CS206294B1 - Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy - Google Patents
Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy Download PDFInfo
- Publication number
- CS206294B1 CS206294B1 CS516979A CS516979A CS206294B1 CS 206294 B1 CS206294 B1 CS 206294B1 CS 516979 A CS516979 A CS 516979A CS 516979 A CS516979 A CS 516979A CS 206294 B1 CS206294 B1 CS 206294B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- albumin
- ethanol
- proteins
- fraction
- paste
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 239000002699 waste material Substances 0.000 title claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 59
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 34
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 32
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- DZTHIGRZJZPRDV-UHFFFAOYSA-N N-acetyltryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DZTHIGRZJZPRDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims description 6
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 6
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 claims description 5
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- -1 sodium carboxylate Chemical class 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 2
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 claims 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 claims 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000001621 Mucoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010093825 Mucoproteins Proteins 0.000 claims 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 claims 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims 1
- 235000020097 white wine Nutrition 0.000 claims 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000006424 Flood reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Vynález sa týká spósobu izolácie albuminu z odpadnej frakcie ludskej plazmy, ktorý sa v roztoku stabilizuje a ostatně bielkoviny sa tepelne denaturujú a potom precipitujú etanolom.
Podlá literárnych údajov najznámejšie izolačně postupy albuminu z ludskej plazmy sú: Etanolová frakcionácia [E. J. Cohn, L. E. Strong, W. L. Hughes, D. J. Mulford, J. Ashworth, M. Melin, H. L. Taylor: J. Amer. Chem. Soc., 68, 459, (1946)] a jej modifikácia (Nitschmann H., Kistler P., Lergie W.: Helv. Chim. Acta, 37, 866, [1954]).
Rivanolová metoda· [Rejnek J., Bednářik T., Mašek J.: Cs. farm., 10, 407, (1961)].
Izolácia pomocou iontomeničov [Rybák M., Rejnek J.: Cs. farm., 7, 80, (1958)].
Izolácia etylenglykolom [Curling J. M., Borglóf J., Lindouist L. O., Briksson S.: Vox sang., 33, 97, (1977), Vilioen M.: Vox sang., 35, 268, (1978) (Garcia L. A., Ordotnez G. A.: Pat. USA No 4025500)].
Tepelno-etanolová metoda [Hoch H., Chanutin A.: Arch. of biochem. and biophysic, 51, 27, (1954), Lundblad J. I.: Vox sang., 5, 122, (1960), Gabr Y., Soliman H. R.: Acta biolog, et med. ger., 27, 341, (1971), Schneider W., Lefewre H., Friedler H., Mc Carty L. I.: Blut, 30j 121) (1875), Schneider W,, Wolter D., Mc Carty L. J.: Folia haematol., 104, 116, (1977)].
Pri izolácii albuminu etanolovou frakcionáciou krvnej plazmy vzniká bielkovinový odpad vo formě frakcie IV. Táto sa izoluje pri pH 5,8, iónovej sile 0,1, 40 objemových % etanolu a teplote —6 °C. Uvedená frakcia obsahuje niekolko druhov plazmatických bielkovín, včítane albuminu, kvantitativné získanie ktorého bežne používanými metodami sa nedaří realizovať.
Jedným z možných spósobov kvantitativného získania albuminu z odpadnej frakcie IV je modifikácia tepelno-etanolovej metody, ktorá povodně ako východzí materiál využívá l’udskú plazmu, v ktorej zastúpenie jednotlivých bielkovín je podstatné iné ako v odpadnej frakcií IV. Nevýhodou týchto metod je, že sa pracuje pri nízkom percente bielkovín východzieho materiálu, čo zvyšuje nároky na pracovně objemy, nízkej koncentrácii stabilizátora (0,004 M Na kaprylát) a vysokom percente etanolu, čo pri hraničných teplotách (70 °C) móže dochádzať k inreverzibilným změnám v molekule albuminu. Podstatným problémom pri tepelno-etanolovej metóde přípravy albuminu je separácia denaturovaných balastných bielkovín, ktorá sa spravidla prevádza na špeciálnych filtroch, alebo sa vyzráža polyetylénglykolom.
Originálnost navrhovanej izolácie albuminu z odpadnej frakcie IV je v tom, že pri de206294 náturách balastných bielkovín sa používá optimálna koncentrácia kombinovaných stabilizátorov za přítomnosti nízkého· percenta etanolu a vysokého percenta bielkovín, čo má priaznivý vplyv na kvalitu výrobku a výrobnú kapacitu.
Jeden z najnáročnějších technologických stupňov, a to izolácia denaturovaných bielkovín sa prevádza účinným, jednoduchým a zatial’ pri tomto spósobe izolácie albuminu neopísaným postupom, precipitáciou etanolom.
Podstata izolácie albuminu z odpadnej frakcie IV spočívá v tom, že albumin přítomný vo frakcii IV sa v roztoku stabilizuje kaprylátom sodným a acetyl-DL-tryptofanom za podmienok 4—5 obj. % etanolu, pH 6,5— 6,7 a 4,5—5,5 hmot. % bielkovín sa ostatně bielkoviny tepelne denaturujú pri teplote 68 až 69 °C po dobu 30 až 40 minút. Denaturované bielkoviny sa potom precipitujú etanolom za podmienok 12 obj. % etanolu, pH
5,1 až 5,3, iónovej sile 0,09 a separujú centrifugáciou. Supernatant obsahujúci albumin sa lyofilizuje, resp. albumin zo supernatantu sa vyzráža etanolom, popřípadě koncentruje iným vhodným spósobom.
Příklad prevedenia
1000 g pasty frakcie IV sa suspenduje v 5000 ml apyrogénnej vody. K roztoku sa přidá 19 g kaprylátu sodného a 21 g acetylDL-tryptofanu a pri pH 6,5—6,7 a teplote 68 —69 °C sa roztok zohrieva po dobu 30—40 minút. Denaturované bielkoviny sa vyprecipitujú přidáním 650 ml 96 % etanolu pri pH
5,1—5,3, iónovej sile 0,09, teplote —2°C po dobu 12 hodin. Vyprecipitované bielkoviny sa separujú na vysokootáčkových prietokových centrifugách rýchlosťou 25 1/hod. pri teplote —3 °C a supernatant, obsahujúci albumin sa číri cez azbestocelulózové vložky, filtrát sa rozplňuje do NTS fliaš, rotačně namrazuje pri —45 °C a lyofilizuje za nízkého vákua na špeciálnych sušiacich aparátoch KS 30, alebo LZ45.
1000 g pasty frakcie IV sa suspenduje v 5000 ml apyrogénnej vody. K roztoku sa přidá 19 g kapry látu sodného a 21 g acetylDL-tryptofanu a pri pH 6,5—6,7 a teplote 68—69 °C sa roztok zohrieva po dobu 30—40 minút. Denaturované bielkoviny sa vyprecipitujú přidáním 650 ml 96 % etanolu pri pH
5,1—5,3, iónovej sile 0,09, teplote —2 °C po dobu 12 hodin. Vyprecipitované bielkoviny sa separujú na vysokootáčkových prietokových centrifugách rýchlosťou 25 1/hod. pri teplote —3 °C a albumin obsiahnutý v supernatante sa vyzráža etanolom za podmienok pH 4,80, iónovej sile 0,1, 40 obj. % etanolu a teplote —8 °C.
1000 g pasty frakcie IV sa suspenduje v 5000 ml apyrogénnej vody. K roztoku sa přidá 19 g kaprylátu sodného a 21 g acetylDL-tryptofanu a pri pH 6,5—6,7 a teplote 68 —69 °C sa roztok zohrieva po dobu 30—40 minút. Denaturované bielkoviny sa vyprecipitujú přidáním 650 ml 96 % etanolu pri pH
5,1—5,3, iónovej sile 0,09, teplote —2 °C po dobu 12 hodin. Vyprecipitované bielkoviny sa separujú na vysokootáčkových prietokových centrifugách rýchlosťoiu 25 1/hod. pri teplote —3 °C a albumin přítomný v supernatante sa koncentruje na špeciálnom zariadení typu Centriterm, alebo DC 30.
Výťažnosť
Výťažnosť albuminu sa pohybuje od 120 do 140 g lyofilizovaného produktu na 1 kg pasty odpadnej frakcie IV. Dosahovaná výťažnosť je závislá na obsahu albuminu v odpadnej frakcii.
Analytické hodnotenie
V následuj úcej tabufke sú uvedené analytické hodnoty zistené u komerčného přípravku a přípravku vyrobeného podl’a vynálezu a tieto porovnané s požadovanými kritériami normy na albumin.
| Požadované sfcúáky | Kritériá normy | Dosliahnuté výsledky | |
| komerč. príp. | ipríp. podlá vynálezu | ||
| Sterilita | sterilně | sterilně | sterilně |
| Neškodnost Sfcúška na | neškodné | vyhovuje | vyhovuje |
| pyr. látky Obsah | apyrogénne | vyhovuje | vyhovuje |
| bielkovín | 4,5-5,5 g/ 100 ml | 4^94 g/lOOml | 4,72 g/100 ml |
| Alkohol kvallrtaitíviny | negativna | negativna | negativna |
| PH Tepelná | 6,2-7,4 | 6,95 | 6,75 |
| stabilita | max. ©0 ine- | 16 nefel. | 16 nefel. jed. |
| íel. jed. | jed. | ||
| Obsah Na | max, 87 mmol/1 | 61 tnm'ol/1 | 46 ,mmol/1 |
| Elektrofo- retloká čistota | min, 96 % | 96,0 % | 96,4 % |
Uvedené výsledky ukazujú, že kvalitativně kritériá přípravku vyrobeného podl’a vynálezu sa nelíšia od komerčného přípravku a vyhovujú normě na albumin.
Claims (3)
- PREDMET VYNÁLEZU1. Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie 1’udskej plazmy obsahujúcej alfa globulíny, beta globulíny viažúce kovy, vel’ký podiel lipoproteínov, alfaj lipoproteín, alfa2 mukoproteín, alfa2 glykoproteín a albumin vyznačujúci sa tým, že pasta z odpadnej frakcie IV sa suspenduje vo vodě, albumin sa stabilizuje a ostatně bielkoviny přítomné vo frakcii IV sa tepelne denaturujú pri teplote 68 až 69 °C po dobu 30 až 40 minút, precipitujú sa etanolom, separujú centrifugáciou a supernatant obsahujúci albumin sa filtruje, lyofilizuje, připadne koncentruje.
- 2. Spósob přípravy podl’a bodu 1 vyznačujúci sa tým, že albumin sa stabilizuje 0,02 M kaprylátom sodným a 0,02 M acetyl-DLtryptofanom a ostatně bielkoviny sa denaturujú za přítomnosti 4 až 5 obj. % etanolu a 4,5 až 5,5 hmotnostných % bielkovín.
- 3. Spósob přípravy podlá bodu 1 a 2 vyznačujúci sa tým, že denaturované bielkoviny sa precipitujú pri 12 obj. % etanolu a pH 5,1 až 5,3.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS516979A CS206294B1 (sk) | 1979-07-25 | 1979-07-25 | Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS516979A CS206294B1 (sk) | 1979-07-25 | 1979-07-25 | Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS206294B1 true CS206294B1 (sk) | 1981-06-30 |
Family
ID=5396067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS516979A CS206294B1 (sk) | 1979-07-25 | 1979-07-25 | Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS206294B1 (sk) |
-
1979
- 1979-07-25 CS CS516979A patent/CS206294B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69019074T2 (de) | Verfahren zur Fraktionierung von Plasmaproteinen. | |
| DE69513751T2 (de) | Reinigung von Alpha-l-proteinaseinhibitor mittels neuen chromatographischen Trennungsbedingungen | |
| US6835379B2 (en) | Method of producing IgG | |
| US4228154A (en) | Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography | |
| US20080242844A1 (en) | Ultra-high Yield Intravenous Immune Globulin Preparation | |
| CN106459140B (zh) | 用于纯化免疫球蛋白的方法 | |
| HU182554B (en) | Process for producing preparation of serum protein for intravenous application | |
| US4670544A (en) | Process for the manufacture of the cold insoluble globulin and pharmaceutical preparation containing it | |
| EP0127603B1 (de) | Verfahren zur Herstellung einer Faktor VIII(AHF)-hältigen Präparation | |
| US4348315A (en) | Process in purification and concentration of the factor VIII-complex | |
| US4476109A (en) | Method of preparing gamma globulin suitable for intravenous administration | |
| DE69329371T2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Faktor VIII-von willebrand Faktor (FVIII:C-FVW) Komplex aus menschlichem Plasma | |
| US2958628A (en) | Heat treatable plasma protein product and method of preparation | |
| US7879332B2 (en) | Ultra-high yield intravenous immune globulin preparation | |
| DE60121196T2 (de) | Verfahren zur monomerisierung von humanen serumalbumin-polymeren | |
| CS206294B1 (sk) | Spósob izolácie albuminu z odpadnej frakcie řudskej plazmy | |
| JPS59231097A (ja) | 均質ヒト免疫インターフェロンサブタイプ２１ｋおよびその製造法 | |
| DE1189674B (de) | Verfahren zur Isolierung von alpha-Antitrypsin | |
| US3475402A (en) | Process of extracting proteins from mistle press juice by carrier-free electrophoresis | |
| CH629819A5 (en) | Process for the isolation of albumin from human blood plasma | |
| DK159164B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af humant leukocytinterferon i krystallinsk form | |
| SU467536A1 (ru) | Способ получени сывороточного альбумина | |
| CH646439A5 (en) | Preparation of albumin from plasma | |
| US3038838A (en) | Method of producing purified properdin | |
| DE1250966B (de) | Verfahren zum Stabilisieren von menschlichen gamma-Globulinloesungen, die aus Plazentamaterial gewonnen wurden |