CS256857B1 - Imobilizované pektolytické enzymy - Google Patents

Abstract

Imobilizovanó pektolytické enzymy endopolygalakturonasa, pektinesterasa a pektinasový komplex, které jsou vázány na porézní nebo neporézní keramický nosič obsahující povrchově chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem. Tyto imobilizované enzymy lze použít ke štěpení alfa-1,4 glykosidických vazeb a metylesterových vazeb v molekule ■ pektinu.

Description

Vynález se týká imobilizovaných pektolytických enzymů.

Takové enzymy byly dosud imobilizovány na nerozpustné polymerní nosiče na bázi agarozy, celulózy, hydroxyalkylmetakrylátu po jejich aktivaci bromkyanem /např. Carbohyd. Res. 34,

233 (1974), Nahrung 22, 185 (1979), Collect. Czech. Chem. Commun. 45, 163 (1980)/, dále na póly(2,6-dimethylfenylenoxid), nebo na póly(6-kaprolaktam) po jejich aktivaci glutaraldehydem /A.O. 230 892, Biotechnol. Lett. 7, 99 (1985)/. Jiným způsobem imobilizace je adsorpce na polyetylentereftalát (1.0. 211 694).

Nevýhodou enzymů imobilizovaných na uvedených nosičích je nedostatečná mechanická stálost, nevýhodné hydrodynamické vlastnosti a mnohdy příliš vysoká cena, proto měly takto imobilizovarié enzymy v technické praxi dosud velmi omezené použiti.

Uvedené nedostatky jsou odstraněny podle vynálezu, jehož podstatou jsou imobilizované pektolytické enzymy vázané na porézní, nebo neporézni keramický nosič, obsahující chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem.

Výchozí reaktanty pro přípravu látek podle vynálezu jsou snadno přístupné, nebot rozpust né pektolytické enzymy jsou běžně vyráběny pro použití v potravinářském průmyslu a uvedený nosič obsahující vázanou aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem lze velmi snadno připravit reakci glutaraldehydu s keramickým nosičem obsahujícím povrchově vázanou aminoskupinu.

Rovněž vlastní imobilizace je velmi snadná a technicky nenáročná, spočívá v reakci rozpustného enzymu s nosičem v prostředí tlumívého roztoku o pH 5,0-7,5. Obvykle se používá teploty 10-40 °C, nižší teplota nežádoucím způsobem ovlivňuje rychlost reakce, vyšší naopak může způsobit, desaktivaci enzymu. Reakční doba se řídí především žádoucím stupněm konverse, teplotou a přebytkem enzymu, obvykle se pohybuje v rozmezí několika hodin do několika desítek hodin. Po skončené reakci se imobillzovaný enzym oddělí od reakční směsi výhodně filtrací, nebo dekantací, případně promyje vodou, nebo tlumivým roztokem.

Výhodou takto připravených imobilizovaných enzymů je kromě nízké ceny a snadné přípravy především skutečnost, že použitý nosič má rigidní strukturu, je mechanicky i tepelně velmi stálý, dále široký výběr velikostí a tvarů č‘ástic keramických materiálů umožňuje volit takovou strukturu základního nosiče, aby byly zaručeny velmi dobré hydrodynamické vlastnosti.

Imobilizované enzymy podle vynálezu lze použít ke štěpení alfa-1,4 glykosidických vazeb v molekule pektinu a k deesterifikaci pektinových látek.

Dále uvedené příklady charakterizují imobilizované pektolytické enzymy podle vynálezu, aniž by jej vymezovaly, nebo omezovaly.

Příklad 1 g keramického porézního nosiče obsahujícího povrchově vázané 3-aminopropyl skupiny ošetřené glutaraldehydem bylo suspendováno v 200 ml tlumivého roztoku o pH 6 a dále k němu přidáno 0,1 g endopolygalakturonasy rozpuštěné v 1 ml téhož tlumivého roztoku. Vzniklá suspen ze byla inkubována na třepačce po dobu 6 hodin. Imobillzovaný enzym byl odfiltrován a promyt tlumivým roztokem o pH 4,2. Během reakce nedošlo ke ztrátám nosiče a aktivita takto připravené imobilizované endopolygalakturonasy ve štěpení glykosidických vazeb pektanu sodného vykazovala 15 % aktivity rozpustné formy enzymu, její stabilita byla taková, že umožňovala několikanásobné použití.

Příklad 2

Příklad 1 byl zopakován s tím rozdílem, že místo endopolygalakturonasy bylo použito 0,1 g pektinesterasy mikrobiálního původu. Imobilizovaný enzym byl promyt tlumivým roztokem pH 4,6. Aktivita zmobilizované pektinesterasy v deestrifikaci pektinu vykazovala 11 % aktivity rozpustného enzymu.

Příklad 3

Příklad 1 byl zopakován s tím rozdílem, že místo endopolygalakturonasy bylo použito 0,1 g směsného pektolytického preparátu pektinasy obsahujícího endopolygalakturonasu, pektinesterasu a exopolygalakturonasu. Pektinasová aktivita imobilizovaného preparátu vykazovala 14 % aktivity rozpustného enzymu.

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Imoblizované pektolytické enzymy endopolygalakturonasa, pektinesterasa a pektinasový komplex připravitelné reakcí s porézním nebo neporézním keramickým nosičem obsahujícím povrchově chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem.