CS243785B1

CS243785B1 - Kmen mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCM F-750

Info

Publication number: CS243785B1
Application number: CS838801A
Authority: CS
Inventors: Ladislav Welward; Marta Potancokova; Richard Frimm; Augustin Martvon; Rudolf Kosalko; Jan Rakyka; Pavel Rolko; Marcel Dudek
Original assignee: Ladislav Welward; Marta Potancokova; Richard Frimm; Augustin Martvon; Rudolf Kosalko; Jan Rakyka; Pavel Rolko; Marcel Dudek
Priority date: 1983-12-01
Filing date: 1983-12-01
Publication date: 1986-06-12
Also published as: CS880183A1

Description

Vynález sa týká kmeňa mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCM F-750 produkujúceho cefalosporín C (ďalej CFS-CJ. Tento kmeň bol získaný z kmeňa Acremonium chrysogenum CCM F-729 šiachtením zaměřeným na zvýšenie produkcie celafosporínu C. 243785 243 3

Vynález sa týká kmeňa míkroorganizpiu Acremonium chrysogenum CCM F-750 produkujúceho cefalosporín C (ďalej CFS-Cj. Tento kmen bol získaný z kmeňa Acremonium chrysogenum CCM F-729 šíachtením zameraným na zvýšenie produkcie cefalosporínu C. Východzí kmen dosahoval v tančíku súhrnú aktivitu 9 200 ug/ml, z toho však len cca 1/3 tvořil požadovaný CFS-C, zbytok bol dezacetylcefalosporín C (D-CFS-C) a cefalosporín C, (CFS-Cxj.

Popisovaný kmeň mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCM F-750 bol získaný tak, že materský kmeň CCM F-729 bol vystavený mutagénemu šlachteniu — striedavo UV světlu a N-nitrozometylbiuretu s preferenciou izolátov rezistentných na feed back kontrolu syntézy antibiotika-inhibíciu koncovým produktom CFS-C. Šíachtenie bolo robené tak, že vysporulovaná kultura rodičovského kmeňa na šikmom agare v Endovej skúmavke na sporulačnej pode NB-II sa zmyla 10 ml sterilnej vody, přefiltrovala cez vatová zátku na pipetě za účelom oddelenia hýf a artrospór od konídií. Z takejto suspenzie konídií vhodné nariedenej sa očkovali Petriho misky s podou NB-II, ktorá má toto zloženie. Bacto Beef extrakt 0,3 °/o, bacto peptone 0,5 %, glukóza 1%, FeSoí . 7HžO 0,005 %, MgSOá. . 7H2O 0,005 %, D,L-metionín 0,005 %, L-cysteín 0,005 %, agar Difco 2,5 %.

Mutagénny zásah sa robil pomocou UV-svetla germicídnou UV-lampou Phillips TUV 30 W s rozdělením spektrálnej energie-vlnová dížka 253,7 nm až 93,5 %, ostatně vlnové dížky 6,5 %. Vzdialenosť misky od zdroje žiarenia bola 30 cm. Po ožiarení sa misky okamžité preniesli do inkubátora na teplotu 28 °C, kde sporulovali 11 dní. Vysporulované kolonie bolí za aseptických podmienok izolované a přenesené na šikmý agar pody NB-II.

Další mutagénny zásah chemicky sa robil tak, že k suspenzii o konc. 105—10® konídií/ /ml sa přidal N-nitrozometylbiuret o koncentrácii 0,4 %. Mutagén bol v kantakte s kulturou počas 1 hodiny na trepacom stroji (4 Hz) pri teplote 27°C. Po expozícii boli zo 85 4 zmesi inutagéu-kultúra připravené riedenia 10-2 až 10_5 konídií/ml. Šíachtenie prebiehalo bez přístupu denného světla, sporulácia na Petriho miskách trvala pri teplote 27 °C 11 dní. Jednotlivé kolonie boli po zásahoch asepticky přenesené na šikmý agar NB-II a odskúšané na produkčnú aktivitu v baničkovom výbere.

Ako pomnožovacia submer^ná podá sa použila pSda IP-5 o zložení: sacharóza 1,5 %, octan amónny 0,5 %, metylolaét 8;$8 %, kukuřičný výluh (100%-ný). Po 72hodinovej kultivácii na rotačnom trepacom -stroji 4 Hz pri teplote 27 °C sa získalo vegetativně inokulum. Z narasteného inokula sa 4 ml očkovali 500 ml varné banky plněné 40 ml pody PP-O. Produkčně pody mali následovně žloženie: škrob kukuřičný 5 %, arašídová múka 6 %, sacharóza 0,5 %, glukóza 1,25 percent, CaCo3 1,0 %, D,L-metionín 0,2 %, borax 0,0 %, zmes řepkový a sójový olej 2,5 percent, (NH<t)2SCU 1,0%, Csl. (100%-ný) 0,5 %. Šlachtený kmeň sa po skončení kultivácie na trepacom stroji na pode PP-0 ponechal vplyvu vlastných metabolitov staticky pri laboratornej teplote 5—7 dní. Hladina hlavného metabolitu CFS-C sa pri tomto pasážovaní postupné upravovala až na hodnoty 25 000,ug/ml. Po uvedenej době sa urobil monokolóniový rozsev na Petriho misky s podou NB-IJ a v screeningu sa vybral najproduktívnejší jedinec na pode PP-O.

Morfológia kmeňa je nasledujúca: získaný kmeň CCM F-750 tvoří na sporulačnej póde NB-II vrásčité kolonie krémovej farby o priemere kolonií cca 2—5 mm. Na pode MPA o zložení. ,másový výťažok 1 %, zmes peptónov 1 %, NaCl 0,5 %, agar 1,5 % sú kolonie vačšie od 3 do 7 mm nepravidelného tvaru, krémovej farby.

Po biochemickej stránke sa získaný kmeň vyznačuje tým, že oproti iným kmeňom Acremonium chrysogenum je potřeba metionínu v submerznej fermentácii len 0,05—0,3 percent podía stupňa aerácie.

Produkčná aktivita kmeňa je v baničkách 10 200 ug/ml a v tančíku 22 400 ug/ml CFS-C.

Claims

PREDMET VYNÁLEZU Kmeň Acremonium chrysogenum CCM F-750 produkujúci cefalosporín C.