CS245797B2

CS245797B2 - Způsob výroby muramylpeptidů

Info

Publication number: CS245797B2
Application number: CS848406A
Authority: CS
Inventors: Albert Hartmann; Oskar Wacker; Gerhard Baschang; Lajos Tarcsay
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1982-07-23
Filing date: 1983-07-21
Publication date: 1986-10-16
Also published as: CS840684A2

Description

Vynález se týká způsobu výroby nových muramylpeptidů obecného vzorce I

(DJ (L)O lí

OH

II

O R ll i

C_x

O⁴ 0R^S ti

RŽ

C-O-CH

CH, 1 (sni I ⁴0 v němž

R² znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxymethylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

R⁵ znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ,10 β^ιυ 0

R³ znamená vodík nebo methylovou skupinu,

R⁷ znamená popřípadě hydroxyskupinou substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku,

R⁸ znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

X znamená kyslík nebo skupinu NH,

Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

R⁹ a R¹⁰ znamenají nezávisle na sobě alkylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku, jakož i solí těchto sloučenin, které mají cenné farmakologické vlastnosti a mohou se používat jako účinné složky léčiv.

Sloučeniny obecného vzorce I mají v případě asymetrické substituce na C-R³ (Dj-konfiguraci, na C—R⁷ (L)-konfiguraci, na C—C—OR⁸ (Dj-konfiguraci, ve zbytku Y (L j-konfiguraci a na C—1 zbytku D-glukosy a- a/nebo β-konfiguraci, tzn., že sloučeniny vzorce I se mohou vyskytovat jako čisté anomery nebo jako směsi anomerů.

K rozlišení konfigurace na středním atomu uhlíku glycerinové části se podle pravidel IUPAC v souhlase se stereospecifickým číslováním atomů uhlíku glycerinové části, používá označení prefixem ,,sn“. Nejhořejší atom uhlíku ve Fischerově projekci vertikálního uhlíkatého řetězce, přičemž hydroxyskupina na atomu uhlíku v poloze 2 je vlevo, dostává číslo 1. U sloučenin podle vynálezu je zbytek fosforečné kyseliny vázán na atom uhlíku v poloze 3 ve smyslu stereospecifického číslování.

Výraz „nižší“ používaný v další části označuje zbytky s 1 až 7 atomy uhlíku, zejména s 1 až 4 atomy uhlíku.

Nižší alkanoylová skupina znamená například propionylovou skupinu, butyrylovou skupinu nebo hexanoylovou skupinu, především však acetylovou skupinu.

Nižší alkylová skupina je představována například n-propylovou skupinou, n-butylovou skupinou, isobutylovou skupinou, sek.butylovou skupinou, terc.butylovou skupinou, dále n-pentylovou skupinou, n-hexylovou skupinou nebo n-heptylovou skupinou, především methylovou skupinou, ethylovou skupinou nebo isopropylovou skupinou.

Jednotlivě znamená alkylový zbytek ve významu symbolu R², zejména methyl, jestliže R³ znamená methyl, nebo znamená ethyl, jestliže R³ znamená vodík; alkylový zbytek R⁵ znamená zejména methyl, alkylový zbytek R⁷ znamená zejména methyl, ethyl nebo isopropyl a alkylový zbytek R⁸ znamená zejména alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku, zejména přímý alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku, především pak n-butyl.

Alkylovou skupinou s 1 až 3 atomy uhlíku, která je substituována hydroxyskupinou, ve významu symbolu R⁷ je zejména hydroxymethylová skupina nebo 1-hydroxyethylová skupina.

Alkylidenovou skupinou ve významu symbolu Y je dvojvazný zbytek, ve kterém obě vazby vycházejí ze stejného atomu uhlíku, výhodně zbytek vázaný v poloze 1,1, jako zejména methylenový zbytek nebo ethylidenový zbytek, dále propylidenový zbytek nebo isobutylidenový zbytek.

Alkylovou skupinou s 11 až 17 atomy uhlíku ve významu symbolu R⁹ nebo R¹⁰ je přímá nebo rozvětvená, zejména však přímá alkylová skupina, především přímá alkylová skupina s lichým počtem atomů uhlíku, jako je n-undecylová skupina nebo n-tridecylová skupina, především přímá alkylová skupina s 15 až 17 atomy uhlíku s lichým počtem atomů uhlíku, tj. n-heptadecylová skupina nebo především n-pentadecylová skupina.

Alkenylovou skupinou s 11 až 17 atomy uhlíku ve významu symbolů R⁹ nebo R¹⁰ je zejména hepta-8(Z)-decenylová skupina.

Proton vázaný přes atom kyslíku na atom fosforu je kyselý a může se působením bází snadno odštěpit a nahradit jiným kationtem. Při hodnotě pH 7 se sloučeniny vzorce I vyskytují tudíž zcela nebo z převážné části ve formě soli. Tyto soli, jakož i směsi soli a kyseliny náleží rovněž k předmětu vynálezu. Vynález se týká zejména farmaceuticky použitelných, netoxických solí sloučenin vzorce I. Jsou to především soli s kovy nebo amoniové soli, jako jsou soli s alkalickými kovy nebo soli s kovy alkalických zemin, například soli sodné, draselné, horečnaté nebo vápenaté, jakož i amonné soli nebo soli s vhodnými organickými aminy, jako s nižšími alkylaminy, například s triethylaminem. Za účelem izolace nebo čištění se mohou používat také farmaceuticky nevhodné soli. K terapeutickému účelu se však používá pouze farmaceuticky použitelných, netoxických solí, které jsou tudíž výhodné.

Oproti sloučeninám, které již byly dříve popsány, mají sloučeniny podle vynálezu silně snížené nežádoucí vedlejší účinky, zejména pak jsou mnohem méně pyrogenní, tj. prakticky .nejism vůbec pyirogenní. Toto zjištění má značný význam, protože aplikace pyrogenní látky může způsobit podle okolností tepelný šok, takže bezpečné použití je zajištěno jen za stálého lékařského dohledu a použití určitých aplikačních forem, jako intravenosní aplikace, nepřichází v úvahu.

Zkoušení pyrogenity se může provádět podle předpisu, který je uveden v publikaci Europaische Pharmakopoe, sv. 2, str. 56 až 59 (1971) na králících. Podle tohoto předpisu se například dokonce při subkutánní aplikaci vysoké dávky, jako je 30 mg/kg sodné soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a-n-butylester-Cy ] -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu (sloučenina IJ nedá zjistit žádný pyrogenní účinek.

Naproti tomu je stejná dávka sodné soli

N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-35

-hydroxyfosforyloxyjethylamidu silně pyrogenní.

Sloučeniny vyráběné způsobem podle vynálezu se mohou používat způsobem popsaným v evropské přihlášce vynálezu číslo 0 025 495.

Na základě své výtečné snášitelnosti jsou však sloučeniny vyráběné podle vynálezu vhodné zejména k profylaxi a terapii infekčních onemocnění, přičemž k silnému účinku nedochází pouze v případě původců bakteriálních onemocnění, nýbrž i překvapivě v případě původců virových onemocnění. Posléze uvedené zjištění nebylo dosud popsáno a má značný praktický význam vzhledem k tomu, že farmaceutika k léčení chorob způsobených viry byla dosud k dispozici pouze ve zcela nedostatečné míře. Pozoruhodné je především dlouhé profylaktické nebo terapeutické trvání účinku od několika dnů až do několika týdnů po jednorázové aplikaci sloučenin vyráběných podle vynálezu, jakož i široké spektrum původců virových chorob, proti kterým jsou tyto sloučeniny účinné.

Muramylpeptidy vzorce I se mohou používat zejména k profylaxi a terapii chorob, které jsou vyvolávány dále blíže označenými viry [k nomenklatuře srov. J. L. Melnick, Prog. med. Virol., 28, 214—232 (1980) a 28, 208 — 221 (1982)]:

DNA viry s kubickou symetrií a neobalenou nukleokapsidou,

DNA-viry s obaleným virionem, jakož i

RNA viry s kubickou symetrií a

RNA viry s helíkoidélní symetrií kapsidy.

Výhodně se sloučeniny vzorce I používají v případě DNA virů s obaleným virionem a kubickou symetrií kapsidy, v případě RNA virů s kubickou symetrií kapsidy s neobaleným virionem v případě RNA virů s helikoidální symetrií kapsidy, v nichž je obal nukleokopsidy u povrché membrány, avšak také v případě čeledí Adenoviridae, Poxviridae a Coronaviridae, jako zejména v případě lidských koronavirů.

Především se sloučeniny vzorce I používají v případě čeledi Herpesviridae, Picornaviridae a myxovirů, avšak také v případě mastadenovirů, jako zejména v případě lidských adenovirů, v případě chordopoxvirů, jako hlavně orthopoxvirů, jako zejména například vacciniavirů, v případě Reoviridae, zvláště (zejména lidských) rotavirů, jakož i v případě Calicivlridae a Rhabfloviridae, jako především vesikulovirů lidí, jakož i koní. hovězího dobytka a prasat.

Hlavně pak se sloučenin vzorce I používá v případě α-herpesvirů, rhinovirů, kardiovirů a Orthomyviridae, avšak také v případě jS-herpesvirů, jako zejména lidských cytomegalovirů, v případě afthovirů, především afthovirů sudokopytníků, jako hlavně hovězího dobytka, jakož i v případě Paramyxoviridae, především pneumovirů, například respiračních syncitialvirů lidí, a vedle toho mcrbillivirů nebo paramyxovirů, jako například lidských parainfluenzavirů včetně sendaivirů.

Především pak se sloučenin vzorce I vyráběných postupem podle vynálezu, používá v případě simplexvirů, například lidských Herpes simplex virů typů 1 a 2, dále pak v případě lidských encefalomyocarditisvirů a v případě virů Influenza, jako je hlavně Influenza A a Influenza B virus, například v případě virů uvedených v příkladech.

Muramylpeptidy vzorce I se mohou používat k profylaxi nebo k terapii virových infekcí tím, že se aplikují enterálně nebo parenterálně, především společně s vhodnými pomocnými látkami nebo nosnými látkami. Výhodně se aplikují na sliznici, například intranasálně, rektálně, vaginálně nebo na oční spojivku, nebo orálně. K antivirovému účinku dochází však také při aplikaci jinými způsoby, například subkutánně, intravenosně, intramuskulárně nebo při aplikaci na normální pokožku.

Nejvýhodnější způsob aplikace závisí kromě jiného na druhu příslušného viru. Tak například v případě respiračních virů je v mnoha případech výhodná intranasální aplikace. Dávkování účinné látky závisí kromě jiného na druhu teplokrevného živočicha, na obranné schopnosti organismu, na způsobu aplikace a na druhu viru.

Sloučeniny vyráběné postupem podle vynálezu mají další velmi zajímavou vlastnost, která spočívá v inhibici tvorby metastás u některých nádorů, zejména plicních nádorů, jak lze experimentálně prokázat na modelu melanomu B16-BL6 a v případě Lewisova plicního karcinomu, přičemž je zvláště výhodná aplikace do liposomů.

Zejména se vynález týká způsobu výroby sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo hydroxymethylovou skupinu, R³znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁵ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R·' znamená alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo hydroxymethylovou skupinu. R³ znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku., X znamená kyslík nebo skupinu. NI-I. Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a R⁹ a R¹⁰znamenají nezávisle na sobě přímou alkylovou. skupinu s 11 a 17 atomy uhlíku nebo deskarbonyloleoylovou skupinu, a jejich solí.

Především pak se vynález týká způsobu výroby sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, R³ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁵ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁷ znamená alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, R⁸ znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, X znamená kyslík nebo skupinu NH, Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku a R⁹ a R¹⁰ znamenají nezávisle na sobě přímou alkylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku s lichým počtem atomů uhlíku nebo deskarbonyloleoylovou skupinu, a jejich solí.

Zvláště pak se vynález týká způsobu přípravy shora uvedených sloučenin obecného vzorce I, v němž R⁸ znamená některý z uvedených alkylových zbytků, a jejich solí.

Zvláště pak se vynález týká způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, R³ znamená vodík, jestliže R² znamená ethylovou skupinu, nebo znamená methylovou skupinu, jestliže R² znamená methylovou skupinu, R⁵ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁷ znamená alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, R⁸ znamená přímou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, X znamená kyslík nebo skupinu NH, Y znamená ethylidenovou skupinu a R⁹ a R⁴⁰ znamenají nezávisle na sobě přímou alkylovou skupinu s 15 až 17 atomy uhlíku s lichým počtem atomů uhlíku a jejich solí.

Především se vynález týká způsobu výroby shora uvedených sloučenin obecného vzorce I, v němž R³ znamená methylovou skupinu, R⁵ znamená vodík, R⁸ znamená n-butylovou skupinu, X znamená skupinu NH a/nebo R⁹ stejně jako R¹⁰ znamenají n-pentadecylovou skupinu, a jejich solí, jakož i sloučenin vzorce I uvedených v příkladech.

Nové sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli se podle vynálezu vyrábějí tím, že se ve sloučenině obecného vzorce la

(L) fl 0«

X-y-C-NH-CHjCHjO-P-O-CHj.

θ?' ¹

V-O-CH $ CH?

O

I v němž

R¹, R⁴ a R® znamenají atomy vodíku, a ostatní symboly mají stejný význam jako v obecném vzorci I, přičemž alespoň jeden ze zbytků R¹, R², R⁴, R⁸, R⁷, R³ nebo hydroxylová skupina na atomu fosforu je přítomen v chráněné formě, odštěpí chránící skupina, popřípadě chránící skupiny, načež se získaná sloučenina vzorce I popřípadě převede na sůl nebo se získaná sůl převede na jinou sůl.

Chrániči skupiny, jejich zavedení a odštěpování se popisuje například v „Protective Groups in Órganic Chemístry“, Plenům Press London, New York 1973, a v „Methoden der organischen Chemie“, Houben-Weyl, 4. vydání, sv. 15/1, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Charakteristické pro chránící skupiny je, že jsou snadno, tj. aniž by docházelo k nežádoucím vedlejším reakcím, odštěpi(/a.;

telné například solvolyticky, redukčně, fotolyticky nebo také za fyziologických podmínek.

Chránícími skupinami liydroxyskupiny jsou například acylové skupiny, jako popřípadě například halogenem substituovaná nižší alkanoylová skupina, jako 2,2-dichloracetylová skupina, nebo acylové zbytky poloesterů kyseliny uhličité, zejména terc.butyloxykarbonylová skupina, popřípadě substituovaná benzyloxykarbonylová skupina, například 4-niírobenzyloxykarbonylová skupina, nebo difenylmethoxykarbonylová skupina, nebo 2-halogen(nižší)alkoxykarbonylová skupina, jako 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová skupina, dále tritylová skupina nebo formylová skupina, nebo organické silylové nebo stannylové skupiny, dále snadno odštěpltelné etherifikující skupiny, jako terč.

(nižšíJalkylová skupina, například terc.butylová skupina, 2-oxa- nebo 2-thiaalifatické nebo -cykloalifatické uhlovodíkové zbytky, především 1- (nižší) alkoxy (nižší) alkylová skupina nebo l-(nížší)alkylthio(nižší)alkylová skupina, například methoxymethylová skupina, 1-methoxyethylová skupina, 1-ethoxyethylová skupina, 1-methylthiomethylová skupina, 1-methylthioethylová skupina nebo 1-ethylthioethylová skupina, nebo 2-oxa- nebo 2-tbiacvkloalkylová skupina s 5 až 6 atomy v kruhu, například tetrahydrofurylová skupina nebo 2-tetrahydropyranylová skupina ne'o odpovídající thiaanalogy, jakož i popřípadě substituovaná l-fenyl( nižší jalkylová skupina, jako popřípadě substituovaná benzylová skupina nebo difenylmethylová skupina, přičennž jatoo substituenty fenylových skupin přichází v úvahu například halogen, jako chlor, nižší alkoxyskupina, jako methoxyskupina a/nebo nitroskupina.

Kyselá skupina fosforečné kyseliny může být chráněna v esterifikované formě, přičemž jako esterifikující zbytky jsou výhodné takové zbytky, které se mohou regloselektivně odštěpit, například methylesterová skupina, která se může odštěpit například alkalickým zmýdelněním, nebo zejména hydrogenolyticky odštěpitelné skupiny, například benzylesterové skupiny nebo fenylesterové skupiny, přičemž benzylesterové skupiny se mohou odštěpit například v přítomnosti paládíoivýcih kiaitalyzátorů, jako paládia. na uhlí a fenylesterové skupiny se mohou odštěpit například v přítomnosti platinových katalyzátorů nebo smíšených katalyzátorů obsahujících pileitinu a paládium.

Dvojvaznými chránícími skupinami hydroxyskupiny jsou zejména popřípadě substituované alkylidenové nebo cykloalkylidenové skupiny. Alkylidenovou skupinou je v nich zejména nižší alkylidenová skupina, jako isopropylidenová skupina a cykloalkylldenovou skupinou je především cyklopentylidenová nebo cyklohexylidenová skupina. Jako substituenty alkylidenových zbytků nutno uvést zejména aromatické zbytky, například fenylové zbytky.

Odštěpení chránících skupin uvedených v popisu vynálezu se daří o sobě známým způsobem solvolýzou, zejména hydrolýzou, alkoholýzou nebo acidolýzou, nebo v některých případech také opatrnou redukcí, popřípadě postupně nebo současně. Silylové chránicí skupiny se odštěpují výhodně působením fluoridů, například působením tetraethylamoniumfluoridu.

Odštěpení shora uvedených dvojvazných chránících skupin hydroxyskupiny se provádí například zředěnou kyselinou, nejlépe při pH 2 až 4, například při pH 3 o sobě známým způsobem, například pomocí kyselého iontoměniče, zejména iontoměniče se zbytky sulfonové kyseliny, jako je Amberlite IR-120 (styrenová pryskyřice se silně kyselými sulfoskupinami) nebo Dowex 50 (polystyrensulfonové kyseliny) nebo působením silné anorganické nebo organické kyseliny, jako chlorovodíkové kyseliny, bromovodíkové kyseliny, sírové kyseliny nebo sulfonové kyseliny, například methansulfonové kyseliny, nebo působením fenylsulfonové kyseliny, která je popřípadě substituována v aromatic kém kruhu, jako p-toluensulfonové kyseliny, nebo trifluoroctové kyseliny.

Výchozí látky potřebné k provádění shora uvedených postupů jsou známé nebo se mohou vyrábět o sobě známými postupy.

Soli sloučenin vzorce I vznikají většinou již při zpracování, například při dialýze proti roztoku pufru o pH 7. Tyto soli se mohou vyrábět o sobě známým způsobem. Tak lze vyrábět soli sloučenin vzorce I například reakcí se sloučeninami kovů, jako se solemi vhodných organických karboxylových kyselin s alkalickým kovem, například se sodnou solí α-ethylkapronové kyseliny, nebo s anorganickými sloučeninami alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, jako jsou odpovídající hydroxidy, uhličitany, nebo hydrogenuhličitany, jako je hydroxid, uhličitan nebo hydrogénuhličitan sodný nebo draselný, nebo s příslušnými sloučeninami vápníku nebo s amoniakem nebo s vhodnými organickými aminy, přičemž se použi vá výhodně stechiometrických množství nebo malého nadbytku solitvorného činidla.

Směsi isomerů se mohou dělit o sobě známým způsobem, například frakční krystalizací, chromatografií atd. na jednotlivé isomery, racemáty, například za vzniku derivátů s opticky aktivními sloučeninami a dělením takto získaných směsí diastereomerů na opticky aktivní anlfcipioidy.

Shora popsané postupy, včetně postupů k odštěpení chránících skupin a přídavná opatření těchto postupů se provádějí o sobě známým způsobem, například v přítomnosti nebo v nepřítomnosti rozpouštědel a ředidel, a pokud je to nutné, v přítomnosti kondenzačních činidel nebo katalyzátorů, při snížené nebo zvýšené teplotě, například v rozsahu teplot asi od —20 do 150 °C, v uzavřené nádobě a/nebo v atmosféře inertního plynu, například v atmosféře dusíku.

Přitom se s přihlédnutím ke všem substituentům přítomným v molekule pracuje, pokud je to potřebné, například za přítomnosti snadno hydrolyzovatelných zbytků, zejména za šetrných reakčních podmínek, jako jsou krátké reakční doby, za použití mírně kyselých něho bazických činidel v nízkých koncentracích, za použití stechiometrických vzájemných poměrů a stejně tak se přihlíží k volbě vhodných katalyzátorů, rozpouštědel, podmínek teplotních a/nebo tlakových.

Vynález se týká také těch provedení postupu, při kterých se jako výchozí látky používá sloučeniny, která byla získána jako meziprodukt na libovolném stupni postupu a provedou se chybějící stupně postupu nebo se postup na libovolném stupni přeruší nebo se výchozí látka tvoří za reakčních podmínek nebo se používá ve formě reaktivního derivátu nebo soli. Přitom se vychází výhodně z takových výchozích látek, které postupem podle vynálezu poskytují sloučeniny, které byly shora označeny jako zvláště cenné.

Sloučeniny vyráběné podle vynálezu se mohou používat ve formě farmaceutických přípravků, které obsahují farmakologicky účinné množství účinné látky, popřípadě společně s farmaceuticky použitelnými nosnými látkami, které jsou vhodné pro enterální, například orální nebo rektální, nebo parenterální aplikaci a které mohou být anorganického nebo organického původu v pevném nebo kapalném stavu. Tak se používá tablet nebo želatinových kapslí, které obsahují účinnou látku společně s ředidly, například s laktosou, dextrosou, sacharosou, mamutem, sorbitem, celulosou a/nebo glycerinem, a/nebo lubrikačními látkami, jako je například křemelina, mastek, stearová kyselina nebo jejich soli, jako je hořečnatá nebo vápenatá sůl stearové kyseliny, a/nebo s polyethylenglykolem. Tablety mohou rovněž obsahovat pojidla, například křemičitan hořečnato-hllnitý, škroby, jako je kukuřičný škrob, pšeničný škrob nebo rýžový škrob, želatinu, methylcelulosu, natriumkarboxymethylcelulosu a/nebo polyvinylpyrrolidon a popřípadě látky umožňující rozpad, jako jsou například škroby, agar, kyselina alginová nebo její sůl, jako alglnát sodný a/nebo šumivé směsi, nebo adsorpční prostředky, barviva, chuťové přísady a sladidla. Dále je možné používat farmakologicky účinné sloučeniny, vyráběné podle vynálezu ve formě parenterálně aplikovatelných přípravků nebo ve formě infusních roztoků. Takovými roztoky jsou výhodně isotonické vodné roztoky nebo suspenze, přičemž tyto přípravky se mohou vyrábět před upotřebením jako je tomu například v případě lyofillzovaných přípravků, které obsahují účinnou látku samotnou nebo společně s nosnou látkou, například s mannitem. Farmaceutické přípravky se mohou sterilovat a/nebo mohou obsahovat pomocné látky, například konzervační prostředky, stabilizátory, smáčedla a/nebo emulgátory, pomocná rozpouštědla, soli k regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Uvedené farmaceutické přípravky, které pokud je to žádoucí, mohou obsahovat další farmakologicky účinné látky, jako antibiotika, se vyrábějí o sobě známým způsobem, například běžnými mísicími, granulačními, dražovacími, rozpouštěcími nebo lyofilizačními postupy a obsahují asi 0,001 až 99 %, zejména 0,01 až 10 °/o, především 0,1 až 5 % účinné látky, popřípadě účinných látek, přičemž koncentrace účinné látky pod 1 % je vhodná zejména pro přípravky, které se aplikují místně.

Pro profylaxi a terapii virových infekcí jsou zvláště vhodné následující místně použitelné aplikační formy:

krémy, masti nebo pasty s obsahem účinné látky od 0,001 až do 1 %, zejména 0,01 až 0,1 %, například 0,05 °/o, například masti k intranasální aplikaci nebo rtěnky, nebo vodné roztoky s obsahem účinné látky 0,001 až 1 %, zejména 0,05 až 0,5 %, například 0,1 procent, výhodně isotonické, sterilní a fyziologicky použitelné roztoky, například oční kapky, výhodně v mikronádobkách pro jelnorázové použití, nebo spreje k aplikaci v dutině ústní a hltanu.

Zvláště vhodné jsou farmaceutické přípravky popsané v příkladech.

Krémy jsou představovány emulzemi oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Jako olejový základ se používá především mastný alkohol, např. laurylalkohol, cetylalkohol, nebo stearylalkohol, mastné kyseliny, například palmltová kyselina nebo stearová kyselina, kapalné až pevné vosky, například isopropylmyristát, vosk z ovčí vlny nebo včelí vosk a/nebo uhlovodíky, například vaselina (petrolátum) nebo parafinový olej. Jako emulgátory přicházejí v úvahu povrchově aktivní látky s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou příslušná neionogenní emulgátory, například estery mastných kyselin s polyalkoholy nebo s jejich adukty s ethylenoxidem, jako jsou estery mastných kyselin s polyglycerinem nebo estery mastných kyselin polyoxyethylensorbitanu (Tweensj, dále polyoxyethylenethery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenestery mastných kyselin, nebo odpovídající ionogenní emulgátory, jako jsou soli sulfatovaných mastných alkoholů s alkalickými kovy, například natriumaurylsulfát, natrlumcetylsulfát nebo natriumstearylsulfát, které se používají obvykle v přítomnosti mastných alkoholů, například cetylalkoholu nebo stearylalkoholu. Přídavky k vodné fázi jsou kromě jiného prostředky, které zabraňují vysychání krémů, například polyalkohol, jako glycerin, sorbit, propylenglykol a/nebo polyethylenglykoly, dále konzervační prostředky, vonné látky, atd.

Mastmi jsou emulze vody v oleji, které obsahují až 70 %, výhodně však asi od 20 do 50 % vody nebo vodné fáze. Jako mastná fáze přicházejí v úvahu především uhlovodíky, například vaselina, parafinový olej a/ /nebo tvrdý parafin, přičemž mastná fáze obsahuje ke zlepšení schopnosti vázat vodu výhodně vhodné hydroxysloučeniny, jako mastné alkoholy, nebo jejich estery, například cetylalkohol nebo alkoholy vosku z ovčí vlny, popřípadě vosk z ovčí vlny. Emulgátory jsou představovány odpovídajícími lipofilními látkami, jako je ester mastné kyseliny a sorbitanu (Spans), například sorbitanoleát a/nebo sorbitanisostearát. Jako přídavků ve vodné fázi se používá například prostředků udržujících vlhkost, jako jsou polyalkoholy, například glycerin, propylenglykol, sorbit a/nebo polyethylenglykol, dále konzervační prostředky, vonné látky atd.

Masti s mastnou složkou jsou bezvodé a obsahují jako základ zejména uhlovodíky, například parafin, vcsehnu a/nebo kapalné parafiny, dále přírodní nebo polosyntetické tuky, například triglyeerid kyseliny kokosového tuku nebo výhodně ztuženého oleje, například hydrogenovaný podzemnicový olej nebo ricinový olej, dále parciální estery glycerinu s mastnými kyselinami, například glycerinmoncstearát a glycerindistearát, jakož i například v souvislosti s mastmi zmíněné mastné alkoholy, které zvyšují schopnost přijímat vodu, emulgátory a/nebo přísady.

Pasty jsou představovány krémy a mastmi se složkami pudrů absorbujícími sekrety, jako jsou oxidy kovů, například oxid titaniěitý, nebo oxid zinečnatý, dále mastek a/nebo křemičitany hlinité, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekrety.

Pěny se aplikují z tlakových nádob a jsou představovány emulzemi kapalných olejů ve vodě, které jsou přítomné v aerosolové formě, přičemž se jako propelentu používá halogenovaných uhlovodíků, jako chlorlluor(nižších jalkanů, například dichlordifluormethanu a dichlortetrafluorethanu. Jako olejové fáze se používá kromě jiného uhlovodíku, například parafinového oleje, mastných alkoholů, například cetylalkoholu, esterů mastných kyselin, například isopropylmyristátu a/nebo dalších vosků. Jako emulgátorů se používá kromě jiného směsí emulgátorů s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou polyoxyethylenestery mastné kyseliny a sorbitanu (TweensJ, a emulgátory s převážně lipofilními vlastnostmi, jako jsou estery sorbitanu s mastnými kyselinami (Spans), Navíc se přidávají obvyklé přísady, jako jsou konzervační prostředky atd.

Tinktury a roztoky obsahují většinou vodně-ethanolický základ, ke kterému se přidávají kromě jiného polyalkoholy, například glycerin, glykoly a/nebo polyethylenglykol, jako prostředky udržující vlhkost ke snížení odpařování a látky vracející tuk, jako jsou estery mastné kyseliny s nižšími polyethylenglykoly, tj. ve vodné směsi rozpustné, lipofilní látky, jako náhrada za mastné látky, které byly pokožce odejmuty ethanolem, a popřípadě další pomocné látky a přísady.

Pro výrobu místně použitelných farmaceutických přípravků se postupuje o sobě známým způsobem, například tak, že se účinná látka rozpustí nebo suspenduje v základové látce nebo v její části, pokud je to nutné. Při aplikaci účinné látky ve formě roztoku se účinná látka zpravidla rozpustí před emulgováním v některé z těchto dvou fází. Při aplikaci ve formě suspenze se účinná látka smísí po emulgaci s částí základu a potom se přidá zbytek přípravku.

Dávkování účinné látky závisí na různých faktorech, jako je způsob aplikace, druh, obranná schopnost organismu a v rozhodující míře povaha ošetřované choroby. Tak se denní aplikované dávky pohybují při o14 rální aplikaci teplckrevným o hmotnosti asi 70 kg v rozmezí í si 0.0001 až 0,1 g, přičemž se používá dávky méně než 0,001 g především k zabránění tvorby metastas, po odstranění primárního nádoru.

K profylaxi virových infekcí se aplikuje jednorázová dávka asi od 0,5 mg do 50 mg, výhodně 25 až 15 mg, například 7 mg, účinné látky teplokrevnému živočichu o hmotnosti asi 70 kg, například lidem. Pro potřebu v dobách zvýšeného nebezpečí nákazy opakuje se ctplikace této dávky v intervalech 1 až 3 týdnů, napřpíklad 2 týdnů.

Terapeutická dávka pro teplokrevné o tělesné hmotnosti asi 70 kg se v případě virové infekce pohybuje v rozmezí 1 mg až 50 miligramů, výhodně 5 až 20 mg, například činí 10 mg, zejména při orální aplikaci. Dávka při intranasální aplikaci se snižuje o faktor 10. Při potřebě opakuje se aplikace derivátů hepoxypyranosy vzorce I v intervalu několika dnů, například 1 až 3 dnů až do začátku zlepšení stavu onemocnění.

Následující příklady vynález blíže ilustrují, aniž by nějakým způsobem omezovaly jeho rozsah. Hodnoty R_f se zjišťují na silikagelových destičkách pro chromatografii na tenké vrstvě. Poměr rozpouštědel v používané rozpouštědlové směsi je vyjádřen v objemových dílech.

Příklad 1

1,0 g (0,7 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„ J -n-butylester- (Cy J -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu, která obsahuje ještě 0,8 mol vody, se míchá v 10 ml 50% octové kyseliny 2 hodiny při teplotě místnosti, potom se přidá 40 ml vody a takto získaná reakční směs se lyofilizuje. Surový produkt se potom čistí sloupcovou chromatograf ií na 50 g silikagelu (typ 60, čistý, velikost částic 0,063 až 0,200 mm) za použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 2 až 5 jako elučního činidla, přičemž se odebírají frakce po 5 ml. Frakce obsahující žádaný produkt se spojí a odpaří se ve vakuu při teplotě 30 °C.

Zbytek se vyjme 100 ml dvojnásobně destilované vody, roztok se filtruje přes miliporézní filtr (0,2 gm) a takto získaný roztok se znovu lyofilizuje.

Získá se 0,91 g (86,8 % teorie) čisté sodné soli N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a J -n-butylester-Cyj-L-alo:n/iín-2-(l,2-d_iiipia|lmltio_!yl-an.-glycer!o-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu ve formě bezbarvého prášku, který obsahuje ještě 4,41 mol vody.

[α]₀ ^2θ=+6,9° (c = 0,504, v methylenchloridu j.

R_f = 0,65 (rozpouštědlový systém: směs chlo245797 roformu, methanolu a vody v poměru 70 :30 : ;5) —0,63 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu a methanolu v poměru 7:3).

Výchozí látka se získá následujícím způsobem:

13,0 g 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_H) -n-butyl-(C/)-benzylesteru se katalyticky hydrogenuje ve směsi dimethoxyethanu a vody v poměru 20 : 1 v přítomnosti 2,5 g paládia na uhlí (10 % paládia ) jiaiko katalyzátoru při teplotě místnosti a za atmosférického tlaku. Po ukončení hydrogenace (2 ho’iny) se katalyzátor odfiltruje a takto získaný filtrát se odpaří ve vysokém vakuu při teplotě 20 °C.

Získaný (C«)-n-butylester 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamové kyseliny se převede ve směsi chloroformu a isopropylalkoholu v poměru 7 : 3, ke které bylo přidáno malé množství dimethylformamidu, působením dicyklohexylkarbodiimidu a N-hydroxysukcinimidu na N-hydroxysukcinimidester, který se po částech v pevné formě přidá do roztoku tvořeného směsí L aIanin-2-(l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy)ethylamidu a triethylaminu ve směsi chloroformu, Isopropylalkoholu a vody v poměru 70 : 30 : 2. Reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti.

Potom se takto získaný kalný reakční roztok odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C. Surový produkt se poté suspenduje ve dvojnásobně destilované vodě (pH 5,5), načež se suspenze přidáním triethylaminu upraví na hodnotu pH 6,0. Nerozpustné podíly (dicyklohexylmočovina) se odfiltrují a filtrát se potom lyofilizuje ve vysokém vakuu.

Takto získaný lyofilizát se rozpustí ve dvojnásobně destilované vodě a získaný roztok se potom zahustí až na objem 75 ml v dialyzační komůrce (ultrafiltr PM 10/76 mm 0) přit tlaku 0,3 MPa (přetlak). Takto zahuštěný produkt se filtruje proti 250 ml směsi fosfátového pufru a chloridu sodného (vždy 0,1 molární roztok, poměr 1:1, pH 7) a 1 750 ml dvojnásobně destilované vody až do odstranění chloridových iontů. Roztok zbylý v komůrce (asi 75 ml) se potom postupně filtruje dvěma miliporézními filtry (0,45 /im a 0,2 ,um) a takto získaný čirý, bezbarvý roztok se potom lyofilizuje ve vysokém vakuu.

Lyofilisát se dále čistí Craigovým dělením za použití směsi tetrachlormethanu, chloroformu, methanolu a 0,5% roztoku chloridu sodného v poměru 7 : 17 : 18 : 6. Frakce obsahující produkt se spojí a odpaří se ve vysokém vakuu bez zahřívání (chlazení) k suchu. Získá se bezbarvý prášek, který ještě obsahuje chlorid sodný. K odstranění chloridu sodného se produkt rozpustí v 600 ml dvojnásobně destilované vody a filtruje se v dialyzační komůrce (ultrafiltr PH 30/76 milimetrů 0) při 0,3 MPa nejprve až asi na 50 ml vnitřního objemu a potom za použití celkem 1 750 ml dvojnásobně destilované vody.

Roztok zbylý v komůrce (asi 50 ml) se potom sterilně filtruje pomocí dvou miliporézních filtrů 0,45 μΐη popřípadě 0,2 μΐη) a poté se lyofilizuje ve vysokém vakuu.

Získá se sodná sůl 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K j -n-butylester- (C _Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu ve formě bezbarvého prášku, který obsahuje ještě 1,2 mol vody. Příklad 2

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1 se z 1,0 g (0,8 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu, která obsahuje ještě 1 mol vody, získá 0,92 g (91,5 %) čisté sodné soli N acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C₍,) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy j ethylamídu, která obsahuje ještě 2,96 mol vody, ve formě bezbarvého prášku.

[aj_D20 = + 11 + 1° (c = 0,285, 10% octová kyselina).

Rí = 0,39 (rozpouštědlový systém: směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru 42 : 21 : 21 : 6 : 10).

R_f = 0,55 (rozpouštědlový systém: směs acetonitrilu a vody v poměru 3 :1).

R_f = 0,25 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : : 30 : 5).

Analogickým způsobem se z 1,0 g (0,7 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutarayl-(C_a)-terc.butylester- (G _Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3 hydroxyfosforyloxyJethylamidu, která obsahuje ještě 0,5 mol vody, získá

0,94 g (93,8 % teorie) čisté sodné soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -terc.butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu ve formě bezbarvého prášku, která obsahuje ještě 3,38 mol vody.

[a]_D ²⁰ = + 14 + 1° (C = 0,817, 10% octová kyselina).

R_f = 0,29 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 :

: 30 : 5).

245737

R_f = 0,53 (rozpouštědlový systém: směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru 42 : 21: 21: 6 :10).

Analogickým postupem se z 1,0 g (0,7 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-acetylmur amyl-L-alanyl-D-glutamy 1- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy)ethylamidu, která obsahuje ještě 1,0 mol vody, získá

0,95 g (94,5 % teorie) čisté sodné soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y)-L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydr oxyfosforyloxy) ethylamidu, která obsahuje ještě 3,61 mol vody.

[_a]_o20 = +i4 + i° (_C = 0,440, voda).

R_f = 0,37 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 :

: 30 : 5).

R_f = 0,26 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu a methanolu v poměru 7:3).

Rf = 0,64 (rozpouštědlový systém: směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru 42 : 21 : 21 : 6 : 10).

Analogickým postupem jako je popsán shora se z 1,0 g (0,7 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramy 1-L-alany 1-D-glutamyl- (C„) -methy lester- (C_Y)-L-ailianlm-2- (l,2-dipaillmit!oy,l-sin-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, která obsahuje ještě 1,2 mol vody, získá 0,93 g (93,5 % teorie) čisté sodné soli N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl-C_a) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy )ethylamidu ve formě bezbarvého prášku, která obsahuje ještě 3,09 mol vody.

[k]d²⁰ = + 3,7° (c = 0,672, v chloroformu).

R_f = 0,62 (rozpouštědlový systém: směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru 42 : 21 : 21 : 6 : 10).

R_f = 0,25 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu a methanolu v poměru 7:3).

R_f = 0,42 (rozpouštědlový systém: směs chloformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : :5).

Analogickým postupem jako je popsán shora se z 1,0 g (0,7 mmol) sodné soli 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl-(C_a)-terc.butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, která obsahuje ještě 0,7 mol vody, získá 0,96 g (96,9 % teorie) čisté sodné soli N18

-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C«) -ter c.butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl) -sn-glycer o-3-hydroxyf osforyloxy) ethylamidu ve formě bezbarvého prášku, která obsahuje ještě 2,64 mol vody. [_a]_D20 = + 2,5 + 0,1° (c = 0,649, ve vodě).

R_f = 0,60 (rozpouštědlový systém: směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : : 30 : 5).

Příklad 3

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1 se získají sloučeniny:

sodná sůl N-acylmuramyl-N-methyl-L-alany-D-glutamyl- (C_H) -ethylester-C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3hydroxyfosforyloxy)ethylamidu, sodná sůl N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmuramyl-L-seryl-D-glutamyl- (C_H) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmiuiramyl-L-cystelnyl-D-glutamyl- (C_K j -n-butylester- (C_Y j -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmuramyl-L-methionyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -n-butylester-C_Y) -L-alanln-2- (l,2-dlmyristoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_c) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-distearoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dioleoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu, sodná sůl N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydr oxyfosforyloxy) ethylamidu, sodná sůl N-glykolmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu a sodná sůl N-acetyl-l,4,6-O-triacetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydr oxyfosf oryloxy) ethylamidu.

Příklad 4

Oční kapky

Složení:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutamyl- (C_(í )-n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy )ethylamidu (sloučenina II) 0,10 mg kyselina boritá 30,00 mg tetraboritan sodný (10 HsO) 0,10 mg benzalkoniumchlorid 0,20 mg voda pro injekci do 1,0 ml

Výroba

V jedné části shora uvedeného množství vody pro injekční účely se za aseptických podmínek a za míchání rozpustí kyselina boritá, tetraboritan sodný a benzalkoniumchlorid při teplotě místnosti. Potom se v takto získaném roztoku rozpustí sloučenina II a roztok se doplní vodou pro injekční účely na konečný objem 1,0 ml.

Tento roztok nebo jeho část nebo několikanásobné množství se filtruje přes membránový filtr a plní se do čistých nádobek. Vhodnými nádobkami jsou například:

nádobka z pružné plastické hmoty (o objemu 5 ml nebo 10 ml) s kapátkem, nádobka ze skla (o objemu 5 ml nebo 10 ml) s kapací pipetou ze skla nebo z plastické hmoty a elastickým nástavcem na pipetu nebo jednorázová dózovací pipeta z plastické hmoty (o obsahu 1 až 2 kapek).

Příklad 5

Nevodná jednotlivá dávka pro nasální aplikaci

Složení:

sodná sůl N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -n-butylester- (C_Y j -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu (sloučenina III) 0,03 mg miglyol 812 do 30,00 mg

Výroba

0,3 mg sloučeniny III se za aseptických podmínek rozpustí v 29,97 mg miglyolu 812.

Tento roztok se plní pomocí aplikačního přístroje pro jednorázovou nasální aplikaci, který je běžný na trhu, například podle amerického patentu č. 3 739 951, a který se před použitím niaisadí na nádobku s proipelenitem.

Příklad 6

Nosní kapky

Složení:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-valyl-D-glutamyl- (C_a j -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osforyloxy j ethylamidu (sloučenina IV) thiomersal natriummonohydrogenfosfát. H2O natriumdihydrogenfosfát. 12 H2O benzalkoniumchlorid dvojsodná sůl ethylendiamintetraoctové kyseliny chlorid sodný demineralizovaná voda hodnota pH snížení teploty mrazu Δ¹

I II

0,15 mg	0,10 mg
0,02 mg	—
0,30 mg	0,30 mg
10,10 mg	10,10 mg
—	0,10 mg
0,50 mg	0,50 mg
3,70 mg	4,50 mg
988,30 mg	987,60 mg
5,0 + 0,3	5,0 + 0,3
— 0,51 °C	0,56 °C

Výroba

V jedné části shora uvedeného množství demineralizované vody se za míchání rozpustí inaitiriumdlhydírogeinfoisfát, diinatriumhydrogenfosfát, chlorid sodný, thiomersal a dvojsodná sůl ethylendiamintetraoctové kyseliny při teplotě místnosti.

V tomto roztoku se potom rozpustí sloučenina IV a zbylou demineralizovanou vodou se roztok doplní na konečný objem.

Tento roztok nebo jeho část nebo jeho několikanásobek se filtruje přes membránový filtr a plní se do čistých nádobek. Vhodnými nádobkami jsou například

a) nádobka ze skla nebo p'astické hmoty (o objemu 5 ml nebo 10 mlj, která je opatřena pipetou ze skla nebo z plastické hmoty s elastickým nástavcem pipety upraveným k nasávání

b) mačkací lahvičky z plastické hmoty s trubicí a rozstřikovací hlavou z plastické hmoty

c) nádobky z plastické hmoty pro jednotlivou dávku (obsah 2 až 3 kapky) nebo

d) lahvičky ze skla nebo plastické hmoty opatřené normovaným mechanickým rozprašovačem z plastické hmoty (bez hnacího plynu).

Příklad 7

Gel

Složení:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamy 1- (C«) -n-butylester- (C._f )-L-alanin-2- (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-hyroxyf osf oryloxy) ethylamidu

(sloučenina V)	0,01 g
glycerin 85%	10,00 g
méthylparaben	0,12 g
propylparaben	0,03 g
natriumkarboxymethylcelulóza (vysoká viskozita)	2,50 g
demineralizovvaná voda	87,34 g

Výroba

Methyl- a propylparaben se rozpustí v 1 dílu horké demineralizované vody. Potom se do získaného roztoku za intenzivního míchání přidá natřiumkatboxymethylcelulcza. Získaný slizovitý produkt se nechá za míchání nabotnat. Po ochlazení se přidá glycerin a roztok účinné látky (sloučenina V) ve zbytku vody.

Příklad 8

Krém

Složení:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l-palmitoyl-2-oleyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu (sloučenina VI) 0,10 g sorbitanmonosíearát 0,60 g cetylalkohol 3,00 g isopropylpalmitát 2,00 g methylparaben 0,12 g viskózní parafinový olej 10,00 g

PEG (20)-sorbitanmonostearát 4,40 g propylparaben 0,03 g

70% roztok krystalického sorbitu v demineralizované vodě 6,00 g síearová kyselina 9,00 g demineralizovaná voda 64,67 g

Výroba

Mastná fáze sestávající ze sorbitanmonostearátu, cetylalkoholu, stearové kyseliny, PEG (20)-sorbitanmonostearátu, isopropylpalminátu a parafinového oleje se roztaví. Potom se v jednom dílu horké demineralizované vody rozpustí methyl- a propylparaben. K vodné fázi se přidá roztok sorbitu. Asi při 75 °C se potom za míchání přidá vodná fáze k mastné fázi. Krémový základ se potom nechá za míchání vychladnout. Asi při 40 °C se ve zbytku vody přidá ke krémovému základu roztok účinné látky (sloučenina VI).

Příklad 9

Nosní mast

Složení:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dlpalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oroxy) ethylamidu (sloučenina VII) 0,03 g viskózní parafinový olej 20,00 g bílá vaselina 30,00 g tuk z ovčí vlny, bezvodý 40,00 g demineralizovaná voda 19,97 g

Výroba

Mastná fáze, sestávající z parafinového oleje, vasellny a tuku z ovčí vlny, se roztaví. Do mastné fáze se při teplotě asi 50 °C zapracuje vodný roztok účinné látky.

Příklad 10

Mast na pokožku

Složení:

sodná sůl N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -n-butylester- (C_Y j -glycin-2- (l,2-dipalmltoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf or yloxy) ethylamidu (sloučenina VIII] 0,25 g sorbitanseskvioleát 10,00 g bílý včelí vosk 5,00 g cetylalkohol 2,50 g methylparaben 0,15 g viskózní parafinový olej 20,00 g propylparaben 0,02 g stearylalkohol 2,50 g bílá vaselina 40,00 g demineralizovaná voda 19,58 g

Výroba

Mastná fáze, která sestává ze sorbitanseskvioleátu, bílého včelího vosku, cetylalkoholu, parafinového oleje, stearylalkoholu a bílé vaseliny, se roztaví. Potom se v hlavním množství vody rozpustí za horka methyl- a propylparaben. Při teplotě asi 80 °C se vodná fáze zapracuje do mastné fáze. Při teplotě asi 40 °C se do takto získaného máslového základu přidá roztok účinné látky (sloučenina VIII) ve zbývajícím množství vody.

Příklad 11

Rtěnka

Složení:

so ’ná sůl N-acetylmuramyl-N-methyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydro24 xyf osf oryloxy j ethylamidu (sloučenina IX) 1,00 g polyethylenglykol se střední molekulovou hmotností 400 15,00 g polyethylenglykol se střední molekulovou hmotností 1 000 83,00 g polyethylenglykol se střední molekulovou hmotností 4 000 1,00 g

Výroba

Účinná látka se jemně roptýlí v tavenině polyethylenglykolů. Viskózní tavenina se potom lije do vhodných forem pro rtěnky a nechá se ztuhnout.

Příklad 12

0,6 g (0,5 mmol) N-propionyldesmethylmuramy 1-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dijpiaiimitoyl-sn-glycer o-3-methoxyf osf oryloxy) ethylamidu se suspenduje ve 100 ml acetonu, přidá se 0,45 g (3,0 mmol) jodidu sodného a takto získaná směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Na začátku vznikne čirý roztok, ze kterého se postupně vylučuje žádaný produkt. Po reakci za shora uvedených reakčních podmínek (reakční doba 4 hodiny) se reakční směs ochladí na ledové lázni, sraženina se odfiltruje a promyje se acetonem. Takto získaný surový produkt se za účelem odstranění zbylého jodidu sodného rozpustí v methylenchloridu, poté se přidáním acetonu produkt vysráží a čistí se sloupcovou chromatografií na silikagelu 60 (velikost částic 0,063 až 0,200 mm) za použití rozpouštědlového systému představovaného směsí chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 2 až 5. Frakce obsahující žádaný produkt (vždy po 5 ml) se spojí a odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C.

Zbytek se vyjme 100 ml dvojnásobně destilované vody, filtruje se přes milipórový filtr 0,2 um) a takto získaný roztok se lyofilisuje. Získá se 0,62 g (91,9 %) chromatograficky čisté sodné soli N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -methylester-(C_Y)-L-alanm-2-(l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu ve formě bezbarvého prášku, který obsahuje ještě 2,87 mol vody.

[a]η²⁰ = -i- 3,7° (c = 0,672; chloroform).

R_f = 0,42 (směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 5).

Výchozí látka se získá následujícím způsobem:

K roztoku 1,0 g (0,8 mmol) 4,6-O-isopro245797 pyliden-M-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a )-methylester- (C_Y )-L-alanin-2- (l,2-dipamitoyl-sn-glycero-3-metboxyfosforyloxy)ethylamidu v 10 ml octové kyseliny se za míchání během 10 minut přidá 6 ml vody. Po 12 hodinách se gel vzniklý z roztoku vyjme směsí vždy 12 ml chloroformu, methanolu a vody, organická fáze se oddělí a potom se odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C. Takto získaný zbytek se potom čistí sloupcovou chromatografií na 50 g silikagelu 60, velikost částic 0,063 až 0,200 milimetrů] za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 5 : 1 jako elučního činidla, přičemž se odebírají frakce po 5 mililitrech. Frakce obsahující žádaný produkt se spojí a odpaří se ve vakuu při teplotě 30 °C. Získá se 0,92 g (95,4 %) N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_G) -methylester- (C_Y )-L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-methoxyfosforyloxy jethylamidu.

Výchozí látka se získá následujícím způsobem:

1,1 mol 4,6-O-isopropyliden-N-proplonyldesméthylmuramové kyseliny se suspenduje ve 20 ml absolutního methylenchloridu. Potom se postupně přidá 0,17 ml (1,2 mmol) triethylaminu (bezvodý, d = 0,73), 1,0 mmol L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-methoxyf osf oryloxy) ethylamidhydrochloridu a 0,12 g (1,0 mmol) N-hydroxysukcinimidu, přičemž vznikne čirý roztok. K tomuto roztoku se přidá během 10 minut roztok 0,25 gramu (1,2 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu v 5 ml absolutního methylenchloridu a reakční směs se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Potom se vyloučená dicyklohexylmočovina odfiltruje a filtrát se extrahuje vodou. Organická fáze se oddělí, vysuší síranem hořečnatým a odpaří se za chlazení pří teplotě 20 °C ve vakuu. Takto získaný surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií na 80 g silikagelu 60, (velikost částic 0,083 až 0,200 mm) za použití směsi methyllenchloridu a methanolu v poměru 8 : 1 jako elučního činidla. Frakce obsahující žádaný produkt (vždy po 10 ml) se spojí a odpaří se ve vakuu za chlazení při teplotě 20 °C.

Získá se 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramyl) -L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-methoxyfosf oryloxy) ethylamid.

Sodná sůl výchozí látky se získá následujícím způsobem:

Roztok 34,4 g (73,8 mmol, 2,14 mmol/g, obsahující ještě chlorid sodný) sodné soli la-O-benzyl-4,6 O-ísopropyliden-N-propionyldesmethylmuramové kyseliny ve 340 ml vody se hydrogenuje při konstantní hodnotě pH 7,1 v přítomnosti 6,0 g 10% paládia na uhlí jako katalyzátoru 23 hodin při teplotě místnosti a při atmosférickém tlaku.

Potom se katalyzátor odfitruje, filtrát se odpaří při pH 7,1 ve vakuu při teplotě 30 ^CC a takto získaný zbytek se vysuší ve vysokém vakuu pomocí oxidu fosforečného.

Získá se sodná sůl 4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramové kyseliny ve formě bezbarvého prášku.

Rf = 0,50 (směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 5) a

Rf = 0,66 (směs acetonitrilu a vody v poměru 3 : 1).

Výchozí látka- se získá následujícím způsobem:

K roztoku 14,3 g (32,7 mmol) methylesteru la-0 benzyl-4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramové kyseliny ve 130 ml methanolu se přidá 24,4 ml (48,7 mmol) 2N roztoku hydroxidu sodného a směs se míchá jednu a půl hodiny při teplotě místnosti.

Potom se takto získaný čirý, slabě žlutý roztok upraví přidáním 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny na pH 7,0 a odpaří se ve vakuu při teplotě 30 °C.

Po vysušení nad oxidem fosforečným se získá sodná sůl la-O-benzyl-4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramové kyseliny ve formě bezbarvých krystalů.

R_f = 0,67 (směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 5) a

R_f = 0,74 (směs acetonitrilu a vody v poměru 3:1).

Výchozí látka se získá následujícím způsobem:

K suspenzi 6,75 g (224,7 mmol) hydridu sodného ve 120 ml absolutního tetrahydrofuranu ss přikape při teplotě 5 °C pod atmosférou dusíku a za míchání během 5 minut roztok 31,3 g (85,65 mmol) la-O-benzyl-2- esoxy-4,6-0-isopropyliden-2-propionamido-α-D-glukopyranosidu ve 200 ml absolutního tetrahydrofuranu, přičemž teplota vystoupí na 20 ^CC.

Takto získaná suspenze se míchá ještě 2 hodiny při teplotě 40 °C, potom se ochladí na 0 C a za míchání a pod atmosférou dusíku se během 30 minut přikape k roztoku 20,7 g (135,77 mmol) methylesteru bromoctové kyseliny v 95 ml absolutního tetrahydrofuranu, který je ochlazen na —15 °C.

Takto získaná suspenze se míchá ještě 3 hodiny při teplotě 0 až 5 °C a poté se přidá 20 ml methanolu a 20 ml tetrahydrofuranu. Pomocí 4,5 ml ledové kyseliny octové se upraví hodnota pH na 6 a poté se směs odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C.

Zbytek se rozpustí ve 200 ml methylen245797 chloridu a takto získaný roztok se třikrát promyje vždy 125 ml vody. Methylenchloridové fáze se spojí, vysuší se síranem sodným, zfiltrují se a poté se odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C.

Získá se surový produkt ve formě slabě žlutých krystalů, které se čistí sloupcovou chromatografii na 500 g neutrálního oxidu hlinitého (Super 1) za použití ethylacetátu jako elučního činidla (odebírají se frakce po 10 ml). Frakce 14 až 36 se spojí a odpaří se ve vakuu.

Získá se methylester la-O-benzyl-4,6-O-isopropyliden-N-propionyldesmethylmuramové kyseliny ve formě bezbarvých krystalů o teplotě tání 121 až 123 °C (ze směsi diethyletheru a petroletheru v poměru 1:2).

[a]„²⁰ = + 146,9 + 0,1° (c = 0,849, chloroform ).

R_f — 0,67 (směs chloroformu a methanolu poměru 9:1).

P ř í k 1 a d 1 3

K roztoku 2,85 g (2,09 mmol) sodné soli N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -terc.butylester- (C_y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu ve 112 ml absolutního methylenchloridu se přidá 28 ml trifluoroctové kyseliny a směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti.

Bezbarvý, čirý roztok se potom odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C a takto získaný odparek se několikrát vyjme methylenchloridem a získaný roztok se vždy znovu odpaří.

Získá se 3,0 g bezbarvého oleje, který se rozpustí ve 350 ml směsi fosfátového pufru a chloridu sodného (vždy 0,1 M, v poměru 1 : 1, pH 7) a získaný roztok se filtruje v dialyzačním filtru (ulírafiltr PM 30/76 mm 0) při přetlaku 0,3 MPa. Potom se filtruje ještě proti celkem 2,1 litru dvojnásobně destilované vody až do odstranění chloridových iontů. Roztok zbylý v komůrce dialyzátoru (asi 50 mililitrů) se lyofilizuje ve vysokém vakuu.

Takto se získá bezbarvý lyofilizát, který se čistí dále sloupcovou chromatografii na 260 g silikagelu (silikagel 60, čistý, velikost částic 0,063 až 0,200 mm) za použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 5 jako elučního činidla, přičemž se odebírají frakce o obsahu 10 ml. Frakce 90 až 260 se spojí a odpaří se, aniž by se zahřívaly ve vysokém vakuu (ochlazení) k suchu. Zbytek se rozpustí ve 250 ml dvojnásobně destilované vody a v dialyzačním filtru (ultrafiltr PM 30/76 mm 0) se při přetlaku 0,3 MPa nejdříve zahustí na objem asi 50 ml a potom se postupně filtruje proti 250 ml směsi fosfátového pufru a chloridu sodného (vždy 0,1 M, 1:1, pH 7) a 1 750 ml dvojnásobně destilované vody až do odstranění chloridových iontů. Roztok zbylý v komůrce dialyzačního filtru se potom sterilizuje filtrací dvěma miliporézními filtry (0,45 μτα, popřípadě 0,2 μΐη] a poté se lyofilizuje ve vysokém vakuu.

Získá se dvojsodná sůl (C_y)-L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamové kyseliny ve formě hygroskopického prášku, který obsahuje ještě 4,80 mol vody.

[«],+ ₌ _ ₆₎₁ 4- 0,1° (c = 0,489, methylenchlorid ku ethanolu v poměru 1:1).

Rf = 0,28 (směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru 42 : : 21: 21 : 6 : 10) a

R_f = 0,62 (směs acetonitrilu a vody v poměru 3:1).

Příklad 14

4,5 g (34 mmol) sodné soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl-(C_a)-terc.butylester- (C_y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy)ethylamidu, která byda vysušena ve vysokém vakuu nad oxidem fosforečným, se rozpustí v 75 ml absolutního dichlormethanu. Roztok se ochladí na 0 -C a potom se k němu přidá za míchání a za vyloučení vlhkosti 25 ml bezvodé trifluoroctové kyseliny a teplota roztoku se nechá vystoupit na teplotu místnosti. Po dvou a půl hodině se čirý, bezbarvý roztok silně zahustí na rotační odparce při teplotě místnosti (asi na objem 10 ml), několikrát se přidá vždy 100 ml dichlormethanu a f ichlorethan se vždy znovu odpaří. Zbylý olej se vyjme 100 ml terč.butanolu a roztok se lyofilizuje. Surový produkt se čistí dvojnásobnou chromatografii vždy na 400 g silikagelu (silikagel 60) za použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : : 30 : 5 jako elučního činidla. Produkt obsažený ve frakcích 92 až 172 se rozpustí ve 100 ml dvojnásobně destilované vody ,a tento roztok se čistí dialyzační filtrací analogickým postupem jako je popsán v příkladu

1. Roztok zbylý v komůrce dialyzátoru se filtruje miliporézním filtrem (0,2 tun) a filtrát se lyofilizuje.

Získá se dvojsodná sůl (C_y)-L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamové kyseliny, která obsahuje ještě 4,89 mol vody, ve formě bezbarvého kyprého prášku.

[«],+ =+ 10 + 1° (c = 0,675, methanol).

R_f = 0,08 (směs chloroformu, methanolu a vody v poměru 70 : 30 : 5).

Ri = 0,15 (směs ethylacetátu, n-butanolu, pyridinu, octové kyseliny a vody v poměru : 21 : 21 : 6 :10) a

Rí = 0,30 (směs chloroformu, methanolu, vody a octové kyseliny v poměru 70 : 40 : 9 : :1).

Příklad 15

Alveolární krysí makrofágy získané promýváním plic se nanesou na desku a in vitro se inkubují 24 hodiny buď liposomy, které obsahují účinnou látku, nebo účinnou látkou ve fyziologickém roztoku chloridu sodného (fyziologický roztok chloridu sodného pufrovaný fosfátovým pufrem). Potom se přidají nádorové buňky značené jodem (¹²⁵J) a v inkubaci se pokračuje dalších 72 hodin. Potom se usmrcené nádorové buňky odstraní vymytím a stanoví se počet ještě živých nádorových buněk na základě jejich radioaktivity. Aktivace makrofágů se posuzuje na základě jejich cytotoxicity, tzn. podle podílu usmrcených nádorových buněk na konci pokusu. Specifická cytotoxicita (v procentech) se vypočte následujícím způsobem:

100 počet nádorových buněk inkubovaných makrofágy a účinnou látkou v 1 ml [cpm]

1-------------------------------------------počet nádorových buněk inkubovaných makrofágy a účinnou látkou ve fyziologické roztoku, který je pufrován fosfátovým pufrem, v 1 ml (cpmj

Další podrobnosti shora uvedeného testu jsou popsány v publikaci I. J. Fidlera a dalších, J. Biol. Response Modifiers 1, 43 až 55 (1982). V následující tabulce jsou uvedeny některé výsledky pokusu, které byly dosaženy při testování dále uvedených účinných látek:

I sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C„) -n-butylester- (C..) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osf oryloxy) ethylamidu,

II sodná sůl N-propionylnormuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_K) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosf oryloxy) ethylamidu,

III sodná sůl N-propionylnormuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a }-n-methylester-C_Y) -L-alánin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy j ethylamidu a

IV sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -terč.butylester- (C_Y) -L-ailiainiiin-2- (1,2-dipialmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyf osforyloxy j ethylamidu.

účinná specifická cytotoxicita (%) látka účinná látka v 0,2 ml PBS účinná látka ve 100 ,ug liposomů na 0,2 ml /íg/kultura ^g/kultura

0,02 0,2 2 20 0,02 0,2 2 20

I	39	59	56	51	44
II		21	48	74		10	23	11
III	3	81	47		64	76	79
IV	23	18	20		64	68	52

PBS = fyziologický roztok chloridu sodného pufrovaný fosfátovým pufrem

Příklad 16

Výroba 1 000 tablet s obsahem 0,5 % účinné látky

Složení na 1 000 tablet:

sodná sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a )-methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy)ethylamidu 0,5 g rozemletá laktóza 43,0 g kukuřičný škrob 52,0 g hydroxypropylmethylcelulcza obsahující 28 až 30 % methoxyskupin (Pharmatcoat 603^(R) 3,0 g koloilní oxid křemičitý (Aerosil^(R) 1,0 g horečnatá sůl kyseliny stearové 0,5 g

Výroba

Nejdříve se smísí účinná látka a 15 g laktózy. Takto získaná předsměs se smísí dále s 28 g laktózy a 47 g kukuřičného škrobu.

Z této směsi a vodného roztoku hylroxypropylmethylcelulózy se získá hmota vhodná ke granulování, která se granuluje, granulát se vysuší a rozemele se. Poté se přimísí 5 g 5 g kukuřičného škrobu, koloidní oxid křemičitý a horečnatá sůl stearové kyseliny a ze směsi se lisováním vyrobí 1 000 tablet o hmotnosti po 100 mg.

Takto vylisované tablety se mohou opatřovat o sobě známým způsobem vrstvou laku, která je rezistentní vůči účinku žaludečních šťáv.

Příklad 17

Účinná látka ve formě lyofilizované suché látky mg sodné soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_c,) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy) ethylamidu a 500 mg mannitu (prostého pyrogenních látek] se rozpustí ve vodě pro injekční účely a roztok se sterilizuje filtrací přes membránový filtr. Za aseptických podmínek se sterilní roztok plní do sterilních skleněných ampulí nebo do skleněných flol a vysuší se vymrazením. Po liofilizaci se ampule uzavřou a fioly se uzavřou gumovým uzávěrem a překryjí se hliníkovou fólií.

Claims

1. Způsob výroby miuramylpeptidů obecného vzoce I {Dí

II I S I x II O R R O (L)O κ

OH

C-N-CH-C~NH-CH-CH;CH;C-X~Y~C- NH~CH;CH;O-P-O-CH_Z

O OR

II

O

R⁹

C-O-CH

CH* 1 (sni l *

O v němž .

R² znamená alkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxymethylovou skupinu nebo fenylovou skupinu,

R³ znamená vodík nebo methylovou skupinu,

R⁶ znamená vodík nebo alkýlovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku,

R⁷ znamená popřípadě hydroxyskupinou substituovanou alkýlovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku,

R⁸ znamená vodík nebo alkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

X znamená kyslík nebo skupinu NH,

Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

R⁹ a R¹⁰ znamenají nezávisle na sobě alkylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku, a/nebo jejich solí, vyznačující se tím, že se ve sloučenině obecného vzorce Ia

CH^OR

3 í, (D)ŇH-Č-R^2,

R-CH _v .

(L) (D) (ϋ 9

C-N-CH-C-NH-CH-CH^CHaC-X-Y-C-NH-CH^CH^O-P-O-CHo

II l_r ι, II I II / o o ^C-O-CH $ (-^2. 1'’(^Sí2-)

II lf I, II Q O⁷ O io£.

R' v němž

R¹, R¹ a R⁶ znamenají atomy vodíku a ostatní symboly mají stejný význam jako v obecném vzorci I, přičemž alespoň jeden ze zbytků R¹, R², R⁴, R⁶, R⁷, R⁸ nebo hydroxylová skupina na atomu fosforu je přítomen v chráněné formě, odštěpí chránící skupina, popřípadě chránící skupiny, načež se získaná sloučenina vzorce I, popřípadě převede na sůl nebo se získaná sůl převede na jinou sůl.

2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená alkýlovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo hydroxymethylovou skupinu, R³znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁵znamená volík nebo methylovou skupinu, R⁷ znamená alkýlovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo hydroxymethylovou skupinu, R³ znamená vodík nebo alkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, X znamená kyslík nebo skupinu NH, Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a R⁹ a R¹⁰znamenají nezávisle na sobě přímou alkylovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku nebo deskarbonyloleoylovou skupinu a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

3. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, R³ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R³ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁷ znamená alkýlovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, R⁸ znamená vodík nebo alkýlovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, X znamená kyslík nebo skupinu NH, Y znamená alkylidenovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku a R⁹ a R¹⁰ znamenají nezávisle na sobě přímou alkýlovou skupinu s 11 až 17 atomy uhlíku s lichým počtem atomů uhlíku nebo deskarbonyloleoylovou skupinu, a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

4. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 3, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce Ia za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R⁸ znamená alkýlovou skupinu uvedenou v bodech 1 až 3 a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z

243797 bodů 1 až 3, a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

5. Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R² znamená methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, R³ znamená vodík, jestliže R² znamená ethylovou skupinu, nebo znamená methylovou skupinu, jestliže R² znamená methylovou skupinu, R⁵ znamená vodík nebo methylovou skupinu, R⁷ znamená alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, R³ znamená přímou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, X znamená kyslík nebo skupinu NH, Y znamená ethylidenovou skupinu a R⁹ a R¹⁰znamenají nezávisle na sobě přímou alkylovou skupinu s 15 až 17 atomy uhlíku s lichým počtem atomů uhlíku, a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

6. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 5, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného nebo vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R³ znamená methylovou skupinu, a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z bodů 1 až 5, sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

7. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 6, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R⁵ znamená vodík, a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z bodů 1 až 6, a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

8. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 7, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R⁸ znamená n-butylovou skupinu, a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z bodů 1 až 7, a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

9. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 8, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použiji odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž X znamená skupinu NH, a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z bodů 1 až 8 a sloučeniny vzorce I se porom popřípadě převádějí na své soli.

10. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 9, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž R⁹ stejně jako R¹⁰ znamenají n-pentadecylovou skupinu a ostatní substituenty mají význam uvedený v jednom z bodů 1 až 9 a sloučeniny vzorce I se potom popřípadě převádějí na své soli.

11. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C« ] -terc.b utylester- (C._f) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu, který se poté popřípadě převádí na svou sůl.

12. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku (C,,) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy)ethylamidu N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamové kyseliny, který se pofté popřípadě přeivádí na svou sůl.

13. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl - (C_K) -n-butylester- (C_y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxy jethylamidu, který se poté popřípadě převádí na svou sůl.

14. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_a) -n-butylester- (C_Y) -L-alanin-2- (l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu, který se poté popřípa 'ě převádí na svou sůl.

15. Způsob podle bodu 1, vyznačující še tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamy 1- (C_H) -methylester- (C_Y) -L-alanin-2- (1,2-dipalmltoyl sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu, který se poté popřípadě převádí na svou sůl.

16. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl- (C_C! j -methylester- (C_Y ] -L-olanin-2-(l,2-dipslmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyfosforyloxyjethylamidu, který se poté popřípadě převádí na svou sůl.

17. Způsob podle jednoho z bodů 1 až 16, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku sloučenin obecného vzorce I ve formě farmaceuticky použitelných solí.

18. Způsob podle bodu 17, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí odpovídající sloučeniny obecného vzorce la za vzniku sloučenin obecného vzorce I ve formě sodných solí.