CS245160B1 - Proteolytický kryt na rány - Google Patents

Abstract

Řešení se týká proteolytického krytu na rány na dextranové bázi, ve formě zásypu, sloužícího k zakryti a ošetřování hnisavých a nekrotických ran. Podle řešení kryt sestává ze sítšného dextranu, bobtnajícího na obsah vody v odstředěném stavu 2 až 10 g HoO/g sušiny, ve sférické formě o velikosti jednotlivých částic 0,05 až 0,5 mm, obsahujícího imobilizovanou proteasu, například chymotrypsin, trypsin, papain nebo subtilisin. Dextranový nosič obsahuje jen kovalentně vázanou proteasu, nevýmývajíoí se do rány. Proteasy imobilizované zeaítěným dextranem čistí rány rozpouštěním nežádoucích proteinových látek, zvláště fibrinu, nekrotoxických tkání, komponent hnisu aj. Nový proteolytický kryt kromě tohoto působí i svou vysokou absorpční schopností, tj. odsává exsudát a hnis infikovaný bakteriemi z rány do kapilárních prostorů mezi částěčkami a zvláště do vlastní hmoty vysoce porézních částic. Proteolytický kryt podle vynálesu působí rychlým vyčištěním nekrotických defektů, urychluje tvorbu granulaoí a zhojeni rány. Možnosti využití vynálezu jsou ve farmaceutické výrobě.

Description

(54) Proteolytický kryt na rány

Řešení se týká proteolytického krytu na rány na dextranové bázi, ve formě zásypu, sloužícího k zakryti a ošetřování hnisavých a nekrotických ran. Podle řešení kryt sestává ze sítšného dextranu, bobtnajícího na obsah vody v odstředěném stavu 2 až 10 g HoO/g sušiny, ve sférické formě o velikosti jednotlivých částic 0,05 až 0,5 mm, obsahujícího imobilizovanou proteasu, například chymotrypsin, trypsin, papain nebo subtilisin. Dextranový nosič obsahuje jen kovalentně vázanou proteasu, nevýmývajíoí se do rány. Proteasy imobilizované zeaítěným dextranem čistí rány rozpouštěním nežádoucích proteinových látek, zvláště fibrinu, nekrotoxických tkání, komponent hnisu aj. Nový proteolytický kryt kromě tohoto působí i svou vysokou absorpční schopností, tj. odsává exsudát a hnis infikovaný bakteriemi z rány do kapilárních prostorů mezi částěčkami a zvláště do vlastní hmoty vysoce porézních částic. Proteolytický kryt podle vynálesu působí rychlým vyčištěním nekrotických defektů, urychluje tvorbu granulaoí a zhojeni rány.

Možnosti využití vynálezu jsou ve farmaceutické výrobě.

Vynález ae týká proteolytického krytu na rány ve formě volně tekoucího pudru, který se používá k zakrytí a léčení hnisavých a nekrotických ran.

V dosavadní farmaceutické praxi ae k podobným účelům doporučují zásypy, často dvojsložkového typu, u nichž za základ slouží například škrob nebo talek a kde je účinnou látkou bakteriostaticky nebo baktericidně působící přísada jako antibiotikum, antimykotikum nebo vhodný sulfonamid.

Další vývoj poknačoval od těchto klasických přípravků k zásypům nového typu na bázi hydrofilních biopolymerů. Jejich předností je nerozpustnost ve vodě, zamezující kontaminaci rány cizími složkami. Biopolymerní hydrofilní nerozpustné zásypy jsou organismem dobře tolerovány, nebo? nemají vedlejší účinky. Jejich působení spočívá v interakci mezi pevnou a kapalnou fází, tj, mezi částicemi zásypu a kapalnou komponentou poraněného míata. (Interakce je omezena na oblast kontaktu a nepřenáší se na jiná místa v organismu. Podle typu interakce je možno rozlišit dva druhy biopolymerních krytů na rány, adsorpční a proteolytický.

Prvý z nich působí fýzlkálně, druhý chemicky.

Adsorpční kryt odsává z rány vodnou složku, zvláště exsudát, a s ním i bakterie, látky způsobující zánětlivé pochody a toxiny. Proteolytický kryt s kovalentně vázanými protesami působí enzymatickou hydrolýzou proteinových složek hnisající rány.

Jeho účinek se projevuje hydrolytickým rozkladem a rozpouštěním nekrotických tkání a hnisu, čímž se odstraňuje prostředí podporující růst bakterií a omezuje se nasávání toxických produktů z rány do zdravého organismu.

Účinným adsorpčním krytem je například sférický zesítěný dextran, který je komerčně dostupný pod označením Debrisan viz Β. Ξ. Jacobason a spol., Scand J. Plast. Recoňstr. Surg. 10, 65 (1976).

Proteolytický kryt na bázi sférické celulózy a kovalentně vézanými proteasami, vysušený lyofilizaoí a jeho použití v lékařské praxi popsala J. Turková a kol. v čs.

AO 249311.

Oba typy biopolymerních krytů mají své výhody proti dosud používaným klasickým zásypům, ale také svá omezení. Zmíněný dextranový adsorpční kryt působí jen fyzikálně, tj. odsáváním vody a vodných roztoků, případně do porézní hmoty částic a do mezičástečkových, tj. intersticiélníoh proatorů zásypové vrstvy. Je však velmi žádoucí, aby současně odsával kapalné složky z rány, tj. aby vykazoval i účinek adsorpční, resp. sorpční To je však možno dosáhnout jen tehdy, provedou-li se speciální opatření při přípravě celulozového nosiče a vlastního krytu, která jsou často komplikovaná a nákladná.

Celuloza-má přirozený sklon ke krystalizací při sušení a ke tvorbě nízko porézních struktur. Pokud se mají získat kryty s vysokou adsorpční schopností, vysokou porezitou, je třeba používat speciálních sušících postupů ve všech fázích přípravy.

Dosavadní nedostatky hydrofilních biopolymerních nerozpustných krytů odstraňuje proteolytický kry# podle vynálezu

Předmětem vynálezu je proteolytický kryt na rány jehož podstata spočívá v tom, že sestává ze sférických čéstic o průměru 0,05 až 0,5 mm, přednostně 0,1 až 0,3 mm ba bázi derivatizovaného zesítěného dextranu s imobilizovanými enzymy typu proteas.

Výrazným rysem nového proteolytického krytu je použití zesítěného dextranu jako biopolymerní báze pro imobilizace proteas. Zesítěný dextran na rozdíl od celulózy vykazuje vysokou porozitu bez nutnosti speciálních opatření.

Porézní strukturu dextranového nosiče je možno v Širokém rozmezí regulovat podle , stupně zesítění výchozího polymeru. Při sušení zesítěného dextranu nabobtnalého ve vodě se porozita neztrácí v případě celulózy a i při běžném způsobu sušení se mohou získat produkty, které znovu nabobtnají ve vodě na vysokou hodnotu obsahu vody. Proteolytické kryty na rány na bázi dextranu podle vynálezu mají vysokou adsorpění schopnost, aniž by bylo třeba používat speciální opatření.

K přípravě proteolytického krytu nového typu se používají sférické zesítěné dextrany o velikosti částic 0,05 až 0,5 mm, které botnají ve vodě na obsah 2 až 10 g vody/g sušiny. Obsah vody se rozumí v nabotnalé hmotě částic po odstředění na skleněné fritě.

Těmto požadavkům vyhovuje komerční produkt Debrisan a odpovídající chromatografické materiály zn. Sephadex, resp. jim odpovídající materiály jiného původu.

Porézní zesítěné dextrany mají dobrou chemickou reaktivitu pro vazbu enzymů a k imobilizaci proteas je možno použít známých případně modifikovaných postupů viz například Handbook of Enzyme Biotechnology. Alan Wieseman, Editory, E. Horwood,

London 1975. Je třeba volit takové postupy, které poskytují produkty s pevně vázanými enzymy, neuvolnujícími se v průběhu používání. K sušení produktu se s výhodou použije lyofilizace.

Způsob použití nového proteolytického krytu v lékařské praxi je podobný, jako bylo již popsáno v čs. AO 24931 1.

V dalším je objasněn způsob výroby krytu podle vynálezu, ne však omezen, příklady provedení.

Příklad 1

Příprava krytu s vázaným chymotrypsinem

Jako nosič byl použit zesítěný dextran výrobního označeni Sephadex G-100 a k aktivaci 2-amino-4,6-dichloro-s-triazin.

Zesítěný dextran byl nabotnán ve vodě a do reakce použit v množství odpovídající 7,5 g sušiny. Aktivační činidlo bylo při 50 °C rozpuštěno v 750 ml acetonu a při téže teplotě byl přidán k roztoku stejný objem vody. Zesítěný dextran byl s 300 ml aktivačního roztoku promícháván 5 minut při 50 °C. Byl připraven roztok smícháním roztoku 15 g uhličitanu sodného ve 100 ml vody s 0,6 objemem 1 M kyseliny HC1, a v množství 120 ml s teplotou 50 °C přidán do aktivační směsi, která byla při 50 °C promíchávána dalších 5 minut. Přídavkem koncentrované kyseliny solné HC1 bylo pH aktivní směsi náhle sníženou pod 7, aktivovaný produkt odfiltrován, promyt 50% vodným roztokem acetonu, vodou a uchován v 0,1 M fosfátovém pufru při 2 °C a při pH 6,6.

Chymotripsin byl navázán na aktivovaný nosič z 1,5% roztoku v 0,2 M borátovém pufru o pH 8,75 při 24 °C. Po 12 hodinách bylo imobilizováno 195 mg enzymu/g nosiče.

Zesítěný dextran s navázaným chymotrypsinem byl střídavě promýván 0,1 M borátovým pufrem, obsahujícím 1 M chloridu sodného NaCl, o pH 9, a 0,1 M acetátovým pufrem, obsahujícím 1 M chloridu sodného NaCl, o pH 4,5, až do nulové proteolytické aktivity eluátu. Nakonec byl vzorek promyt 0,25 M borátovým pufrem o pH 8 a lyofilizován.

Příklad 2

Příprava krytu s vázaným trypsinem

Jako nosič byl použit zesítěný dextran, výrobní označení Sephadex G 50, aktivovaný uvedením isothiokyanátových skupin.

g zesltěného dextranu bylo promícháváno se 4 g 4-nitrofenylglycidyleteru ve 20 ml toluenu a bylo přidáno 80 ml roztoku hydroxidu sodného. Suspenze byla zahřívána 18 hodin na 70 °C. Po promytl byl nosič nabotnán ve 100 ml, přidáno 40 ml 5 M hydroxidu sodného NaOH a 3 g dithioničitanu sodného a reakční směs udržována 1 hodinu při 65 °C. Produkt byl promyt, nabotnán v 3,5 M fosfátovém pufru o pH 6,8, zreagován s 10% roztokem thiofosgenu v chloridu uhličitém, promyt a vysuSen.

Trypsin byl vázán na aktivovaný nosič z 1,8% roztoku v 0,05 M borátovém pufru o pH 8,6 v dusíkové atmosféře při 5 °C. Po 15 hodinách bylo imobilizovéno 200 g enzymu/g nosiče.

Produkt byl podobně jako v přikladu 1 promýván střídáním pufrů do nulové proteolytické aktivity,eluátu, nasycen stejným borátovým pufrem a lyofilizován.

Přiklad 3

Příprava krytu s vázaným papainem

Jako nosič byl použit zesítěný dextran, výrobní označeni Debrisan, aktivovaný uvedením imidokarbonátových skupin.

g zesltěného dextranu bylo ponecháno v kontaktu se 40 ml bromkyanu při 24 °G a pH po dobu 6 minut. Poté byl produkt promýván 500 ml chladného roztoku 0,1 M kyselého uhličitanu sodného NaHCOj 7 minut, vodou a 0,1 M fosfátovým pufrem o, pH 7,6.

Papain byl vázán na aktivovaný nosič z 0,1 M fosfátového pufru o pH 7,6 za teploty místnosti během 16 hodin.

Produkt byl nakonec upraven podobným způsobem jako v přikladu 1, tj. dokonale vymyt střídáním pufrů, aby eluát nevykazoval proteolytiokou aktivitu, a vysušen lyofilizaoi.

Claims (1)

1. pSedmSt vynálezu

   Proteolytický kryt na rány vyznačený tlm, že sestává ze sférických částic o průměru 0,05 až 0,5 mm, na bázi derivatizovaného zesltěného dextranu s imobilizovanými enzymy typu proteas.

   Severografia, n. p., MOST

   Cena 2,40 Kčs