 | 50 | 1,6 | 1,7 |
| 14 | 60 | 1,8' | 1,7 |
| 15 | 70 | 1,7 | 1,7 |
Vysvětlivky viz tab. 1. - Pokusné podmínky: šarže 29, aparatura D, měřena teplota vstupuji čího vzduchu. Doba sušení pro teploty 25 až 40 °C byla 120 minut, pro teploty od 50 °C 20 minut.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNALEZUZpůsob výroby proteolytického krytu na rány podle čs. AO 249 311, přičemž se perlová regenerovaná celulóza nabotnalá ve vodě, nikdy nesušená, o velikosti částic 0,07 až 0,4 mm dokonale zbaví promýváním, případně destilací s vodní parou, toxických nečistot, aktivuje se pro vazbu enzymů, modifikuje imobilizací proteas' ze skupiny chymotrypsin, trypsin, subtilisin, střídavě se promývá pufrem o pH 8,5 až 9,5 a pufrem o pH 4 až 5 do nulové proteolytické aktivity promývací kapaliny, vyznačený tím, že polymerní produkt promytý pufrem o pH 7,5 až 8,5 se v tomto prostředí suší na 1 až 15 % zbytkového obsahu vody, ve vznosu v proudu vzduchu při 20 až 90 °C po dobu 10 až 150 minut.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS143087A CS264607B3 (cs) | 1983-09-29 | 1987-03-04 | Způsob výroby proteolytického krytu na rány |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS713883A CS249311B1 (en) | 1983-09-29 | 1983-09-29 | Proteolytic wound dressing |
| CS143087A CS264607B3 (cs) | 1983-09-29 | 1987-03-04 | Způsob výroby proteolytického krytu na rány |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS143087A1 CS143087A1 (en) | 1988-11-15 |
| CS264607B3 true CS264607B3 (cs) | 1989-08-14 |
Family
ID=25745426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS143087A CS264607B3 (cs) | 1983-09-29 | 1987-03-04 | Způsob výroby proteolytického krytu na rány |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS264607B3 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS271434B1 (en) * | 1988-07-28 | 1990-09-12 | Karel Jindra | Spinning unit for spindleless spinning frame |
-
1987
- 1987-03-04 CS CS143087A patent/CS264607B3/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS143087A1 (en) | 1988-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4613502A (en) | Proteolytic, dry biopolymeric composition for treatment of wounds, and method of using same | |
| RU2143924C1 (ru) | Способы использования фибринового герметика, способ получения состава, составы, наборы | |
| US4464468A (en) | Immobilization of active protein by cross-linking to inactive protein | |
| US4004979A (en) | Preparation of active proteins cross-linked to inactive proteins | |
| AU719834B2 (en) | Stable avidin composition and methods using same | |
| US4970156A (en) | Immobilization of active protein by cross-linking to inactive protein | |
| JP2992143B2 (ja) | 海綿状コラーゲンの製造方法 | |
| EP2809365A1 (en) | Haemostatic wound dressing | |
| CN110003518B (zh) | 一种活性丝素蛋白多孔材料或活性丝素蛋白膜及其制备方法 | |
| CA1217134A (en) | Proteolytic cover of wounds | |
| Glyantsev et al. | Crab collagenase in wound debridement | |
| CS264607B3 (cs) | Způsob výroby proteolytického krytu na rány | |
| CN110066418B (zh) | 一种活性丝素多孔材料或活性丝素膜及其制备方法 | |
| GB2164052A (en) | Polymeric material having an enzymatic action, its process of preparation and a medicament containing it | |
| JPS5946594B2 (ja) | 固定化生物活性物質及びその製造方法 | |
| RU2357753C1 (ru) | Материал, обладающий биологической активностью, способ его получения и терапевтическое средство на его основе | |
| CN110041557B (zh) | 一种功能丝素多孔材料或功能丝素膜及其制备方法 | |
| CN113925997B (zh) | 一种含止血微胶囊的明胶海绵及其制备方法 | |
| RU2323748C2 (ru) | Медицинская повязка, содержащая комплекс ферментов из гепатопанкреаса краба, и способ ее получения | |
| JPS60156468A (ja) | 蛋白質分解性創傷被覆物 | |
| AU4558700A (en) | Method for producing a polyurethane matrix with covalently immobilised biomolecules | |
| PITRÁK | Academy of Sciences, 162 06 Prague 6, Czechoslovakia | |
| Šťovíčková et al. | A comparison of the drying of chymotrypsin bound to bead cellulose by lyophilisation and in air at 25 to 70° C | |
| WO1996015236A1 (en) | Bioactive conjugates of polyhydroxy-polymers with amines | |
| WO1996015236A9 (en) | Bioactive conjugates of polyhydroxy-polymers with amines |