CS256857B1 - Immobilized pectolytical enzymes - Google Patents
Immobilized pectolytical enzymes Download PDFInfo
- Publication number
- CS256857B1 CS256857B1 CS851738A CS173885A CS256857B1 CS 256857 B1 CS256857 B1 CS 256857B1 CS 851738 A CS851738 A CS 851738A CS 173885 A CS173885 A CS 173885A CS 256857 B1 CS256857 B1 CS 256857B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- immobilized
- enzymes
- endopolygalacturonase
- porous
- glutaraldehyde
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title description 13
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- -1 3-aminopropyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 abstract description 7
- 239000001814 pectin Substances 0.000 abstract description 4
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 abstract description 4
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 abstract description 4
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- ICMZFZGUTLNLAJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethyl-7-oxabicyclo[4.1.0]hepta-2,4-diene Chemical compound CC1=CC=CC2(C)OC12 ICMZFZGUTLNLAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N epsilon-caprolactam Chemical compound O=C1CCCCCN1 JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Imobilizovanó pektolytické enzymy endopolygalakturonasa, pektinesterasa a pektinasový komplex, které jsou vázány na porézní nebo neporézní keramický nosič obsahující povrchově chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem. Tyto imobilizované enzymy lze použít ke štěpení alfa-1,4 glykosidických vazeb a metylesterových vazeb v molekule ■ pektinu.Immobilized pectolytic enzymes endopolygalacturonase, pectinesterase and a pectinase complex that is bound on a porous or non-porous ceramic support chemically bound 3-aminopropyl group treated with glutaraldehyde. These immobilized enzymes can be used to cleave alpha-1,4 glycosidic linkages and methyl ester linkages in the molecule ■ pectin.
Description
Vynález se týká imobilizovaných pektolytických enzymů.The invention relates to immobilized pectolytic enzymes.
Takové enzymy byly dosud imobilizovány na nerozpustné polymerní nosiče na bázi agarozy, celulózy, hydroxyalkylmetakrylátu po jejich aktivaci bromkyanem /např. Carbohyd. Res. 34,Such enzymes have heretofore been immobilized to insoluble polymeric carriers based on agarose, cellulose, hydroxyalkyl methacrylate upon activation with cyanogen bromide (e.g. Carbohyd. Res. 34,
233 (1974), Nahrung 22, 185 (1979), Collect. Czech. Chem. Commun. 45, 163 (1980)/, dále na póly(2,6-dimethylfenylenoxid), nebo na póly(6-kaprolaktam) po jejich aktivaci glutaraldehydem /A.O. 230 892, Biotechnol. Lett. 7, 99 (1985)/. Jiným způsobem imobilizace je adsorpce na polyetylentereftalát (1.0. 211 694).233 (1974), Nahrung 22: 185 (1979), Collect. Czech. Chem. Commun. 45, 163 (1980)], to poles (2,6-dimethylphenylene oxide), or poles (6-caprolactam) after their activation with glutaraldehyde (A.O. 230 892, Biotechnol. Lett. 7, 99 (1985)]. Another method of immobilization is adsorption to polyethylene terephthalate (1.0. 211 694).
Nevýhodou enzymů imobilizovaných na uvedených nosičích je nedostatečná mechanická stálost, nevýhodné hydrodynamické vlastnosti a mnohdy příliš vysoká cena, proto měly takto imobilizovarié enzymy v technické praxi dosud velmi omezené použiti.The disadvantages of the enzymes immobilized on the above-mentioned carriers are insufficient mechanical stability, disadvantageous hydrodynamic properties and often too high a price, therefore the immobilized enzymes have so far had very limited use in technical practice.
Uvedené nedostatky jsou odstraněny podle vynálezu, jehož podstatou jsou imobilizované pektolytické enzymy vázané na porézní, nebo neporézni keramický nosič, obsahující chemicky vázanou 3-aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem.These drawbacks are overcome according to the invention, which is based on immobilized pectolytic enzymes bound to a porous or non-porous ceramic carrier containing a chemically bound 3-aminopropyl group treated with glutaraldehyde.
Výchozí reaktanty pro přípravu látek podle vynálezu jsou snadno přístupné, nebot rozpust né pektolytické enzymy jsou běžně vyráběny pro použití v potravinářském průmyslu a uvedený nosič obsahující vázanou aminopropyl skupinu ošetřenou glutaraldehydem lze velmi snadno připravit reakci glutaraldehydu s keramickým nosičem obsahujícím povrchově vázanou aminoskupinu.The starting reactants for the preparation of the compounds of the invention are readily accessible, since soluble pectolytic enzymes are commonly produced for use in the food industry and said glutaraldehyde-treated aminopropyl-containing support containing carrier can readily be prepared by reacting glutaraldehyde with a surface-bound amino-containing ceramic support.
Rovněž vlastní imobilizace je velmi snadná a technicky nenáročná, spočívá v reakci rozpustného enzymu s nosičem v prostředí tlumívého roztoku o pH 5,0-7,5. Obvykle se používá teploty 10-40 °C, nižší teplota nežádoucím způsobem ovlivňuje rychlost reakce, vyšší naopak může způsobit, desaktivaci enzymu. Reakční doba se řídí především žádoucím stupněm konverse, teplotou a přebytkem enzymu, obvykle se pohybuje v rozmezí několika hodin do několika desítek hodin. Po skončené reakci se imobillzovaný enzym oddělí od reakční směsi výhodně filtrací, nebo dekantací, případně promyje vodou, nebo tlumivým roztokem.Also the immobilization itself is very easy and technically undemanding, it consists in the reaction of the soluble enzyme with the carrier in the buffer medium pH 5.0-7.5. Usually temperatures of 10-40 ° C are used, lower temperatures adversely affect the rate of reaction, higher conversions can cause enzyme deactivation. The reaction time is governed primarily by the desired degree of conversion, temperature, and excess of enzyme, usually in the range of several hours to several tens of hours. After the reaction is complete, the immobilized enzyme is separated from the reaction mixture, preferably by filtration or decantation, optionally washed with water or buffer.
Výhodou takto připravených imobilizovaných enzymů je kromě nízké ceny a snadné přípravy především skutečnost, že použitý nosič má rigidní strukturu, je mechanicky i tepelně velmi stálý, dále široký výběr velikostí a tvarů č‘ástic keramických materiálů umožňuje volit takovou strukturu základního nosiče, aby byly zaručeny velmi dobré hydrodynamické vlastnosti.The advantage of such prepared immobilized enzymes is, besides low cost and easy preparation, especially the fact that the used carrier has a rigid structure, is mechanically and thermally very stable, and a wide selection of sizes and shapes of particles of ceramic materials allows to choose such a basic carrier structure to guarantee very good hydrodynamic properties.
Imobilizované enzymy podle vynálezu lze použít ke štěpení alfa-1,4 glykosidických vazeb v molekule pektinu a k deesterifikaci pektinových látek.The immobilized enzymes of the invention can be used to cleave alpha-1,4 glycosidic bonds in a pectin molecule and to de-esterify pectin substances.
Dále uvedené příklady charakterizují imobilizované pektolytické enzymy podle vynálezu, aniž by jej vymezovaly, nebo omezovaly.The following examples characterize the immobilized pectolytic enzymes of the invention without limiting or limiting it.
Příklad 1 g keramického porézního nosiče obsahujícího povrchově vázané 3-aminopropyl skupiny ošetřené glutaraldehydem bylo suspendováno v 200 ml tlumivého roztoku o pH 6 a dále k němu přidáno 0,1 g endopolygalakturonasy rozpuštěné v 1 ml téhož tlumivého roztoku. Vzniklá suspen ze byla inkubována na třepačce po dobu 6 hodin. Imobillzovaný enzym byl odfiltrován a promyt tlumivým roztokem o pH 4,2. Během reakce nedošlo ke ztrátám nosiče a aktivita takto připravené imobilizované endopolygalakturonasy ve štěpení glykosidických vazeb pektanu sodného vykazovala 15 % aktivity rozpustné formy enzymu, její stabilita byla taková, že umožňovala několikanásobné použití.EXAMPLE 1 g of a ceramic porous carrier containing surface-bound 3-aminopropyl groups treated with glutaraldehyde was suspended in 200 ml of pH 6 buffer and 0.1 g of endopolygalacturonase dissolved in 1 ml of the same buffer was added thereto. The resulting suspension was incubated on a shaker for 6 hours. The immobilized enzyme was filtered off and washed with pH 4.2 buffer. There was no loss of carrier during the reaction and the activity of the thus prepared immobilized endopolygalacturonase in the digestion of glycosidic bonds of sodium pectan showed 15% of the activity of the soluble form of the enzyme, its stability being such that it allowed multiple uses.
Příklad 2Example 2
Příklad 1 byl zopakován s tím rozdílem, že místo endopolygalakturonasy bylo použito 0,1 g pektinesterasy mikrobiálního původu. Imobilizovaný enzym byl promyt tlumivým roztokem pH 4,6. Aktivita zmobilizované pektinesterasy v deestrifikaci pektinu vykazovala 11 % aktivity rozpustného enzymu.Example 1 was repeated except that 0.1 g of pectinesterase of microbial origin was used instead of endopolygalacturonase. The immobilized enzyme was washed with pH 4.6 buffer. The activity of the mobilized pectinesterase in the pectin deestrification showed 11% soluble enzyme activity.
Příklad 3Example 3
Příklad 1 byl zopakován s tím rozdílem, že místo endopolygalakturonasy bylo použito 0,1 g směsného pektolytického preparátu pektinasy obsahujícího endopolygalakturonasu, pektinesterasu a exopolygalakturonasu. Pektinasová aktivita imobilizovaného preparátu vykazovala 14 % aktivity rozpustného enzymu.Example 1 was repeated except that 0.1 g of a mixed pectolytic pectinase preparation containing endopolygalacturonase, pectinesterase and exopolygalacturonase was used instead of endopolygalacturonase. The pectinase activity of the immobilized preparation showed 14% soluble enzyme activity.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851738A CS256857B1 (en) | 1985-03-12 | 1985-03-12 | Immobilized pectolytical enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851738A CS256857B1 (en) | 1985-03-12 | 1985-03-12 | Immobilized pectolytical enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS173885A1 CS173885A1 (en) | 1987-09-17 |
| CS256857B1 true CS256857B1 (en) | 1988-04-15 |
Family
ID=5352499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS851738A CS256857B1 (en) | 1985-03-12 | 1985-03-12 | Immobilized pectolytical enzymes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS256857B1 (en) |
-
1985
- 1985-03-12 CS CS851738A patent/CS256857B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS173885A1 (en) | 1987-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4111838A (en) | Composition for chromatography | |
| US4798793A (en) | Immobilized Mucor miehei lipase for transesterification | |
| Messing | [11] Adsorption and inorganic bridge formations | |
| JPH01503677A (en) | Immobilization method | |
| EP0104571B1 (en) | Immobilization of biocatalysts on granular carbon | |
| JPH0338B2 (en) | ||
| US4524137A (en) | Preparation of catalysts for biochemical conversion reactions | |
| US3982997A (en) | Immobilized glucose isomerase | |
| Xu et al. | Immobilization of Candida cylindracea lipase on methyl acrylate-divinyl benzene copolymer and its derivatives | |
| Tümtürk et al. | Immobilization of invertase attached to a granular dimer acid-co-alkyl polyamine | |
| CS256857B1 (en) | Immobilized pectolytical enzymes | |
| Solomon et al. | Adsorption of amyloglucosidase on inorganic carriers | |
| Smiley et al. | Immobilized enzymes | |
| Pifferi et al. | Immobilization of catalase on macromolecular supports activated with acid dyes | |
| US3992329A (en) | Support of alumina-magnesia for the adsorption of glucose isomerase enzymes | |
| HU204084B (en) | Process for producing enzymes bonded to a carrier | |
| RU2167197C1 (en) | Biocatalyst for starch saccharification, method of its preparing, solid carrier for glucoamylase immobilization and method of starch saccharification | |
| CS257830B1 (en) | Method of immobilized exopolygalacturonase preparation | |
| RU2005784C1 (en) | Method of immobilized peroxidase preparing | |
| Rexova-Benkova et al. | Endopolygalacturonase immobilized on a porous poly (2, 6-dimethyl-p-phenyleneoxide) | |
| CS258637B1 (en) | Insoluble derivatives of pectolytic enzymes and method of their preparation | |
| NO144633B (en) | PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF 6-AMINOPENICILLANIC ACID | |
| WO1989008705A1 (en) | Supports for proteins and amino acids | |
| Rexová-Benková et al. | Endopolygalacturonase immobilized on ceramic materials substituted with aminopropyl groups. Synthesis, kinetics, and mode of action | |
| Wang et al. | Occlusion immobilization of hybridoma cells in chitosan |