CS254162B1 - Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy - Google Patents
Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy Download PDFInfo
- Publication number
- CS254162B1 CS254162B1 CS855619A CS561985A CS254162B1 CS 254162 B1 CS254162 B1 CS 254162B1 CS 855619 A CS855619 A CS 855619A CS 561985 A CS561985 A CS 561985A CS 254162 B1 CS254162 B1 CS 254162B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- soluble
- polysaccharide
- determination
- glucan
- chromolytic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález sa týká sposobu přípravy rozpustného chromoíytického substrátu na stanovenie /3(1-3) glukanázy, EC 3.2.1.6.
K osvědčeným a velmi efektívnym spfisobom stanovenia pólysacharid-hydrolázových enzymových aktivit patria sposoby fotokolorimetrické. Spočivajú v tom, že enzým sa nechá reagovat s nerozpustným chromolytickým substrátem, pričom účinkom enzýmu sa tento stává rozpustným a zafarbuje reakčný roztok. Intenzita zafarbenia roztoku je potom úměrná aktivitě meraného enzýmu [J. Kennedyc Advances in carbohydrate chemistry and biochemistry 29, 350 (1974)]. Známe sú sposoby i s použitím vodorozpustných chromolytických substrátov, u kterých sa rozpustný enzymatický neatakovaný podiel chromoíytického polysacharidu vyzráža organickým rozpúšťadlom a hydrolyzovaný podiel ostává rozpustný a tým aj zafarbuje reakčný roztok úměrně aktivitě přítomného enzýmu [Κ. K. Mákinen,
I. K. Paunio: Anal. Biochem. 39, 202 (1971)]. V súčasnej době nemožno jednoznačné doporučovat nerozpustné alebo rozpustné chromolytické polysacharidové substráty, pretože oba majú svoje výhody i nevýhody. Záleží na konkrétných podmienkach analýzy, ktorému typu substrátu dáme přednost. Příprava mnohých vodorozpustných polysacharidových chromolytických substrátov je predmetom Čs. AO 237 101 a US patentu 4 321 364. Nezahrňuje však menej známe polysacharidy, akým je /3(1-3) glukán, izolovaný z buněčných stien pekárenských kvasiniek (Saccharomyces cerevisiae), ktorý sa vyznačuje velmi nízkou reaktivitou pri následných alkylačných modifikačných reakciách, ktorými sa tento nerozpustný polysacharid prevádza na rozpustný.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že v prvom stupni sa /3(1-3) glukán alkylu je etylénoxidom alebo /3-chloretyl sulfonátom sodným alebo kyselinou monochlóroctovou v· alkalickom prostředí na stupeň substitúcle 0,35 až 0,8 a v druhom stupni sa na alkyl-polysacharid naviaže farblvo; dvojsodná so! kyseliny 8-amino-5-[3-(sulfoetylsulfonyl janilíno ] 6-antrachinón-sulf onove j (Remazol briliant blue R) v množstve 6 až 10 percent hmot. na hmotnosť polysacharidu pri teplote 15 až 25 °C a koncentrácii hydroxidu sodného 1,0 až 3,0 % hmot. po dobu 2 až 4 hodin a vyfarbený polysacharid sa z roztoku izoluje známým spĎsobom.
Připravený chromolytický /3(1-3) glukán je vo vodě dobré rozpustný a je vhodným substrátem pre meranie β (1-3) glukanázovej enzýmovej aktivity, EC 3.2.1.6. Hydroxyetyl-derivát je vhodnější pre viazanie farbiva, nakolko neblokuje hydroxylové skupiny polysacharidu. Karboxymetyl a sulfoetyl deriváty /3(1-3) glukánu sa horšie vyfarbujú, ale je jednoduchšia ich příprava oproti hydroxyetylderivátu.
Výhodou nového postupu přípravy vodorozpustného chromoíytického gelu /3(1-3) glukánu je, že umožňuje připravit z tohto málo reaktívneho polysacharidu dostatečné citlivý vodorozpustný enzýmový substrát vhodný pre fotokolorimetrické stanovenie /3(1-3] glukanázovej aktivity, EC 3.2.1.6, čím sa rozšiřuje paleta vodorozpustných polysacharid-hydrolázových enzýmových substrátov.
Přikladl
K 200 g vzduchosuchého práškového /3(1—3) glukánu izolovaného z buněčných stien pekárskych kvasiniek (Saccharomyces cerevisiae] sa alkalizuje, s 200 ml 20 °/o hmot· vodného roztoku hydroxidu sodného a nechá sa aktivovat po dobu 1 hodiny pri teplote 20 °C. Potom sa alkalyzovaný glukán v reaktore, z ktorého sa odsaje vzduch alkyluje postupné přidáváním 35 g etylénoxidu pri teplote 45 °C sa nechá reagovat ešte 2 hodiny po přidaní posledného podielu etylénoxidu. Po ukončení reakcie sa produkt rozpustí v 3 litroch vody, ochladí sa na teplotu 20 °C a postupné sa za miešania přidává 25 g farbiva (Remazol briliant blue Rj. Reakčná zmes sa nechá reagovat celkove 2 hodiny od pridanía posledného podielu farbiva. Po naviazaní farbiva na polysacharid sa reakčný roztok zneutralizuje kyselinou octovou. Potom s neutrálny roztok naleje do přebytku alkoholu za miešania, čím sa chromolytický /3(1-3) glukán vyzráža, odfiltruje sa na filtri a premýva metanolom, až premývací roztok je bezfarebný. Hotový produkt obsahuje 8 až 10 % hmot. vlaženého farbiva, je dobré rozpustný vo vodě a je teda vhodným vodorozpustným substrátem na stanovenie /3(1-3) glukanázovej enzýmovej aktivity.
Příklad 2
200 g vzduchosuchého práškového /3(1—3) glukánu izolovaného z buněčných stien pekárskych kvasiniek sa alkyluje v suspenzii 2 litrov izopropanolu a 200 ml vodného roztoku hydroxidu sodného o koncentrácii 20 percent hmot. Reakčná zmes sa postupné vyhrieva na teplotu 55 °C, kedy sa v prlebehu 30 minút po častiach přidává 70 g pevného /3-chlóretylsulfonátu sodného. Reakčná zmes sa pri teplote 55 °C za miešania udržuje 3 hodiny, potom sa pevný sulfoetyl-glukán odfiltruje, premyje 96 % hmot. etanolom, dobré odsaje a pevný produkt sa rozpúšťa v 3 litroch vody, upraví sa koncentrácia hydroxidu sodného na hodnotu 3 percenta hmot. a vyfarbí sa farbivom (Remazol briliant bleu R) pri teplote 25 °C po dobu 4 hodin. Hotový produkt je dobré rozpustný vo vodě a je vhodným substrátom na stanovenie /3(1-3) glukanázovej enzýmovej aktivity. Obsahuje 6 % hmot. viazaného farbiva.
Příklad 3
200 g vzduchosuchého práškového /3(.1-3) glukánu izolovaného z buněčných stien pekárskych kvasiniek sa suspenduje v 2 litroch 96 % hmot. etanolu, do ktorého sa predtým přidalo 100 ml vodného roztoku hydroxidu sodného o koncentrácii 600 g. . I-1. Reakčná zmes sa mieša 1 hodinu pri teplote 20 °C, potom sa přidá 100 g kyseliny chlóroctovej a vyhřeje sa na teplotu 55 stupňov Celsia počas 30 až 45 minút a pri tejto teplote sa reakčná zmes udržuje celkom 3 hodiny. Potom sa pevný produkt karboxymetyl-glukán odfiltruje, dobré odsaje etanol a pevný produkt sa rozpustí v 2 litroch vody, upraví sa koncentrácia hydroxidu sodného, na hodnotu 3 % hmot. a vyfarbí sa barvivom (Remazol briliant blue R) ako v příklade 2. Hotový produkt je dobré rozpustný vo vodě, a je vhodným substrátom na stanovenie /3(1-3) glukanázovej enzýmovej aktivity.
Vynález má použitie v analytike enzýmov, biotechnologii a všade kde třeba pohotovo merat /3(1-3] glukanázovú enzýmovú aktivitu.
Claims (2)
- PREDMETSposob přípravy rozpustného chromolytického substrátu na stanovenie /3(1-3] gluKanázy, EC 3.2.1.6 modifikáciou /3(1-3) glukánu vyznačený tým, že v prvom stupni sa /3(1—3) glukán alkyluje etylénoxidom alebo /3-chloretylsulfonátom alebo kyselinou monochlóroctovou v alkalickom prostředí na stupeň substitúcie 0,35 až 0,8 a v druhom stupni sa na alkyl-polysacharid naviaže farbivo, dvojsodná sol' kyseliny 8-amíno-5- [ 3- (sulfoetylsulf onyl janilíno ] 6-antrachinon-sulfonovej v množstve 6 až 10 % hmot. na hmotnost polysacharidu pri teplote 15 až 25 °C a koncentrácii hydroxidu sodného 1,0 až 3,0 % hmot, po dobu 2 až 4 hodin a vyíarbený polysacharid sa z roztoku izoluje.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS561985A1 CS561985A1 (en) | 1987-05-14 |
| CS254162B1 true CS254162B1 (cs) | 1988-01-15 |
Family
ID=5401390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254162B1 (sk) |
-
1985
- 1985-08-01 CS CS855619A patent/CS254162B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS561985A1 (en) | 1987-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3956273A (en) | Modified agarose and agar and method of making same | |
| US4127563A (en) | Low pH preparation of cationic starches and flours | |
| JPH03137101A (ja) | ケイ素化多糖類 | |
| Tiller et al. | Soluble and film‐forming cellulose derivatives with redox‐chromogenic and enzyme immobilizing 1, 4‐phenylenediamine groups | |
| US4097667A (en) | Hydroxyalkyl cellulose ethers | |
| US4321364A (en) | Preparation of soluble chromogenic substrates | |
| US3513156A (en) | Esters of starch and anthranilic acid and derivatives thereof | |
| CS254162B1 (cs) | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy | |
| KR19990077979A (ko) | 양성구아검유도체의제조방법 | |
| US4563421A (en) | Method for determining the presence of endohydrolase in a liquid and composition therefor | |
| CA1110620A (en) | SUBSTRATE FOR .alpha.-AMYLASE AND THE PREPARATION THEREOF | |
| US3694318A (en) | Substrate and method for alpha-amylase assay | |
| CS254163B1 (sk) | Sposob přípravy ohromolytického substrátu na stanovenie /(1-3) glukanázy | |
| US4167621A (en) | Method for preparing starch ether derivatives | |
| JPS5931699A (ja) | α−アミラ−ゼ活性の測定法 | |
| CS241325B1 (sk) | Spasob pripravý sodnej soli 2-[4-(l-amino-2-suIfoantracIiinón- -4-ylamíno) řenylsulfonyl] etylxylánu | |
| CZ476389A3 (cs) | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity | |
| CS237101B1 (sk) | Sposob přípravy vodorozpustných chromolytických polysacharidových enzýmových substrátov | |
| CS261080B1 (sk) | Trojsodná sol' 0-(4-(N-etyl-N-fenylamíno)-6-(4-metyl-2-sulfobenzén- -l-azo-2-(l-hydroxy-3,6-bissulfonát-l-yl)amíno]-l,3,5-triazín-2-yl}škrobu | |
| CS240463B1 (cs) | Trojsodná sol' 4-(N-etyl-N-f0nylamíno)-8-(4-meíyll-2-sulíobenzén-l- -azo-2-(l-hydroxy-3,6-bÍ8Sulfonaft-l-yl)antíno ]-1,3,5-triazín- -2-ylhydroxyetylcelulózy a sposob jej přípravy | |
| DE1953189A1 (de) | An Cellulosederivate chemisch gekuppelte Amylasen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| CS233088B1 (cs) | ) Trojsodná soí 6- [2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-l-antrachinón- amino/j anilino-4-(x- sulfoanilino)-l,3,5‘-triazín-2-yl-hydroxyetylcelulózy a sposob jej přípravy | |
| JPH025400B2 (sk) | ||
| Pober et al. | Water-insoluble residue following acid hydrolysis of water-soluble polysaccharides | |
| SK127292A3 (en) | Three-sodium salt o-{4-(n-ethyl-n-phenilamine)-6-[4-methyl-2- -sulfobenzene-1-azo-2-(1-hydroxy-3,6-bissulphonapht-1-yl)- -amino]-1,3,5-triazine-2-yl} galactomannane and method of its preparation |