CS227331B2 - Method of glycerol determination - Google Patents
Method of glycerol determination Download PDFInfo
- Publication number
- CS227331B2 CS227331B2 CS816831A CS683181A CS227331B2 CS 227331 B2 CS227331 B2 CS 227331B2 CS 816831 A CS816831 A CS 816831A CS 683181 A CS683181 A CS 683181A CS 227331 B2 CS227331 B2 CS 227331B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glycerol
- nad
- measured
- hydrogen peroxide
- process according
- Prior art date
Links
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 119
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 46
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 108010015133 Galactose oxidase Proteins 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 12
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 12
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- -1 glycerol aldehyde Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 7
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 claims description 6
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical group CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 38
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 5
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000007999 glycylglycine buffer Substances 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- CKFGINPQOCXMAZ-UHFFFAOYSA-N methanediol Chemical compound OCO CKFGINPQOCXMAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthylamine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=CC2=C1 RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFFZDZCDUFSOFZ-UHFFFAOYSA-N 3,4-Dihydroxy-phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 CFFZDZCDUFSOFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010052895 Coronary artery insufficiency Diseases 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde Chemical compound OC[C@@H](O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014820 Galium aparine Nutrition 0.000 description 1
- 240000005702 Galium aparine Species 0.000 description 1
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 1
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940058934 aminoquinoline antimalarials Drugs 0.000 description 1
- 150000005010 aminoquinolines Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- JBWYLPPDHROLBP-UHFFFAOYSA-N cyclohex-2-en-1-ylhydrazine Chemical compound NNC1CCCC=C1 JBWYLPPDHROLBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FNXKBSAUKFCXIK-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen carbonate;8-hydroxy-7-iodoquinoline-5-sulfonic acid Chemical class [Na+].OC([O-])=O.C1=CN=C2C(O)=C(I)C=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FNXKBSAUKFCXIK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu stanovení glycerolu a činidla к provádění tohoto způsobu.
Stanovení triglyceridů, to jest glycerolesterů alifatických kyselin s delším řetězcem má pro lékařskou diagnostiku podstatný význam. Zvýšená hladina triglyceridů v krvi je rizikovým faktorem pro vznik arteriosklerózy. Při vysokých hladinách triglyceridů v krvi dochází častěji ke koronární nedostatečnosti a srdečnímu infarktu než v případech, kdy hladina triglyceridů je nízká. Vysoká hladina triglyceridů vede také častěji к vývoji arteriosklerózy a koronárních onemocnění a je tedy velmi žádoucí ji zjistit včas, aby bylo možno provádět příslušnou léčbu. Je tedy zapotřebí mít к dispozici rychlou a snadno proveditelnou metodu ke stanovení triglyceridů nebo glycerolu.
Známé a používané metody ke stanovení triglyceridů jsou založeny na enzymatické hydrolýze těchto látek lipázou a esterázou s následným stanovením uvolněného glycerolu glycerolkinázou, kinázou pyrohroznanu a naftátdehydrogénázou, jak bylo popsáno v publikaci A. W. Eahlefeld, Methods of Enzymatic Análysis IV, H. U. Bergmeyer, Ed. Academie Press, New York, Londýn, 1974, str. 1 831 až 1 835.
Tyto známé způsoby však mají podstatné nevýhody. Aby bylo možno vyloučit poruchy zbarvení krevního séra, vznikající přítomností bilirubinu nebo hemoglobinem a zákaly různého původu, je zapotřebí vždy provádět slepou zkoušku, což zvyšuje časové náklady i spotřebu reakčních činidel a tím i celkové náklady na analýzu. Mimoto reakční činidlo je vzhledem к přítomnosti různých citlivých enzymů a koenzymů jen málo trvanlivé.
Kromě těchto zkoušek jsou známy také barevné zkoušky založené na tvorbě formazánu. Při těchto postupech je také zapotřebí vždy provádět slepou zkoušku a mimoto jsou tyto 227331 zkoušky poměrně komplikované a jsou rušeny různými dalšími látkami. Mimoto je znám způsoby při němž se užívá glyceroloxidáza za vzniku peroxidu vodíku a glycerolaldehydu, které je možno stanovit. Tento enzym se však získává jen z vysoce pathogenních mikroorganismů, jako jsou bakterie moru, z jiných bakterií je možno jej získat jen v malém množství.
Z tohoto důvodu by bylo zapotřebí navrhnout způsob a činidlo, při jejichž použití by bylo možno odstranit svrchu uvedené nevýhody. Mělo by jít o způsob, který by bylo možno provádět při použití enzymu, získatelného jednoduchým způsobem v dobrém výtěžku. Mimoto by mělo být možno způsob provádět bez měření proti slepé zkoušce za získání dostatečně přesných výsledků. Zvláště by bylo žádoucí, aby bylo dosaženo barevné reakce s dostatečně vysokým extinkčním koeficientem vzniklého barviva, to jest ( í > 18 cm2>/umol).
Předmětem vynálezu je způsob stanovení glycerolu, vyznačující se tím, že se glycerol inkubuje ve vodném prostředí za přítomnosti kyslíku s galaktózooxidázou a pak se měří výsledek reakce, a to spotřeba kyslíku, množství vzniklého peroxidu vodíku nebo množství glycerolaldehydu.
Galaktózooxidáza EC 1.1.3.9. je známý enzym, který za přítomnosti kyslíku oxiduje D-galaktózu na D-galektózohexodieldózu a peroxid vodíku. Jde o enzym, který obsahuje měň. Vynález spočívá na překvapujícím zjištění, že je tento enzym možno s dobrým výsledkem užít ke stanovení glycerolu.
Tento výsledek nebylo možno očekávat, protože byla sice známa minimální účinnost galaktózooxidázy vzhledem ke glycerolu, avšak podle publikace Hamilton a další Oxidases and Relsted Redox Systems, vyd. King, sv. 1 (1971), avšak reakční rychlost byla tak nízká, že nebylo uvažováno o použitelnosti tohoto enzymu. Protože v tělesných tekutinách, v nichž má být stanoven glycerol se může vyskytovat také galaktóza ve volné nebo vázané formě, bylo možno očekávat silné rušení této reakce galaktózou, takže vůbec nebylo možno uvažovat o možnosti kvantitativní reakce glycerolem. Bylo však neočekávaně zjištěno, že v tělesných tekutinách, zejména v krevním séru к tomuto rušení nedochází.
Způsob podle vynálezu je možno také provádět po předběžném nebo při současném enzymatickém zmýdelnění triglyceridů za současného uvolnění glycerolu, nebo po předběžném chemickém zmýdelnéní triglyceridů. Zmýdelnění chemickým způsobem je možno provádět zejména alkoholovým roztokem hydroxidu draselného, к enzymatickému zmýdelnění je vhodná lipáza s esterázou nebo esteráza.
Měření spotřeby kyslíku, tvorby peroxidu vodíku nebo tvorby glycerolaldehydu se provádí známými postupy.
Vhodným způsobem měření spotřeby kyslíku Je například plynová chromatogrefie a depolarizace. Výhodná je polarometrická metoda při použití kyslíkové elektrózy, protože tento postup Je zvláště vhodný к automatickému provádění analýzy. Způsoby obdobného typu Jsou známy. Zvláště vhodný je způsob, uvedený v NSR vykládacích spisech 21 30 340 a 21 30 308, tyto způsoby se týkají polarometrického měření spotřeby kyslíku ve vodných prostředích.
Vzniklý peroxid vodíku Je možno stanovit titrací nebo také potenciometrický, polarograficky, kolorimetricky nebo enzymaticky. Výhodné Jsou enzymatické způsoby při použití katalázy nebo peroxidázy, protože tyto metody jsou Jednak velmi specifické a dostupné, mimoto však také je možno tyto metody kombinovat s hlavní reakcí za vzniku peroxidu vodíku velmi Jednoduchým způsobem. Vhodné je zejména stanovení katalázou za přítomnosti beta-diketonů, například acetylacetonu a methanolu nebo ethanolu nebo methylenglykolu, Jakož i stanovení pomocí peroxidázy za přítomnosti Jedné nebo většího počtu chromogenních látek.
Při stanovení pomocí katalázy, acetylacetonu a methanolu Je methanol oxidován na formaldehyd, který reaguje s acetylacetonem za vzniku barevné reakce, kterou Je možno měřit. Při použití peroxidázy jsou jako chromorofní látky použity sloučeniny, které je po reakci možno měřit fotometricky. Příkladem vhodného chromoforu může být kyselina 2,2'-aminobenzthiazolinsulfonová (ABTS). Dalším příkladem je indikátorový systém podle publikace Trinder Ann. Clin. Biochem. I 6 (1969), 24 až 27, při němž se uvádí v reakci fenol a 4-aminoantipyrin (4-AAP) za přítomnosti POD a za působení peroxidu vodíku za vzniku barviva. Místo . fenolu je možno užít jiné aromatické alkoholy jako p-chlorfenol, anilinové deriváty, naftol, deriváty naftolu, naftylamin, naftylerainové deriváty, aminochinoliny, hydroxychinoliny, kyselinu dihydroxyfenyloctovou a obdobpým způsobem reagující sloučeniny.
Místo 4-aminoantipyrinu je možno užít deriváty 4-aminoantipyrinu například 4-aminoantipyrinamid, kyselinu fenylendiaminsulfonovou, MBTH.
Stanovení glycerolaldéhydu se stanoví pomocí běžně užívaných reakčních činidel, s výhodou pomocí hydrazinového derivátu, který reaguje s aldehydovými skupinami za vzniku hydrazonu, například při použití 2,4-dihydrofenylhydrazinu. Vzniklý hydrazon je možno stanovit kolorimetricky.
Zvláště výhodná je reakce za přítomnosti peroxidázy a chromogenní sloučeniny, například ABTS. V tomto případě je možno dosáhnout krátké reakční doby a současně lineární závislosti mezi rozdílem v extinkci a koncentrací glycerolu, takže se toto provedení způsobu podle vynálezu zvláště hodí pro kinetické stanovení. Je však možno je stejně dobře užít i ke stanovení koncového bodu.
Dosažená úměrnost mezi extinkci a obsahem glycerolu je doložena na přiloženém obr. 1· Graficky je znázorněna souvislost mezi extinkci s obsahem glycerolu.
Na ose úseček je uvedena koncentrace glycerolu v 10“г mol/1. Na ose pořadnic je uvedena odpovídající extinkce.
Podle výhodného provedení způsobu podle vynálzu se stanoví provádění za přítomnosti glyceroldehydrogenázy a jejího koenzymu NAD. Glyceroldehydrogenáza ЕС 1.1.1.6 je známá a je móžno ji získat z mikroorganismů, například Enterobacter aerogenes a je běžně užívána. Bylo zjištěno, že za přítomnosti glycerodehydrogenázy (Glyc-DH) je citlivost a specifičnost způsobu stanovení ještě dále zlepšena. Při této výhodné formě provedení způsobu podle vynálezu je možno přidat NAD v přebytku vzhledem ke stechlometričky nutnému množství, s výhodou se však přidává katalytické množství NAD a systém, který za přítomnosti NAD tuto látku regeneruje.
Vhodným systémem pro regeneraci NAD je například systém popsaný v DOS 28 34 705. Výhodným systémem pro regeneraci NAD pro použití při provádění způsobu podle vynálezu sestává z laktátdehydrogenázy a jejího substrátu pyrohroznanu. V případě, že se NAD přidá v přebytku, je možno místo peroxidu vodíku opticky měřit také redukovaný NAD.
Při této formě provedení způsobu podle vynálezu je vhodné udržet hodnotu pH v rozmezí 7,0 a 9,0, protože v tómto rozmezí mají všechny ostatní enzymy, které se účastní reakce, a to galaktózooxidáza (Gal-OD), Glyc-DH a popřípadě peroxidáza (POD) dobrou účinnost.
Je překvapující, že při této formě provedení probíhá reakce hladce a kvantitativně při spotřebě molekulárního kyslíku a tvorbě peroxidu vodíku, přestože dochází ke konkurenci obou enzymů Gal-OD a Glyc-DH o glycerin a také Glyc-DH vytváří kromě kyslíku peroxid vodíku.
Při výhodném použití Gal-OD a současně Glyc-DH se citlivost udrží na '0,001 mol/litr.
Provádění tohoto způsobu se vypočítává z rozdílu mezi slepou 'zkouškou a zkušebním vzorkem nebo kinetickým způsobem. Na přiloženém obr. 3 je zřejmé, že při použití obou těchto forem provedení se ,získá lineární vztah mezí koncentrací glycerolu a rozdílem extinkce alespoň až do koncentrace glycerolu 0,0005 mol/litr.
Také tato forma provedeni způsobu podle vynálezu může být provedena za současného enzymatického zm^elmění triglyceridů, takže dochází k uvolněni a rychlému stanovení glycerolu.
Způsob podle vynálezu je zvláště vhodný pro automatické analyzátory, protože je možno provádět cejchování koncentrace glycerolu velmi přesně při použžtí standardu.
Reakční činidlo ke stanovení glycerolu sestává z galaktózooxidázy, systému pro stanovení peroxidu vodíku nebo systému ke stanovení glycerolaldehydu. Při prvním výhodném pro: vedení sestává reakční činidlo v podstatě z galaktózooxidázy, peroxidázy, alespoň jedné chromogenní sloučeniny a pufru, a to jednotlivě nebo ve směěi. Jako chromogenní látky se s výhodou užije ABTS. Dalším - vhodným barevným indikátooovým syséárnem je systém, který byl uveden - ve svrchu uvedené Trinderově publikaci.
Výhodným reakčním činidlem je - činidlo, sestávajcí v poddtatě z galaktózooxidázy, katalázy, acetylacetonu, methanolu a pufru, a to jedno tlivě nebo ve směs..
Reakční činidlo může také sestávat z galaktózooxidázy, hydrazinového derivátu, který reaguje s t2^s^<^ly^S^oo^ý^;l skupinami za vzniku hydrazonu a z pufru. Jako hydrazinový derivát se s výhodou použije 2,4-SinitrofθnylhySrtzin.
Realk&iní činidla mohou kromě uvedených složek obsahovat ještě běžná rozpouštědla, stabilizátory a/nebo srnmčedda, Všechny tyto další možné přísady jsou známy a jsou vhodné pro použití v systémech pro stanovení peroxidu vodíku i glycerolaldelydu· S výhodou obsahují reakční- činidla, kromě svrchu uvedených složek ještě enzymy, štěpící tuky, například lipázu a esterázu nebo pouze esterázu, aby bylo možno stanovit také vázaný glycerol, nachááeeící se ve formě triglyceridů.
. Reakční činidla k provádění způsobu podle vynálezu obsahují jednotlivé složky - s výhodou v následujících poměrech.
1. 15 až 30 jednotek/ml galaktózooxidázy
0,5 až 100 jednotek/ml peroxidázy
0,05 až 20 ^unl/ml chromogenní látky a popřípadě
0,001 až 0,1 g/ml smáčedla a pufr k úpravě pH na 6 až 9 ,2. 15 až 30 jednotek/ml galaktózooxidázy až 10 ^wmo/1 2,4-dinitrof ery n^drazinu a popřípadě
0,001 až 0,1 g/ml smáčedla a pirfr k úpravě pH na 6 až 9.
Podle výhodného provedení způsobu podle vynálezu obsahuje reakční činidlo ještě Glyc-DR, NAD a popřípadě systém, regeneruuící NAD. '
Pro systémy, r^nce^ící NAD platí totéž, co bylo uvedeno svrchu pro způsob podle vynálezu. Výhodný systém pro regeneraci NAD sestává z laktásdályrdrogenčzy (LDH) a p^jrohroznanu. Přítomnost systému, regenerujícího NAD umožňuje s katalytccým rnioostvím koenzymu NAD pro reakci s Glyc-DH vyB^ed-t, protože v průběhu reakce vznike^ící NADH se ok^i^mžitě regeneruje zpět na NAD oxidací. Za přítomnosti tohoto - regeneračního systému pro NAD je možno snížit mrnožtví systému NAD až na 0,05 Jioo/l.
Při tomto výhodném provedení obsahuje rea^ní činidlo - podle vynálezu Glyc-DH v i^oožs,ví 5 až 100 - jednotek/ml. Je samozřejmé, že je možno pouužt i většího mno^v!, není to však již hospodárné. Mn.ožsví nižší než 5 jednotek/ml je také možno použžt, výhody, dosažené použitím Glyc-DH však se snižu!.
Vhodný pufг je možno zjistit jednoduchými předběžnými pokusy. Vhodnými pufry jsou například glycylglycinový pufr a bicinový pufr (N,N-bis-/2-hydroxyethyl/glycin) v koncentracích 0,05 až 0,2 mol/litr. Svrchu uvedené enzymatické jednotky pro galaktózooxldázy'se týkají galaktózy jako substrátu, jak bylo popsáno například v publikaci Fazur a další Carbohydrates, Nucleosides, Nucleotides” £, 147 (1977).
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Přikladl
Reakční činidlo: pufr s fosforečnanem draselným (0,1 mol/1, pH 7,5), peroxidáza (12 500 jednotek/1, galaktózooxidáza (20 000 jednotek/1) ABTS (2 mmoly/1).
Vzorky: vodné roztoky glycerolu o koncentraci 0,005 až 0,06 molu/1.
Způsob stanovení: měření bylo prováděno při použití rtulové laippy při 405 nm, kyveta měla šířku 1 cm, inkubační teplota 25 °C.
2,0 ml reakčního činidla se pipetou vnese do kyvety, přidá se 0,1 ml vzorku a směs se promísí. Měří se změny extinkce mezi druhou a desátou minutou.ΔEg . Při kvantitativním stanovení glycerolu se tento rozdíl vztahuje na koncentraci glycerolu ve standardu.
Příklad 2
Stanovení glycerolu v séru
Reakční činidlo: pufr s fosforečnanem draselným (0,1 mol/1, pH 7,5), peroxidáza (12 500 jednotek/1), galaktózooxidáza (20 000 jednotek/1), ABTS (2 mmoly/1).
Vzorky: jako vzorek bylo užito krevní sérum, které obsahovalo různá množství glycerolu, který byl přidán do koncentrace 0,006 až 0,07 molu/1.
Způsob stanovení: měření bylo prováděno při použití rtutové lampy při 405 nm, tlouštka kyvety byla 1 cm a inkubační teplota 25 °C.
Stanovení se provádí tak, že se pipetou vnese do kyvety 2,0 ml reakčního činidla, přidá se 0,1 ml vzorku a směs se promísí. Po skončení lag-fáze se měří změna extinkce v průběhu druhé až 10. minuty. Lineární závislost mezi koncentrací glycerolu a změnami extinkce je zřejmá z přiloženého obr. 2.
—2
Na ose úseček je uvedena koncentrace glycerolu v 10 mol/1. Na ose pořadnic ge nachází odpovídající extinkce při 405 nm.
Příklad 3
Reakční Činidlo má následující složení:
Složka Množství glycylglycinový pufr o pH 8,0 0,1 mol/1 síran amonný 0,16 mol/1
ZnSO^.7HgO . 0,1 mmol/1 uhličitan sodný 0,078 mmol/1
| Složka | Množství |
| A-aminoentipyridin-NUg | 0,5 mmol/1 |
| p-chlorfenol | 10 mmol/1 |
| POD | 10 000 jednotek/1 |
| LDH | 10 000 jednotek/1 |
| pyrohroznan | 2,25 mmol/1 |
| Gal-OĎ | 20 000 jednotek/1 |
| Glyc-DH | 50 000 jednotek/1 |
| NAD+ | 1,5 mmol/1 |
Zkušební vzorky:
Vodné roztoky glycerolu v koncentračním rozmezí 0,001 až 0,01 mmol/litr. Místo vodných roztoků glycerolu je možno použít extrakty séra, další tělesné tekutiny a například také extrakty z potravin.
Podmínky při měření:.
Vlnová délka: 546 nm
Tlouštka vrstvy: 1 cm
Teplota: 25 °C až 37 °C
1,0 ml reakčního činidla se vloží do kyvety a přidá se 0,01 ml zkušebního vzorku. Efctinkce se měří po 30 minutách proti slepé zkoušce. Pro kvantitativní stanovení se vztahuje tatoДЕ proti standardu ke zjištění koncentrace glycerolu.
Není zapotřebí provádět kontrolní zkoušku bez přítomnosti roztoku, v němž se glycerol nachází. Křivka, získaná nanesením koncentrace glycerolu v mol/1 proti extinkci při 546 nm je znázorněna na obr. 3.
Claims (11)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob stanovení glycerolu, vyznačující se tím, že se glycerol inkubuje ve vodném prostředí za přítomnosti kyslíku s galaktózooxidázou a pak se měří výsledek reakce, a to spotřeby kyslíku, množství vzniklého peroxidu vodíku nebo množství glycerolaldehydu.
- 2. Způsob podle bodu T, vyznačující se tím, že se spotřeba kyslíku měří polarograficky.
- 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se vzniklý peroxid vodíku stanoví enzymaticky při použití katalázy nebo peroxidázy.
- 4« Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se přidá peraxidáza a chromogenní sloučenina a měří se zbarvení nebo změny extinkce.
- 5. Způsob podle bodů 1 až 4, vyznačující se tím, Že se měření provádí kineticky v předem stanoveném časovém intervalu.
- 6. Způsob podle bodu 1 až 5, vyznačující se tím, že se к inkubačnímu prostředí přidá glyceroldehydrogenáza a NAD.
- 7. Způsob podle bodu 6, vyznačující se tím, že se přidává NAD spolu se systémem pro regeneraci NAD.
- 8. Způsob podle bodu 7, vyznačující se tím, že se jako systém pro regeneraci NAD užije pyrohroznan a laktátdehydrogenáza.
- 9. Způsob podle bodu 1 až 8, vyznačující se tím, že se postup provádí při pH 7,0 až 9,0,
- 10· Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se vzniklý glycerolaldehyd převede působením hydrazinového derivátu na odpovídající hydrazon a tato látka se pak měří·
- 11. Způsob podle bodu 6, vyznačující se tím, že se stanoví redukovaný NAD.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3035465 | 1980-09-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS227331B2 true CS227331B2 (en) | 1984-04-16 |
Family
ID=6112418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS816831A CS227331B2 (en) | 1980-09-19 | 1981-09-16 | Method of glycerol determination |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4409328A (cs) |
| EP (1) | EP0048347B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5818077B2 (cs) |
| AR (1) | AR225366A1 (cs) |
| AT (1) | ATE4328T1 (cs) |
| AU (1) | AU523858B2 (cs) |
| CA (1) | CA1179929A (cs) |
| CS (1) | CS227331B2 (cs) |
| DD (1) | DD201734A5 (cs) |
| DE (1) | DE3160709D1 (cs) |
| ES (1) | ES505403A0 (cs) |
| IL (1) | IL63726A (cs) |
| YU (1) | YU224981A (cs) |
| ZA (1) | ZA816479B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0815430B2 (ja) * | 1986-08-19 | 1996-02-21 | 株式会社シノテスト | アスコルビン酸オキシダ−ゼの安定化法 |
| DE3821077A1 (de) * | 1988-02-12 | 1989-08-24 | David Diagnostics Inc | Verfahren zur bestimmung des sauerstoffgehaltes in biologischen fluessigsubstraten und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| JP3170377B2 (ja) * | 1993-01-27 | 2001-05-28 | 協和メデックス株式会社 | 物質の測定法 |
| CN103602718A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-02-26 | 天津市宝坻区人民医院 | 血清中甘油三酯的甘油脱氢酶测定方法 |
| CN108828215B (zh) * | 2018-08-30 | 2019-05-14 | 中拓生物有限公司 | 一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用 |
| US11759914B2 (en) | 2020-08-06 | 2023-09-19 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
| WO2022032148A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3367842A (en) * | 1965-02-17 | 1968-02-06 | Miles Lab | Test composition and device for the detection of galactose in fluids |
| US3362886A (en) * | 1965-04-09 | 1968-01-09 | Miles Lab | Composition and method for the detection of galactose |
| US3537906A (en) * | 1966-01-05 | 1970-11-03 | Allis Chalmers Mfg Co | Process for producing a fuel cell electrode |
| US3413197A (en) * | 1966-06-30 | 1968-11-26 | Miles Lab | Controlled sensitivity galactose test composition and process |
| US3410757A (en) * | 1966-06-30 | 1968-11-12 | Miles Lab | Galactose test composition and method |
| AT308049B (de) * | 1970-08-28 | 1973-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagens zur Glucosebestimmung |
| DE2130340C3 (de) * | 1971-06-18 | 1975-07-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Vorrichtung zur quantitativen Bestimmung von einzelnen Proben unterschiedlicher Konzentration von Substanzen |
| DE2130308C3 (de) * | 1971-06-18 | 1975-07-24 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Vorrichtung zum Bestimmen von enzymatisch umsetzbaren Probensubstanzen |
| JPS5169691A (en) * | 1974-06-07 | 1976-06-16 | Iatron Lab | Ketsuseichuno chuseishibosokuteiyoshaku |
| DE2558536B2 (de) * | 1975-12-24 | 1979-07-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur kinetischen Substratbestimmung und Reagens zu seiner Durchführung |
| JPS6049477B2 (ja) * | 1977-04-19 | 1985-11-01 | 協和醗酵工業株式会社 | グリセロ−ル酸化酵素およびその製造法ならびにグリセロ−ル酸化酵素を用いるグリセロ−ルの定量法 |
| US4241178A (en) * | 1978-01-06 | 1980-12-23 | Eastman Kodak Company | Process and composition for the quantification of glycerol ATP and triglycerides |
| US4220503A (en) * | 1978-04-28 | 1980-09-02 | The Yellow Springs Instrument Co., Inc. | Stabilization of activated galactose oxidase enzyme |
| DE2831580C2 (de) * | 1978-07-18 | 1980-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Glycerin |
| DE2834705B1 (de) * | 1978-08-08 | 1980-01-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen |
| JPS5850719B2 (ja) * | 1978-10-18 | 1983-11-11 | 協和醗酵工業株式会社 | トリグリセライドの定量方法 |
| US4399218A (en) * | 1980-02-05 | 1983-08-16 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for the determination of glycerin |
-
1981
- 1981-08-24 AT AT81106565T patent/ATE4328T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-08-24 DE DE8181106565T patent/DE3160709D1/de not_active Expired
- 1981-08-24 EP EP81106565A patent/EP0048347B1/de not_active Expired
- 1981-09-03 IL IL63726A patent/IL63726A/xx unknown
- 1981-09-03 AU AU74917/81A patent/AU523858B2/en not_active Ceased
- 1981-09-10 CA CA000385609A patent/CA1179929A/en not_active Expired
- 1981-09-11 ES ES505403A patent/ES505403A0/es active Granted
- 1981-09-16 DD DD81233338A patent/DD201734A5/de unknown
- 1981-09-16 CS CS816831A patent/CS227331B2/cs unknown
- 1981-09-16 US US06/302,861 patent/US4409328A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-09-17 YU YU02249/81A patent/YU224981A/xx unknown
- 1981-09-17 JP JP56145640A patent/JPS5818077B2/ja not_active Expired
- 1981-09-18 ZA ZA816479A patent/ZA816479B/xx unknown
- 1981-09-21 AR AR286823A patent/AR225366A1/es active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1179929A (en) | 1984-12-27 |
| DD201734A5 (de) | 1983-08-03 |
| DE3160709D1 (en) | 1983-09-01 |
| IL63726A0 (en) | 1981-12-31 |
| AU7491781A (en) | 1982-06-10 |
| JPS5818077B2 (ja) | 1983-04-11 |
| YU224981A (en) | 1988-04-30 |
| AR225366A1 (es) | 1982-03-15 |
| EP0048347B1 (de) | 1983-07-27 |
| US4409328A (en) | 1983-10-11 |
| EP0048347A1 (de) | 1982-03-31 |
| ES8205860A1 (es) | 1982-08-16 |
| JPS5783296A (en) | 1982-05-25 |
| AU523858B2 (en) | 1982-08-19 |
| ZA816479B (en) | 1983-05-25 |
| IL63726A (en) | 1984-12-31 |
| ATE4328T1 (de) | 1983-08-15 |
| ES505403A0 (es) | 1982-08-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fossati et al. | Use of 3, 5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid/4-aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine. | |
| CA1339058C (en) | Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation | |
| US4350762A (en) | Aminopyrine improved Trinder's reagent and dosing process for hydrogen peroxide from enzymatic oxidation of metabolic substrata with the same | |
| US6008006A (en) | Determination of glycated proteins | |
| JPS61146196A (ja) | Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬 | |
| CS207453B2 (en) | Method of determination of substrates or enzymatic effectiveness | |
| EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| EP0124909B1 (en) | Process for determining reduced form coenzymes | |
| EP0133681B1 (en) | Enzymatic urea assay | |
| EP0632133B1 (en) | Highly sensitive determination of d-3-hydroxybutyric acid or acetoacetic acid and composition therefor | |
| CS227331B2 (en) | Method of glycerol determination | |
| FI60887C (fi) | Foerfarande foer kinetisk enzymsubstratbestaemning samt reagens foer genomfoerande av foerfarandet | |
| EP0121254A2 (en) | Process for determining substrate or enzymatic activity | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US5474908A (en) | Method of enzymatically measuring hydrogen peroxide and reagent therefor | |
| US5436133A (en) | Enzyme assay of biochemical substances | |
| EP0386237B1 (en) | Enzyme assay of biological substances | |
| JPS61173799A (ja) | 基質又は酵素活性の定量方法 | |
| JP2643205B2 (ja) | 高感度比色定量法 | |
| JPS58165799A (ja) | グリセリンの測定試薬 | |
| JPS6123998B2 (cs) | ||
| EP0138530A2 (en) | Method for the estimation of salicylates or reduced Pyridine nucleotides | |
| JP3034984B2 (ja) | Ｄ−ガラクトースの高感度定量法および定量用組成物 | |
| JPH02100699A (ja) | 生体試料の測定法 | |
| JP3034979B2 (ja) | グリセロール、ジヒドロキシアセトンまたはｄ−グリセロアルデヒドの高感度定量法および高感度定量用組成物 |