CS202884B1 - Způsob fermentační přípravy L-lysinu - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu fermentační přípravy L-lysinu, a to kultivací kmenů Corynebacterium produkujících L-lysin v tekuté živné půdě, která obsahuje na počátku fermentace jako hlavní zdroj uhlíku soli kyseliny octové, komplexní zdroje dusíku >a minerální živné soli.

Je známo více způsobů fermentační přípravy L-lysinu, při kterých se původně používaný zdroj asimilovatelného uhlíku, tj. sacharosa, nahrazuje jinými levnějšími a dostupnějšími zdroji, i za cenu o něco nižší produkce L-lýsinu. Tak například je popsána fermentace kmene Corynebacterium glutamicum v půdě s ethanolem jako jediným zdrojem uhlíku pro růst produkčního mikroorganismu a produkci L-lysinu a močovinou a NZ-aminem /obchodní produkt neurčeného složení/ jako zdroji dusíku. V průběhu fermentace se do půdy dávkuje směs ethanolu a močoviny v určitých poměrech v závislosti na pH-indikátoru, který je přítomen ve fermentačním médiu /australský pat. spis.č. 51577/.

Analogický postup s použitím fermentačního média jiného složení uvádí americký pat. spis č. 3 595 751. Dále je popsán technologický postup biosyntézy L-lysinu s produkčními kmeny Brevibacterium lactofermentum, užívající jako zdroje uhlíku a dusíku směsi kyselina octová-octan amonný nebo ethanol-čpavek /NSR pat. spis č. 2 321 461/.. Aktuální koncentrace ethanolu ve fermentačním médiu je sledována plynovou čhromatografii.

líkolem vynálezu bylo najít vhodné zdroje asimilovatelného uhlíku, které by pokud možno nahradily v produkční fázi drahou a deficitní sacharosu bez podstatného zásahu do obvyklé technologie a bez podstatného snížení výtěžků L-lysinu. Podařilo se vypracovat způsob fermentační přípravy L-lysinu kultivací kmenů Corynebacterium produkujících L-lysin v tekuté živné půdě obsahující na počátku fermentace jako hlavní zdroj uhlíku soli kyseliny octové, komplexní zdroje dusíku a minerální živné soli, podle vynálezu, jehož podstata spočívá V tom, že se v průběhu fermentace přidává do půdy po dosažení hodnoty pH 7,8 až 8,0 ve více dávkách obsahující 600 ml ethanolu, 100 ml kyseliny octové, 66 g. sacharosy a vodu do objemu 1 000 ml, v takových časových intervalech, aby koncentrace ethanolu v půdě činila 0,60 až 0,75 Z hmot. a hodnota pH 7,0 až 7,2, načež se po dosažení maxima produkce fermentace ukončí. Jako kmene

Corynebacterium, vhodného pro fermentací podle vynálezu, lze použít kmene Corynebacterium glutamicum, dependentního na homoserin a leucin a rezistentního k S-aminoethylcyateinu, popřípadě kmene, který je dependentní na homoserin a leucin a rezistentní k aminomethylthiomáselné kyselině.

Podle povahy použitého produkčního kmene lze způsobem podle vynálezu dosáhnout po 72 hodinách fermentace produkce L—lysinu'16 až 26 g/litr média, při podstatné úspoře sacharosy·

Bližší podrobnosti jsou patrny z příkladů provedení.

Příklady provedení:

Přikladl

Kmenem Corynebacterium sp. se zaoěkuje 60 ml inokulační půdy, umístěné v 500 ml varné baňce, tohoto složení:

octan sodný 1 , 5 g sacharosa 2,0 g kukuřičný extrakt /60Zní/ 3,0 g voda do 100,0 ml pH půdy před sterilizací 7,2, sterilizace 30 minut při 120 °C, Po zaočkování se kultivuje na rotační třepačce /240 ot/min/ 18 hodin při teplotě 29 °C. Kulturou vyrostlou v baňce se zaoěkuje 800 ml půdy ve dvoulitrových fermentačních tancích, jež má toto složení:

octan sodný	20	g
kukuřičný extrakt /6OXní/	10	8
hydrolyzát arašídové mouky	150	ml
síran amonný	10	8
fosforečnan draselný sek.	1	g
síran hořečnatý	o,’	S
uhličitan vápenatý	30	g
biotin	50	,«g
vitamin B,	1 00	,“g
voda	do Ί 000	ml

pH půdy před sterilizací 7,2, sterilizace 30 minut při 120 °C. Po zaočkování se kultivuje při teplotě 29 až 30 °C, vzdušnění stejným objemem vzduchu/min, míchání 800 ot/min. V průběhu fermentace se po dosažení pH 7,8 až 8,0 dávkuje v intervalech po 6 hodinách a v dávkách po ml ethanolová směs tohoto složení: ethanol 600 ml, kyselina octová 100 ml, sacharosa 66 g, voda do 1 000 ml. Během 72 hodin fermentace se do tanků přidá celkem ,00 ml uvedené směsi, která obsahuje zdroje uhlíku v tomto celkovém množství /přepočítáno na 1 litr média/: ethanol g, kyselina octová 11 g a sacha.rosa 7 g. Produkce L-lysinu po 72 hodinách fermentace činí až 18 g/litr fermentačního média.

Příklad 2

Kmenem Corynebacterium glutamicum, dependentním na homoserin a leucin a rezistentním k analogu lysinu, S-aminoethylcysteinu, se zaoěkuje 60 ml inokulačního média, umístěného v 500 ml varné baňce, stejného složení jako v příkladu 1 a kultivuje se za stejných-podmínek jako v tomto příkladu. Laboratorní dvoulitrové fermentační tanky se naplní po 800 ml fermentačního média stejného složení jako v tomto příkladu. Analogicky se dávkuje ethanolová směs.

Po 72 hodinách fermentace se proces ukončí. Produkce L—lysinu činí 21 až 26 g/litr fermentační ho média.

Příklad 3

Kmenem Corynebacterium glutamicum, dependentním na homoserin a leucin a rezistentním k analogu isoleucinu, aminomethylthiomáselné kyselině, se zaoěkuje 60 ml inokulačního média umístěného v 500 ml varné baňce, stejného složení jak,o v příkladu 1 a dále se kultivuje za

Stejných podmínek jako V tomto příkladu. Obdobně se vede fermentace ve 21 laboratorních dvoulitrových tancích, rovněž i dávkování ethanolové směsi. Produkce L-lysinu po 72 hodinách fermentace činí 19 až 21 g/litr.

Claims (1)

1. PSEDMfiT VYNÁLEZU

   Způsob fermentační přípravy L-lysínu kultivací kmenů Corynehacteríum produkujících L-lysin, v tekuté živné půdě obsahující na počátku fermentace jako hlavní zdroj uhlíku soli kyselí ny octové, komplexní zdroje dusíku a minerální živné soli, vyznačující se tím, že se kultivuji kmeny Corynehacteríum glutámicum, dependentní na homoserin a leucin a rezistentní k S-aminoethy1eysteínu nebo k amínomethy1thiomáseIné kyselině, přičemž se v průběhu fermentace přidává do půdy po dosažení hodnoty pH 7,8 až 8,0 ve více dávkách směs, obsahující 600 ml ethanolu,

   100 ml kyseliny octové, 66 g sacharosy a vodu do objemu 1 000 ml, v lech, aby koncentrace ethanolu v půdě činila 0,60 až 0,75 Z hmot. načež se po dosažení maxima produkce fermentace ukončí.