JPS5830040B2 - 抗生物質の採取法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はセファマイシンＣの濃縮及び精製に関するもの
である。

更に詳しくは、本発明はセファマイシンＣを含有する醗
酵液からセファマイシンＣを濃縮精製する方法に関する
ものである。

セファマイシンＣは次の構造式を有するセファロスポリ
ン抗生物質である。

醗酵法によるこの抗生物質の製造は、スタプレー等によ
ってアンチミクロピアル・エージンッ・アンド・ヘモセ
ラピー（ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓ
ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）１９７２年９月、
１２２〜１３１頁）に報告されている。

このような方法においては、多量の望ましくない物質を
含有する大量の液体から所望の生成物を分離することが
必要である。

このような分離は時間がかかりそして費用がかかる。

従って、本発明の目的は醗酵液からセファマイシンＣを
得る改善された方法を提供せんとするものである。

他の目的は、製造された醗酵液からセファマイシンＣを
濃縮及び精製する方法を提供せんとするものである。

他の目的は、醗酵液からセファマイシンＣを濃縮及び精
製する簡単な且つ経済的な方法を提供せんとするもので
ある。

本発明のこれらの及び他の目的は、以下の記載から明ら
かとなるであろう。

セファマイシンＣは、セファマイシンＣを含有する醗酵
液を次の工程順序即ち、酸性ｐＨでの済過、活性炭素上
の炉液の吸着、炭素を水及び極性有機溶剤の混合物と接
触せしめることによる吸着抗生物質の除去、陰イオン交
換樹脂と溶離液との接触及びｐＨ約５．５〜１０におけ
る塩溶液による樹脂の溶離にうけしめることによって濃
縮及び精製される。

セファマイシンＣは前述したスタプレー等により説明さ
れている醗酵法により製造される。

醗酵の終りにおいて、セファマイシンＣは多量の望まし
くない有機及び無機物質を含有する大量の液体中に存在
する。

本発明によれば、このような醗酵液中に存在するセファ
マイシンＣは、′酸性化、済過、炭素上の吸着、任意的
な水による炭素吸着物の洗滌次に水及び極性有機溶剤の
混合物による溶離、溶離液と陰イオン交換樹脂との接触
及び約ｐＨ５゜５〜１０における樹脂の溶離からなる操
作イこよって濃縮精製される。

本発明の方法の工程を詳述する。

Ａ、醗酵液を酸好適には経済的な理由から鉱酸もつとも
好適にはＨ２ＳＯ４の添加によって酸性にして約２．５
〜４．５のｐＨ好適には約３．５のｐＨにする。

次に酸性にした醗酵液を好適には例えば珪藻土のような
済過助剤を加えた後に濾過する。

Ｂ、 Ｆ液を活性炭素と接触する。

任意的にしかし好適には活性炭素は鉱酸で予備処理し次
に水で洗滌する。

灰分のアルカリ性は実質的に除去される。

好適には、カラムの底部における炭素粒子がカラムの上
部部分の炭素粒子の重量によって破砕されないような炭
素が高度な多孔性及び比較的太なる孔サイズ並びに良好
な物理的強度を有する炭素カラム上に吸着させる。

好適には、炭素粒子は、タイラー１２メツシユスクリー
ンを通過しそしてタイラー４０メツシユスクリーン上に
保持されるようなサイズを有する。

適当な炭素は、ピッツバーグＣＡＬ炭素である。

吸着は、約１５分〜９０分のプソイド接触時間（カラム
中のろ液の滞留時間）中に行われる。

Ｃ０次に吸着した抗生物質を含有する活性炭素を任意的
にではあるが好適には吸着したセファマイシンＣに対し
て実質的に影響を与えることなしに望ましくない物質を
排除するのに充分な量の水で抗藻する。

００次に吸着したセファマイシンＣを含有する炭素を、
セファマイシンＣを脱着するのに充分な量の水及び極性
有機溶剤の混合物と接触させる。

極性溶剤は例えばケトン、アルコールまたはエステルで
ある。

好適な混合物は、アセトン及び水の１＝１（容量／容量
）混合物、ブタノールで飽和した水または水中の酢酸エ
チルの飽和混合物である。

Ｅ０次に脱着したセファマイシンＣを含有する水及び極
性有機溶剤の混合物を陰イオン交換樹脂で処理する。

この交換樹脂はセファマイシンＣをカラム上に保持しそ
して水−溶剤混合物及び不純物を通過させるものである
。

一般に、すべての陰イオン交換樹脂は等しく有効ではな
いが、何れの陰イオン交換樹脂も使用できる。

弱塩基性陰イオン゛交換樹脂が好適である。

適当な樹脂０）例ハ、ローム・アンド・ハス・カンパニ
ーにより製造されたＩＲＡ４５．ＩＲＡ４７゜ＩＲＡ６
８及びＩＲＡ９３である。

Ｆ０次に陰イオン交換樹脂を約５．５〜１０好適には７
以上の−を有する塩で溶離する。

適当な塩は、Ｎａ、ＰＯ４ｔ Ｎａ２ＨＰＯ４ｔ Ｎａ
ＣＬまたはＮａＨＣＯ３である。

溶離液中のセファマイシンＣは、出発醗酵液中の付随不
純物に関して約２０〜７０倍強化される。

溶離液中の有機物質の約４５〜６５％がセファマイシン
Ｃである。

以下の例は本発明を説明するものである。

しかしながら、本発明はこれらの例に限定されるもので
はない。

例１ 米国特許第３，７７０，５９０号に説明されているよう
にして製造したセファマイシンＣを含有する醗酵液５６
８１に、ｐＨを３．５に調整するのに充分な量の３Ｎ−
硫酸を加え次で珪藻土（ハイフロス−パーセル）１．５
４ｋｇを加える。

次に酸性にした液をドラム・フィルター上で済過し次に
炉液を炭素４４．３１の床容量を有する活性炭素（ピッ
ツバーグＣＡＬ）のカラムに供給しそしてカラム中の滞
留時間が約３０分であるような速度で炭素床を通す。

吸着したセファマイシンＣを含有する炭素を約２倍の床
容量の水で洗滌してカラムから望ましくない物質を排除
する。

次に炭素カラムを４．５倍の床容量のアセトン及び水の
にＦ（容量／容量）混合物と接触させる。

はじめに０．５倍の床容量の流出液を拾でそして脱着し
たセファマイシンＣを含有する残りの流出液をＩＲＡ６
８陰イオン交換樹脂４４．３／を含有するカラムに通す
。

次に樹脂をＮ ａ ３ Ｐ ０４の０．５Ｍ溶液で溶離
する。

溶離液のはじめの１５４を拾てそして次の２２５１を更
に処理するために集める。

この溶離液の部分中の有機物質の約５２％がセファマイ
シンＣからなりそしてこれに・対して醗酵液中において
は有機物質の約３％のみがセファマイシンＣからなる。

溶離液中で測定されるセファマイシンＣの量は、もとの
醗酵液中に存在する量の６２％である。

例２ この場合においては活性炭素を酸予備処理にうけしめる
以外は例１に説明した方法を反復する。

炭素の酸予備処理は、５０℃以上の温度でカラムを通し
てＩＮ−硫酸の１床容量を通すことからなる。

次に、カラムを５０℃以上の温度で水で上流方向に流し
て洗滌し次に流出液の−が４．０より犬となるまで加熱
しない水で洗滌する。

実めた陰イオン交換樹脂からの溶離液中の有機物質の約
５８％がセファマイシンＣからなる。

他方、出発醗酵液においては、有機物質の約３％のみが
セファマイシンＣかｅなる。

溶離液中に測定されるセファマイシンの量はもとの液中
に存在する量７１％である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 約２．５〜４．５のｐＨにおけるセファマイシンＣ
   を含有する醗酵液を濾過し、Ｆ液を活性炭素上に吸着せ
   しめ、炭素を水及び極性有機溶剤の混合物と接触せしめ
   ることによって炭素から吸着したセファマイシンＣを除
   去し、脱着したＦ液を陰イオン交換樹脂と接触させ次に
   樹脂を約５．５〜１０のｐＨにおける塩溶液で溶離する
   ことを特徴とする醗酵液不純物からセファマイシンＣを
   分離する方法。 ２ 醗酵液を約３．５のｐＨで濾過する特許請求の範囲
   第１項の方法。 ３ 活性炭素が約１２メツシユより小さくそして約４０
   メツシユより大きい粒子サイズを有する特許請求の範囲
   第１項の方法。 ４ 極性有機溶剤がアセトンである特許請求の範囲第１
   項の方法。 ５ 陰イオン交換樹脂が弱塩基性陰イオン交換樹脂であ
   る特許請求の範囲第１項の方法。 ６ 樹脂をＮ ｓ ｓ Ｐ ０４で溶離する特許請求の
   範囲第１項の方法。 ７ 樹脂を７以上のｐＨで溶離する特許請求の範囲第１
   項の方法。 ８ 炭素を水及び極性有機溶剤と接触せしめる前に活性
   炭素上に吸着されたセファマイシンＣを特徴とする特許
   請求の範囲第１項の方法。 ９ 活性炭素を灰分のアルカリ性が実質的に除去される
   まで酸で予備処理する特許請求の範囲第１項の方法。 １０ｐＨ約３．５におけるセファマイシンＣを含有スる
   醗酵液を済過し、この済液を約１２メツシユより小さく
   そして約４０メツシユより犬なる粒子サイズの酸予備処
   理した活性炭素上に吸着させ、炭素を水で洗滌し、炭素
   をアセトン及び水の約１：１（容量／容量）混合物と接
   触させることによって炭素からセファマイシンＣを除去
   し、脱着したろ液を弱塩基性陰イオン交換樹脂と接触さ
   せ次に樹脂を７以上のｐＨにおけるＮａ３ＰＯ４で溶離
   することからなる特許請求の範囲第１項の方法。