CS238800B1 - Způsob fermentační přípravy L-lysinu - Google Patents

Abstract

Vynález se týká způsobu fermentační přípravy L-lysinu v tekutých kultivačních médiích, které obsahují jako zdroj uhlíku sacharosu a jako hlavní zdroj dusíku kyselý hydrolysát profokarpové mouky (jemně mleté boby Psophocarpus tetragonolobus). Tímto hydtolysátem je možno nahradit standardně používaný hydrolysát arašídové mouky jako zdroj dusíku ve fsrmentačních médiích. Jako produkční mikroorganismy jsou používány mutantní kmeny Brevibacterium flavum a Corynebacteriura glutamicum, která se vyznačují rezistencí k analogům aminokyselin a dále vyžadují ke svému růstu některé esenciální aminokyseliny.

Description

Vynález se týká způsobu fermentačni přípravy .L-lysinu v tekutých živných médiích, která obsahují jako zdroj uhlíku sacharosu a jako komplexní zdroj dusíku hydrolysét psofokarpové mouky, dále kukuřičný extrakt, minerální soli, vitaminy a další růstové látky. Uvedený postup umožňuje použití nového typu komplexního zdroje dusíku za dosud používaný hydrolysét arašídové mouky. K přípravě uvedeného hydrolysátu se použije jemně mletá mouka z bobů Psophocarpus tetragonolobus a tato se dále hydrolysuje standardním postupem minerální kyselinou. Aminokyselinová složeni hydrolysátu psofokarpové mouky je analogické hydrolysátu sojové mouky; dále vyěěím obsahem některých esenciálních aminokyselin předčí běžně používaný hydrolysét arašídová mouky.

Jako produkčních mikroorganismů se používá mutantních kmenů Brevibacterium flavum a Corynebacterium glutamicum, které se vyznačují resistencí na analogy aminokyselin a dále vyžadují k růstu některá esenciální aminokyseliny. V patentových spisech jsou jako zdroje dusíku udávány různá typy hydrolysátů dusíkatých substrátů; např. frano. patent 2 033 119 popisuje jako zdroj dusíku hydrolysét sojového proteinu, stejný zdroj dusíku uvádějí déle patentové spiey NSR 2 100 159 a 2 321 461; jako další zdroje dusíku se uvádějí hydrolysét kaseinu v USA patent, spisu 3 595 751, dále japonský patent, spis 515 75 popisuje jako zdroj dusíku NZ-amin; jako vhodný zdroj dusíku se používají také hydrolysáty kvasničné biomasy a další dusíkaté látky.

Fermentačni způsob přípravy L-lysinu podle vynálezu uváděj! následující příklady.

Přiklad 1

Kmenem Brevibacterium flavum (homoserin”,AEC^r) se zaočkuje 500ml varná baňka, která obsahuje 50 ml inokulačniho média o tomto složení: sacharosa 30 g, octan sodný kryst.

g, kukuřičný extrakt 30 g, voda dest. ad 1 litr; pH media 7,0. Po zaočkování se baňky kultivují na rotační třepačce (6,7Hz) po dobu 18 až 24 hodin při teplotě 29 °C.

Vyrostlou kulturou se v množství 10 % obj. zaočkují 500ml varné baňky, které obsahuji 20 ml fermentačního média o tomto složení: sacharosa 180 g, kyselý hydrolysét psofokarpové mouky (7,0 až 8,1 mg celk.N/ml) 200 ml, kukuřičný extrakt 10 g, hydrogenfosforečnan draselný 1 g, síran hořečnatý kryst. 0,1 g,uhličitan vápenatý mikromletý 30 g, voda dest. ad 1 litr; pH media 7,0; kultivace déle probíhá na rotační třepačce při 29 °C po dobu 96 hodin.

V průběhu fermentace se upravuje pH kultury pomoci 10% roztoku amoniaku na hodnotu 7,0 až 7,2. Produkce L-lysinu dosahuje 42,4 g/litr fermentačního média za 96 hodin kultivace.

Příklad 2

Kmenem Corynebacterium glufcamicum(homoserin~,AEC^r) se zaočkuje inokulační baňka jak se uvádí v příkladu 1 a další postup kultivace a fermentačni přípravy L-lysinu je stejný jak.je popsáno v příkladu 1. Za 96 hodin kultivace je dosahováno produkce 39,8 g L-lysinu/litr fermentačního média.

Příklad 3

Kmenem Brevibacterium flavum(homoserin~,AEC^r) se zaočkuje 500ml varná baňka,, která obsahuje 50 ml inokulačniho média o složení jak se uvádí v příkladu 1. Vyrostlou kulturou se zaočkuje dvoulitrový laboratorní fermentačni tank, který obsahuje 800 ml fermentačního média, jehož složení je popsáno v příkladu 1. Jako komplexního zdroje dusíku se použije kyselý hydrolysét psofokarpové mouky z bobů Psophocarpus tetragonolobus, var.Binh-Minh. Další kultivací za odpovídajícího míchání a vzdušněni, úpravy pH a teploty 29 °C je po 96 hodinách fermentace dosahováno produkce 70,9 g L-lysinu/litr kultivačního média.

Příklad 4

Postup fermentační přípravy L-lysinu kmenem Brevibacterium flavum je stejný jak je uvedeno v příkladu 3 s tím rozdílem, že jako zdroje dusíku je použito kyselého hydrolysátu psofokarpové mouky z bobů Psophocarpus tetragonolobus, var. Chiabu. Při výše uvedených parametrech fermentace je dosahováno produkce 71,2 g L-lysinu/litr fermentačního média za 96 hodin kultivace.

Claims (2)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob fermentační přípravy L-lysinu kultivací produkčních mikroorganismů jako jsou produkční kmeny Brevibacterium flavum nebo Corynebacterium glutamicum v tekutých živných médiích obsahujících zdroje uhlíku, růstové faktory a minerální látky, vyznačený tím, že fermentační médium obsahuje jako komplexní zdroj dusíku kyselý hydrolysát psofokarpové mouky, která 3e připraví jemným mletím bobů Psophocarpus tetragonolobus a dále zpracuje na formu hydrolysátu působením minerálních kyselin.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že celkový obsah dusíku v hydrolysátu psofokarpové mouky.odpovídá hodnotám 7,0 až 10,0 mg celk. N v 1 ml roztoku.