CS240345B1 - Sposob izolácie antibiotika tylozínu - Google Patents

Description

240345

Vynález rieši sposob izolácie antibiotikatylozínu z filtrátu fermentačnej pody, poskončení kultivácie produkčného kmeňaStreptomyces fradiae, alebo z iných vod-ných roztokov tylozínu.

Tylozín je makrolidové antibiotikum, su-márneho vzorca C45H77NO17. Má slabo bá-zický charakter, vo vodě je málo rozpust-ný, dobré rozpustný je v polárných a semi-polárnych organických rozpúšťadlách a ne-rozpustný v nepolárných rozpúšťadlách, ako je hexán, či petroléter. Vodné roztokytylozínu sú stále v rozmedzí pH 5,5 a 8,5.Kyslou hydrolýzou sa tylozín rozkládá nabiologicky obdobné účinný dezmykozín. S kyselinami tvoří tylozín soli dobré roz-pustné vo vodě a v polárných organickýchrozpúšťadlách.

Tylozín je antibiotikum používané vo ve-terinárnej praxi, najma na potlačenie infek-cií vyvolaných gram-pozitívnymi baktéria-mi a mykoplazmózami (Ose E. E.: J. Am.Vet. A. 137, 421—423, 1980). Samotný tylo-zín sa využívá obzvlášť pri liečbe dyzentériía pneumónií hospodářských zvierat (Cur-tíns R. A.: Canad. Vet. J. 3, 285—288, 1962;Doornebal H.: Canad. J. Comp. Med. Sci. 29,179—182, 1985; Schovánek V.: Veterinář-ství 25, 505—507, 1975). Široko sú využíva-né aj kombinácie tylozínu s inými antibak-teriálne pósobiacimi látkami, ako sú sulfo-namidy (Ose E. E.: Vet. Med. Smáli Anim.Clin. 68, 539—543, 1975; Reichel, F.: Biol.Chem. Výž. Zvířat 10, 343—350, 1974), fu-razolidínom (US 3, 690, 869), colistinom(Ger. offen 2, 327, 392), ako aj s inertnýmipřísadami ako síranom sodným (US 3, 932,995), polyoxyetylénestermi (Brit. 1, 219,785), alebo s močovinou (Ger. offen 1, 812,471). Na přípravu liečebných prípravkov savyužívá buď tylozín vo formě bázy, alebovo formě solí, ako je tartarát, chlorid, fos-fát alebo síran (Bruszewski W.: Now. Wet.6, 349—352, 1972). V krmných zmesiach satiež využívá technický tylozín, připravenývysušením fermentačnej pody (Dvořák, J.,Straková, J^, Ševčík, B.: Biol. Chem. Vet. 18,77—78, 1982).

Doposial' sa tylozín izoloval z fermentač-nej pody tak, že sa odfiltrovalo mycélium,filtrát sa extrahoval chloroformom a po od-destilovaní chloroformu za zníženého tla-ku sa z olejovitého zvyšku tylozín vyzrážalhexánom, alebo petroléterom (US 3, 178,341). Takto připravený tylozín bolo nutnépřed dalším použitím rekryštalizovať, alebopreviesť na sol’, ako například tartarát, zktorého sa připravila báza čistého tylozínu(Hamill R. L.: Antib. and Chemother. 11,328—334, 1961). Preparát tylozínu o obsahu40 % účinnej látky je možné pripraviť vyso-lením tylozínu z deprotelnizovaného filtrá-tu fermentačnej pody, alebo extrakciou ty-lozínu alkoholmi z vysprayovanej fermen-tačnej půdy, napr. 90 % propanolom (Aut.osv. č. 197 600). Tylozín podobnej čistoty jemožné získať tiež azeotropickým oddestilo- vaním vody z filtrátu fermentačnej pody na-příklad s n-hexylalkoholom (Ger. offen 2,054, 085). Tylozín vo formě tylozín tartarátuje možné pripraviť o vysokej čistotě extrak-ciou tylozínu z filtrátu fermentačnej podyextrakciou do butylacptátu (AO č. 231 279).Nevýhodou tohoto postupu je nutnost voliťviacnásobnú extrakciu filtrátu, nakoíko prijednostupňovej extrakci! butylacetátom satylozín vyextrahuje s malým výťažkom. Priextrakcii Ί 000 ml filtrátu fermentačnej po-dy 200 ml butylacetátu pri pH 9,0 a teplote25 °C sa vyextrahuje do organické] fázy lencca 53 % tylozínu. S vyšším výťažkom mož-no tylozín vyextrahovat zmesou chloroform--etylacetát, ale vzhťadom na toxicitu chlo-roformu je využitelnost tejto metody v prie-myselnom meradle značné obmedzená.

Bolo zistené, že tylozín je možné získaťvo vysokej čistotě a výtažku z filtrátu fer-mentačnej pody, alebo z iných vodných roz-tokov, ako je napr. vodný roztok technic-kého tylozín-fosfátu, sposobom podta vyná-lezu, ktorého podstata spočívá v tom, žesa filtrát fermentačnej pody, alebo iný vod-ný roztok tylozínu extrahuje butylacetátom,ktorý obsahuje 1 až 30% obj. vo vodě ob-medzene rozpustného alkoholu, akým je na-příklad amylalkohol, izoamylalkohol, izobu-tylalkohol, benzylalkohol (s výhodou 10 %obj. butanolu) alebo ketonu, ako je napr.metylizobutylketón, metyletylketón a pod.Výhodou tohto postupu je, že stačí jedno-stupňová extrakcia tylozínu týmto postu-pom, aby sa tylozín vyextrahoval vo vyso-kom výtažku. Pri extrakcii 1 000 ml filtrátufermentačnej pody 180 ml butylacetátu a20 ml benzylalkoholu pri pH — 9,0 a teplo-ta 20 °C sa vyextrahuje do organické} fázy91 % tylozínu.

Takto získané extrakty tylozínu na roz-diel od chloroformových extraktov možnopriamo zrážať acetonovým roztokom kyseli-ny, napr. 1 % hmot. obj. roztokom kyseli-ny vínnej, čím sa získá dobré kryštalizujúcasol — tylozín tartarát. Tento sa móže buďpriamo využit na přípravu liečebných prí-pravkov, alebo sa prevedie běžnými postup-mi na tylozín — bázu. Výhodou tohto postu-pu je, že tylozín sa získá vo vysokom výtaž-ku a čistotě z filtrátu fermentačnej pody zapoužitia netoxických a tahko sa regeneru-júcich rozpúšťadiel.

Nasledujúci příklad prevedenia spĎsobpodta vynálezu len dokládá, ale nijako ne-obmedzuje. K 500 ml filtrátu fermentačnej pody o ú-činnosti 7 630 jug/ml sa přidá 100 ml butyl-acetátu a 25 ml butanolu. Zmes sa za inten-zívneho miešania upraví roztokom hydroxi-du sodného na pH — 9,0 a nechá sa 15 mi-nút miešať. Po tomto čase sa organickávrstva oddělí, čím sa získá 125 ml organic-kej fázy s účinnosťou 27 750 /^g/ml čo je 91pere. výťažnosť extrakcie. Získaný organic-ký extrakt potom po kvapkách přidáváme

Claims (1)

1. 240345 do 300 ml acetonu, v ktorom bolo rozpuště-né 3,5 g kyseliny vínnej. Po hodině intenzív-neho miešania po přidaní celého množstvaorganického extraktu sa vylúčený tylozíntartarát odfiltruje, premyje 30 ml acetonu a vysuší volné na vzduchu pri laboratórnejteploíe, čím sa získá 4,1 g tylozín tartarátuo účinnosti 850 m. j./mg, čo je 86% výťaž-nosť, počítané na filtrát fermentačnej půdy. P R E D Μ EI Spůsob izolácie antibiotika tylozínu z fil-trátu fermentačnej pódy po skončení kulti-vácie produkčného kmeňa Streptomycesfradiae, alebo z iných vodných roztokov ty-lozínu, vyznačený tým, že sa filtrát fermen-tačnej půdy, alebo iný vodný roztok tylozí-nu extrahuje butylacetátom, ktorý obsahuje VYNALEZU 1 až 30 % obj. vo vodě obmedzene rozpust-ného organického rozpúšfadla, s výhodoubutanolu a z extraktu sa tylozín vyzrážaako sol' acetonovým roztokom kyseliny, svýhodou 1 % hmot. obj. roztokom kyselinyvínnej v acetone.