CZ476389A3 - Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity - Google Patents
Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity Download PDFInfo
- Publication number
- CZ476389A3 CZ476389A3 CS894763A CS476389A CZ476389A3 CZ 476389 A3 CZ476389 A3 CZ 476389A3 CS 894763 A CS894763 A CS 894763A CS 476389 A CS476389 A CS 476389A CZ 476389 A3 CZ476389 A3 CZ 476389A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- xylan
- chromolytic
- sodium
- amount
- weight
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 title claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 3
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 description 2
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- URPBSRQSVAMQRT-UHFFFAOYSA-N 4-amino-9,10-dioxo-1-[3-(2-sulfoethylsulfonyl)anilino]anthracene-2-sulfonic acid Chemical compound NC=1C=C(C(=C2C(C=3C=CC=CC3C(C12)=O)=O)NC1=CC(=CC=C1)S(=O)(=O)CCS(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O URPBSRQSVAMQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L remazol brilliant blue r Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C(N)=C2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C2=C1NC1=CC=CC(S(=O)(=O)CCOS([O-])(=O)=O)=C1 KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- -1 xylan polysaccharide Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie
xylanázovej enzýmovej aktivity. Jeho podstatou je, že v
prvom stupni sa xylán zosie 'tuje epichlórhydrínom v
množstve 7 až 10 % hmot. na hmotnos‘t xylánu v pa‘tnásobnom
objeme vodného roztoku o koncentrácii 1,8 až 2,0 %
hmot. hydroxidu sodného a 15 až 20 % hmot. chlo ridu
sodného pri teplote 25 až 35 °C po dobu 4 až 8 hodin, potom
sa reakčný produkt v druhom stupni defibruje na částice 60
až 300 um v 15 až 20-násobnom množstve (na množstvo póvodného
xylánu) vodného roztoku obsahujúceho 0,7 až 1,0
% hmot. hydroxidu sodného a 6,0 až 7,0 % hmot. chloridu
sodného a vyfarbí sa farbivom, ktorým je dvojsodná sof kyseliny
8-amino-5 -3/-sulfoetylsulfonyl)anilino/-6-antrachinon
sulfonovej v množstve 8 až 10 % hmot. na hmot nos‘t
suchého xylánu pri teplote 15 až 25 °C po dobu 2 až 3 hodin,
ďalej sa chromolytický xylán izoluje v práškovej formě známým
spósobom.
Description
Vynález sa týká spósobu přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanázovej enzýmovej aktivity.
Potěrajší stav techniky
Beta-xylanáza (EC 3.-2.1.8) je enzym, ktorý je schopný štepiť polysacharidy xylanového typu s vazbami /3 (1 -*· 4) a patří preto k dóležitým enzýmom uplatňujúcich sa pri enzymatickom rozklade lignín-sacharidových komplexov vyskytujúcich sa v dreve, resp. v jednoročných rastlinách.
Velmi výhodou metodou na stanovenie úrovně beta-xylanázovej enzýmovej aktivity je metoda kolorimetrická,založená na principe použitia příslušného polysacharidového chromolytického nerozpustného substrátu /K.Kennedy: Advances in Carbohydrate chemistry and biochemistry, 29, 350 (1974)/, a ktoré boli rozpracované pre rožne aplikácie i u nás /Čs. AO č. 192210, č. 203676, č. 219575, č. 224155 a i./.
Příprava chromolytických substrátov na báze nerozpustných polysacharidov v alkalickom prostředí pri viazaní farbiva nenaráža na ťažkosti, pretože vyfarbený substrát sa móže premývať vodou bez straty na výťažku hotového produktu. Nie je tomu tak v případe polysacharidu xylánu, ktorý sa izoluje z dřeva, resp. jednoročných rastlín (slama, kukuřičné oklasky). Izolovaný xylán spravidla má nižšiu molekulovú hmotnosť nepřesánujúcu 20.000.
Xylan v podmienkach viazania farbiva je už značné rozpustný v reakčnom alkalickom prostředí. Rovnako sa jeho rozpustnost zvyšuje naviazaním farbiva, takže je značné rozpustný i v neutrálnom prostředí. Má to za následok, že výťažok chromolytického xylánu je nízký a pohybuje sa v rozsahu 30 až 50 %hmot. počítané na hmotnosť použitého suchého xylánu.
Podstata vynálezu
Podstata spósobu podl'a vynálezu spočívá v tom, že v prvom stupni sa xylán zosieťuje epichlórhydrinom v množstve 7 až 10 %hmot. na hmotnost' xylánu v páťnásobnom objeme sodného roztoku o koncentraci! 1,8 až 2 %hmot. hydroxidu sodného a 15 až 20 %hmot. chloridu sodného pri teplote 25 až 35 °C počas 4 až 8 hodin, potom sa reakčný produkt v druhom stupni defibruje na částice 60 až 300 um v 15 až 20-násobnom množstve, vztiahnuté na množstvo xylánu, vodného roztoku obsahujúceho 0,7 až 1,0 %hmot. hydroxidu sodného a S,0 až 7,0 ;jhmot. chloridu sodného a vyfarbí sa farbivom, ktorým je dvosodná sol' kyseliny 8-amino-5/3-(sulfoetylsulfonyl)an ilino/-5-antrachinon sulfonovej.
Substrátové vlastnosti chromolytického xylánu podstatnou mierou ovplyvňujú stupeň zosietenia polysacharidu. Aby pri pravený chromolytický substrát bol dostatočne citlivý i na níz ke úrovně enzýmovej aktivity, stupeň zosietenia nemá byť vysoký, ale nízký, pretože vyšším zosietením možno sice zvýšit' výťažok, ale na úkor citlivosti substrátu. Stupeň zosietenia v novom postupe je volený tak, že napúčací objem vo vodě chromolytického xylánu má byť v rozsahu 17 až 25 ml/g, čo je optimálna hodnota, pri ktorej je substrát dostatočne citlivý i pře nízké aktivity enzýmu a súčasne nie je rozpustný pri vymývaní naviazaného farbiva, t.j. zaručuje vysoký výťažok finálneho produktu.
Optimálně množstvo farbiva je v rozsahu 8 až 12 %hmot. aplikované na hmotnosť suchého xylánu. Pri nižších úrovniach vyfarbovanie &esá a zvyšuje sa spotřeba vody na vymývanie nezreagovaného farbiva. Prídavok elektrolytu (chloridu sodného) zvyšuje účinnosť viazania farbiva na xylán.
Spósobom pódia vynálezu sa eliminuje rozpustnosť chromolytického substrátu vo vodnom prostředí a tým sa zvyšuje podstatnou mierou výťažok chromolytického xylánu.
Příklady uskutočnenia vynálezu
Příklad 1
K 10 g xylánu izolovaného z kukuřičných oklaskov sa přidá 1,0 ml epichlorhydrinu v uzatvořenej řeakčnej banke a homogenizuje sa za miešania při izbovej teplote po dobu 30 min. Potom sa přidá naraz 50 ml reakčného vodného roztoku obsahujúceho 2 %hmot. hydroxidu sodného a 20 %hmot. chloridu sodného. Reakčná zmes sa zamieša a nechá sa reagovat' staticky pri izbovej teplote 4 až 8 hodin. Potom sa zosietený gél xylánu prenesie do mixéra, kde sa přidá 140 ml vodného roztoku obsahujúceho 0,75 %hmoto hydroxidu sodného a 7,0 %hmot. chloridu sodného. Reakčná zmes sa defibruje v mixéri na velkost' častíc 50 až 300 um. Suspenzia sa z mixéra preleje do kadičky, kde sa pri izbovej teplote přidává počas 30 min roztok farbiva Remazol briliant blue R, ktorým je dvosodná so! kyseliny 8-amino-5/3-(sulfoetylsulfonyl)anilino/-6-antrachinon sulfonovej, připraveného rozpuštěním 1,0 g farbiva v 10 ml destilovanej vody. Po přidaní posledného podielu farbiva sa reakčná zmes na elektromagnetickéj miešačke udržuje pri teplote 15 až 25 °C po dobu 2 h. Po ukončení vyfarbenia sa do řeakčnej zmesi přidá za miešania 3 ml koc. kyseliny octovej, přefiltruje sa cez sklenný filter a na filtri sa premýva destilovanou vodou, pokial filtrát nie je bezfarebný. Z premytého farebného xylánového gélu sa voda vytěsní najprv alkoholom a nakoniec acetonom, dobré sa odsaje a vysuší na vzduchu od acetonu.
Získá sa farebný chromolytický xylánový substrát vhodný na stanovenie xylanázovej enzýmovej aktivity, s velkosťou častíc 60 až 300 um, o napúčacom objeme vo vodě 18 až 25 ml/g o celkwom výťažku 9,5 g, t.j. 95 % na vyčhodzí xylán. Obsahuje 7 až 8 %hmot. viazaného farbiva.
Příklad 2
Postup ako v příklade 1 s tým rozdielom, že na sieťovanie sa použije 0,8 ml epichlóřhydřínu a na vvfařbenie 0,8 g farbiva. Výsledný produkt má obdobné vlastnosti ako v příklade 1, má však o niečo vyššiu hodnotu napúčania, ale nižší stupeň prefarbenia, čo rezultuje v rovnakej citlivosti gelu na xyV lanázu ako má gel v příklade 1.
Priemyselné využitie
Vynález má použitie v analytike xylanázy v biotechnologii pri medziopeřačnej kontrole sledovania úrovně xylanázovej aktivity.
Claims (1)
- Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanázovej enzýmovej aktivity vyznačujúci sa tým, že v prvom stupni sa xylán zosieťuje epichlórhydrínom v množstve 7 až 10 ^hmot. na hmotnost/ xylánu v páťnásobnom objeme sodného roztoku o koncentrácii 1,8 až 2 %hmot. hydroxidu sodného a 15 až 20 %nniot. chloridu sodného pri teplote 25 až 35 °C počas 4 až 8 hodin, potom sa reakčný produkt v druhom stupni defibruje na částice 60 až 300 um v 15 až 20-násobnom množstve vztiahnuté na množstvo xylánu, vodného roztoku obsahujúceho 0,7 až 1,0 %hmot. hydroxidu sodného a 6,0 až 7,0 %hmote chloridu sodného a vyfarbí sa farbivom, ktorým je dvojsodná sol' kyseliny 8-amino-5-/3-(sulfoetylsulfonyl)anilino/-6-antrachinon sulfonovej.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS894763A CZ476389A3 (cs) | 1989-08-11 | 1989-08-11 | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS894763A CZ476389A3 (cs) | 1989-08-11 | 1989-08-11 | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ476389A3 true CZ476389A3 (cs) | 1993-01-13 |
Family
ID=5391119
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS894763A CZ476389A3 (cs) | 1989-08-11 | 1989-08-11 | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ476389A3 (cs) |
-
1989
- 1989-08-11 CZ CS894763A patent/CZ476389A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3619371A (en) | Production of a polymeric matrix having a biologically active substance bound thereto | |
| Biely et al. | Soluble chromogenic substrates for the assay of endo-1, 4-β-xylanases and endo-1, 4-β-glucanases | |
| US4195128A (en) | Polymeric carrier bound ligands | |
| US3802997A (en) | Method of stabilizing enzymes | |
| Olson et al. | Plant suspension culture media macromolecules—pectic substances, protein, and peroxidase | |
| US3278392A (en) | Water insoluble enzymes | |
| CZ476389A3 (cs) | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity | |
| US4144128A (en) | Polymeric carrier bound ligands | |
| US4563421A (en) | Method for determining the presence of endohydrolase in a liquid and composition therefor | |
| Lojda | Indigogenic methods for glycosidases: IV. An improved method for β-glucuronidase | |
| CS254163B1 (sk) | Sposob přípravy ohromolytického substrátu na stanovenie /(1-3) glukanázy | |
| CN110452315B (zh) | 一种含硫脲盐的羧甲基壳聚糖衍生物及其制备方法和应用 | |
| SK127292A3 (en) | Three-sodium salt o-{4-(n-ethyl-n-phenilamine)-6-[4-methyl-2- -sulfobenzene-1-azo-2-(1-hydroxy-3,6-bissulphonapht-1-yl)- -amino]-1,3,5-triazine-2-yl} galactomannane and method of its preparation | |
| CN114609129A (zh) | 一种猫用葡萄糖检测颗粒及葡萄糖指示猫砂和制备方法 | |
| DD263663A7 (de) | Verfahren zur herstellung eines immobilisierten cholinestetase-praeparates | |
| US4929556A (en) | Enzyme immobilization with polysulfonium salts | |
| CS254162B1 (cs) | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy | |
| CS261524B1 (sk) | Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity | |
| JP2002233362A (ja) | ラッカーゼ活性の安定化方法および安定化されたラッカーゼ組成物 | |
| DE2619521A1 (de) | Neue aktivierte traeger und ein verfahren zu ihrer herstellung | |
| IL43573A (en) | Enzymes fixed on a solid cellulose support | |
| CS240463B1 (cs) | Trojsodná sol' 4-(N-etyl-N-f0nylamíno)-8-(4-meíyll-2-sulíobenzén-l- -azo-2-(l-hydroxy-3,6-bÍ8Sulfonaft-l-yl)antíno ]-1,3,5-triazín- -2-ylhydroxyetylcelulózy a sposob jej přípravy | |
| US20030166195A1 (en) | Enhancing protein thermostability | |
| IE48138B1 (en) | -amylase substrate and the preparation thereof | |
| CS261080B1 (sk) | Trojsodná sol' 0-(4-(N-etyl-N-fenylamíno)-6-(4-metyl-2-sulfobenzén- -l-azo-2-(l-hydroxy-3,6-bissulfonát-l-yl)amíno]-l,3,5-triazín-2-yl}škrobu |