CS206924B1 - Způsob odstraňování zbytků dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu z roztoku imunoglobulinů - Google Patents

Description

(54) Způsob odstraňování zbytků dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu z roztoku imunoglobulinů

Vynález se týká výroby imunoglobulinů /protilátek/ z jejichž roztoků se odstraňují zbytky purifikačního činidla - kvartérní amoniové sloučeniny.

Pro přípravu lidských i zvířecích sérových imunoglobulinů existuje řada výrobních postupů. Jeden z nich spočívá v použití purifikačního činidla dimethyllaurylbenzylamoniumbromidu, který odstraňuje ze séra nebo z plasmy veškeré bílkoviny kromě imunoglobulinů. Zbytky purifikačního činidla se odstraňují adsorbcí na aktivní uhlí a imunoglobuliny se získají vysolením síranem amonným. Tento způsob přípravy sérových imunoglobulinů je chráněn podle československého patentu č. 132058. Součástí uvedeného výrobního postupu je nevýhodný způsob odstraňování zbytků dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu adsorbcí na aktivní uhlí, které se přidává za míchání do roztoku imunoglobulinů ve formě husté pasty s vodou v množství 2 %. Po vmíchání veškerého uhlí se roztok nechá v klidu usadit do druhého dne, kdy se sleje z usazené vrstvy uhlí a filtruje se na tlakovém filtru přes filtrační vrstvu. Nevýhoda tohoto postupu spočívá ve ztrátách imunoglobulinů, ke kterým dochází během adsor.bce a filtrace jejich roztoku, možnost přechodu jemMých částic aktivního uhlí do roztoku imunoglobulinů, kde působí šedočerný baťevný odstín hotového přípravku a konečně je tato operace časově náročná, pracná a finančně nákladná.

206 924

206 924

Výše uvedené nedostatky řeší způsob odstraňování žbytků dimethyllaurylbenzylamoniumbromidu podle vynálezu, jehož podstatou je použití k tomuto účelu iontoměniče - silně kyselého katexu v Na⁺ formě, s výhodou katexu OSTIONu KS.

Použitím silně kyselého katexu v Na⁺ formě se sníží ztráty imunoglobulinů při výrobě o 15 až 20 %, zlepši ge vzhled hotového výrobku, sníží se výrobní náklady a výroba se celkově urychlí a usnadní. Tento způsob je velmi jednoduchý a nevyžaduje žádné složité výrobní zařízení. Použitím silně kyselého katexu v Na⁺ formě se nemění vlastnosti konečného výrobku, který si uchovává plnou biologickou účinnost protilátek. OSTION KS mé vysokou výměnnou kapacitu /1,8 mval/cm-V, takže např. 10 1 tohoto katexu odstraní zbytky dimethyllaurylbenzyl amonium-bromidu z 1300 až 6500 1 0,1 až 0,5%-ního roztoku tohoto purifikačního činidla v prostředí imunoglobulinů. Cena OSTIONu KS je poměrně nízká a lze jej používat prakticky stále po periodické regeneraci, která se provádí 3 až 4 objemy 10%niho roztoku NaCl na objem OSTIONu KS, s následným promytím destilovanou vodou do negativní reakce aluátu na chlo ridové ionty a 0,9 %ním roztokem NaCl. OSTION KS se plní do skleněné kolony, jejíž poměr průměru k výšce se pohybuje v rozmezí 1:5 až 1:10. Před regenerací je vhodné provádět protiproudové nakypření uvedeného katexu destilovanou vodou. Detekce přítomnosti dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu v eluátu se provádí l,7%ním roztokem ferrikyanidu draselného.

Bližší charakteristika uvedeného iontoměniče: Název Výrobce

Dodavatel s

Funkční skupiny Forma

Kapacita suchého katexu Kapacita vlhkého katexu Zrnění

Sypná váha Pracovní rozsah pH Tepelné stálost Cena

OSTION KS

Spolek pro chemickou a hutní výrobu, Ústí nad Labem <

Chema, Kyjov - so₃h Na⁺ mval/g

1,8 mval/cm^

0,3 až 1,2 mm

740 g/1 až 14 do 125°C

Kčs na litr .

Skleněná kolona s vypouštěcím ventilem a s pevným keramickým nebo novodurovým sítem na dně kolony o rozměrech např. 100 x 500 mm se naplní z části destilovanou vodou a přidá 25 mm vrstva skleněných kuliček o průměru cca 3 mm. Na kuličky se navrství katex OSTION KS do dvou třetin výšky kolony. Následuje promytí sloupce tohoto katexu 0,9%ním roztokem NaCl.

Roztok zvířecích imunoglobulinů, získaný po odstranění sraženiny balaetních bílkovin

208 924 se přivádí kontinuálně na kolonu OSTIONu KS a nechá se volně protékat rychlostí 0,6 až 0,7 1 za minutu přes sloupec tohoto katexu. Po projití 1000 až 1200 1 roztoku se provédí kontrolní zkoušky na nepřítomnost dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu v eluátu zákalovou reakcí s ferrikyanidem draselným.

Provedeni zkoušky: K 5 cm^ eluátu /roztoku imunoglobulinů/ se přidají 2 cnP l,7%niho roztoku ferrikyanidu draselného. Za přítomnosti zbytků dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu vznikne žlutý zákal až sraženina. Jakmile se v eluátu zjistí přítomnost dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu, je nutno provést regeneraci kolony následovně: Deset 1 10%ního roztoku NaCl se nechá volně protékat kolonou rychlostí 0,5 1 za minutu a po projití veškerého roztoku se promyje kolona destilovanou vodou do negativní reakce eluátu na chloridové ionty a promyje se 10 1 0,9%ního roztoku NaCl. Tím je kolona připravena k dalšímu použití.

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Způsob odstraňování zbytků dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu z roztoku imunoglobulinů v průběhu jejich výroby, vyznačený tím, že ee roztok imunoglobulinů se zbytky dimethyllaurylbenzylamonium-bromidu nechá volně protékat skleněnou kolonou přes sloupec silně kyselého katexu v Na⁺ formě.