CS209351B1 - Inactivated vaccination against infectious atrophic rinididis of pigs and method of manufacture of the same - Google Patents

Description

ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ POPIS VYNALEZU 209351 R E P U B L 1( 19 ) K A K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU (11) (Bl) XÍřX (22) Přihlášené 23 12 77(21) (PV 8738-77) (51) Int. Cl.3 A 61 K 39/40 C 12 N 1/20 ÚŘAD PRO VYNÁLEZY A OBJEVY (40) Zverejnené 17 09 79 (45) Vydané 01 07 83 -- (75)

Autor vynálezu - ŠNIRC JÚLIUS MVDr. a KOVÁČ JOZEF MVDr., NITRA (54) Inaktivovaná očkovaciaá spóšob jej výroby látka proti infekčnej atrofickej rinitíde ošípaných

Vynález sa týká spósobu výroby inaktivovanejočkovacej látky proti infekčnej atrofickej rinitídeošípaných z mikroorganizmu Bordetella bronchi-septica, ktorá má dobré imunizačné vlastnostia ktoré možno použit na prevenciu infekčnejatrofickej rinitídy ošípaných. Vynález sa tiež týkáaj samotnej očkovacej látky.

Na prevenciu infekčnej atrofickej rinitídy ošípa-ných sa v súčasnosti používá perorálne álebóparenterálne pódávanie róznych antibiotik, sulfo-namidov a iných farmakologíckých prípravkov. Natomto základe boli u nás navrhnuté a v praxipoužité niektoré metody terapie a prevencie in-fekčnej atrofickej rinitídy ošípaných. Šrubař, B. (Veterinářství, 21: 234-236, 1971)podával asi 10 dní před pórodom prasniciamchlortetracyklín vo formě Aureovitu v dávkách100 g na 100 kg živej hmotnosti, spolu s 20 gsulfadimidínu. Štvrtý až piaty deň po zahájeníperorálnej aplikácie liečiv sa prasniciam vypláchnuobidve nosné dutiny 1% vodným roztokom chlór-tetracyklínu. Okrem toho sa aplikovali prasniciamintramuskulárne 2 g streptomycínu alebo oxymy-koinu v dávke 20 až 25 ml. Po tomto ošetření súprasnice premiestnené do vydezinfikovanej porod-nice, kde sa pokračuje v podávaní chlórtetracyklí-nu. Miesto výplachov nosných dutin doporučujepodávat chlortetracyklín aerosolom po dobu asi 1 hodiny denne za 4 dni. Doporučuje sa aplikovatznovu antibiotiká před pórodom, alebo v priebehuporodu. Ciciakom sa podává 3. až 4. deň ponarodení 3 ml Ferridextranu a vitamín A a D per osvo formě hydrosolu. Ciciaky sa odstavuj ú vo veku3 až 4 týždňov. Pri podozrení výskytu infekčnejatrofickej rinitídy sa u ciciakov vykoná popísanáliečebná procedúra. Škaloud, J. a spol. (Veterinaria Spofa,17: 69—92, 1975) sledovali účinnost preparátovNeomix (Spofa-tylosin + Sulfadimidin), Neomix(Spofa) v kombinácíi s tylanom pro inj. (Elanco),Spectamu (ABBOTT) a Galiimycín (ABBOTT)na výskyt a priebeh atrofickej rinitídy. Najlepšie saosvědčil prípravok Neomix pri porovnaní s ostat-nými v užitkových chovoch s nízkou zootechničkouúrovňou v tom smere, že viedol k výraznémuzvýšeniu hmotnostných prírastkov, k zníženiu úhy-nu a čiastočnému zníženiu infekčnej atrofickejrinitídy. Autoři sa domnievajú, že uvedené prepa-ráty s antibakteriálnymi účinkami nie sú schopnésamé likvidovat infekčnú atrofickú rinitídu. V zahraničí Switzer, W. ř. (Vet. Med.,58: 571—574, 196Ξ») podával sulphamethazinv dávke 100 g na 1 t onu krmivá ošípaným, ktoréboli experimentálně iiifokovaně Bordetellou bron-chisepticou. Liečivo bolo podávané 3 až 5 týž-dňov. 209351 209351 S podstatné vyššími dávkami Sulphamethazinu, 100 až 500 g na 1 tonu krmivá po dobu 3 týždňov,zaznamenali výsledky (Akkermans, J. P. W. M.a spol., Tijdsch. Diergeneesk., 93:964—972,1968).

Woods, G. T. a spol. (Canad. J. Comp. Med.,36: 49-54,1972) podávali počas 3 týždňov kom-bináciu antibakteriálnych látok v zložení 50 mgchlortetracyklínu, 50 mg sulphamethazinu a 25 mgprokain-penicilínu na 453,6 g krmivá. Dospělik závěru, že uvedená zmes je efektívna v eradikádizárodkov Bordetella bronchiseptica v nosnejdutině.

Po dlhodobom používaní uvedených liečiv saobjavujú rezistentně kmene mikroorganizmu Bor-detella bronchiseptica. Harris, D. L. a Schwitzer, W. P. (Amer. J. Vet. Res., 30: 1161-1165,1969)pri vyšetřovaní zistili v 20 z 25 stád (80 %) výskytrezistentných kmeňov Bordetella bronchisepticak sulfonamidom. Okrem toho popísali Terakado,N. a spol. (Antimicrob. Ag. Chemoter., 3: 555 až558, 1973) rezistentně kmene k sulfadiraetoxiou,streptomycínu a aminobenzylpenicilínu. Vznikli ajďalšie problémy v súvislosti s podáváním spomína-ných chemických prípravkov, ako je výskyt rezis-tentných kmeňov iných druhov mikroorganizmovv populácii ošípaných, výskyt nových infekciía v neposlednom radě aj nutnost’ obmedzeniapoužívania antibiotik z hradiska obecnéhozdravia.

Kashiwazaki, M. a spol. (Nat. Inst. Anim. HealthQuart., 12: 17—22, 1972); Koníček, J. a spol.(Vesmír, 51: 71 až 73, 1972); Rahkin, D. A.(JAVMA, 167: 274 až 278, 1975); Van Os, J. L.(Tijd. Diergennesk., 100: 999, 1975).

Na základe uvedeného je v súčasnosti potřebnézaviesť vhodný biologický preparát na prevenciuinfekčněj atrofickej rinitídy ošípaných.

Podfa námi uvedených pokusov sa ukázalo, že jemožné vyrobit inaktivovanú očkovaciu látku protiinfekčnej atrofickej rinitíde z bakteriálněj kultúrypripravenej submerzným spósobom kultivádemikroorganizmu bordetella bronchiseptica v I.rastovej fáze. Mikroorganizmy v I. rastovej fázeobsahujú K antigén a. tento antigén je schopnývyvolať u myší ochranný účinok proti intracereb-rálnej infekcii; vykazuje aglutinádusKantisérom;vyvolává nekrózu pri intrakutánnom injekčnompodaní morčatám; musia mať dobré hemaglutinač-né vlastnosti (aglútinujú králičie erytrocyty do titra1 : 32); vysokú kyslú aglutináciu (v Mclllvanehopufre do hodnoty pH 4,2 až 4,6); v teste toxicityšupematant z bakteriálnych kultúr spdsobuje úhynmyší do riedenia 1 : 8 až 1 : 32 a v 10% roztokuNaOH mikroorganizmy lyzujú do 30 minút. jPre výrobu inaktivovanej očkovacej látky podlávynálezu sa používajú 4 kmene Bordetella bron-chiseptica, ktoré spíňajú uvedené rastové požia-davky. Kmene boli izolované autormi vynálezu odošípaných v priebehu akútneho ochorenia infekč-nej atrofickej rinitídy a sú uložené v „Českosloven-skej sbírke mikroorganismů Univerzity J. E. Pur- uložené pod tyrruto čislami:Kultúra č.: Č-l = CCM 3304P —5/2 = CCM 3305DB—7 = CCM 3306DP-5 = CCM 3307 kyně, Brno, tř. Obránců míru 10“. Kultury sú lokalita izolácie:ČergovPreselanyDolný PeterDolný Peter

Autoři vynálezu skúšali rózne druhy živnýchmédií a rožne stimulátory rastu tak, aby mikroor-ganizmy obsiahnuté v bakteriálnej kultúre, z ktorejje vyrábaná inaktivovaná očkovacia látka, rástli v I.fáze. Bolo zistené, že kombinácia „Sojového živné-ho média“, ktoré představuje roztok aminokyselin(proteínov) získaný enzymatickou hydrolýzou de-lipidizovanej sójovej múky, obsahujúceho350 mg% celkového dusíka, 150 mg% aminodusí-ka a NaCl 0,4 g/100 ml. K tomuto produkčnémumédiu sú přidané rastové stimulátory, ktorými sú1% vodný roztok kvasničného extraktu (předsta-vuje vodný roztok čerstvých autolyzovaných kvas-nic), 10% vodný roztok přípravku Bacto Casaminoacids (firemný názov pre zmes aminokyselin získa-ný kyslou hydrolýzou kazeínu, obsahuje celkovýdusík 10 %, NaCl 14^%, popol 15 %, fosfor akokysličník fosforičitý 2 %) á albumínová frakciakrvného séra alebo plazmy ošípaných vmnožstve0,1 až 1,5 % (objemových), spíňatieťó rastovépožiadavky, že očkovacia látka vyrobená z mikro-organizmu Bordetella bronchiseptica, kultivova-ného v uvedenej živnej pode, má dobrý preventiv-ný účinok proti infekčnej atrofickej rinitíde ošípa-ných.

Podstatou vynálezu teda je inaktivovaná očko-vacia látka proti infekčnej atrofickej rinitíde óšípa-ných, ktorá obsahuje v 1 ml 2 x IQ8 až 20 x 108, inaktivovaných zárodkov baktérií Bordetella bron-chiseptica adsorbovaných na gel hydroxidu hlinité-ho, a to kmene baktérií CCM 53Q4, CCM 3305,CCM 3306, CCM 3307. '

Bre výrobu inaktivovanej očkovacej látky sapoužívajúbaktérie Bordetella bronchiseptica v I.rastovej fáze, ktoré sa kultivujú v sójovom živnommédiu, obhatenom o rastovo-stimulačné faktory,ktorými sú zmes aminokyselin, získaných kyslou, hydrolýzou kazeinu v množstve 0,5 až 1,5 hmot-nostných %, kvasničný extrakt v množstve 0,05 až0,15 hmotnostných %, albumínová frakcia z krv-ného séraalebo plazmyošípaných v množstve 0,01až 0,15 hmotnostných %, vztiahnuté na hmotnostživného média, pri teptote 36 až 37 °C, po dobu 20až 36 hodin a potom sa získaná bakteriálna kultúrainaktivuje 4,8 až 5,2 % vodným roztokom formalí-nu v množstve 3,9 až 4,1 objemových % vztiahnuténa objem kultúry, následné sa adsorbuje na gelhydroxidu hlinitého, ktorého množstvo je 30 až 35objemových % vztiahnuté na objem kultúry a posedimentácii sa koncentruje odstránením supema-tantu. Přínos tohto vynálezu spočívá v tom, že námi vyrobená očkovacia látka vytvoří u očkovaných ošípaných dobrú aktívnu imunitu proti infekčnej atrofickej rinitíde. Úplné alebo čiastočne odstráni

Claims (4)

1. používanie chemických prípravkov používaných naprevenciu tejto nákazy. Zníži náklady spojenés podáváním týcho prípravkov na prevenciu, a týmcelkove zlepší ekonomiku chovu pri výrobě brav-čového masa. Zníži sa množstvo používanýchróznych širokospektrálnych antibiotik, čím sa zúžiamožnosti výskytu prenosnej rezistencie. , Vakcína je kontraindikovaná v chovoch, kdeprebieha iné nákazlivé ochorenie prasiat a nesmiesa pódávať u prasnic menej ako 14 dní předpórodom. Vakcína sa aplikuje podkožně do volného vázivaprekolennej riasy, alebo pri kořeni ušnéhoboltca. Po aplikácii vakcíny nevznikajú žiadne re-akcie. Prasnice sa vakcinujú dvakrát v druhej polovicigravidity vždy s odstupom 14 dní, dávkami 10 ml.Druhá dávka musí byť podaná najneskór 14 dnípřed očakávaným pórodom. Prasiatka sa vakcinujúdvakrát a to vo veku 14 a 28 dní dávkou 3 ml. Imunita nastupuje za 10 až 14 dní po poslednejdávke vakcíny. Imunně prasnice sú schopné kolo-stralhou cestou chránit svoje mláďatá proti infekciidýchacích ciest zárodkami Bordetella bronchisep-ticá počas jedného pórodu. Vákcinované prasiatkasú schopné aktívnou tvorbou specifických protilá-tok chránit' sliznicu dýchacích ciest voči infekciiv období porodu. Vakcína je vyhovujúca, ak priememý titer speci-fických aglutinačných protilátok dosahuje hodnotu1 : 640. 7 209351 Exspiračná doba vakcíny pri dodržaní skladova-cích podmienok je 1 rok. Příklad prevedefiiá K sterilnému „Sójovému živnému médiu“ sa zaaseptických podmienok přidá 0,5 až 1,5 % (hmot-nostných), optimálně 0,8 % hmotnostných pří-pravku Bacto Casamifflo aúítfš, 0,05 až 0,15 %(hmotnostných) s optimom 0,08 % přípravkuYeast extract a 0,01 až0,15 hmotnostných % albu-mínovej frakcie. Do takto pripravenej kultivačnejtekutej pódy sa naočkuje mikroorganizmus Borde-tella bronchiseptica I. rastovej fázy. Kultiváciaprebieha pri 36 až 37 °C ža stálého rhiešania pri170 ob/min. a přívode sterilného vzduchu 7 1/min.nepřetržíte počas celej kultivácie. pH je udržovanéna hodnotě 7,6. Pri poklese priepUstnosti na 50 %(meranej na Spekole proti referenčnej vzorke pri575 nm) sa kultivácia ufeóílčí. Dížka kultivácie je20 najdlhšíe 36 hodin. Po ukončení kultivácie sabakteriálna kultúra inaktivuje 5% vodným rozto-kom formalínu v pomere 4 % k objemu kultúry. Po30 min. inaktivácii sa kultúra adsorbuje naAl(QH)3-gel v pomere 33 ó/o k óBjému kultúrya naadsorbovaná kultúra sa nechá 48 hodin sedi-mentovať. Po sedimentácii sa inaktivovaná očko-vacia látka zahustí na 1/3 póvodného objemuOdsátím supematantu a upraví sa akťúálha aciditana hodnotu 5,8 až 6,8 pomocou hydrofosforečnanusodného. PREDMET

   1. Inaktivovaná očkovacia látka proti infekčnejatrofickej rinitíde ošípaných, vyznačujúca sa tým,žel ml obsahuje 2 X 108 až 20 x 108 inaktivóva-ných zárodkov baktérií Bordetella bronchisepticaa to kmene baktérií CCM 3304, CCM 3305, CCM3306, CCM 3307, adsorbovaných na gel hydroxiduhlinitého.
2. 2. Sposob výroby inaktivovanej očkovacej látkypodlá bodu 1, ktorá sa vyrába z baktérií Bordetellabronchiseptica v I. rastovej fáze, vyznačujúci satým, že sa kultivuje I. rastová fáza baktérií Borde-tella bronchiseptica v sójovom živnom médiuobohatenom o rastovo-stimulačné faktory, ktorý-mi sú zmes aminokyselin získaných kyslou hydrolý-zou kazeinu, v množstve 0,5 až 1,5 hmotnostných%, kvasničný extrakt v množstve 0,05 až 0,15hmotnostných %, albumínová frakcia z krvnéhoséra, alebo plazmy ošípaných v množstve 0,01 až0,15 hmotnostných %, vztiahnuté na hmotnost’ VYNÁLEZU živného média, pri teplóte 36 až 37 °C, po dobu 20až 36 hodin a potom sa získaná bakteriálna kultúrainaktivuje 4,8 až 5,2 % vodným roztokom formalí-nu v množstve 3,9 až 4,1 objemových % vztiahnuténa objem kultúry, nááiéifie sa adsorbuje na gelhydroxidu hlinitého, któťéWo AftÓŽŠÍVo je 30 až 35objemových % vztiahnuté na objem kultúry a posedimentácii sa koncentruje odstránením supema-tantu.
3. 3. Sposob výroby podlá bodu 2, vyznačujúci satým, že baktérie" BÓřdfetelíá bronchiseptica pred-stavujú kmene baktérií CCM 3304, CCM 3305,CCM 3306, CCM 3307.
4. 4. Sposob výroby podlá bodu 2 a 3, vyznačujúcisa tým, že sa používajú rastovo-stimulačné faktoryv zložení 0,8 hmotnostných % zmesi aminokyselinzískaných kyslou hydrólýzou kazeinu, albuminovejfrakcie z krvného séra, alebo plazmy ošípaných,vztiahnuté na hmotnost živného média.