SU1599431A1 - Питательна среда дл культивировани FUSаRIUм GRамINеаRUм-продуцента галактозооксидазы - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, а именно касаетс  составов питательных сред дл  культивировани  FUSARIUM GRAMINEARUM ИМБ F N 1060 - процудента галактозооксидазы. Цель изобретени  - повышение выхода галактозооксидазы. В питательную среду дополнительно ввод т гидролизат отходов производства соевых бобов после выделени  уреазы в количестве 4,0-8,0 г/л среды при следующем соотношении компонентов, г/л : галактоза 10,0-20,0

мочевина 9,0-11,0

дрожжевой экстракт 2,0-3,0

калий фосфорнокислый однозамещенный 5,0-6,0

натрий фосфорнокислый двузамещенный 7,5-8,5

магний сернокислый 0,2-0,3

марганец сернокислый 0,02-0,03

медь сернокисла  0,05-0,06

деминерализованна  вода до 1 л, PH 6,9-7,1. При этом достигаютс  следующие характеристики по отношению к галактозооксидазе : активность 2,5-2,4 ед/мл культуральной жидкости, выход 2500-2400 ед/л.

Description

Изобретение относитс  к микробиологической и химической промьппленно- сти, касаетс  состава питательной среды дл  культивировани  Fusarium draminearum ИМВ F № 1060 - продуцента галактозооксидазы (D-галактоза i : кислород-оксидоредуктаза 1.1.3.9).

Целью.изобретени   вл етс  повышение выхода галактозооксидазыо

Питательна  среда дл  культивировани  штамма, включающа  источники амминного азота, углеводов, витаминов и минеральные соли, содержит в качестве индуктора накоплени  галактозооксидазной активности гидролизат соевых бобов после вьщелени  уреазы.

Соевый гидролизат готов т слё- дуюшим образом

Размолотые соевые бобы после экстрагировани  70%-ным этиловым спиртом дл  выделени  уреазы в количестве 100 г заливают 1 л деминерализованной воды с 10 мл концентрированной фосфорной кислоты и выдерживают в течение 4 ч при t 55-60 С при посто нном перемешивании.

ш

( с

После охлаждени  гидролизат фильтруют и нейтрализуют 30%-ным КОН до рН 6,9-7,1 и лиофильно высушивают.

Использование лиофи ьновысуиен-

ного гидррлизата соевых бобов в питательной среде способствует не только повышению выхода биомассы и увеличению активности галактозооксидазы а культуральной жидкости Fusarium

raminearum ИМВ F № 1060, но и сни- Лает пигментацию культуральной жид- йости.

Гидролизат отходов соевых бобов содержит р д аминокислот в количест- ее 0,6 - 1,2 мг/г препарата, относительно большое количество аргинина, аспарагина, глютамина и может служить дополнительны источником аммин Ного азота и благопри тствовать рост микробиальных клеток. Использование амминного азота в дополнительном его источнике (гидролизате) приводит к увеличению синтеза белков, а значит, и ферментов, в том числе галактозо- оксидазы.

Одновременное введение с гидроли- затом фосфатов кали  способствует стабилизации микробиальной среды (играют роль буфера), кроме того,

клетка использует их как дополнительный источник фосфора и кали . Культуральна  жидкость при примене- НИИ гидролизатов соевых бобов после вьщелени  уреазы имеет гораздо мешьшую пигментацию, что улучшает качество целевого продукта.

Пример 1. Питательна  среда содержит, г/л:

Галактоза10,0

Мочевина 9,0

Дрожжевой экстракт2,0

Гидролизат отходов соевых бобов4,0

Калий фосфорнркис-

лый однозамещенный5,0

Натрий фосфорнокис- льй двузамещенный7 3

Магний сернокислый0,2

Марганец сернокислый 0,02

Медь сернокисла 0,05

Вода деминерализо- ванна До 1 л

рН6,9

Оживление штамма Fusarium grami- nedrum ИМВ F № 1060 осуществл ют на среде указанного состава в кача- лрчных колбах. Инкубируют в термокамере при 28 С в течение 72 ч на качалке при 240 об о/мин.

В ферментационные колбы (среда та же) перенос т посевной материал из расчета 6-8%. Инкубирование ведетс  при на качалке при 240 об./мин в течение 72-80 ч, до достижени  в культураш ной жидкости 2,4 едо/мл галактозооксидазной активности (СФЛ-540 нм). Мицелий предварительно отфильтровываетс  о

Выход: активность 2,50 еДо/мл культуральной среды.

Из примера 1 видно, что добавление гидролизата отходов соевых бобов в качестве 4,0 г/л приводит к увеличению активности фермента.

Выделение фермента осуществл ют известные способе.

И р им е р 2, Питательна  сред содержит, г/л:

Галактоза15,0

Мочевина10 0

Дрожжевой экстракт2,5

Гидролизат отходов соевых бобов6,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный5,5 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,0 Магний сернокислый0,025 Марганец сернокис- льй0,025 Медь сернокисла 0,05 Вода деминерализо- ванна  До 1 л рН .7,0 Выращивание и адаптацию культуры , инокул цию посевного материала, ферментацию культуры провод т аналогично примеру 1.

Выход: активность 2,45 ед./мл культуральной жидкости

Из примера 2 видно, что добавление гидролизата соевых бобов 13 количестве 6,0 г/л приводит к повьшению активности галактозооксидазы.

Пример 3. Питательна  сред содержит, г/л:

Галактоза20,0

Мочевина11,0

Дрожжевой экстракт3,0

Гидролизат отходов соевых бобов8,0

фосфорнокислый однозамещенный6,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,5

Магний сернокислый Марганец сернокислый Медь сернокисла  Вода деминерализованна  РН

Выращивание, адаптацию культуры, инокул цию посевного материала, фер- ментацию культуры проводили аналогично примеру 1,

Выход: активность 2,40 едо/мл культуральной жидкости.

Как видно из примера 3, добавление гидролизата отходов соевых бобов в количестве 8,0 г/л приводит к повышению активности галактозооксидаэы .

Технико-экономический эффект изобретени  заключаетс  в повьшёнии выхода единиц фермента 2500 едо/л и ферментной активности до 2,5 ед./мл, а также в снижении пигментации культуральной жидкости, что в свою очередь облегчает дальнейшее вьзде- ление и очистку целевого продукта.

599431

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   ) Питательна  среда дл  культиви-

   ровани  Fusarixim graminearum ИМВ с F iP 1060 - продуцента талактозоокси- дазы, содержаща  галактозу, мочевину, дрожжевой экстракт, од нозамещенный фосфат кали , двузамещенный фосфат натри , сернок,исльш магний, серно- 10 кислый марганец, сернокислую медь и деминерализованную воду, о т л и - чающа с  тем, что, с целью повьшени  выхода галактозооксидазы, питательна  среда дополнительно со- 15 держит гидролизат соевых после вьщелени  уреазь при следующем соот- нощении компонентов, г/л:

   Галактоза10,0-20,0

   Мочевина9,0-11,0

   Дрожжевой экстракт2,0-3,0 Гидролизат соевых бобов после выделени  уреазы4,0-8,0 Однозамещенный фос

   фат кали 5,0-6,0 Двузамещенный фосфат натри 7,5-8,5 Сернокислый магний0,2-0,3 Сернокисльй марганец0,02-0,03

   Сернокисла  медь .0,,06 Деминерализованна 

   водаДо 1