CS252747B1 - Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy - Google Patents
Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS252747B1 CS252747B1 CS861843A CS184386A CS252747B1 CS 252747 B1 CS252747 B1 CS 252747B1 CS 861843 A CS861843 A CS 861843A CS 184386 A CS184386 A CS 184386A CS 252747 B1 CS252747 B1 CS 252747B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- virus
- vaccine
- cell
- medium
- lyophilized
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 title 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 68
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 50
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 23
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 19
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 15
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 claims description 10
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims description 9
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 claims description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L dipotassium;(2s)-2-aminopentanedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O WDRWZVWLVBXVOI-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000013919 monopotassium glutamate Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 3
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000004467 Infectious Canine Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
232747
Clin. North Amer., 13, 1983, 3: 551 — 556).Pri aktívnej imunizácli získavajú postupnépřevahu živé vakcíny připravené z atenuova-ných homológnych kmeňov. Po ich apliká-cii dosahujú hladiny specifických protilá-tek úroveň, ako po prirodzenej infekcii vi-rulentným kmeňom. Protilátky sa zisťujú užna 3. deň po inokulácii a prezistujú najme-nej 2 roky (CARMICHAEL, L. E. — JOUR-BERT, J. C. — POLLOCK, R. V. H..: A modi-fied live canine parvovirus vaccine. II. Im-mune response. Oornell Vet., 73, 1983,: 13až 29, KALIN, D. E. EMERGY, J. B. — SMITH,M. J. — SPOTTS, A. M.: Safety and efficacyof modiffied-live canine parvovirus vaccine.Vet. Med. Smáli Anim. Clin., 78, 1983,: 1 739až 1746). Potomstvo od imúnnych matiekje chráněné proti infekcii materskými proti-látkami, z kterých 10 % získává transpla-centárne a 90 % kolostrom. Na druhej stra-ně tieto protilátky nepriaznivo ovplyvňujúimunitnú odpověď na podanie živých aleboinaktivovaných vakcín (CARMICHAEL, L. E.— JOUBERT, J. C. — POLLOCK, R. V. H.: Amodified live canine parvovirus vaccine. II.Immune response. Cornell Vet., 73, 1983,:13 — 29; BAKER, J. A. — ROBSON, D. S. —GILLESPIE, J. Η. — ET AL.: A nomographthat predicts the age to vaccinate puppiesagainst distemper. Cornell Vet., 49, 1959,:158 — 167; CARMICHAEL, L. E. — ROBSON, D. S. — BARNES, F. D.: Transfor and dech-ne of maternal infectious canine hepatitisantibody in puppies. Proč. Soc. Exp. Biol.Med., 109, 1962,: 677 — 681). Z experimen-tálnych aj praktických skúseností vyplývá,že podmienkou pre dosiahnutie dlhodobejchránenosti je očkovanie mláďat až vo ve-ku okolo 16 až 18 týždňov.
SpQsob kultivácie parvovírusu v buňko-vých kultúrach za účelom pomnoženia viru-sového materiálu na přípravu pokusnýchvakcín popísali viacerí antori (CARMICHAEL,L. E. — JOUBERT, J. C. — POLLOCK, R. V. H.:A modified live canine parvovirus strainwith novel plaque characteristics. I. Viralattenuation and dog response. Cornell Vet.,71, 1981, 4: 408 — 427; CHURCHILL, A. E.: Apo-tency test for inactivated smáli animialparvovirus vaccines using chicks. J. biol.Standard., 10, 1982,: 1 — 8; NARA, P. L. —WINTERS, K. — RUCE, J. B. et al.: Systemicand Local intestinal antibody response indogs given both infective and inactivatedcanine parvoviruses. Amer. J. Vet. Res., 44,1983, 11: 1989 — 1 995; BERGMAN, R. —SUNDQUIST, B. — STRÍÍMAN, L.: Producti-on of a feline parvoviruses vaccine usingmonolayer cell systems in roller flasks andmicrocarriers. Develop. biol. Standard., 55, 1984,: 77 — 78). Použili najma primárné kul-túry mačacích a psích embryomálnych bu-niek, alebo z nich připravené stabilně buňko-vé linie. Infekciu buniek robili obvykle za4 až 6 hodin po nasadení do kultivačnýchnádob. Nakolko množenie virusu nebolo do-prevádzané pravidelným vývojom cytopatic-kých zmien, kontrolovali obsah virusu v tka-nivových tekutinách na základe přítomnos-ti intranukleárnych teliesok, imunofluores-centnou metodou, připadne výšky hema-glutinačného titru. Pri infekcii buniek sačasto používal oplach fyziologickým rozto-koím a výměna kultivačného média. Velko-výrobná technológia výroby vakcín vyžadujevšak minimálně množstvo operácií a podlámožnosti priamu, pohotovu a presvedčivúmikroskopická kontrolu množenia virusu nazáklade špecifických cytopatických zmien.Táto úloha bola vyriešená následovně:
Bola připravená živá atenuovaná vakcínaproti parvoviróze psov, monovalentná, lyo-filizovaná, alebo vakcinačný komponent biva-lentnej lyofilizovanej vakcíny aj proti (psin-ke, ktorá obsahuje v 1 ml atenuovaný kmenparvovírusu psov CPVA-BN 80/82 CAMP V--290 v množstve najmenej 103 TKIDso častícvirusu a v případe bivalentnej vakcíny ob-sahuje ešte kmen virusu psinky CDV-F-BN10/83 CAPM V-289 v množstve najmenej 103TKIDso častíc virusu psinky.
Uvedený virusový kmeň bol adaptovanýna kultúry buniek stabilnej mačacej linieFE. Ako rastové médium bolo použité mini-málně esenciálně médium podlá Eaglea o-bohatené o bovinné sérum, v ktorom sa vi-rus pomnožoval pri teplote 36 až 38 °C podobu 4 až 8 dní. Po- vytvoření zřetelných cy-topatických zmien sa virusový materiál zmie-šal s lyofilízačným médiom tak, aby obsa-hoval minimálně 104 TKIDso častíc virusuenteritídy psov v 1 ml.
Virusový kmeň parvovírusu psov s ozna-čením CPVA-BN 80/82 a zbierkovým číslomCAPM V-290, uložený v Československejzbierke mikroorganizmov na Výskumno-m ú-stave veterinárneho lekárstva v Brně, Hud-cova 60, sme získali z povodně virulentnéhovirusu izolovaného z infekčných materiálovcestou sériových pasáží na mačacej bunko-vej linii označenej FE. Homogenita víruso-vej populácie a stabilita imunobiologickýchvlastností atenuovaného kmeňa sa dosiahlaizolováním linie metodou hraničných riede-ní so šesťnásobným opakováním.
Uvedený kmeň CPVA-BN 80/82 CAPM V--290 je charakterizovaný týmito imunobiolo-gickými vlastnosťami: 252747 1. Pri dodržaní definovaných kultivačnýchpodmienok je množenie virusu na stabilně]bunkovej linii FE doprevádzané vývojom vý-razných cytopatických zmien s obsahom 105až 106 TKID50. ml-1. 2. Vakcinačný virus je neškodný pre všet-ky věkové kategorie zvierat, pričom mláďa-tá bez materinských protilátok možu byťúspěšně imunizované počnúc vekom 6 týž-dňov. 3. Vakcinačný virus sa nevylučuje z orga-nizmu očkovaných zvierat a neprenáša sana spolustajnené vnímavé zvieratá. 4. Očkovanie vnímavých zvierat vyvoláchránenosť počnúc 4. dňom po podaní vak-cíny. 5. Imunita vyvolaná jednorázovým očko-váním zvierat starších ako 12 týždňov trvánajmenej jeden rok, a je doprevádzaná prí-tomnosťou špecifických protilátok.
Stabilná buňková línia FE vykazovala prijej získaní nedostatočné rastové vlastnosti,charakterizované pomalým množením bu-niek a neschopnosťou vytvořit súvlslý mo-nolayer. Uvedené vlastnosti bunkovej linienezodpovedali nárokom na intenzívně mno-ženie uvedeného virusu so získáním viruso-vých suspenzi! s dostatočnými titrami po-třebnými pre' výrobu vakcíny. Prejavom ne-dostatočných rastových vlastností bunkovejlinie bolo aj chýbanie vývoja cytopatickýchzmien po infekcii vakcinačným kmeňom, čonedovolovalo sledovat a hodnotit stupeň po-množenia virusu. Sériovým pasážovaním bun-kovej linie FE vo vybraných médiách (MEM,BEM, M199) s obsahom novorodeneckého sé-ra sme po 25 pasážach v, médiu MEM derivo-vali populáciu buniek, ktorá vykazuje ná-sledovně vlastnosti: 1. Líniu je možné pasážovať v pomere 1 : : 3 až 1 : 4 v 72- až 96hodinových interva-loch pomocou roztoku verzén-trypsín. 2. Najvhodnejšie rastové médium je mini-málně esenciálně médium podlá Eaglea sprídavkom 5 až 15 hmot. % bovinného sé-ra. 3. Buňková líniu je možné uchovávat vzmrazenom stave pri teplotách pod —100 °C,s použitím proitekčného média, ktoré obsa-huje 10 až 20 hmot. % dimetylsulfo-xidu. 4. Množenie vakcinačného virusu je pra-videlné sprevádzané výraznými cytopatic-kými změnami na 4. až 8. deň po infekciiv závislosti od dávky virusu.
Dosiahnuté titry virusu dovofujú realizo-vat efektívnu výrobu očkovacej látky protiparvoviróze psov. Výběr kultivačného média:
Kultivačně sérum s dobrými rastovými vlastnostami pre uvedená buňková líniu mo-že obsahovat nespecifické inhibitory naj-viac v titry 1: 32, stanovenom hemaglutinač-no-inhibičným testom.
Postup výroby vakcíny:
Spósob infekcie buniek linie FE vakcinač-ným vírusom: A.
Suspenzia buniek linie FE o hustotě 5 až10.106 buniek .ml-1 v rastovom médiu sazmieša s vakcinačným vírusom pri multipli-cite infekcie od 0,0001 do 0,001. Zmes viru-su a buniek sa inkubuje pri 36 až 38 °C po-čas 30 až 60 minút. Potom sa zmes virusu abuniek nariedi v rastovom médiu, ktoré před-stavuje minimálně esenciálně médium podláEaglea s pH 6,8 až 7,3 a prídavkom piatichaž desiatich hmot. % bovinného séra s vy-značenou kvalitou. B.
Do bunkovej suspenzie v rastovom médiusa přidá inokulum vakcinačného virusu omultiplicite infekcie 0,0001 až 0 001, ktorása ihned vyleje do kultivačnej nádoby. Tak-to připravená suspenzia buniek za účelompřípravy vakcíny sa kultivuje na skle, plas-tickej hmotě, štacionárnym sposobom, ale-bo v otáčených ffašiach („rolleroch“), při-padne na mikronosičoch, pri 36 až 38 °C po-čas 4 až 8 dní. Množenie virusu je sprevá-dzané výraznými cytopatickými změnami. C.
Infekcia prichytených buniek na kultivač-nom povrchu — po štvor- až šesťhodinovejinkubácii buniek linie FE pri 36 až 38 °C. Dopastového, média sa přidá inokulum vakci-načného virusu pri multiplicite infekcie0,0001 až 0,001. Inkubácia pokračuje pri 36až 38 °C počas 4 až 8 dní. Množenie virusuje rovnako ako v bode A a B sprevádzanévýraznými cytopatickými změnami.
Zmes infekčných tekutin sa získává vtedy,keď 80 až 90 percent monolayeru vykazujespecifické změny. Takto připravená viruso-vá suspenzia sa kontroluje na přítomnostnežiadácich kontaminujúcich mikroorganiz-mov a stanoví sa obsah virusu titráciou nabuňkách linie FE. Po ukončení kultivácie savirusový materiál zmieša s lyofilizačným mé-diom v pomere 50 až 75 hmot. % virusu k50 až 25 hmot. % lyofilizačného média a u-chováva pri —15 až —20 °C až do, lyofilizá-cie. Lyofilizačné médium je možné pri za-chovaní rovnakých hmotnostných pomerov 252747 pridávať až tesne před lyofilizáciou. Na pří-pravu lyofilizovanej vakcíny sa použijú in-fekčně tekutiny s obsahom minimálně 104TKIDso . ml-1 virusu, bakteriologicky steril-ně. Homogenizovaná virusová suspenzia slyofilizačným médiom, ktoré obsahuje sa-charózu, fosforečnanový pufor, glutamátsodný alebo draselný, bovinný albumin ale-bo iný zdroj bielkovín, dextrán alebo želati-nu (BOVARNICK, M. R. — MILLER, J. C. —SYNDER, J. C.: The influence of certain salts,amoinoacids, sugars, and proteins on the sta-bility of rickettsiae. J. Bacteriol., 59, 1950,:509 — 522) sa rozplňuje do ampuliek, aleboliekoviek, lyofilizuje, vzduchotěsně uzatvá-ra a uchovává pri chladničkovej teplote. Vak-cína připravená podlá uvedeného postupuobsahuje najmenej 103 TKIDso. ml-1 vakci-načného virusu, čo· představuje jednu imu-nizačnú dávku.
Použité lyofilné médium podfa BOVAR-NICK, M. R. — MILLER, J. C. — SNYDER,J. C.: The influence of certain salts, amino-acids, sugars, and proteins on the stabilityof risketsiae. J. Bacteriol 59, 1950,: 509 až622) je vhodné aj na lyofilizáciu iných dru-hov vakcinačných vírusov. Preto ak sa při-dá do infekčnej suspenzie obsahujúcej inýdruh vakcinačného virusu, například viruspsinky, je možné tieto suspenzie navzájommiešať v íubovoTnom pomere a lyofilizovať.
Uvedené příklady predmet vynálezu nijakneobmedzujú, ani nevyčerpávajú: 1. Sposoto kultivácie:
Suspenzia buniek, připravená pomocoupro-teolytických fermentov v rastovom mé-diu, ktoré obsahuje definované množstvo a-minokyselín, a vitamínov s prídavkom 10hmot. % séra určeného pre tkanivové kul-túry sa kultivuje na skle, plastickej hmotě,štacionárnym sposobom alebo v otáčanýchffašiach (rolleroch), připadne v suspenziina mikronosičoch. 2. Spdsob infekcie buňkových kultúr vakci-načným vírusom:
Buňkové kultúry, připravené a pěstovanépodfa bodu 1, sa infikuji! vakcinačným víru-som pri multiplicite infekcie najmenej 0,001nasledovnými sposobmi: a) suspenzia buniek linie FE o hustotě10.106 buniek .ml"1 v rastovom médiu sazmieša s vakcinačným vírusom pri multipli-cite infekcie 0,001. Zmes virusu a buniek sainkubuje pri 37 °C počas 30 rninút. Potom sazmes virusu a buniek nariedi v rastovom mé-diu, ktoré představuje minimálně esenciál- ně médium podfa Eaglea s pH 7,1 a prídav-kom 10 hmot. % bovinného séra. b) do suspenzie buniek linie FE o husto-tě 5.105 .ml-1 v rastovom médiu sa přidáinokulum vakcinačného virusu o multiplici-te infekcie 0,001, a infikovaná suspenzia saihned' vyleje do- kultivačnej nádoby. Taktopřipravená suspenzia buniek za účelom pří-pravy vakcíny sa kultivuje v Rouxových ffa-šiach pri teplote 37 °C počas 6 dní. Množe-nie virusu je sprevádzané výraznými cyto-patickými změnami. c) infekcia prichytených buniek na kulti-vačnom povrchu — po šesťhodinovej kulti-vácii buniek FE pri 37 °C sa do rastového-média přidá inokulum vakcinačného virusupri multiplicite infekcie 0,001. Inkubácia po-kračuje pri 37 °C počas 6 dní. Množenie vi-rusu je rovnako ako v bode a) a b) sprevá-dzané výraznými cytopatickými změnami. 3. Zber vakcinačného virusu:
Vakcinačný virus sa produkuje v rasto-vom médiu na buňkových kultúrach pěsto-vaných podfa bodu 1 a infikovaných podfabodu 2. Po vytvoření rozsiahlych cytopatic-kých zmien stanovených mikroskopicky sakultivácia ukončí a do rastového média spomnoženým vírusom sa přidá priamo dokultivačných nádob vhodné lyofilizačné mé-dium v pomere 67 hmot. % vírusovej suspen-zie a 33 hmot. % lyofilizačného média. Zmessa ďalej uchovává v kultivačných nádobáchv zmrazenom stave až do lyofilizácie.
Homogenizovaný virusový materiál s po-žadovaným obsahom infekčných jednotiek(najmenej 104 TKIDso. ml-1), ktorý neobsa-huje kontaminujúce mikroorganizmy sa roz-plňuje do ampuliek, lyofilizuje, vzduchotěs-ně uzatvorí a uchovává pri chladničkovejteplote. Vakcína připravená podfa uvedené-ho postupu obsahuje najmenej 103·0 TKIDso. . ml"1 vakcinačného· virusu. 4. Příprava kombinovanej vakcíny:
Lyofilizačné médium, ktoré obsahuje sa-charózu, fosforečnanový pufor, glutamátsodný alebo draselný, bovinný albumin ale-bo iný zdroj bielkovín a želatinu alebo dex-trán vyhovuje aj pre lyofilizáciu iných dru-hov vakcinačných vírusov. Připravená vakcí-na proti parvoviróze psov sa mieša so živouatenuo-vanou vakcínou proti psinke v 1'ubo-vofnom pomere, rozplňuje do ampuliek, lyo-filizuje, vzduchotěsně uzatvorí a uchovávápri chladničkovej teplote. Bivalentná vak-cína připravená podfa uvedeného postupuobsahuje najmenej 103 TKIDso. ml'1 vakci-načných vírusov psinky a parvovírusu psov.
Claims (6)
- 252747 10 PREDMET1. Živá atenuovaná vakcína proti parvo-viróze psov monovalentná, lyofilizovaná, a-lebo vakcinačný komponent bivalentnej lyo-filizovanej vskcíny aj proti psinke, vyzna-čujúci sa tým, že obsahuje v 1 ml atenuova-ný kmeň parvovírusu psov CPVA-BN 80/82CAPN V-290 v množstve najmenej 103 TKIDsočastíc virusu a v případe bivalentnej vakcí-ny obsahuje ešte kmeň virusu psinky CDV--F-BN 10/83 CAPM V-289 v množstve najme-nej 103 TKIDso častíc virusu psinky.
- 2. Živá atenuovaná vakcína podlá bodu 1,alebo vakcinačný komponent bivalentnej lyo-filizovanej vakcíny aj proti psinke, vyzna-čujúci sa tým, že obsahuje lyofilizačné mé-dium v množstve 25 až 50 hmot. %, vztiah-nuté na hmotnost celej vakcíny.
- 3. Sposob výroby vakcíny pódia bodov 1a 2, vyznačujúci sa tým, že atenuovaný kmeňparvovírusu psov sa pomnožuje na stabil-nej mačacej linii buniek FE v minimálnomesenciálnom médiu pódia Eaglea s pH 6,8až 7,3 obohatenom o bovinné sérum pri tep-lotě od 36 do 38 QC po dobu 4 až 8 dní, aždo vytvorenia výrazných cytopatických zmiena potom sa virusový materiál zmieša s lyo-filizačným médiom tak, aby obsahoval mi-nimálně 104 TKIDso .ml-1.
- 4. Sposob výroby vakcíny pódia bodu 3,vyznačujúci sa tým, že ako přísada do kul-tivačného média sa použije bovinné sérums definovaným obsahom nespecifických in-hibítorov proti odpovedajúcemu virusu. VYNALEZU
- 5. Spdsob výroby vakcíny pódia bodov 3a 4, vyznačujúci sa tým, že infekcia buniekna produkciu virusu sa robí buď tak, že buň-ková suspenzia s obsahom 5 až 10.10s. mlna _1 buniek v rastovom médiu sa infikujevírusom pri MOI najmenej 0 0001 na buňku,inkubuje pri 36 až 38 °C počas 30 až 60 mi-nút, potom sa 10 až 20 krát nariedi v rasto-vom médiu, vyleje do' kultivačných nádoba kultivuje pri teplote 36 až 38 °C až do zbe-ru virusu alebo buňková suspenzia s obsa-hom 4 až 8.105. ml·1 buniek v rastovommédiu sa infikuje vírusom pri MOI najme-nej 0,0001 na buňku a inkubuje pri 36 až38 C až do zberu virusu alebo do kultivač-ných nádob sa nasadzuje buňková suspenziav rastovom médiu s obsahom 4 až 8.105.. ml“1 buniek, a kultúry sa po· 4- až 6hodi-novej inkubácii pri 36 až 38 °C infikujú pria-mo do rastového média vírusom pri MOI naj-menej 0,0001 na buňku a inkubujú až dozberu virusu.
- 6. Sposob výroby vakcíny podl'a bodov 3až 5, vyznačujúci sa tým, že sa k virusovýmsuspenziám přidává po ukončení inkubácielyoifilizačné médium, ktoré obsahuje sacha-rózu, fosforečnanový pufor, glutamát sodnýalebo draselný, bovinný albumin alebo inýzdroj bielkovín a želatinu alebo dextrán azmes sa uchovává až do lyofilizácie v zmra-zenom stave pri teplotách vyšších ako —20stupňov Celzía, alebo sa lyoíilízuje okamži-té.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS184386A1 CS184386A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS252747B1 true CS252747B1 (cs) | 1987-10-15 |
Family
ID=5401109
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
| CS861842A CS252746B1 (sk) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti, panleukopénii mačiek a sposob jej přípravy |
| CS861843A CS252747B1 (cs) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855593A CS252736B1 (cs) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Živá atenuovaná vakcína proti parvovírusovej enteritíde noriek a sposob jej přípravy |
| CS861842A CS252746B1 (sk) | 1985-07-31 | 1986-03-17 | Živá atenuovaná vakcína proti, panleukopénii mačiek a sposob jej přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (3) | CS252736B1 (cs) |
-
1985
- 1985-07-31 CS CS855593A patent/CS252736B1/cs unknown
-
1986
- 1986-03-17 CS CS861842A patent/CS252746B1/cs unknown
- 1986-03-17 CS CS861843A patent/CS252747B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS252736B1 (cs) | 1987-10-15 |
| CS252746B1 (sk) | 1987-10-15 |
| CS184286A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS559385A1 (en) | 1987-03-12 |
| CS184386A1 (en) | 1987-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI398272B (zh) | 化學定義的安定劑 | |
| EP1123710B1 (en) | Freeze-dried hepatitis a attenuated live vaccine and its stabilizer | |
| US5597721A (en) | Preparation of antigens of and of vaccines for the virus of mystery disease, antigens and vaccines obtained for the prevention of this disease | |
| McFerran et al. | Some properties of an avirulent Newcastle disease virus | |
| CN102470170B (zh) | 用作轮状病毒疫苗的组合物及其方法 | |
| FI85222B (fi) | Hund parvovirusstam och foerfarande foer framstaellning av ett hund parvovirusvaccin. | |
| US3080291A (en) | Serial passage of distemper virus in tissue cultures of chick embryo and canine tissue and vaccine therefrom | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| Blaškovič et al. | Experimental infection of weanling pigs with A/Swine influenza virus: 2. The shedding of virus by infected animals | |
| US3961046A (en) | Mumps vaccine and preparation thereof | |
| US4279893A (en) | Vaccine against Newcastle fowl disease, method for preparing and use thereof | |
| CN103789274A (zh) | 一种兔病毒性出血症病毒重组亚单位疫苗及其制备方法 | |
| US2965544A (en) | Tissue culture propagated canine distemper virus and vaccine thereof | |
| CS252747B1 (cs) | Živá atenuovaná vakcína proti parvoviráze psov a spósob jej přípravy | |
| CN103977400B (zh) | 一种用细胞系生产鸡马立克氏病活疫苗的方法 | |
| US2934473A (en) | Bovine rhinotracheitis vaccine and methods of production | |
| CA1097219A (en) | Respiratory syncytial vaccine | |
| US4145252A (en) | Respiratory syncytial vaccine | |
| US4215107A (en) | Parainfluenza virus vaccine and its preparation | |
| CN112370531B (zh) | 一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用 | |
| US20070111211A1 (en) | Integrated viral complexes, methods of production thereof, vaccines containing same and methods of use thereof | |
| US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
| CN112402599B (zh) | 一种犬用犬瘟热、细小病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| US3585108A (en) | Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same | |
| US4004974A (en) | Live virus culture vaccine against carnivore distemper and method of producing same |