CS261056B1 - Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806 - Google Patents

Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806 Download PDF

Info

Publication number
CS261056B1
CS261056B1 CS866455A CS645586A CS261056B1 CS 261056 B1 CS261056 B1 CS 261056B1 CS 866455 A CS866455 A CS 866455A CS 645586 A CS645586 A CS 645586A CS 261056 B1 CS261056 B1 CS 261056B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
strain
trichoderma reesei
glucose
days
cellulose
Prior art date
Application number
CS866455A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Other versions
CS645586A1 (en
Inventor
Ivica Labudova
Vladimir Farkas
Original Assignee
Ivica Labudova
Vladimir Farkas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ivica Labudova, Vladimir Farkas filed Critical Ivica Labudova
Priority to CS866455A priority Critical patent/CS261056B1/cs
Publication of CS645586A1 publication Critical patent/CS645586A1/cs
Publication of CS261056B1 publication Critical patent/CS261056B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

2 íi 1 O 5 6 3
Vynález sa týká nového kmeňa imper-fektnej mikroskopickej huby Trichodermaréesei CCII produkujúceho při submerznejkultivácii zvýšené množstva celulolytickýchenzýmov, pričom produkcia celuláz je čias-točne rezistentná voči katabolickej represiil'ahko utilizovatělnými cukrami.
Mikroskopické vláknité huby rodu Tri-choderma sú dobrými producentami celulo-lytických enzýmov {celuláz], ak sa ako sub-strát i ako induktor používá prášková celu-lóza, alebo rožne celulózu obsahujúce lát-ky. Maximálně dosahované celulázové akti-vity s celulázou ako substrátom sa pohybu-jú pri vsádkovej kultivácii od 70 do 200nkat/ml FPA {A. W. Khan, K. A. Lamb, Bio-technol. Lett. 6, 633 (1984); T. G. Watson,I. Nelligan, 5, 25 (1983); H. Matanič et ál.Prehramb. Technol. Rev. 18, 3 (1980)]. Ne-výhodou použitia celulózy a iných vodone-rozpustných celulózových substrátov všakje, že produkčně mikroorganizmy v takých-to médiách rastů a produkujú celulózy po-měrně pomaly — jeden produkčný cykluspři’ vsádkovej submerznej kultivácii trvá 10až 14 dní. Ďalšou nevýhodou použitia neroz-pustných substrátov je, že svojou prítom-nosťou zvyšujú viskozitu živného média, čozvyšuje požiadavky na energiu potřebná namiešanie a zhoršuje transfer kyslíka v kul-tivačnej zmesi. Okrem toho, použitie neroz-pustných celulózových substrátov kompli-kuje spósob ich dávkovania v priebehu kon-tinuálnej, resp. fed-batch kultivácie. Použi-tie rozpustných zdrojov uhlíka—glukózy,resp. oligosacharidov, tieto problémy siceodstraňuje, avšak v důsledku katabolickejrepresie je produkcia celuláz silné potlače-ná. Hladajú sa preto také kmene producen-tov, v ktorých je mutáciami odstránená ka-tabolická represia tvorby celuláz. Miera od-stránenia katabolickej represie je určenámaximálnou koncentráciou cukru (glukózy,laktózy a pod.), při ktorej je huba ešteschopná celulázy produkovať.
Uvedené nedostatky odstraňuje přihlašo-vaný vynález, ktorým je nový kmeň Tricho-derma reesei, mutant CCII, uložený v Čs.zbierke mikroorganizmov Univerzity J. E.Purkyně v Brně, Třída Obránců míru 10pod označením CCM F-806. Nový kmeň vy-kazuje zvýšená produktivitu celuláz a mámutáciou čiastočne odstránená katabolickárepresiu tvorby celuláz pri raste na l'ahkoutilizovatelných sacharidických substrátoch.
Uvedený nový kmeň sa získal známýmpostupom, kombinovanou fyzikálnou a che-mickou mutagenázou spojenou s dvojstup-ňovým obohacováním mutagenizovanýchspor podl'a I. Labudovej a V. Farkaša FEMSMicrobiol. Lett. 20, 211 (1983) z východzie-ho kmeňa Trichoderma reesei CCM F-560.
Hlavnou výhodou nového kmeňa oprotipůvodnému kmeňu je zhruba 8x zvýšenátvorba celuláz pri kultivácii na l-% celu-lóze ako substráte, kde sa dosahuje v závis-losti na podmienkach kultivácie aktivita FPA 50 až 180 nkat/ml na 5. deň kultivácie.Ďalšou výhodou nového kmeňa je čiastočneodstránená katabolická represia tvorby ce-luláz, čo sa prejavuje jeho schopnosťou pro-dukovat celulázy aj v přítomnosti 0,05 %glukózy, resp. 0,2 °/o laktózy v médiu, zatial'čo póvodný kmeň T. reesei F-560 pri týchtopodmienkach neprodukuje žiadnu celulázu. Příklad 1
Popis nového kmeňa
Morfológia: pri raste na agarovom glukó-zovom médiu mycélium vláknité, hutso vět-vené, zriedkavo septované. Priemer hýf 3,5až 5 μΐη. Konídiónosiče kratšie a rozvětve-né, fialídy zvyčajne jednotlivé, alebo proti-stojace. Konídie hojné, spočiatku biele, po-tom žité v stave zrelosti zelené až zeleno-hnedo pigmentované,, eliptickoovoidné, prie-mer 2 až 3 /tm. Prf submerznej kultiváciipri dobrom prevzdušňovaní a v médiu chu-dobnou na uhlík a dusík dochádza ku ko-nidiácii. Pri kultivácii na povrchu tuhýchpod je konidiácia stimulovaná svetlom. Prisubmerznej kultivácii niekedy vznikajá sfé-rické chlamydospóry o priemere 8 až 10 μΐη.Pri kultivácii na glukóze, resp. fruktóze vy-lučuje do média žitý pigment. Oproti po-vodnému kmeňu sa morfologicky líši váčšouhustotou vetvenia mycélia a o 50 až 100 °/ovačšou hrubkou hýf.
Mikroorganizmus rastie na celom raděcukorných substrátov: celulóze, xylane, D--glukóze, D-galaktóze, D-manóze, D-fruktóze,D-xylóze, L-arabinóze, D-ribóze, celobióze,trehalóze, škrobe, laminaríne, maltóze, D--glycerole, etanole. Slabo rastie na: sacha-róze, rafinóze, acetáte, laktáte, tartaráte,malonáte, inulíne a chitíne. Optimálna tep-lota rastu je 28 až 32 °C, optimálně pH 3až 5, nerastie pri 50 °C. Příklad 2 Příprava nového kmeňa
Konídie Trichoderma reesei OM 6a sa sus-pendujá v koncentrácii 108/ml v 10 ml ň-stojného roztoku 0,05 mól/1 Tris(hydroxy-metyl)amínometán — kyselina chlorovodí-ková (Tris-HCl) pH 9,6, obsahujáceho 0,02proč. polyoxyetylénsorbitanu kyseliny tri-steárovej (Tween 80) a 0,05 % N-metyl-N‘--nitro-N-nitrózoguanidínu a suspenzia saožaruje na Petriho miske pod 40 W UV--lampou zo vzdialenosti 20 cm počas 5 min.Po skončení ožarovania sa suspenzia inku-buje 6 hodin pri 37 CC a konídie sa potomzaočkujá do 40 ml minimálneho média ob-sahujáceho v 1 litri vody 5 g síranu amon-ného, 1 g dihydrogénfosforečnanu drasel-ného, 0,5 g síranu horečnatého heptahydrá-tu, zmes vitamínov podl'a L. J. Wickerehama[U.S. Dept. Agric. Bul. No. 1029, 56 (1951)],

Claims (1)

  1. 261056 S okrem toho, do média sa přidá 2 % celo-biózy a 0,5 % 2-deoxy-D-glukózy. Zmes sainkubuje na rotačnej trepačke při 30 °Cpočas 4 až 5 dní, pokial' sa neobjevia prvéklíčiace konídie. Tieto sa potom odseparujúod nevyklíčených spor filtráciou cez skle-nenú fritu S 1 a vysejú sa na sporulačnýagar obsahujúci minimálně médium plus2 % glukózy a nechajú sa rásť na svetlepri izbovej teplote počas 5 dní. Vytvořenékonídie sa zmyjú z povrchu agaru steril-nou vodou a zaočkujú sa do minimálnehomédia obsahujúceho 0,5 % Na-karboxyme-tylcelulózu a 0,5 % 2-deoxy-D-glukózu ainkubujú sa niekoíko dní pri 30 °C na tre-pačke. Vyklíčené konídie sa odseparujúfiltráciou cez fritu S 1 a vysejú sa na de-tekčný agar obsahujúci minimálně médiumplus 0,5 až 1 % amorfnú celulózu, 5 %hmotnostných fruktózy, resp. glukózy, aleboglycerolu a 50 /zg/ml dvojsodnej soli tetra-jodotetrachlóro-f luoresceínu (bengálskej červenej. Misky so selekčným agarom sainkubujú 2 dni pri 30 °C a 1 deň pri 50 °C.Izolujú sa kolonie, ktoré na selekčnom aga-re vytvárajú okolo seba číře zóny. Vyizolo-vané kolonie sa prečisťujú opakovanou ko-nidiáciou a pasážovaním a jednotlivé klony 6 sa testujú na schopnost produkovat celulo-lytické enzymy v přítomnosti celulózy a lak-tózy ako substrátov. Příklad 3 Médium obsahujúce v 1 1 20 g laktózy,1,5 g dihydrogénfosforečnanu draselného,5 g síranu amonného, 0,3 g síranu horečna-tého, 0,2 g chloridu vápenatého a 2,5 gkvasničného autolyzátu vo vodě, sa zaočkuje105 konídiami/ml Trichoderma reesei CCIIa kultivuje sa pri pH 4,0 až 5,0 vo fermen-tačnom tanku pri teplote 30 °C, miešaní 6 Hza prevzdušňovaní. 1 objem (objem) min podobu 5 až 7 dní, V priebehu fermentáciesa získá v médiu celulózová aktivita FPA60 až 80 nkatalov/ml, stanovená podl'a do-poručení IUPAC (Measurement of cellulaseactivities, Commision on Biotechnology,IUPAC. New Delhi, 1985). Kmen Trichoderma reesei F-806 sa móževyužit pri priemyslovej produkcii celuláz naroznych sacharidických substrátoch, s vý-hodou na substrátoch obsahujúcich fahkoutilizovatelné sacharidy. PREDMET VYNALEZU Kmeň mikroorganizmu Trichoderma reesei F-806 s čiastočne katabolicky derepri-movanou produkciou celuláz.
CS866455A 1986-09-05 1986-09-05 Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806 CS261056B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS866455A CS261056B1 (en) 1986-09-05 1986-09-05 Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS866455A CS261056B1 (en) 1986-09-05 1986-09-05 Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS645586A1 CS645586A1 (en) 1988-06-15
CS261056B1 true CS261056B1 (en) 1989-01-12

Family

ID=5411624

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS866455A CS261056B1 (en) 1986-09-05 1986-09-05 Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS261056B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS645586A1 (en) 1988-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chen et al. Production of β-fructofuranosidase by Aspergillus japonicus
US11279961B2 (en) Aspergillus oryzae BLCY-006 strain and application thereof in preparation of galactooligosaccharide
EP4029931A1 (en) Alginate lyase-producing genetic engineered strain and fermentation method thereof
CN104328056A (zh) 一株高产纤维素酶的里氏木霉及其应用
CN102899256A (zh) 一种产果糖基转移酶的菌株及其制备方法
EP0133035B1 (en) Process for the preparation of cellulase
CN104130950A (zh) 一株黑曲霉及其培养方法与应用
RU2001949C1 (ru) Штамм гриба TRICHODERMA REESEI - продуцент целлюлолитических ферментов
US10053680B2 (en) Strain and a method to produce cellulase and its use
RU2195490C2 (ru) Штамм мицелиального гриба trichoderma longibrachiatum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы
CN113502282A (zh) 一株青霉固态发酵产果胶酶制剂的方法
CN104805029B (zh) 一种微生态肥的制备方法
CN106148243A (zh) 一株产β‑呋喃果糖苷酶节杆菌及其应用
CS261056B1 (en) Strain of microorganism trichoderma reesei ccm-f-806
CN107641602A (zh) 一株产朊假丝酵母及其在发酵产蛋白中的应用
CN100390295C (zh) 一种微生物多糖及其生产方法和应用
CN116121080B (zh) 一种棘孢曲霉及其在单宁酶和没食子酸生产中的应用
RU2287571C2 (ru) Штамм мицелиального гриба trichoderma longibrachiatum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, маннаназы и пектиназы
KR100442574B1 (ko) Rna 함량이 증대된 신규한 고핵산 효모 변이주 및 그 대량 제조방법
SU933704A1 (ru) Штамм плесневого гриба aSpeRGILLUS oRyZae-3-продуцент @ -амилазы
RU2287570C2 (ru) Штамм мицелиального гриба penicillium funiculosum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы
Thonart et al. Improvement of inulin hydrolysis yeast cell reactor by mutants selection
KR100355619B1 (ko) 바실러스 서브틸리스 ek11 균주 및 이로부터프로토펙티나아제 제조방법
CN109234194B (zh) 一种多拉菌素产生菌及其应用
KR100424846B1 (ko) 5'-이노신산 생산 미생물 및 그 생산방법