CS202545B2 - Method of preparing living vaccine from influenza virus for nasal application - Google Patents
Method of preparing living vaccine from influenza virus for nasal application Download PDFInfo
- Publication number
- CS202545B2 CS202545B2 CS75669A CS66975A CS202545B2 CS 202545 B2 CS202545 B2 CS 202545B2 CS 75669 A CS75669 A CS 75669A CS 66975 A CS66975 A CS 66975A CS 202545 B2 CS202545 B2 CS 202545B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- strain
- virus
- influenza
- atcc
- attenuated
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 40
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 41
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 31
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 19
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 7
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims 3
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 abstract description 29
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 abstract description 6
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 abstract description 4
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 33
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 20
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 19
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 5
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000353621 Eilat virus Species 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 241001500350 Influenzavirus B Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229960001226 live attenuated influenza Drugs 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229940037525 nasal preparations Drugs 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- XULSCZPZVQIMFM-IPZQJPLYSA-N odevixibat Chemical compound C12=CC(SC)=C(OCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC)C(O)=O)C=3C=CC(O)=CC=3)C=C2S(=O)(=O)NC(CCCC)(CCCC)CN1C1=CC=CC=C1 XULSCZPZVQIMFM-IPZQJPLYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000008063 pharmaceutical solvent Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
. Vynález se týká způsobu přípravy živé vakciny z chřipkového viru pronasální podání, obsahující jako aktivní složku oslabený, ustálený kmen viru chřipky typu B, popřípadě oslabený, ustálený kmen viru chřipky typu A podávatelné nasálně a způsobu . přípravy zmíněné vakcíny z oslabeného, ustáleného viru chřipky. » ·
Bylo prokázáno, že ochrana proti virovým infekcím dýchacích cest souvisí s lokální imunitou respirační sliznice. Tento aspekt byl zpracován v poslední době formou přehledného referátu Rossenem se sp. (Progr. Med. Vi^OjL. 1971, . 13, 194)‘.\V posledních létech bylo učiněno několik pokusů o indukci imunity proti chřipce nasální aplikací Zaktivovaných vakcín (viz . například: Waldman se sp. ·: Nátuře, 1968, 218, 594; JPMA 1969, 207. 520; WHO Bull. 1969, 41, 543). Výsledky byly nejednotné,, bylo to patrně zaviněno nedostatečnou stimulací imunitního systému Zaktivovanými antigeny· (TyreH· se sp.: J. Hyg. 19'70-, 68, 359).
Živé vakcíny viru chřipky typu . B jsou známé, poskyyuuí však variabilní stupeň ochrany. Četné pokusy o’redukci pathogenních vlastností viru byly provedeny například sériovými pasážemi na vejcích (viz například P. P. SmoooOtntsev, Proč. . Symposium on acu.te respirátory Diseases, Zagreb 1969, 391-404) nebo s využitím nízko teplotních mmu-ant (P. · M. Davenpprt se sp. · Proč. Symposium on Live Influenza Vaacines, Zagreb 1971, 105-113). .
V literatuře jé též popsána rekombinace kmenů viru chřipky typu B (viz například E. D. Kilbourne: Progr. Med. Virol. 2, 79-126, 11963). ‘
Jak je uvedeno například G. ·C. Schildem se sp. : Brit. Med. J. 4, 127-31, 197.3, antigenní variace jeho povrchových antigenů je jednou z nejdůležitějších chaaaktteístik viru chřipky a vlastnootí, která přináší četné problémy při pokusech o kontrolu chřipky vakcinací.
Předložený vynález přináší oslabené, ustálené kmeny viru chřipty typu B, cenné pro vakcínové použití nebo způsob jejich přípravy, vyznačující se tím, že virulentní kmen viru chřipky typu В se oslabí natolik,· žetse získá oslabený a vakcínový kmen chřipkového viru typu B, zmíněný oslabený a vakcínový kmen se rekombinuje s izolátem chřipkového viru typu В a rekombinant,mající alespoňj jeden znak vlastnosti oslabeného rodičovského kmene, o který se nepodílí s druhým rodičovským kmenem a antigenní skladbu druhého rodičovského kmene, se izoluje selektivním tlakem. Selektivním tlakem se zde rozumí každá selektivní činnost prováděná virocidem a dovólující přežití virů, které mají jeden nebo více zvláštních dědičných fakto. rů, zatímco viry, které nemají tyto faktory, se eliminují.
Oslabený a vakcínový chřipkový kmen typu В je zvláště kmen uváděný zde také jako Brigit (uložený v americké sbírce typových kultur, 12301 Parklawn Driwe, Rockville Md 20852 pod depositním číslem ATCC VR786) a byl získán pasážováním chřipkového kmene B/Russia/69/ATCC VRT90 v allantoické dutině kuřecích zárodků v přítomnosti vepřového séra až po izolaci oslabeného vakcínového kmene chřipkového viru typu В s následujícími vlastnostmi:
- je zcela resistentní vůči sérovým inhibitorům,
- vykazuje pozitivní znak AÓS (allantoic on shell), (titrace na allantoické membráně na skořápce je popsána S. · Fazekasem, St. Grothem a D. O. Whitem: J. Hyg'. 56. 151-62, 1958),.
- v testech provedených na fretkách je antigenní bez vedlejších účinků,
- vykazuje při 60 °C pozitivní hemagglutininovou thermosensitivitu,
- vykazuje při 30 °C nestabilní hemagglutinaci ovčích erythrocytů.
V uvedeném způsobu přípravy rekombinační stupeň se provádí v kterémkoliv .známém růstovém substrátu chřipkového viru typu B, tj., materiálu kuřecích zárodků nebo na tkáňové kultuře ledvin hovězího plodu, zvláště v allantoické dutině kuřecích zárodků. Rekombinaci lze provést s kterýmkoliv Žádaným izolátem viru typu B, zvláště s novým izolátem B/Hong Kong/5/72 (ATCC VR79I) nebo B/Hong Kong/8/7/73 (ATCC VR792)./
Takto získané rekombinované kmeny.mohou být klonovány nebo podrobeny několika dilučním pasážím, aniž by byla měněna podstata vynálezu.
Rekombinanty získané podle tohoto vynálezu z kmene Brigit (ATCC 7R786) buč s izolátem B/HK/5/72 (ATCC VR79D, nebo s izolátem Β/ΗΚ/Θ/73 (ATCC VR792) byly určeny jako kmen chřipkového viru typu В R 22 (ATCC VR788), kmen R 5 (ATCC VR787) a kmen R 75 (ATCC VR789).
Rekombinanty viru získané způsobem přípravy podle vynálezu jsou nepathogenní, imunogenní, cenné pro přípravu živé.vakcíny chřipkového viru typu В za použití kteréhokoliv známého postupu přípravy živé vakcíny chřipkového viru a/nebo její stabilizace. V důsledku toho se vynález týká také oslabené vakcíny chřipkového viru typu, obsahující alespoň jeden zmíněný rekombinant chřipky typu В a způsobu přípravy zmíněné vakcíny z tohoto rekombinantu.
V souhlase s tímto, vynález se týká způsobu přípravy vakcíny z oslabeného chřipkového viru; vyznačujícího se tím, že kmen chřipkového viru typu B, získaný výše uvedeným postupem se nechá růst v allantoické dutině kuřecích zárodků po dostatečnou dobu umožňující růst velkého množství viru a získání rezultujícího virového materiálu.
Takto získané vakcíny oslabeného viru chřipky se aplikují místně v nosohltanu v účinné dávkovači' jednotce (tj. alespoň 10 ΕΙΏ^θ viru)^ zmíněné podání se v případě potřeby opakuje.
Pro vakcínové využití se udržuje vir s výhodou ve formě lýofilizátu a vakcína se rekonstituuje v případě potřeby přidáním vody nebo jiného farmaceutického rozpouštědla nebo směsi, známých pro přípravu nasálních preparátů, jako jsou kapky nebo spray. Vakcínové forma může samozřejmě obsahovat stabilizátor,jako je například pepton, cukr a další známé používané látky. ' ’
V souhlase s jiným znakem vynálezu, kmen chřipkového viru typu B, získaný výše popsaným postupem, může být kombinován s vakcínou chřipkového viru typu A, aplikovatelnou nasálně.
Vynález se tedy týká způsobu přípravy živé vakcíny z chřipkového viru pro nasální podávání, jejíž aktivní složka obsahuje alespoň účinné množství rekombinantu oslabeného kmene chřipkového viru typu B, vyznačující se tím, že se rekombinuje ve známém růstovém substrátu chřipkového viru typu B, tj. v kuřecíph zárodcích nebo v tkáňové kultuře z ledvin hovězího plodu, s výhodou v allantoické dutině kuřecích zárodků/oslabený a vakcínový kmen chřipkového viru typu B, tj. kmen Brigit chřipkového viru typu В (ATCC VR786) s izolátem chřipkového viru typu B, tj. s izolátem B/HK/5/72 (ATCC VR791) nebo s B/HK/8/73 (ATCC VRT92) a rekombinant, tj. kmen chřipkového viru typu В R 22 (ATCC VR788) nebo kmen R 75 (ATCC VR789) nebo kmen R 5 (ATCC VR787)>mající alespoň jeden znak vlastnosti oslabeného rodičovského kmene, který nesdílí s druhým rodičovským kmenem a antigenní skladbu druhého rodičovského kmene, se izoluje selektivním tlakem, zmíněný rekombinant se ponechá růst v allantoické dutině kuřecích zárodků a je-li to třeba, přidá se stabilizátor a směs se zlyofilizuje.
Následující příklady vynález ilustrují, aniž by jej omezovaly.
Přikladl
Vzorek kmene chřipky,B/Russia/69 (ATCC VR790) se podrobí třem konečným, dilučriím pasážím s cílem přečištění na vejcích prostých specifických pathogenů. Vzorek poslední pasáže se použije jako, inokulum pro přípravu pokusné šarže, která byla shledána prostou pathogenních ptačích činidel a citlivou vůči sérovým inhibitorům a vykazující residuální pathogeni—1 —3 —5 -7 tu pro člověka. Různé koncentrace (tj. 10 , 10 , 10 ' a 10 ') inokulačního virového materiálu v solném roztoku se mísí s různými koncentracemi sterilního vepřového séra (neředěného, 25 % a 5 %)', vystaveného předtím po dobu 15 minut teplotě vroucí vodní lázně, homogenizovaného a odstředěného při 2 000 ot./min. po dobu 30 minut. Filtrát se použije pro další stupeň, který spočívá v inkubaci směsi vir,· sérum 1 hodinu při 37 °C před inokulaci 0,2 ml této směsi do allantoické dutiny vajec s kuřecími zárodky předtím inkubovaných po 8 až 11 dní při 37 °C a filtrovaných přes svíčku (inokulována byla pouze přežívající vejce). Vejce se potom inkubují dále po dobu pohybující se mezi 24 a 96 hodinami.
Po skončené inkubaci se provede filtrace na svíčce a přežívající vejce se ochladí na x 4 °C. Allantoické tekutina ze všech sérií přežívajících vajec se izoluje odděleně a testuje hemagglutinační methodou na přítomnost viru chřipky. Izolovaný vir, produkovaný inokulem největšího virového ředění, v přítomnosti největší sérové koncentrace, vykazující hemagglutinační aktivitu (tj. virové zředění 10_í>, sérová koncentrace 25 %) se užije pro druhé pasážování provedené za stejných pracovních podmínek.
Postupem uvedeným výše se provede celkem 5 pasáží.
Vir, izolovaný po 5 pasážích, produkovaný inokulem největšího zředění viru (tj. 10”°) v přítomnosti neředěného séra, vykazuje hemagglutinační aktivitu a je resistentní vůči sérovým inhibitorům.
Tři další pasáže při konečném zředění se provádějí v nepřítomnosti séra s cílem klonovat resistentní mutantu a stabilizovat její resistentní charakter. Vir získaný z každé těchto tří pasáží je resistentní vůči inhibitorům normálního séra. Vir poslední pasážové hladiny pojmenovaný Brigit” a deponovaný v ATCC pod depositním číslem VR786, se užije jako inokulum pro přípravu šarže virového inokula. Získané allantoické tekutiny se shromáždí a slijí, otestují na sterilitu a bezpečnost, smísí s peptonem, až se dosáhne konečná koncentraci 5 % peptonu. Objem 0,5 ml virové suspenze se naplní do 3 ml lahviček, lyofilizujě se a získá se šarže Brigit kmene (ATCC VR786).
Charakteristiky modifikovaného viru (Brigit kmen) in ·vitro a in-vivo: ..
1) Inhibitorová resistence' s * ' .·
Pro hodnoceni resistence vůči inhibitorům, přitomrým v normálním, ohřátém- ·živočišném séru (ohřátém předtím 1 hodinu na 75 °C), sériová dvojnásobná zředění ohřátých , ·sér byla · smíchaná se 4 he^e^^gil^ttinační^mi jednotkami · rodičovského· kmene a· . modifikovrnéht viru. Po in, kubaci po dobu 1 hodiny za normální teploty, byly přidány kuřecí erythrocyty ·a výsledky hodnoceny. · Výsledky ukazují, úplnou resistenci u inokulační šarže i u pokusných šarží z inokulační šarže · připravených. V předložené speecfikaci je eeaeo charakter uváděn jako pozZtivní. .
2) Antigenita a ntpřítoonost vedlejších účinků .
Skupina · dvou fretek byla inokulovina nasálně s 10?-10® EID^q Brrgit kmene (ATCC VRR86·).
Teplota zvířat kontrolována denně · po dobu 8 dní p.i. Nebyl zaznamenán žádný význačn^ší . vzrůst teploty (maximální teplota 39,6 °C). Druhá skupina dvou fretek byla inokulována nasálně 10?-10®· EID^q · rodičovského kmene B/Ruusia/69 (ÁTCC VR790). Dva dny po inokulaci vylkázaXa zvířata teplotu 40,2 °C. Testy, týkající se·inhibice atmoriiuUinact ukázaly, že , mo o dekovaný kmen indukoval antigenní reakci u fretek: 14 dní po nasální inokulaci byly titry sérových protilátek očkovaných zvířat velmi vysoké (titr: 1/256) proti hodnotí konnrolní, neočkované skupiny (tit^?: <11/8).
3) Poměr E^/UOS)]^ (AOS znak) ' . . .
Totéž inokultm se titruje na kuřecích Zárodcích a v systému allantoicki memmrána na skořápce. (Strace na rllanetické membráně · na · skořápce je popsána S. Faztkasto, St. Grotilem a D. O. · Wh tem: J. Hyg. 5) 151-62, 195B.,) · Poměr EID^q/C AOSJID-q pro Brigit kmen (ATCC' VR786) byl na^zen ^1°2 . V předložené speccfikaci je poměr 410214 uváděnjato pozitivní. ,
4) Hemoggluuenační eatroozettittvitr ·
HeeoggluUinační test byl prováděn v infikované allantoické dutině, inkubované 1 hodinu při 60 °C. Po tomto zásahu ΒτΊ.β±^ kmen (ATCC VR786) ztratil zcela htInoaiiuUinrční vlastnost. Tato th^mass^^^i^ je zde označována jako pozitivní.
5) Hemoggluuenaδní test s ovčími eryeaascyey při 30 °C
Heeoggluuenační test byl proveden s ovčími eryearocyey při 4 a 30 °C.
vzorky při 4 °C byly normminí, zatímco při 30 °C docházelo k rychlému vylučování, takže nebylo možné pozorovat jasnou aemariiuUinační hranííci. Pozorováním po 20' hodinách po začátku testu bylo zjištěno, že htmariiuUinact zcela zmizela. Tento charakter je zde · označovin jako nestabilní.
Přřklad2
Vzorek kmene B/HC/5/72 (ATCC VR791) viru chřipky typu B; jehož aemargiuUinin se liší od kmene Brigit (ATCC VRR78), se inokuluje v rllattsické dutině vajec s kuřecími zárodky, starými 10 až 11 dní (inokul um: 0,2 ml/vejce), podrobí se třem pasážím, aby se získalo · poddtatné mn^žtví viru. Na konci pasáže se ztató vir^ov1 suspenze, jejíž titr ·oíioovíí1 W®
EID-q/diI. Odp^d^ící mužství (0,2 m.) neředěné virové suspenze se inokuluje v SPF г11гпetické dutině (prosté specifických paehtienů) kuřecích zárodků. Po inkubaci po dobu 2 hodin při 33 °C se inokuluje do stejrý^ vajec Brigm kmen sus^n^ (ATCC VR786) s ^toem · l0?'4 EID^/oI. Vejce se pak inkubuuí po 16 hodin pří. 33 °C a získájí se allantoické ^kuHny.
Odpovídající množství (0,25 ml) králičího séra sérotypu anti-BrigiVtaieoe, ohřátého předtím 1 hodinu na 56 ’°C 'se smíchá·se · stejným objemem normálního séra. Odpovídající množství (0,25 · ml) této směsi sér še přidá ' k 'získarým · allanOoicýým tekutině. Směs se udržuje po' dobu 1 hodiny při 37 °C. Vejce' · s kuřecími zárodky se invkulují 0,2 mL iikubační sm^í^i (2 vejce na každou směs) a inkubují po dobu 48 hodin při 33 °C, · Z každého inokulovjniého vejce se získají alljitvicCé tekutiny, pasážují v kuřecích zárodcích. (0,2 ml na 1 vejce) a ^kubuj po dobu 72 hodin · pří 33 °C za pouští 2 vajec pro každý vzorek. Po · 72 hodinách inkubace · se získají pozztivií ... al·ljntoicCé tekutiny a vyšetřuj na:
- hej^m^^u^na! ovčích · erythrocytů,
- sérotyp proti anti-Brigit séru a proti anti-B/HV5/72 séru,
- resistecce proti nespecifickým · sérovým inhibioorům, .
- růst ve vejcích .a na AOS (^Ιε^^ί^ά membrána na skořápce).
Jedna z takto získaných virových suspenzí, která má, jak je ukázáno v následníci tabulce · I, ·sérotyp jednoho z rodičů (B/HM5/72) a · infekční znaky v · AOS systému a sérový ichibitorový znak·Brigit kmene je nazván R 22 (ATCC VR788) a podroben 2 pasážím na kuřecích zárodcích, aby ·byla ·získána podstatná mnoosiví · rekombinantu viru R 22} získaná allaitvicCé tekutina je doplněna peptonem až do konečné koncentrace 5 % a lyofiliovvána’. '
T a b u 1 k · a ’ 1 ‘
| * Kmen | Sérotyp | Inhibitor resistecce | EID50/ (AOS)ID50 | . Hemmaglujinační thermosensi tivita | Hemmagiu uinac e ovčích erythrocytů při 30 °C | |
| Brigit | • B/НМ 5/72 | |||||
| Brigit | + | - | + | + | ‘ , + · | nestabilní |
| B/HK/5/72 | - | + ’ | • ( - | - | - . | stabilní . |
| гeCob^l^na^t | - | + | + | - | stabilní ' | |
| R 22 (ATCC | ||||||
| VR788) | ||||||
| P ř í k 1 a | d · 3 | |||||
| Slejcé | objemy | suspenze | Brigit kmene | (ATCC VR786) chřipky typu B a | •B/Hong Kong/8/73 | |
| kmene (ATCC | VR792) | (titr každého je·10',? | ЕИ50/ь1) | se smíc^l^e^jí a přediikul^i^;jí po dobu 72 |
hodin při 4 °C. Směs se potom užije k·inokulaci v allaitoické dutině SPF kuřecích · zárodků (0,2 ml na 1 vejce). Po 16 hodinách inkubační doby · při 33 °C se allaitoické tekutiny izolují a soni^mí po dobu 30 vteřin.
Izolované tekutiny·neředěné a ředěné na hodnoty 10 a 10 se ponechaa! reagovat po dobu 1 hodiny při 37 °C · s různě zředěrým králičím sérem sérotypu arti-Brigit kmene, které bylo předtím zahřáto po dobu 30 minut na teplotu 56 °C. RezMlní! směsi se očk^í na alleil0oickéb systému a inku^uj po dobu 72 hodin při 37 °C. Vzorky posledního pozitivního virového ředění (10“2) se číslují 1 až 7. ,
Titry icfěkčcooti a neutralizace aiti-Brigit sérem v AOS systému pro uvedených 7 vzorků se porovnej se dvěma rodičovskými ^kmeny.
Vzorky, které nejsou neutralizovány acti-Brigit sérem a které výkazu;)! (AOS)IDgO titr alespoň ekvvvalenticí Brigit kmenu (ATCC VR7íB6) se izolují při největším pozitivním zředění.
Tyto jednotlivé, získané vzorky se zředí na 10“^ a í 1x na SPF vejcích.
Jedna z těchto virových suspenzí, vykající sérotyp a · hembagiutiniclovvu therbooseiitivitu kmene B/Hong Kong/8/73 a EHD5q/(A0S)ID50 poměr Brigit kmene, je označena R 5 (ATCC VR777). .
V následující tabulce II jsou shrnuty charakteristiky re.kombinmYtu R 5 a srovnány 8 týmiž .u rodičů Brd-git (ATCC VJR786) a B/HK8/73 . (ATCC ’ VR792). . . t
| T a b u 1 k a | I I. . · | . - | |
| Kmen | Λ Sérotyp | EID5a/(AOO)lD5a ’ | HeInbgglutinační |
| Brigit 8/73 | tuetbossrsiíd.vi'ta | ||
| Brigit | + - . | +. | + . |
| B/HK8/73 . | - . + | - | |
| ^komb^ani R 5 (ATCC VR787) | - + | + · | - |
Rekombbnant R 5 je_podrpben dvěma'limioovarým . zředěrým pasážím (v SPF kuřecích zárodcích), aby bylo eliminováno jakékoliv eventuálně Škodlivé . ptačí agens a další pasáži, aby bylo získáno podstatné množssví rekombihantu ' viru R 5. Získaná allentoická tekutina je doplněna peptctnem do finální koncentrace 5 % a lyofilizována.
Příkladě ‘
Vychází se z lyofilizátu získaného v příkladu 1 (tj. Brigit kmene, ATCC VR786) jako inokula. pro přípravu vakcíny ve velkém měěítku, další.pasáž se provede v allantoické tekutině další série kuřecích .zárodků, které jsou inkubovány po 3 dny při 35 °C.
Allantoickétekutiny se získají, slijí, otestují na sterilitu a bezpečnost, smísí s peptonem jako staiilizáOoreb, aby se dosáhla konečná koncentrace peptonu 5 % a distribuují se do 3 ml skleněných lahviček, aby se získalo žádané mncoství jednotek viru (tj. alespoň
10' EID^q). Potom se produkt lyofilizuje a lahvičky se dobře uzavřou. ·
Tato hladina pasáže se užije jako šarže vakcíny. Obsah jedné lahvičky se rekonstituuje přidáním 0,5 ml vody,fyziologického roztoku nebo 5 % cukerného roztoku a podává se ve formě kapek do nosních dutin.
Alternativně, preparáty obsahující allantoické tekutiny a pepton se rozdělí do větších’ skleněných lahviček, aby se získala dávkovači jednotka viru odpoovídaící bmltildVvkovýb preparátům vakcíny.
Vvkcinace oslabbeným chřipkovým virem typu В (kmen Brigit) .
Klinické testy byly prováděny na 46 dobrovolnících s předvakcinačním HI titrem (hemaglt^ut^^niači^ií inhibice) proti chřipkovému viru typu B, nižším nebo rovným 32. Každý dobrovolník došita! dvě intranasální podání v rozmezí 8 nebo 14 dnů. Během každé aplikace dostáváli kmen Brigit s konncmrací 10'· EID^q (5 kapek do každého nosního otvoru čerstvě rekonstruované vakcíny v 5% vodném cukerném roztoku). Změny v séru konstatovány u 40 případů (tj. u 87 % případů); pozorovány jenom mírné klinické reakce (rýma nebo ucpaný nos po dobu 1 až 2 dny). V pokusech, v nichž byly k dispozici koi^^roin^ skupiny, nebyl pozorován přenos vakcíny chřipkového viru.Pokusy o izolaci viru z^krčních nebo nosních výtěrů byly neúspěšné, po dvou slepých pasážích na kuřecích zárodcích zůstávaly vzorky negativní . .
P ř í k 1 a d - 5 * '
Vychází se z lyorlizátu R 22 kmene (ATCC VR778), získaného v příkladu 2 jako šaržového inokula pro přípravu vakcíny ve velkém měřítku, další pasáž se provádí v allantoické tekutině další série kuřecích zárodků, které jsou inkubovány po dobu tří dnů při 35 °C.
Allantoické tekutiny se izolují, slijí, otestují na sterilitu a bezpečnost, smísí
S peptonem jako stabilizátorem, aby se dosáhlo konečné koncentrace'5 % peptonu a distribují 7 se do 3 ml skleněných lahviček, aby se získalo žádané množství viru (tj. alespoň 10' EID^q). Potom se produkt zlyofilizuje a lahvičky se dobře uzavřou.
Tato pasážová hladina se užije jako Šarže vakcíny. Obsah jedné lahvičky se rekonstituuje přidáním 0,5 ml vody, fyziologického nebo 5% cukerného roztoku a podává se ve formě kapek do nosních dutin.
Alternativně se preparáty obsahující allantoické tekutiny s peptonem distribují do větších skleněných lahviček, aby se získalo dávkování jednotek viru, odpovídajících multi-dávkovým preparátům vakcíny.
Vakcinace oslabeným R 22 kmenem vakcíny chřipky typu В
Materiál a metody
Pro pokus zvoleno 6 dobrovolníků s protilátkovým HI titrem nižším nebo rovným 32. Dvě osoby užity jako kontrolní, 6 případů dostávalo v И až 14denních intervale.ch dvě podání čerstvě rekonstituované vakcíny, R 22 kmene. Při každém podání dostávaly všechny osoby 5 kapek vakcíny (10^*^ EID^q).
Vzorky krve pro stanovení protilátek byly odbírány v den vakcinace a 10 a 14 dní po prvé inokulaci a 14 dní po druhém podání. Nosní výtěry pro stanovení místních protilátek byly odbírány 14 dní pó druhé inokulaci.
Klinické symptomy 4
Žádné nebyly zaznamenány.
Izolace viru
Nasální .výtěry byly odbírány 3. a 6. den u tří případů. Po,dvou slepých pasážích v kuřecích zárodcích zůstaly všechny vzorky negativní.
Sérologické výsledky a lokální protilátky
| U 5 ze 6 dobrovolníků se neobjevily ani sérové, ani. nasální reakce nebo jejich kombinac e. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce III. | |||||
| T a b u 1 | к а III | ||||
| Subjekt | Sérový titr (HI) | Sérový titr | (HI) | Lokální protilátky | Lokální protilátky |
| před vakcinací | po 2. vakcinaci | před vakcinací (SN) | po 2. vakcinaci (SN) | ||
| 1 | 32 | 32 ' | 2 | 24 | |
| 2 | 8 | 8 | 2 | 2-4 | |
| 3 | 32 | 64 | 2 | 12 | |
| 4 | 8 | 32 | z 2 | 2 | |
| 5 | 8 | 8 | ND | ND | |
| 6 | 8 | 16 | ND | ND |
ND = nebylo stanoveno
202545 8 · .
P Píklad 6 * ' .
Vvyhází se - z lyofilizátu získaného v- příkladu 3 - -(7 5 kmen, ATCC VR787), jako inokula pro přípravuvakcíny ve velkém měřítku, další pasáž se provádí v allantoické tekutině jiné série kuřecích zárodků, které - jsou inkubovány 3 dny při '35 °C. .
Allantoické.tekutiny se - získají, slijí, otestují na .sterilitu a bezpečnost,-smísí se s peptonem jako stabilZzáoorem, aby se dosáhla konečná koncentrace - 5.% peptonu a distribují . do 3 ml skleněných lahviček, aby se.získalo žádané mtoOžtví jednotek viru (tj. alespoň 10' EIDj0). Směs se potom lyofilizuje, lahvičky zataví nebo - pevně uzavřou.
Tato hladina pasáže se užije jako vakcínová šarže. Pro adninnasraci . vakcíny se obsah jedné lahvičky rekonntituuje přidáním 0,5 ml vody, fyziologického nebo 5% cukerného . roztoku a podává se ve formě kapek do - nosních dutin.’ , Alternativně, preparáty obsahnu^cí allantoické tekutiny a pepton - se distribují do . větších skleněriých lahviček,- aby se - získalo dávkování jednotek viru, odpoovddaících multidávkoiým preparátům vakcíny. Příklad 7
K - jedné dávce vakcíny (Brigit kmen) ATCC VR776), viru - chřipky typu B, připraveného postupem podle příkladu 4, se přidá dávka živého, oslabeného viru chřipky typu A (Alice kmen, ATCC VR776) v 0,5 ml 5% - cukerného vodného roztoku. Takto - získaná bivale^<tní vakcína se podává - jako kapky do. nosních dutin - a podání se po 14 dnech opakuje..
Klinické testy byly provedeny na 22 dobrovoonících maaících předvakcinační HI titr (hemmaginuinační -inhibice) proti viru chřipky - A nebo B, nižší nebo rovný 64. Každý dobrovolník , dostal dvě nasální podání (10?’^ EID^q Brigit kmene a EID^q Alice kmene) s 8 a ^denním intervalem. .
Změny - v séru proti viru chřipky typu A pozorovány u 80 % případů, proti, viru chřipky typu B u 73 %- případů.
Pozorovány jenom mírné klinické reakce. Nepozorován přenos vakcíny viru chřipky. Příklade.
K - jedné -dávce (10?’^ EIDcn) lyofiizoovené vakcíny viru chřipky typu B (7 22 kmen, ATCC
5
VR778), připravené podle příkladu - 5, se přidá jedna dávka (10'*5 eid^q) živého oslabeného viru chřipky typu A (kmen Alice, ATCC VR776) v 0,5 ml 5% cukerného roztoku..
Takto získaná bivalentní vakcína se podává jako kapky do nosních dutin a podání se opakuje o 14 - dní - pozděěi. Změna v séru -pro -oba komppnnnty (typ B a typ A) je pozorována 16 - -dní po druhém podání.’
Příklad 9 -,
Vzorek viru chřipky - typu B kmene B/HK5/72 (ATCC VR791) s odlinrým hemagglutinincm ve srovnání s Brrgit kmenem se inokuluje v allantoické dutině 10 až 11 dní starých vajec s kuřecími zárodky (0,2 ml inokula na 1 vejce) a podrobí se třem pasážím, aby - se získalo podstatné íiožžsví viru. Ke fonci třetí- pasáže se získá virová suspenze, jejíž titr je 10® EID50/m.. část (0,2 ml) neředěné suspenze se- ‘inokuluje v allentoické - dutině SPF vajec a kuřecími zárodky prostých specifických pathžienů); po intobaci po 2 hodinách při 33 °C se inokuluje ve stejných vejcích část (0,2 ml) suspenze kmene Brigit (získaného - v příkladu 1) s ti-treml1 0 KDc^íI.
. . ' . .. ' 9 / . 202545 ·
Vejce se potom inkubují 16 hodin pri-33 °C a získají.se allantoické tekutiny.
t / '' · část (0,25 ml) králičího. séra>, sérotypu kmene an.ti-Brigit, zahřátého předtím · 1 hodinu .. · na 56 °C, se smísí se stejným objemem normmáního . séra. Části (0,25 ml·) této sm^£^:i sér se přidají do získané' allantoické tekutiny. . Směs se potom udržuje 1 .hodinu při 37 °C. SPF vejce s kuřecími zárodky se inokulují 0,2 ml této směsi a inkubují 48 hodin při 33 °C. Allantoické tekutiny každého inkubovaného se izolují, pasážuj v SPF vejcích s kuřecími zárodky (0,2 ml · na 1 vejce) a inkubují 72 hodin . při 33 ' °C,. pouUijí se dvě vejce na jeden vzorek.
Po' 72 hodinách inkubace se izolují·pozitivní allantoické tekutiny a testují se na:
— hemmggiuUinaci ovčích erythrocytů, - — sérotyp proti anti-Brigit séru a proti· anti-B/HK/5/72 séru,’ .
— růst ve vejcích a na AOS (allantoické memibána na .skořápce).
Jedna z takto získaných virových suspenzí, vykazuUící sérotyp B/H//72 rodičovského·kmene a . infekčnost Brrgit rodičovského kmene v AOS systému je nazvána R 75 . (ATCC VR789).
Rekomminant 7 75 je podroben dvěma pasážím v SPF kuřecích zárodcích, aby bylo získáno podstatné mnoožtví rékombínaitu 7 75.
V následnicí tabulce IV je shrnut popis rékombínantu a je porovnán s Brigit a B/HK/5/72 rodiči.
| Tabulka IV | ||||
| Kmen | Sérotyp | EID50/(AOS) | /eemggluUininsvá | //mmggiuUinace ovčích |
| Brigit B//K/5/72 | ' _ ID50 | thermosensitivita | erythrocytů při 30 °C | |
| Brigit | + . - · | + | + ’ | nestabilní |
| В/ШК5/72 | - + | , - | ' - . | stabilní |
| rekombinant | - + ·' | ' - - · | stabilní * | |
| 7 75 |
Př.í.klaao . .. ' . Slité allantoické tekutiny, získané v příkladu 9, jsou otestovány na sterilitu a· bezpečnost, smíseny s peptonem jako staiilisáSoeem s cílem dosáhnout konečnou konneenraci 5 % peptonů a rozděleny do 3 ml skleněných lahviček s cílem připravit dávku viru (tj. alespoň 10^ EID^q). Směs se potom lysOiliiuзe, lahvičky zataví nebo těsně uzavřou.
Tato pasážová hladina se užije jako šarže vakcíny. Před podáním vakcíny se obsah jedné lahvičky rekonnsituuje přidáním'0,5 ml vody nebo fyziologického nebo 5% cukerného roztoku a podává se jako kapky do nosních dutin.
Klinické pokusy byly provedeny na 24 dobrovolnících. Každý dostal v 11 až 14denním intervalu dvě nasální pod&ií čerstvě rekonstruované vakcíny ' kmene 7 75 (ATCC VR779). Při kaž* 7 8 ' dém podáni dootali dobroviSníci virovou konncenraci 10' » ELD^q fyziologického roztoku reksnstiluovaoé vakcíny (5 kapek do . každé nosní · dutiny). . .
' Sér.ologické výsledky jsou shromážděny v následnicí tabulce V.
| 202545 · | 10 ' | |||
| Tabulka | V | |||
| PřSpad ’ | Sérový | titr (HI) | před vakcinačS | Sérový titr (HI) po.druhé vakcinaci |
| , 1 , | 256 | 256 ' . · | ||
| 2 | 16 | 32 | ||
| . ', · 3 | 16 | 32 . | ||
| 5 . ' ' · | <4 | 32 | ||
| 9 | 16 | 32 . | ||
| 13 | <4 | 32 | ||
| 23 | 8 | 16 | ||
| 25 | 4 4 | 64 | ||
| 27 . | 16 | 64 | ||
| 28 ’ | 4 | 32 | ||
| 29 | 16 | ' 64 | ||
| 30 | 4 | . ... 32 | ||
| 32 . | 16 | . 64 | ||
| 35 | 8 | 128 | ||
| 36 | 8 | 32 | ||
| 37 | 128 | 128 | ||
| 40 , | 8 | 16 | ||
| 43 | 64 | <256 | ||
| 47 | . 4 | . 16 | ||
| 49 | 16 | * | 32 ‘ | |
| 59 | 64 | . 64 | ||
| 63 | 4 | 16 . | ||
| 66 | <4 | 16 |
Změna v séru'(čtyřnásobný vzrůst · HI titru) byla pozorována·u 75 % případů s předvakcinačním titeem 416.
Pík 1 a dl ,1 ' ·
Suspenze R 75 kmene chřipky typu B (ATCC VR789) a kmen ' Alice chřipky typu A (ATCC VR777), se smísí.s peptonem jako stabilZáátreem·do konečné koncentrace 5 % peptonu a směs ' v · 7 se rozdělí do 3 ml skleněných lahviček, aby obsah každého viru byl alespoň 10’ EID^q. Směs . se lyofilizuje a lahvičky ' se zat^avS nebo pevně uzavřou. Bezprostředně před podáním vakcSny se obsah lahvičky rekonstituuje přidáním 0,5 ml vody, fyziologického roztoku nebo 5½ cukerného roztoku a podává se jako kapky do nosních dutin.
Claims (9)
- ’ PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob přípravy živé' vakcíny z chřikkového viru pro nasální podávání, jejíž aktivní složka obsahuje alespoň účinné mnnožtvS rekombinantu ,oslabeného kmene chřipkového viru typu B, vyznnčujícS se tím, že se rekombinuje oslabený a vakcSnový kmen chřipkového,viru typu ts v · růstovém substrátu chřipkového viru typu B, jímž je s výhodou matteiál kuřecích zárodků nebo tkáňová'kultura ledvin hovězího plodu a , zejména allantoické dutina kuřecích zárodků, s izolátem chřipkového viru typu B · a selektivním tlakem se izoluje rekombinant, maaící alespoň jeden znak vlastnosti oslabeného rodičovského kmene, který nesdílí s druhým rodičovslýfa kmenem a antigennS skladbu druhého rodičovského kmene a rekombimant se ponechá růst v allantoické dutině kuřecSch zárodká a k viru, je-li to třeba, se přidá stabilizátor a směs se lyofilizuje. . 'и. 202545
- 2. Způsob přípravy podle bodu 1t vyznačující se tím, že oslabený a vakcínový kmen chřipkového viru typu В je kmen Brigit chřipkového viru typu В (ATCC VR7S6).
- 3·. Způsob přípravy podle bodu 2, vyznačující se tím, že rekombinace se provádí v allantoické dutině kuřecích zárodků. ' >· _
- 4. Způsob přípravy podle bodů 1 a 3, vyznačující se tím, že izolát je B/HK/8/73 izolát (ATCCVR792) a rekombinant je R 5 kmene chřipkového viru typu В (ATCC VR787).
- 5. Způsob přípravy podle bodů 1 a 3fvyznačující se tím, Že izolát je B/HK/5/72 izolát (ATCC VR791) a rekombinant je R 22 kmene chřipkového viru typu В (ATCC VR788).
- 6. Způsob přípravy podle bodů 1 a 3, vyznačující se tím, že izolát je B/HK/5/72 izolát (ATCC VR791) a' rekombinant je R 75 kmene chřipkového viru typu В (ATCC VR789).
- 7. Způsob přípravy podle bodu ý vyznačující se tím, že stabilizátorem je pepton nebo cukr.
- 8. Způsob přípravy podle bodu 1, vyznačující se tím, že aktivní složka zahrnuje také účinné množství vakcíny z oslabeného chřipkového viru typu A, které se přidá po získání rekombinantu chřipkového viru typu B.
- 9. Způsob přípravy podle bodu 8, vyznačující se tím, že .oslabený chřipkový vir typu A je kmen Alice chřipkového typu A (ATCC VR776).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US43917674A | 1974-02-04 | 1974-02-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202545B2 true CS202545B2 (en) | 1981-01-30 |
Family
ID=23743623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS75669A CS202545B2 (en) | 1974-02-04 | 1975-02-03 | Method of preparing living vaccine from influenza virus for nasal application |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS50107122A (cs) |
| AT (1) | AT338416B (cs) |
| BE (1) | BE824970A (cs) |
| CA (1) | CA1047922A (cs) |
| CH (1) | CH596316A5 (cs) |
| CS (1) | CS202545B2 (cs) |
| DD (1) | DD116474A5 (cs) |
| DE (1) | DE2504373A1 (cs) |
| DK (1) | DK141926B (cs) |
| ES (1) | ES434384A1 (cs) |
| FI (1) | FI750260A7 (cs) |
| FR (1) | FR2259616B1 (cs) |
| GB (1) | GB1439742A (cs) |
| HU (1) | HU170522B (cs) |
| IE (1) | IE42043B1 (cs) |
| IL (1) | IL46446A (cs) |
| LU (1) | LU71784A1 (cs) |
| NL (1) | NL7501028A (cs) |
| NO (1) | NO750295L (cs) |
| SE (1) | SE424503B (cs) |
| ZA (1) | ZA75248B (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2588918A (en) * | 1947-11-07 | 1952-03-11 | William T Graham | Mechanism for raising and lowering plow frames relative to the ground wheels |
| JPS6042209B2 (ja) * | 1974-05-31 | 1985-09-20 | 北里研究所（社団法人） | インフルエンザウイルスの新鮮分離株を発育鶏卵へ短期間で順化させる方法 |
-
1975
- 1975-01-14 ZA ZA00750248A patent/ZA75248B/xx unknown
- 1975-01-16 DK DK9775AA patent/DK141926B/da not_active IP Right Cessation
- 1975-01-16 IL IL46446A patent/IL46446A/xx unknown
- 1975-01-20 SE SE7500549A patent/SE424503B/xx unknown
- 1975-01-23 CA CA218,508A patent/CA1047922A/en not_active Expired
- 1975-01-24 FR FR7502331A patent/FR2259616B1/fr not_active Expired
- 1975-01-27 IE IE160/75A patent/IE42043B1/en unknown
- 1975-01-29 NL NL7501028A patent/NL7501028A/xx not_active Application Discontinuation
- 1975-01-30 NO NO750295A patent/NO750295L/no unknown
- 1975-01-30 BE BE152864A patent/BE824970A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-01-31 FI FI750260A patent/FI750260A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1975-02-01 ES ES434384A patent/ES434384A1/es not_active Expired
- 1975-02-03 DD DD183973A patent/DD116474A5/xx unknown
- 1975-02-03 CS CS75669A patent/CS202545B2/cs unknown
- 1975-02-03 LU LU71784A patent/LU71784A1/xx unknown
- 1975-02-03 DE DE19752504373 patent/DE2504373A1/de not_active Withdrawn
- 1975-02-03 AT AT76675A patent/AT338416B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-02-03 CH CH124275A patent/CH596316A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-02-03 GB GB453575A patent/GB1439742A/en not_active Expired
- 1975-02-03 JP JP50014790A patent/JPS50107122A/ja active Pending
- 1975-02-03 HU HUTE805A patent/HU170522B/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK9775A (cs) | 1975-09-29 |
| FI750260A7 (cs) | 1975-08-05 |
| SE7500549L (cs) | 1975-08-05 |
| AU7734675A (en) | 1976-07-15 |
| BE824970A (fr) | 1975-07-30 |
| FR2259616A1 (cs) | 1975-08-29 |
| LU71784A1 (cs) | 1975-06-24 |
| ATA76675A (de) | 1976-12-15 |
| SE424503B (sv) | 1982-07-26 |
| AT338416B (de) | 1977-08-25 |
| ZA75248B (en) | 1976-01-28 |
| HU170522B (cs) | 1977-06-28 |
| IL46446A0 (en) | 1975-04-25 |
| JPS50107122A (cs) | 1975-08-23 |
| IE42043B1 (en) | 1980-05-21 |
| ES434384A1 (es) | 1976-12-01 |
| DE2504373A1 (de) | 1975-08-07 |
| CA1047922A (en) | 1979-02-06 |
| IL46446A (en) | 1978-01-31 |
| FR2259616B1 (cs) | 1980-01-04 |
| GB1439742A (en) | 1976-06-16 |
| NL7501028A (nl) | 1975-08-06 |
| CH596316A5 (cs) | 1978-03-15 |
| NO750295L (cs) | 1975-09-01 |
| DD116474A5 (cs) | 1975-11-20 |
| DK141926C (cs) | 1981-01-19 |
| DK141926B (da) | 1980-07-21 |
| IE42043L (en) | 1975-08-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4530831A (en) | Infectious Bursal Disease vaccine | |
| US6919084B2 (en) | Duck pneumovirus and corresponding vaccines | |
| US4009258A (en) | Influenza vaccine containing a recombinant, antigenically hybridized virus and method of using the same | |
| Atanasiu et al. | Rabies neutralizing antibody response to different schedules of serum and vaccine inoculations in non-exposed persons: Part 3 | |
| US5807551A (en) | Method to provide artificial passive immunity in birds | |
| US4302444A (en) | Vaccines for immunizing egg-laying birds against Egg Drop disease, preparation of said vaccines, and method of use of said vaccines | |
| HU189222B (en) | Process for preparing a new vaccine against infectious bronchytis | |
| US3953592A (en) | Live influenza virus vaccines and preparation thereof | |
| IE51122B1 (en) | Infectious-bronchitis vaccines for poultry,combined infectious-bronchitis vaccines,process for preparing such vaccines,method for preventing infectious bronchitis,and infectious-bronchitis virus strains | |
| AU705186B2 (en) | Multivalent bovine coronavirus vaccine and method of treating bovine coronavirus infection | |
| Minbay et al. | An experimental study of the pathogenesis of fowlpox infection in chickens | |
| JP3945842B2 (ja) | 弱毒性ニューカッスル病ウイルスワクチン | |
| US20120107354A1 (en) | Viral vaccine and process for preparing the same | |
| US3962423A (en) | Live influenza type B virus vaccines and preparation thereof | |
| CS199569B2 (en) | Method of producing vaccine against influenza | |
| MXPA96003124A (en) | Vaccine against the newcastle beni disease virus | |
| CS202545B2 (en) | Method of preparing living vaccine from influenza virus for nasal application | |
| Crick | The vaccination of man and other animals against rabies | |
| US3769400A (en) | Process for the manufacture of a live vaccine against the infectious bursitis of chickens | |
| EP0292210A2 (en) | Attenuated virus and vaccine therefrom for use against infections in fowl caused by Turkey rhinotracheitis virus | |
| RU2259844C1 (ru) | Вирус-вакцина против ньюкаслской болезни птиц | |
| JPS62201573A (ja) | 家禽用インフルエンザワクチン | |
| JPS6244528B2 (cs) | ||
| El-Zanaty et al. | VACCINATION AGAINST PARAMYOVIRUS TYPE 1 | |
| USRE34013E (en) | Infectious bronchitis vaccine for poultry |