CS254162B1 - Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy - Google Patents
Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy Download PDFInfo
- Publication number
- CS254162B1 CS254162B1 CS855619A CS561985A CS254162B1 CS 254162 B1 CS254162 B1 CS 254162B1 CS 855619 A CS855619 A CS 855619A CS 561985 A CS561985 A CS 561985A CS 254162 B1 CS254162 B1 CS 254162B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- soluble
- polysaccharide
- determination
- glucan
- chromolytic
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 21
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 16
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 16
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 14
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims description 13
- -1 sulfoethylsulfonyl Chemical group 0.000 claims description 6
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FXKMTSIKHBYZSZ-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCl FXKMTSIKHBYZSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical class C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- MMNWSHJJPDXKCH-UHFFFAOYSA-N 9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C3C(=O)C2=C1 MMNWSHJJPDXKCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJZLNMXZKIZLAW-UHFFFAOYSA-N C1CO1.[Na] Chemical compound C1CO1.[Na] BJZLNMXZKIZLAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical class [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N hexopyranose Chemical compound OCC1OC(O)C(O)C(O)C1O WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L remazol brilliant blue r Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C(N)=C2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C2=C1NC1=CC=CC(S(=O)(=O)CCOS([O-])(=O)=O)=C1 KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
254162 3 4
Vynález sa týká sposobu přípravy rozpust-ného chromoíytického substrátu na stano-venie /3(1-3) glukanázy, EC 3.2.1.6. K osvědčeným a velmi efektívnym spéso-bom stanovenia pólysacharid-hydrolázovýchenzymových aktivit patria sposoby fotokolo-rimetrické. Spočívajú v tom, že enzým sanechá reagovat s nerozpustným chromoly-tickým substrátem, pričom účinkom enzý-mu sa tento stává rozpustným a zafarbujereakčný roztok. Intenzita zafarbenia rozto-ku je potom úměrná aktivitě meraného en-zýmu [J. Kennedyc Advances in carbohydra-te chemistry and biochemistry 29, 350 (1974)]. Známe sú sposoby i s použitím vo-dorozpustných chromolytických substrátov,u kterých sa rozpustný enzymatický neata-kovaný podiel chromoíytického polysacha-ridu vyzráža organickým rozpúšťadlom ahydrolyzovaný podiel ostává rozpustný atým aj zafarbuje reakčný roztok úměrněaktivitě přítomného enzýmu [K. K. Mákinen,I. K. Paunio: Anal. Biochem. 39, 202 (1971)].V súčasnej době nemožno jednoznačné do-poručovat nerozpustné alebo rozpustné chro-molytické polysacharidové substráty, preto-že oba majú svoje výhody i nevýhody. Zá-leží na konkrétných podmienkach analýzy,ktorému typu substrátu dáme přednost. Pří-prava mnohých vodorozpustných polysacha-ridových chromolytických substrátov jepredmetom Čs. AO 237 101 a US patentu4 321 364. Nezahrňuje však menej známe po-lysacharidy, akým je /3(1-3) glukán, izolo-vaný z buněčných stien pekárenských kva-siniek (Saccharomyces cerevisiae), ktorýsavyznačuje velmi nízkou reaktivitou pri ná-sledných alkylačných modifikačných reak-ciách, ktorými sa tento nerozpustný poly-sacharid prevádza na rozpustný.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že v pr-vom stupni sa /3(1-3) glukán alkylu je ety-lénoxidom alebo /3-chloretyl sulfonátom sod-ným alebo kyselinou monochlóroctovou v·alkalickom prostředí na stupeň substitúcie0,35 až 0,8 a v druhom stupni sa na alkyl--polysacharid naviaže farbivo; dvojsodnásol' kyseliny 8-amíno-5-[3-(sulfoetylsulfo-nyl )anilíno ] 6-antrachinón-sulf onove j (Re-mazol briliant blue R) v množstve 6 až 10percent hmot. na hmotnost polysacharidupri teplote 15 až 25 °C a koncentrácii hydro-xidu sodného 1,0 až 3,0 % hmot. po dobu 2až 4 hodin a vyfarbený polysacharid sa zroztoku izoluje známým spdsobom. Připravený chromolytický /3(1-3) glukánje vo vodě dobré rozpustný a je vhodnýmsubstrátem pre meranie β (to3) glukanázovejenzýmovej aktivity, EC 3.2.1.6. Hydroxyetyl--derivát je vhodnější pre vlazanie farbiva,nakolko neblokuje hydroxylové skupiny po-lysacharidu. Karboxymetyl a sulfoetyl deri-váty /3(1-3) glukánu sa horšie vyfarbujú,ale je jednoduchšia ich příprava oproti hyd-roxyetylderivátu. Výhodou nového postupu přípravy vodo- rozpustného chromoíytického gelu /3(1-3)glukánu je, že umožňuje připravit z tohtomálo reaktívneho polysacharidu dostatečnécitlivý vodorozpustný enzýmový substrátvhodný pre fotokolorimetrické stanovenie/3(1-3) glukanázovej aktivity, EC 3.2.1.6, čímsa rozšiřuje paleta vodorozpustných poly-sacharid-hydrolázových enzýmových sub-strátov. Přikladl K 200 g vzduchosuchého práškového/3(1—3] glukánu izolovaného z buněčnýchstien pekárskych kvasiniek (Saccharomycescerevisiae) sa alkalizuje, s 200 ml 20 °/o hmot·vodného roztoku hydroxidu sodného a ne-chá sa aktivovat po dobu 1 hodiny pri tep-lote 20 °C. Potom sa alkalyzovaný glukán vreaktore, z ktorého sa odsaje vzduch alky-luje postupné přidáváním 35 g etylénoxidupri teplote 45 °C sa nechá reagovat ešte 2hodiny po přidaní posledného podielu ety-lénoxidu. Po ukončení reakcie sa produktrozpustí v 3 litroch vody, ochladí sa na tep-lotu 20 °C a postupné sa za miešania přidá-vá 25 g farbiva (Remazol briliant blue R).Reakčná zmes sa nechá reagovat celkove 2hodiny od pridania posledného podielu far-biva. Po naviazaní farbiva na polysacharid sareakčný roztok zneutralizuje kyselinou oc-tovou. Potom s neutrálny roztok naleje dopřebytku alkoholu za miešania, čím sa chro-molytický /3(1-3) glukán vyzráža, odfiltrujesa na filtri a premýva metanolom, až premý-vací roztok je bezfarebný. Hotový produktobsahuje 8 až 10 % hmot. viazaného farbi-va, je dobré rozpustný vo vodě a je tedavhodným vodorozpustným substrátem nastanovenie /3(1-3) glukanázovej enzýmovejaktivity. Příklad 2 200 g vzduchosuchého práškového /3(1—3)glukánu izolovaného z buněčných stien pe-kárskych kvasiniek sa alkyluje v suspenzii2 litrov izopropanolu a 200 ml vodného roz-toku hydroxidu sodného o koncentrácii 20percent hmot. Reakčná zmes sa postupnévyhrieva na teplotu 55 °C, kedy sa v priebe-hu 30 minut po častiach přidává 70 g pev-ného /3-chlóretylsulfonátu sodného. Reakč-ná zmes sa pri teplote 55 °C za miešaniaudržuje 3 hodiny, potom sa pevný sulfoetyl--glukán odfiltruje, premyje 96 % hmot. eta-nolom, dobré odsaje a pevný produkt sarozpúšťa v 3 litroch vody, upraví sa kon-centrácia hydroxidu sodného na hodnotu 3percenta hmot. a vyfarbí sa farbivom (Re-mazol briliant bleu R) pri teplote 25 °C podobu 4 hodin. Hotový produkt je dobré roz-pustný vo vodě a je vhodným substrátem nastanovenie /3(1-3) glukanázovej enzýmovejaktivity. Obsahuje 6 % hmot. viazaného far-biva.
Claims (2)
- 254162 5 6 Příklad 3 200 g vzduchosuchého práškovéhoglukánu izolovaného z buněčných stien pe-kárskych kvasiniek sa. suspenduje v 2 lit-roch 96 % hmot. etanolu, do ktorého sapredtým přidalo 100 ml vodného roztokuhydroxidu sodného o koncentrácii 600 g.. I-1. Reakčná zmes sa mieša 1 hodinu přiteplote 20 °C, potom sa přidá 100 g kyseli-ny chlóroctovej a vyhřeje sa na teplotu 55stupňov Celsia počas 30 až 45 minút a přitejto teplote sa reakčná zmes udržuje cel-kom 3 hodiny. Potom sa pevný produkt kar- boxymetyl-glukán odfiltruje, dobré odsajeetanol a pevný produkt sa rozpustí v 2 lit-roch vody, upraví sa koncentrácia hydroxi-du sodného, na hodnotu 3 % hmot. a vyfarbísa barvivom (Remazol briliant blue R) akov příklade
- 2. Hotový produkt je dobré roz-pustný vo vodě, a je vhodným substrátom nastanovenie /3(1—3) glukanázovej enzýmovejaktivity. Vynález má použitie v analytike enzýmov,biotechnologii a všade kde třeba pohotovomerať /3(1—3) glukanázovú enzýmovú akti-vitu. ťREDMET Sposob přípravy rozpustného chromoly-tického substrátu na stanovenie β (l->3 j glu-Kanázy, EC 3.2.1.6 modifikáciou β (l->3) glu-kánu vyznačený tým, že v prvom stupni sa/3(1—3) glukán alkyluje etylénoxidom ale-bo j3-chloretylsulfonátom alebo kyselinoumonochlóroctovou v alkalickom prostředína stupeň substitúcie 0,35 až 0,8 a v dru-hom stupni sa na alkyl-polysacharid navia- že farbivo, dvojsodná sol' kyseliny 8-amí-no-5- [ 3- (sulfoetylsulf onyl janilíno ] 6-antra-chinon-sulfonovej v množstve 6 až 10 %hmot. na hmotnost polysacharidu pri teplote15 až 25 °C a koncentrácii hydroxidu sodné-ho 1,0 až 3,0 % hmot, po dobu 2 až 4 hodina vyfarbený polysacharid sa z roztoku izo-luje.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS561985A1 CS561985A1 (en) | 1987-05-14 |
| CS254162B1 true CS254162B1 (cs) | 1988-01-15 |
Family
ID=5401390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855619A CS254162B1 (cs) | 1985-08-01 | 1985-08-01 | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254162B1 (cs) |
-
1985
- 1985-08-01 CS CS855619A patent/CS254162B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS561985A1 (en) | 1987-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Biely et al. | Remazol brilliant blue-xylan: a soluble chromogenic substrate for xylanases | |
| Wirth et al. | Dye-labelled substrates for the assay and detection of chitinase and lysozyme activity | |
| US3956273A (en) | Modified agarose and agar and method of making same | |
| US3619371A (en) | Production of a polymeric matrix having a biologically active substance bound thereto | |
| US4330443A (en) | Dry chemical process for grafting acrylic and methyl acrylic ester and amide monomers onto starch-containing materials | |
| Okuda et al. | β-Glucan synthesis in the cotton fiber (I. Identification of β-1, 4-and β-1, 3-glucans synthesized in vitro) | |
| US4992538A (en) | Silated polysaccharides | |
| CA1240990A (en) | Heptaose compounds | |
| US4097667A (en) | Hydroxyalkyl cellulose ethers | |
| US4321364A (en) | Preparation of soluble chromogenic substrates | |
| US3513156A (en) | Esters of starch and anthranilic acid and derivatives thereof | |
| US4268628A (en) | Method for the determination of α-amylase | |
| CS254162B1 (cs) | Sposob přípravy rozpustného cbromolytickéha substrátu na stanovenie (3(l-*3) glukanázy | |
| KR19990077979A (ko) | 양성구아검유도체의제조방법 | |
| US4563421A (en) | Method for determining the presence of endohydrolase in a liquid and composition therefor | |
| US4337310A (en) | Method for the determination of α-amylase | |
| US3694318A (en) | Substrate and method for alpha-amylase assay | |
| CS254163B1 (sk) | Sposob přípravy ohromolytického substrátu na stanovenie /(1-3) glukanázy | |
| US4167621A (en) | Method for preparing starch ether derivatives | |
| CS237101B1 (sk) | Sposob přípravy vodorozpustných chromolytických polysacharidových enzýmových substrátov | |
| CZ476389A3 (cs) | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity | |
| CS261080B1 (sk) | Trojsodná sol' 0-(4-(N-etyl-N-fenylamíno)-6-(4-metyl-2-sulfobenzén- -l-azo-2-(l-hydroxy-3,6-bissulfonát-l-yl)amíno]-l,3,5-triazín-2-yl}škrobu | |
| CS240463B1 (cs) | Trojsodná sol' 4-(N-etyl-N-f0nylamíno)-8-(4-meíyll-2-sulíobenzén-l- -azo-2-(l-hydroxy-3,6-bÍ8Sulfonaft-l-yl)antíno ]-1,3,5-triazín- -2-ylhydroxyetylcelulózy a sposob jej přípravy | |
| DE1953189A1 (de) | An Cellulosederivate chemisch gekuppelte Amylasen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| CS233088B1 (cs) | ) Trojsodná soí 6- [2-sulfo-4-(4-amino-3-sulfo-l-antrachinón- amino/j anilino-4-(x- sulfoanilino)-l,3,5‘-triazín-2-yl-hydroxyetylcelulózy a sposob jej přípravy |