CS257830B1 - Spósob prlpravy imobilizovanej exopolygalakturonázy - Google Patents

Description

257830 2

Vynález sa týká spósobu přípravy imobil.izovaného pektolytického enzymu exopolygalaktu-ronázy , ktorá specificky katalyzuje postupné stiepenie koncových alfa-1, 4-glykozidickýchvázieb kyseliny pektovej a oligogalakturónových kyselin po monomérnych jednotkách.

Exopolygalakturonázu imobilizovali dosial len kovalentným viazaním na nerozpustný nosična báze polyakrylamidu po jeho aktivácii vodorozpustnými karbodiimidmí (Collection Czech,*

Chem. Commun. 50, (1985) v tlaČi). Nevýhodou uvedeného postupu založeného na kovelentnej imobilizácii je operačná zložitost súvisiaca s aktiváciou nosiča, tiez nevýhodné hydrody-namické vlastnosti biogélu, ktoré sa prejavujú pri kolónovej aplikácii imobilizovaného enzýmu.Ďalším nedostatkom je tažká dostupnost a poměrně vysoká cena nosiča i aktivačného činidla.

Uvedené nedostatky sa odstraňujú postupom podlá vynálezu, ktorého podstatou je, žesa enzým zakotví pri pH 4,2 až 6,4 a teplote 5 až 30 °C na polyetyléntereftalát, ktorý sapřipraví z etylénglykolu a kyseliny tereftalovej postupom, ktorý zaručuje vysokoprevládajúcuhydrofóbnu adsorbciu enzýmu na nosič {Chem. Prum. 26, 598 (1976). Základný spósob přípravy imobilizovanej exopolygalakturonázy spočívá v operačnej jedno-duchosti postupu a stálého zakotvenia, čo pri dodržiavaní optimálnych podmienok enzýmovejreakcie, umožňuje používat imobilizovaný enzým opakované, alebo v dlhodobých kont.inuálnychprocesoch. ĎalŠou výhodou preparátu připraveného podlá postupu je, že sa spósob jeho účinkuna polymérne substráty oproti účinku volného enzýmu nemení. Východzie reaktanty pre přípravu imobilizovanej exopolygalakturonázy sú lahko dostupné,nakolko exopolygalakturonáza je přítomná v komerčných preparátoch pektináz, vyrábaných prepoužitie v potravinárskom priemysle. Použitý nosič polyetyléntereftalát je čsl. výroby a jecenove přístupný.

Rovnako vlastná imobilizácia je velmi jednoduchá, lahko preveditelná a technicky nenáročná.Spočívá v reakcii rozpustného enzýmu s nosičom v prostředí tlmivého roztoku o pH 4,2 až6,4, obvykle sa používá teploty 5 až 30 °C, nižšia teplota nežiadúcim spósobom ovplyvňujerýchlost reakcie, vyššia naopak móže spósobiť deaktiváciu enzýmu. Reakčná doba sa riadipredovŠetkým žiadúcim stupňom konverzie, teplotou a množstvom enzýmu. Obvykle sa pohybujeod 4 do 16 hodin. Po skončení reakcie sa imobilizovaný enzým oddělí od supernatantu dekantáciou,filtráciou cez fritu, alebo odstředěním, premyje tlmívým roztokom a uchovává v suspenzíipri 4 °C.

Spósob přípravy podlá vynálezu je vysvětlený na nasledujúcich príkladoch. Příklad 1

Exopolygalakturonáza přítomná v dostupných technických preparátoch pektináz, resp.z nich a vyšších rastlín izolovaná lubovolným postupom napr. gólovou a ionovýmennou chroma-tografiou Biochim. Biophys. Acta 422, 349 (1976); Collection Czech. Chem. Commun 42, 3 214 (1977)Biologia 36, 197 (1981) , bola imobilizovaná na polyetyléntereftalát podlá nasledujúcehopostupu: K 1 g polyetyléntereftalátu premytému 0,1 mol.l octanovým tlmivým roztokomo pH 4,8 suspendovanom v 10 ml toho istého tlmivého toztoku sa přidá 10 mg preparátuexopolygalakturonázy. Po 4 hodinách miešania pri laboratornej teplote sa gél oddělí vhodnýmspósobom. Příklad .2

Polyetyléntereftalát suspendovaný vo vodě, alebo v tlmivých roztokoch o pH 4,2 až 6,4 sa naplní do kolony, cez ktorú sa filtruje roztok obsahujúci exopolygalakturonázu v tlmivom roztoku o pH zodpovedajúcom ekvilibračnému roztoku dovtedy, kým afluent nevykazuje enzýmovú aktivitu. Kolona sa potom premyje tlmivým octanovým roztokom pH 4,8.

Claims (1)

1. 3 257830 Schopnosť imobilizovaného enzýmu katalyzovať zmienenú degradáciu pektínových látokje závislá na obsahu exopolygalakturonázy, tiež na obsahu kontaminujúcich látok vo východzomenzýmovom preparáte a tvoří okolo 30 % kapacity naadsorbovaného enzýmu. Aktivita imobilizovanejexopolygalakturonázy pripravenej podlá příkladu 1 a 2, pri stiepení glykozidických vSziebpektanu sodného vykazovala 40 až 44 % kativity rozpustnej formy. Imobilizovaná exopolygalakturonáza má využitie všade tam, kde ide o úplnú degradáciupektínových látok, napr. v konzervárenskom a vinárskom priemysle, dalej sa dá využiť kupřípravě kyseliny D-galakturónovej. PREDMET VYNALEZU SpĎsob přípravy imoblizovanej exopolygalakturonázy vyznačený tým, že sa enzým zakotvípri pH 4,2 až 6,4 a teplote medzi 5 až 30 °C na polyetyléntereftalát.