CS202056B2 - Process for preparing derivatives for preparing 7-aminocephalosporanic acid and ester thereof - Google Patents

Description

Vynález sr týká způsobu výroby derivátů kyšelíny 7-aminocefalosporanové a odppvvddjících esterů obecného vzorce I,

CH₂-S ^COOR Ch₂cooh (I) kde R znamená skupinu pívalo^y^l^c^^^y^í^^thylovou, acetoxymethylovou, methoxy[nerhylvvou, ačetonylovou, fenacylovou, p-nitnobenzylovou, beta,brta,brta-trichOoretУyVovvu, 3-ftalddyoovou nebo 5-indanylowu a

R¹. znameirá některou z ^dále uve^denýc^h s^kupin:

O-r^conh₂ £^-CH-COOH ch₂nh₃ CHjCO202056

HO

H-CQnh₂

Do rozsahu vynálezu spadají pochopitelně i odpovídající netoxické a farmaceuticky vhodné soli uvedených kyselin, tedy látek, kde v obecném vzorci I znamená R atom vodíku.

Sterevchemie bicyklického jádra odpovídá stereochemii cefalosporinu C.

Výhodným provedením postupu podle tohoto vynálezu je příprava sloučenin obecného vzorce Ϊ s D-koofigurací na alfa-ihilíoovém atomu ve sloučenině obecného vzorce I, pochopitelně pokud je to možné.

Způsob výroby sloučenin uvedeného již obecného vzorce I se vyznačuje tím, že se působí na sloučeninu obecného vzorce II,

COOR (II) kde Rg znamená. vodík nebo některou ze skupin, jež byly mu pro a ^R má rovn^ěž výše uve^den^é významy, ne^bo na u obecného vzorce I uvedeny ve význaodpovídající sůl sloučeninou vzorce

N—N

II 1

I

CH₂COOH přičemž se tato reakce provádí za hodnoty pH v rozmezí 6,4 až 7, za přítomooti pufru a za tepoty 55 a^ž 75 °^C, a ^poku^{d r2} znamen^á vodí^k, ^působí se na takto z^dskanou sloučenou ac^ylačním čini^dlem obecného vzorce III, β'-Χ (III) kde znameiró X halogen nebo jeho ^fun^kčn^d ekvivalent a r' znameirá ječlnu z výše uve^dených sku^pin, to za předpokladu, že pokud acylová skupina obsahuje volnou aminoskupinu nebo volnou hydroxylovou skupinu, pak jsou tyto skupiny dočasně chráněny běžnými chránícími skupinami, jejichž odstraněním se získá sloučenina obecného vzorce I, která se - je-li to žádoucí - převádí z formy volné kyseliny na sůl nebo ester sloučeniny obecného vzorce I, nebo se převádí sůl nebo snadno byd^^so-v^elný ester sloučeniny obecného vzorce I na volnou obecného vzorce I.

R^c^T^v^dd-^J.i se volná sloučenina obecného vzorce I, tedy látka, kde R znamená vodík, a ester, připravuje se tímto způsobem s výhodou iiíaloyloxyleehyleeSer_J acetoxynethyleeser, acetoin^leeser, fenacyleeter, p^í^itr^ob^i^a^z^ll^esí^i’, beta, beta, beta-tricУlorttУyleeter, l-ftalidylester nebo 5“inaa'lyleeSer.

Mezi soli patří'netoxické.soli karboxylových kyselin, počítaje v to netoxické soli kovů, jako je sodík, draslík, vápník nebo hliník, dále soli arnoniové a netoxických aminů, jako jsou triaiyylminy, třeba triethylmin, dále prokain, dibenzylamin, N-benzyl-beta-fenethylemin, 1-пГп^п^1^1п, NN-dibenzylethylendiímin, .dthydroabittyiεmiz, N,N*-bis-dehydroabietylEmin, nižší N-alkylderiváty piperidinu, například N-etthy-Piperidin, a další aminy, kterých se obvykle používá na přípravu solí btnzylpρniiilinu; dále může jít o netoxické uliční soli kyselin, tedy například solí aminů, kam patří adiíní soli minerálních kyselin, jako je kyselina chlorovodíková, bromovoodková, jodovodíková, sírová, sulfmwá a fosforečná, a organických kyselin, jako je kyselina maaeinová, octová, citrónová, oxiHová, jantarová, benzoová, vinná, fumarová, jablečná, mandlová, askorbová a podobné.

Do rozsahu tohoto vynálezu jsou rovněž zahrnuty sloučeniny (použité buá jako meeiprodukty, nebo jako metabolické výchozí látky), kde je aminoskupina chráněna subetitunztl, jako je skupina 2-jodethoxyklrbónylooá, viz britský patentový spis 1 349 673, skupina terc.butoxyllreozllooá, karbobenzyloxyskipina, skupina formylová, o-nitrvfezylsulfzrylvoá, betaceta,ettatrric!hlortthollkaebozllooá, ^oxo-^-penten^-ylová, 1 -metho:φrklrbevyl-1 -propen-^-ylová a podobně. Mezi tyto blokující skupiny pa^tří zvláště ketony, obzvláště aceton, a aldehydy, zvláště formaldehyd a acetaldehyd, viz například amenické patentové spisy 3 198 804 . a 3 347 851, dále estery eetl-lttolyseliz a eetl-dilttony, viz například ameeický patentový spis 3 325 479, ' a dále . beta-ketoemidy, viz japonský patentový spis 71/24714 (Farmdoc. 47, 321í3).

Jako výhodné estery cefllvspvrizU podle tohoto vyzálezu . lze jmenovat pioalvyloxlmethylester, lcetox;lnethyletter, meehoxJllettttleeter, lcetonzletSer, a ^-эсу^^о^ Všechny tyto uvedené sloučeniny jsou vhodnými meziprodukty při přípravě cefalosporinů s volnou karboxylovou skupinou a prvně tři uvedené látky jsou rovněž zajímavé se zřetelem na orální podávání, protože se liší rychlostí absorpce a rninožtvím, jež se absorbuje, takže se tím může dzsíci lišící se koncentrace aktivního lztiellttriálzí.hv činidla v krvi a ve tkáních.

Jak je to uvedeno výše, těchto 5 esterů kyseliny 7-lmizocefllosporlnové se připravuje za pcuuití známých postupů. Jedním z vyn^knJících postupů je způsob popsaný v americkém patentovém spise. 3 284 451, kdy se пэ^гШ^п sodná sůl ctfllothinu reakcí s odpovídajícím aktivním chlorovaným nebo brómovaným derivátem, například fenlcylbvomidem, chloraceoonem, chlormethllttherem, pioalvyloxlmethylchlvridem a lcetoxymet1tylchloridem, načež se postranní řetězec kyseliny thitnylvttooé odštěpí působením enzymů, jak je to uvedeno v témže patentovém spise, nebo chemicky, jak je to popsáno v americkém patentovém spise 3 575 970 a v Journ. of ^Anibéotics 21, 767 (1971). Podle jiného dobrého postupu se působí na sůl kyseliny 7-lminocefllosporanooé s trettУyaamZzem přímo aktivní halogenovanou·sloučeninou, viz například britský patentový spis 1 229 453·

Na tyto estery kyseliny 7-aminocefalosporanooé se potom působí mUkLtvfiZem_s tedy zmíněnou již sloučeninou HSR , tedy látkou obecného vzorce

I (CH₂)_nCOOH a to steným způsobem, · jak je to zde popisováno pro kyselinu 7-amizocefllvsporazovou jako takovou. Ester s 3-thivlskjLpizvu, odvozený od kyseliny 7-amZzocefalosporanové, se potom kondenzuje s organickou karboxylovou kyselinou, například s jak je popisováno dříve. Před odstraněním nebo po odstranění jakékoli blokující · skupiny, například skupiny blokující aminoskupinu nebo hydrvxylvvvu .skupinu v postranním řetězci v poloze -7-, se takto získaný ester ^^^sporinu, pokud se nepou^je jako takový, převede na volnou kyselinu, počítljt v to obojaký ion (a je-li to třeba, Zl.jl.lvulo01 sůl) odstr^eniěnim esterové skupiny, jako je hydrolysa v prostředí vodném nebo enzymová hydrolysa (působením lidského nebo zvířecího séra) nebo hydrolysou v kyselém nebo alkalickém prostředí, nebo působením natriumthiofenoxidu, jak je to patrné z amerického patentového spisu 3 284 451, a v penicilinové sérii, viz Sheehan a spol., J. Org. Chem. 29. 2006 (1964).

Při jiné alternativní synthese se připraví 7-aminocefalosporanová kyselina s 3-thiol-substituentem, jak je to zde popisováno, potom se acyluje 7-eminoskupina a posléze se provede esterifikace, například reakcí vhodného alkoholu s chloridem kyseliny, připraveným například reakcí konečného cefalosporinového derivátu s thionylchloridem, nebo za použití jiného postupu esterifikování v kyselém prostředí.

Tento vynález se rovněž týká způsobu výroby nového a cenného meziproduktu struktury

CH₂COOH přičemž se způsob vyznačuje tím, Že se v bezvodém rozpouštědle připraví derivát lithia a thiolu vzorce

CH₃ a na takto připravenou lithnou sloučeninu se působí kysličníkem uhličitým za vzniku produktu, který se hydrolysuje, a získá se tím sloučenina vzorce

HS

Při léčbě bakteriálních infekcí u lidí se sloučeniny podle tohoto vynálezu podávají parenterálně nebo orálně v množství asi od 5 do 200 mg/kg za den a s výhodou v množství asi od 5 do 20 mg/kg za den v rozdělených dávkách, tedy třikrát až čtyřikrát za den. Mohou se podávat v dávkovaných jednotkách, obsahujících například 125, 250 nebo 500 mg účinné složky s vhodným a fysiologicky přípustným nosičem nebo ředidlem. Dávkovači jednotky jsou obvykle ve formě kapalných přípravků, jako jsou roztoky nébo suspenze.

Výchozí látky

A. 1-Karboxymethyl-5-merkaptotetrazol

CHjCOOH

a) Překrystalování 1-methyl-5-merkaptotetrazolu

Postup

1. 110 g 1-methyl-5-merkaptotetrazolu se rozmíchá do 350 ml vroucího chloroformu; vznikne čirý roztok.

2. Horký roztok o teplotě 50 až 60 °C se rychle filtruje za použití vakua vyhřátou Buchnerovou nálevkou (11 cm, papír č. 604; obsahuje dále stlačenou vrstvu do výše 0,8 až 0,6 cm pomocného filtračního prostředku Sapercel). Podíl na filtru se promyje za použití 50 ml chloroformu, zahřátého na 50 až 60 °C, a tento podíl se přidá к filtrátu.

3. Filtrát se ochladí asi na 0 až 6 °C a na této teplotě se udržuje po 2 hodiny. Vzniklé krystaly se odsají za chlazení na 0 až 6 °C a promyjí se za použití 60 ml chloroformu, vychlazeného na stejně nízkou teplotu, a tento chloroformový podíl se přidá к filtrátu. Krystaly (podíl A) se suší na vzduchu při 37 až 45 °C po dobu 18 hodin.

4. Filtrát se zahustí na vakuové rotační odparce (lázeň teploty 60 °C) přibližně na polovinu původního objemu. Získaná suspenze se ochladí na 0 až 6 °C a na této teplotě se udržuje po 2 hodiny. Krystaly se odsají za chlazní na 0 až 6 °C, promyjí se za použití 40 ml chloroformu, vychlazeného na 0 až 6 °C, a tento podíl se přidá к filtrátu. Krystaly (podíl B) se suší na vzduchu za teploty 37 až 45 °C po 18 hodin. Spojením podílu А а В se získá látka ve výtěžku přibližně 65 %.

5. Filtrát po odsátí podílu В ze stupně 4 se může ještě dvakrát zpracovat postupem popsaným ve stupni 4; získá se tím větší podíl ve výtěžku 15 %·

b) Příprava disodné soli 1-karboxymethyl-5-merkaptotetrazolu

Postup

1. 500-ml v podstatě suchého a čistého tetrahydrofuranu se v dvoulitrové tříhrdlé baňce s míchadlem vychladí v lázni se solí, acetonem a ledem přibližně na -10 °C a na povrch kapaliny se zavádí suchý dusík.

2. 500 ml 15,06% (1,6 N) roztoku butyllithia v hexanu (Foote Minerál Co) se přidává během 10 minut pod suchým dusíkem a za míchání do podchlazeného tetrahydrofuranu. Čirý roztok se ochladí na -5 až -10 °C.

3. 46,4 g 1-methyl-5-merkaptotetrazolu, překrystalovaného, jak je to popsáno výše, se rozpustí v 200 ml v podstatě čistého a suchého tetrahydrofuranu. Roztok se filtruje, je-li zakalený, a potom se ochladí na 5 až 10 °C.

4. Ochlazený roztok ze stupně 3 se přidává během 10 minut za míchání a pod suchým dusíkem к roztoku butyllithia, přičemž se má teplota udržovat v rozmezí od -5 °C nejvýše do +10 °C. Může dojít ke vzniku sraženiny.

5. Směs se míchá pod suchým dusíkem a za chlazení na 0 až +10 °C po 30 minut.

6. Do reakční směsi se prudce zavádí plynný kysličník uhličitý za prudkého míchání po dobu 15 až 30 minut přibližně za teploty místnosti (0 až 10 °C), nikoli však za teploty nad +20 °C.

7. Vzniklá bílá sraženina se odfiltruje v prostoru o nízké vlhkosti, sraženina se promyje za použití přibližně 75 ml tetrahydrofuranu.

8. Sraženina se rozpustí v 250 ml vody (o pH 8,5 až 9,5); může · se použít druhá vrstva tetrahydrofuranu, a ten se může oddesSilovat na rotační vakuové odparce za teploty lázně °C.

9. Vodný rrzZok ss usprvi nn hodnoou pH 1,6 až 2,0 přidáním konccetroveaié kksseiny chlorovodíkové· .

10. Kyelý vodný roztok se extrahuje ^а}к'йХ. za poožíil vždy 250 ml ethylesteru kysseiny octové, v každý z extraktů v esteru kyseliny octové (o objemu 250 m.) se extrahuje za pouužtí 100 ml vody. Vodné extrakty nejsou k potřebě. Extrakty ' v ethylesteru kyseliny octové (zbavené jakéhokooi vodného podílu) se filtrují v sp<^j^:í.

11. Spojené extrakty v ethy^ste™ kyseliny octové se zahltí do sucha na vakuové rotační odparce za teploty lázně 60 °C.

12. Kystaly v baňce se zadívají s· 300 ml chloroformu asi 2 minuty k varu, horká suspenze (teploty 50 až 60 °C) se filtruje ve vakuu na vylhřáté ВисУшетё promývačce (11 cm, filtrační papír 'SS-604) a krystaly se promS^ za použítí asi 75 ml chloroformu, vyřhřátého na 50 °C. Kystaly se suší na vzduchu za teploty mís tmo ti asi po 3 hodiny, načež se rozt^i^ltí do velikosti přibližně 100 až 200 mesh. ·

13. Kystaly velikosti 100 až 200 mesch se za pouužtí vroucího chloroformu přesně tak, jak je to popsáno ve stupni 12 (horkým chlorformmem se zdetraoí největší podíl nezreagOijOLéOd 1-meehyУ-5-meekkatzZttrαzzlu). Výtěžek činí přibližně 45 až 50 g krystalického 1-Oαrbox;ynmehoУ-5-IImrkovtoZrSrαzzlž. Tyto krystaly mohou obsahovat 0,02 až 0,05 mol 1-meShyУ-5-meerkαtrZtSrαzolu. .

14. Kystaly ze stupně 13 se rozmíchají do 250 ml srOyletOsrž za teploty místnosti, což trvá asi 3 až 5 minut, směs se filtruje, nerozpustný podíl (0,5 až 5 %) může tvořit jako nečistota symeerický meerkαttZetrαzzlOeton, snad této dále uvedené struktury:

Pozor: tato sloučenina exploduje za teploty přibližně 205 až 210 °C.

15. Etherový filtrát se stupně 14 se odpaří do sucha na vakuové rotační odparce (lázeň teploty 50 °C). Isoluje se tím 42 až 48 g krystalického 1-karbox;yImthoУ-55merkkptoOrerazolu, obsah^ícího přibližně 0,01 až 0,05 mol 1-meShyl-5-meekovtrZetrαzzlž.

16. Krystaly se rozpustí v 420 ml absolutního eroanolu (přibližně 100 m>/ml) v roztok se zahřeje na 50 až 60 °C.

17. Do horkého roztoku ze stupně 16 se přidává 310 ml 41% roztoku sodné soli·kyseliny 2-et0ylLhexenlOié v iszpropylalk:oOzlž za velmi prudkého míchaní během 10 minut. Vzniká tm krystalická sraženina; směs se potem v suspenzi rozmíchává 20 minut při 50 až 60 °C.

18. Směs se filtruje ještě za horka (50 až 60 °C) vylhřátou BucChcerzvzu nálevkou (11 cm, papír ^č. 60-4); K^taty se ^pro^mSí za pouHtí 75 ml e^ano^ teploty ⁵⁰ °C.

19. Krystaly z erhvoolzié suspense ze stupně 18 se rozmíchá 1|í do 200, až 300 ml ethanolu, a suspenze se proseje sítem o velikosti ok 290 mesh. Suspenze se zahřívá 5 minut na až 60 °C za prudkého míchání (nezreagovaná sodná sůl 1-methyS.-5-meerkattZttrαzzlž je velmi rozpustná v horkém ^hanzou). ·

20. Krystaly se odfiltrují za teploty 50 až 60 °C na vyhřáté Buchnerově promývačce průměru 11 cm za použití filtračního papíru SS č. 604. Krystaly se promyjí za použití 75 až 100 ml ethanolu, načež se vakuově suší po 24 až 48 hodin za teploty 50 až 60 °C. Výtěžek činí 40 až 48 g disodné soli к 1-karboxymethyl-5-merkaptotetrazolu (prostého 1-methyl-5-merkaptotetrazolu, jak je to patrné z NMR-spekter).

B. Kyselina 7-amino-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová

N N

NeS-C--N-CH^COONa

h₂n o

CHj-S-C— Ň-CH₂COOH

COOH

1. Ve tříhrdlé baňce s míchadlem, regulací teploty, teploměrem a trubičkou pro zavádění dusíku se umístí 18 g (0,066 mol) kyseliny 7-aminocefalosporanové a 300 ml 0,1 M fosfátového pufru o pH 6,4 (20,7 g monohydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného a 8,5 g bezvodého monohydrogenfosforečnanu sodného; doplnit vodou na 2 litry).

2. Za míchání směsi popsané ad 1) se přidá 1,5 g hydrogensiřičitanu sodného a 16 g (0,078 mol) disodné soli 1-karboxymethyl-5-merkaptotetrazolu.

3. Za pokračujícího míchání se 10 minut probublává směsí dusík.

4. Za udržovaného míchání a zavádění dusíku se suspenze zahřívá 20 minut na 56 °C; během uvedené doby se přidává po malých částech celkem 6,5 g hydrogenuhličitanu sodného.

5. Za pokračujícího míchání a zavádění dusíku se udržuje roztok na teplotě 56 °C po 4 hodiny; hodnota pH se má přitom udržovat v rozmezí 6,2 až 6,6.

6. Reakční směs se dále vychladí v ledové lázni na 5 °C.

7. Přidá se 50 ml roztoku kyseliny fosforečné ve vodě (1:1) nebo koncentrovaná kyselina chlorovodíková až na pH 2,0 až 3,0.

8. Vyloučený produkt se odfiltruje, podíl na filtru se promyje za použití studené vody, dále za použití 200 ml studeného methanolu.

9. Pevný podíl se suší na vzduchu do konstantní hmotnosti (obvykle se takto získá 14,5 g produktu). Barva získaného produktu může kolísat od žluté až do temně hnědé.

10. Produkt se protlačí sítem z nerezové oceli o velikosti ok 0,076 mm.

11. V 200 ml n-propylalkoholu se za prudkého míchání suspenduje 10 g práškovaného produktu, který propadl sítem o velikosti ok 0,076 mm.

12. Po přidání 2,0 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové se reakční směs energicky míchá po 30 minut za teploty místnosti.

2020>b

13· Suapense se filtruje, hnědá pevná látka se promj za použití 20 ml n-propylaHoholu a podíl z prorvání ae přidá k filtrátu (podíl na filtru se zatm uchová pro případné regenerování dalSího podílu ' prodUktu).

14. přidá se 1,5 g aktivního unií (Darco G-60) k n-propanolovému filtrátu ze stupně

13, suspenze se míchá 30 mr^i^u, uhlí se potom oddiltruje, promyje se za pouuití 20 ml η-propylalkoholu a poddl z promování se přidá k filtrátu.

15. Za prudkého míchání se přidá trieUyllmin k n-propylalkohooovému filtrátu ai do dosažené hodnoty pH 3,0. Vyloučí se krystaly a suspenze se míchá 10 minut.

16. Bílé krystaly se oddHtrují a promj se za pouuití 30 ml n-propylaHoholu, 50 ml meehylalkoholu, načei se suSí ve vakuu po 24 hodin za teploty 40 °C. Ve výtěžku 4 ai 8 g se získá kyselina 7-alninnк3-(1-larboxJУlithyltttrazol-5-ylth0omtttyl)-Зctftnm-4-кarbкxyl.ooá.

17. Alternativní postup pro čištění kyseliny 7-aIninno3-(1-karbokχmitttttetгazok-5-ylз ^^methyl·)-3-cffem-4-karboxylové je tento:

a) 10 g produktu ze stupně 10, propadlého sítem o velikosti ok 0,076 mm, se rozmíchá do 75 mg 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a suspenze se míchá 10 ai 15 minut za teploty míítnoosi. Filtrací se odstraní temně hnědé pevné podíly.

b) Přidá se 2,5 g aktivního uhlí (Darco G-60) a suspense se míchá 0,5 hodin.

c) Uhlí se odffltruje, promyje se za použití 15 ml vody a podíl z promování se přidá k filtrátu.

d) Za prudkého míchání se přidá koncentrovaný roztok amoniaku k filtrátu ai k dosaiení pH 2,5 ai 3,0. Vzniknou bílé krystaly.

e) Suspenze krystalů se míchá 25 minut, potom se krystaly oddHtrují a promni za použití 30 ml vody, 50 ml methanolu, načei se suší za teploty ve vakuu. Výtěiek ai 7 g takřka bílých krystalů.

Další činidla, která se pouuiií k přípravě sloučenin podle tohoto vynálezu, se synthetisují buň jak je to v literatuře popsáno, viz například dříve citované patentové spisy a publikace, nebo za pouuití obdobných postupů. NaapíHad při poiuiltí. D-ÍG-aia-aminokyseliny se' tato připravuje za pouuití postupů popsaných v amerických patentových spisech 3 198 804, 3 42 677 nebo 3 634 418, nebo jak to popisuje Friis a spool, AAta Chem. Scand. 17. 2391 (1966), připadlé Neims a spol. Biochemistry· , , 203 (1966), nebo jak je to popsáno v jirých publikacích na toto téma. Pro pohoddí a .se zřetelem na bližší do^iení jsou však dále uvedeny některé příklady podobných synthes přípravy karboxylových kyselin, obsahiu^— cích volnou aminosbipinu, jei je chráněna t^er^c^.bitoxz^y^l^a^i^t^o^n^yl^o^vou skupinou.

C. K^seelina 2-(terc.Utkxxkkrb0nnylminoiettyl)-1 ,4-cyklкtexaditnyloctooá

Roztok 16,5 g (0,1 mol) kyseliny k-aiinomithtlf enyloctové v 1,5 litru kapalného amoniaku, ze kterého předtím byla odstraněna jakákoo.i stopa vlh^oti přidáním 50 mg lithia, se pomalu zředí přidáním 500 ml suchého ttrc<,butylalkotolu. Do roztoku se přidává po mmlých dávkách

3,4 g lithia během 4 hodin, a směs se potom míchá 16 hodin za teploty místnooti za oddítSilování amoniaku do odtahu, načei se konečně vysuší ai do sucha za teploty pod 40 °C. Zbytek se rozpuutí v 500 ml vody a roztok se chrkiatografujt na koloně IR-120 (vodíkový cyklus, 700 m.) a eluování se provádí 1% roztokem amoniaku. Frakce eluátu, jei reagují positivně s ninhydrinem, se sp^í a zahuutí do sucha. Zbytek se promne za pouuiltí. 4 podílů po 50 ml horkého acetonu a překrystaluje z 500 ml směsi ethanolu a vody(1:1); získá se tím 11,2 g (67 %) bezbarvých jehliček kyseliny з(2-£minomitttl-114“cyklktexadíenyl)kctové.

T. t. ' 183 °C.

Absorpce v infračerveném spektru: nýJJ^ ¹⁶3°» ¹5²⁰, ¹3B⁰, 13⁵⁶ cm^-'.

NM-spektrum: delta D2^{0 + K}2^C03 2,72 (4H, s, HgC ,) , 3,01 (2H, s, CH₂C0), 3,20

(2H, s, α^), 5,78 (2H, s H-C=).
Analýza pro CgHjjŇOg	8,38 % N
vypočteno: 64,55 % C,	7,84 % H,
nalezeno: 64,77 % C, ,	80^6 % H,	8,44 % N.

Zlepšený postup přípravy kyseliny o-(2-aminorneehyl-1,4-cyklohexadieinyl)octoré:

CH₂COOH

Li thium, terč.butylalkohol______

NHp hydrochlorid trietlylminu

CH2COOH + LÍCI + (CiH₅)3N

CH2NH2

Byl upraven postup, popsaný v americkém patentovém spise 3 720 665 (viz příklad 1), a to pro přípravu kyseliny D-^-aminool-d,4-cyklohexadienyl)octové. Přidáním. 40 mg lithia pod argonem se vysuší 830 ml destioovíniého kapalného amoniaku a za miclhiání se přidá 11,0 g (0,07 mol) kyseliny --aminomethhУfenyloctoré a 340 ml terc.butylalkoholu, dále pak za energického míchání se vnáší během 2 hodin celkem.1,6 g (0,225 mol) lithia a do reakční smmsi šedivé barvy se dále přidá 35 g (0,215 mol) hydrochloridu triehhylminu a reakční směs se míchá za teploty místnosti po 18 hodin přes noc. Dále se ve vakuu 1,9 kPa za teploty 40 °C oddeesiluje terč.butylalkohol a získá se bílý zbytek, který se suší přes noc nad kysličníkem fosforčným ve vakuu. · Potom se pevný podíl rozpustí v 30 ml směsi methanolu a vody 1:1 a roztok se za míchání vnese do 3,5 litru směsi chloroformu a acetonu 1:1 za teploty 5 °C. Reakční směs se míchá 20 minut, načež se leinokílseioa, tj. kyselina alfa-(2-minoeethyl-1,4*1cyíloteχadienyl)octorá, . oddil^u^e a, suší se 16 hodin ve vakuu nad íysličníkee fosforenrým. Ve výtěžku 6,3 g (58 %) se získá 6,3 g bílých krystalů o t. t. 190 °C (za rozkladu) . Infračervené spektrum a NM-esp^rum jsou ·v souladu s touto strukturou.

Roztok 19,31 g (0,135 mol) terc.butoxyílrbooyllzieu v 152 ml tetratyerofurans se vnese do míchaného roztoku 14,89 g (0,09 mol) kyseliny --aeinomethtУ-1,4ccyklohpχadieoyloctoré a 7,20 g (0,18 mol) hydroxidu sodného v 281 ml vody·a roztok se míchá 18 hodin za·teploty 25 °C, filtruje se vrstvou ^fuso^ové hlinky (Suuee-cce), načež se · tetrahyerofurlo oddestiluje za teploty 40 °C ve vakuu 1,9 kPa a zbylý . roztok se promuje dvěma podíly po 175 ml etheru; směs, okyselená přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, se míchá v ledové lázni a sraženina se po filtraci suší 18 hodin ve vakuu nad kysl-ič^kem fosforčným při . 25 °C; získá se tím 17,3 g (72,6 %) kyseliny -·c(terc.Sutoyykabbooylíminoeeeth'Ί)-1,4-cyílohexadienyl·c octové ve formě bílého přášku. Infračervené spektrum a NMR spektrum jsou v souladu s uvedenou strukturou.

D. Krselina D-(c)-p-hleroxycllfa-eprc.bot0lílaгbolelidofeolloctová

V třecí misce se trituruje 5,65 g (0,14 mol) · oxidu hořečnatého a 11,7 g (0,07 mol) D-1-)1-P“hldroχlfeoylglyciou a přidá se 177 ml 50% dioxanu. Dále .se pomalu přidává 20,0 g (0,14 mol) terc.butoxyílrbooyllzidu do prudce míchané reakční smmsi, která se míchá za teploty 45 °C až 50 °C po dobu 20 hodin. Potom se reakční směs zředí přidáním 710 ml ledové vody a 177 ml ethylesteru kyseliny octové filtiuje se · a filtrát se rozdělí na 2 fáze. Organická fáze se promyje třemi podíly po 50· ml 3% roztoku hydrogeenUllčitanu sodného s třemi podíly po 50 ml vody. Všechny vodné ·podíly se spojí a po ochlazeni se přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové upraví pH na hodnotu 5,0. Produkt se extrahuje třemi podíly po_ 125 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok·v uvedeném rozpouštědle se promyje za použití dvou podílů po 50 ml vody, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a zahuštěním při 35 °C ve vakuu 15 Torr se získá olej; ten se s petrolehheeem a získá se tak kyselina

D-(-)-p-hyrdřoxy-alfa-trrc.butoxkkrrooxmidofenyloctová jako bílá pevná látka. Tento produkt · se odfiltruje a suší ^{18 h}odin ve vakuu ·^nxd · ky^sličník^m f^forečjý^ za teploty ²⁵ °C; získá se tím 13,5 g ·(72,2 ¢) takřka bílého prášku o t. t. 102 °C. Infračervené spektrum a NM-spektrum jsou v souladu s uvedenou strukturou.

, Λ

E. Kalina D-(-)-kfka-terb.boOoxyaabOoamifoftnyloctová

Opakuje ·se výše uvedený postup pro· kyselinu D-(-)-e-lyfrooy-alfa-trrc.šuOoxykabboxεmidofenyloctovou. ^Získaa^í se tím 2 ^podí^ly vzorku o t. ^t. ⁸² °, vý^těie^{k 5,2 g (}3⁰ %). ^In^fračervené spektrim a NM-sppktržЖ je v souladu s touto strukturou.

F. Kleina 2-(terc.šuOoxyk^rbbonyl!minomeethX)-1,2-cykloleoenyl·octová, rovněž označovaná jako kyselina 2-<N-terc.butooχkarbbnylkoino)meehhX-1-cχkloleoen-1-χl-octová.

a) kyselina alfa-[2-( terb.bo0ox^kkar^ooyy^amiLnomethyl⁾-1,4-0^1(^0^^^1] octová (1⁾ ' K míchanému roztoku 8,0 g (0,048 mol) kyseliny alfa-(2amioюmethyX-1,4-cχklolexadfenyX)octová s 3,8 g (0,096 mol) hydrooidu sodného v 150 ml vody se přidá roztok 10,3 g (0,072 mol) terc.buOoxykarbonχlmifš v 80 ml tetrahydrof uranu a ^akční směs · se míchá 18 hodin za teploty místnoosi. Zx sníženého tlaku se oddftpilšjt tttrahχfrofšrko, x zbxlý roztok se promyje dvěma podíly p° 100 ml etheru, dále se otyyslí přidáním 6 N roztoku kyyeliny chlorovodíkové x okyselený podl se rovněž eotrahuje třemi pobily po 100 ml etheru. Spojené eotrakty se promni vodou za e^Oušii’S dvou podílů po 100 · ml, dále za eoušití 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, a po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrát zahnutí do sucha. Olejovitý zbxtek se trHu^je s n-hexanem za vzniku 10,5 g (82 %) bezbarvého prášku 1 o t. t. 113 °C.

^Iofra^etrvtoé s^^rum: ný^^⁰ З³⁷⁰, ^5, ¹⁶,⁴⁰» ¹53⁰, t²^⁰, ¹¹⁶⁰ cm^-'.

NMR^-a^pektr^šo: 1^,45 (9H, ^s, ttre.butylkУkolol) ^, 2,73 -4H, p^, CH₂C=C), 3^,16

-2H, s, CH₂CO), 3,76 <2Η,6, 6Hz, CH₂N), 4,90 -1H, m, N), 5,66 -2H, s, H-C=), 10,6 -1H, br-s, COOH) - ·

Analýza pro C14H21NO4 vypočteno: 62,90 % C, 7,92 % H, 5,24 % N; nalezeno: 63J3 % C, 8^1 % H· 5,26 % N.

b) Kyslina [²-⁽N-terc.bu^ooxykkrboo^χyaшiiLo)me^eh^lX“¹-c^lo^xen-¹ -^yi] -oc-^vá ⁽²⁾

Roztok ^1,33 ^g <5 ^kyselln^y ^-tN-tecc.bi^y^rbbon^am^o^etJhyl^^-c^lo^eoa6^ο-1-χ1 octové <1) v 10 ml 3$ roztoku amoniaku se hydrogenuje na 0,2 g 10% palladia na uhlí za tlaku 274 kPa. Thheoetické množtví vodíku se spotřebuje za.3 hodiny, potom se katalyzátor oddi-lt^je x filtrát se otyyelí na pH 2 přidáním zředěné .kyseliny chlorovodíkové, okyselený se · ^tratoje do dvou dávek ttlχltsttrš kyseliny octové po 50 ml. Spojené eotrakty se pro^Vý! vodou <20' ml) x po vysušení nxd bezvodým síranem sodným x za^i^Ž^ltění zx sníženého tlaku se získá 1,34 g oleje, který tuhne stáním po několik dní. Překrystalováním ze smí^s^:i n-heoaou x ttlχltsttrš kyseliny octové se získá 1,2 g (90 $) látky 2 ve formě bezbarvých prismat o t. t. 118 až 119 °C. .

Infračervené spektrum: 3450, 1730, 1660, 1510 cm \

NMR-spektrum: delta 1,58 (9H,s,terc.butyl-N), 1,50 až 1,90 (4H, m, -CHg-),

1,90 až 2,20 (4H, m, methylenové vodíky allylové skupiny), 3,18 (2H, s, CH₂-CO), 3,78 (2H, d, 6 Hz, CHg-N), 5,00 (1H, br-s, NH), 8,98 (1H, br-s, COOH)

Analýza pro C^Hg^NO^ vypočteno: 62,43 % 0, 8,61 % H, 5,20 % N; nalezeno: 62,12 % C, 8,77 % H, 5,37 % N.

G. Kyselina 2-terc.butoxykarbonylaminomethyl-4-hydroxyfenyloctová se. připraví například postupem podle amerického patentového spisu 3 823 141.

H. Kyselina o-(terc.butoxykarbonylaminomethyl)-fenylthiooctová se připraví například postupem podle amerického patentového spisu 3 657 232, viz rovněž americký patentový spis 3 813 390.

I. Kyselina beta-[o-(terč.butoxykarbonylaminomethyl)feny33propionová se připraví například postupem podlé amerického patentového spisu 3 813 391<

J. D-(-)-N-terč <,butoxykarbonyl-2-(3 -methyl-4 -hydroxyf enyl )glycin

2-(3 ^z-Methyl-4*-hydroxyfenyl)glycin

Roztok 59,02 g (0,6 mol) 75% kyseliny glyoxylové v 100 ml vody se přidá к suspenzi

54,6 g (0,5 mol) 2-methylfenolu a 140 ml koncentrovaného vodného roztoku amoniaku v 400 ml vody za teploty místnosti; teplota reakční směsi stoupne na 37 °C. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po 65 hodin, roztok, jehož pH bylo původně 10,1, se okyselí přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 6,8, a tím se dosáhne krystalisace produktu. Produkt se odfiltruje, promyje se vodou a suší ve vakuu nad kysličníkem fosforečným. Získá se tím 31,5 g (34,8 %) 2-(3-methyl-4-hydroxyfenyl)glycinu, rozkládajícího se za teploty 196 až 199 °C. Infračervené spektrum a NMR-spektrum jsou v souladu s touto strukturou.

V belgickém patentovém spise 774 029 (1972, Farmdoc 27, 122T) je uváděna t. t. 205 až 207 °C.

*

Analýza pro C^H^NO^ vypočteno: 59,66 % C, 6,13 % H, 7,73 % N;

nalezeno: 57,68 % C, 6,23 % H, 7,47 % N, 2,34 % HgO nalezeno s korekcí na uvedený obsah vody:

59,06 % C, 6,12 % H, 7,67 % N.

D,L-N-Chloracetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin

Hodnota pH suspenze 20,2 g (0,112 mol) D,L-2-(3'-methyl-4*-hydroxyfenyl)glycinu v 175 ml vody se upraví na 10,3 přidáním 20% roztoku hydroxidu sodného a dosáhne se tím rozpuštění.

К roztoku, vychlazenému v ledové lázni, se přidá najednou 38,2 g (0,224 mol) anhydridu kyseliny chloroctové a pH reakční sm&si se udržuje na hodnotě 10 přidáváním 20% roztoku hydroxidu sodného, až nelze zjistit žádnou změnu pH. Reakční směs se míchá dalších 10 minut za chlazení, okyselí se přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 2,0 a dosáhne se tím krystalizace produktu. Produkt se odfiltruje a po promytí vodou se vysuší na vzduchu.

Překrystálováním z 200 ml horké vody se získá 13,7 g (47,4 %) D,L-N-chlorасеtyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)-glycinu. Infračervené spektrum i NMR-spektrum jsou v souladu se strukturou připravené látky.

Analýza pro C2NO4CI.H2O:

vypočteno; 47,92 % C, 5,12 % H, 5,08 % N; nalezeno: 48,11 % C, 5,16 % H, 5,15 %N.

D-(-)-N-Chloracetyl-2-(3 *-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin:

5,0 g (0,0194 mol) D,L-N-chlorácetyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycinu a 6,1 g (0,0213 mol) soli L-efenaminu a kyseliny octové se rozpustí za zahřívání na parní lázni v 50 ml isopropylalkoholu· Přidáním vody a chlazením vykrystaluje sůl L-efenaminu, která se odfiltruje a suší na vzduchu.

Tato sůl se suspenduje v 30 ml vody a 50 ml methylenchloridu a pH reakční směsi se upraví na hodnotu 10,0 přidáním 20% roztoku hydroxidu sodného* Obě fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje dvakrát navíc methylenchloridem.

Přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové se upraví pH vodného roztoku na hodnotu 2,0, čímž vykrystaluje produkt, který se odfiltruje a suší ve vakuu nad kysličníkem fosforečným, takže se získá 0,9 g (36,1 %) D-(-) N-chloracetyl-2-(3'-methyl-4*-hydroxyfenyl)glycínu. T.t. 170 až 172 °C, alfa r = 185,9° (95% C2H5OH, c =1). Infračervené spektrum a NMR-spektrum jsou v souladu se strukturou získané látky.

Analýza pro C^H^NO^Cl vypočteno: 51,27 % C, 4,696 % H, 5,44 % N; nalezeno: 51,21 % C, 4,77 % H, 5,29 % N.

1,2-Difenyl-2-methylaminoethanol, běžně označovaný jako efenamin, má strukturu

OH IjíH

CH₃

Uvedená sloučenina je rovněž označována názvem N-methyl-1,2-difenyl-2-hydroxyethylamin nebo alfa, beta-difenyl-beta-hydroxy-N-methylethylamin, popřípadě 1,2-difenyl-2-methyl-amino-1-ethanol.

Tento vynález využívá pouze levotočivého erythro-isomeru. Postup přípravy této látky a reakce s penicilinem G jsou popsány v amerických patentových spisech 2,645.638 a 2,768.081. V posléze uvedeném je shrnuta předchozí literatura, právě tak, jako je tomu v článku W. B. Wheatleye a spol., J. Org.Chem. 18, 1564 (1953). Sheehan a spol., viz

J. Amer.chem. Soc. 81, 3089 (1959), použili tuto látku к rozštěpení racemického fenoxymethylpenicilinu (viz zvláště str. 3091).

D-(-)-2-(3-Methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin:

11,1 g (0,0431 mol) D-(-)-N-chloracetyl-2-(3*-methyl-4'-hydroxyfenylJglycinu se smíchá s 100 ml 2 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a reakční směs se zahřívá 1,5 hodiny к varu pod zpětným chladičem. Roztok se potom ochladí a hodnota pH roztoku se upraví na 5,0 přidáním 20% hydroxidu sodného, čímž produkt₍vykrystaluje; po odsátí tohoto produktu a promytí vodou se sušením ve vakuu nad kysličníkem fosforečným získá 7,4 g (94,7 %) D-(-)-2-(3*/3 ^-meehyУ-4^/-h^ydrvxyirnyУ)^gl^yc:LУU^, rozkl^ajd^cího se za tepoty . ²⁰⁵ až [a^lfá^jp4 = = -152,6° (/ N HC1, c = 1 ). Infračervené spektrim a NRRsppktrim jsou v souladu se strukturou připraveného produktu.

Analýza . pro C^H^NO^ vypočteno: 59,66 % 0 , (5/13 % H , 7,33 % NI;

nalezeno: 586 62 %3 C , 5,49 % H3 7,788 %3 N, 1,46% HgO nalezeno po korekci na obsah 1,46% HgO:

59,48 % C, 5,41 ' % H, 7,84 % N

D- (- )-N-terc. butox^yckaboony^-d ^/-meth^yl-4'-hydrvx^yfrnyl)glycin:

K suspenzi 7,2 g (0,0397 moo) D-(-)-2-(3^/-methyl-4^/-hydrvxyfrn^yl)glycinu a 3,2 g (0,08 moo) práškovaného oxidu horečnatého se 'za míchání za teploty místnooti přikapává v prostředí 100 ml 50% dioxanu 9,7 g (0,068 mol) terc.buVoxykarOvy^ylazidu. Reíkční směs se dále zalhřdvá 19 hodin pod dusíkem na 42 až 45 °C, 'dále se zředí přidáním 100 ml ledové vody, roztok se převrství rthylrsterem kyseliny octové a filtrací se odstraní určitý podíl nerozpustných látek, které se tím vyloučily. Voďný poddl filtrátu se oddělí a extrahuje ještě dvakrát rthylrsterem kyseliny octové, načež sepH vodného roztoku upraví na hodnotu 5,0 přidáním 42% kyseliny fosforečné, a vše se pětkrát extrahuje rthylesterem kyseliny octové. Spojené organické extrakty se promyjí třikrát vodou, vysuší se bezvodým síříme m sodným, načež ' se oddestilováním rozpouštědla za sníženého tlaku zdská jako zbytek olej; ten se ' vysuší ve vakuu nad kysličníkem fosforččiým ^a zdská se tím 10,6 g (95 %) D-C-^N-tercebutoxykarOonyd-6-(3'-methyl-4^z-hydrvxyfenyl)glycinu. Infračervené spektrum je v souladu s uvažovanou strukturou připravené látky.

K. D-(-)-N-terc.Butoxykar0vnyl-6-(3 ^z-methoxy-4*-hydroxyfenyl)glycin

23(3 '-Methoxy-4-hydroxxyfnny)glycin:

Roztok 59,2 g (0,6 mol) 75% kyseliny glyoxylové v 100 riL vody se přidá za teploty nos ti k suspenzi 62,07 g (0,5 moo) 2-me tho xyfen.olu a 140 ml koncentrovaného roztoku amoniaku v 400 ml vody. Teppota reakční směsi vystoupí na 35^O, načež se reakční směs smíchá za teploty místnosti po 65 hodin.

Produkt, který ^^vysaluj^ se oddí-lt^je, promyje se vodou, potom acetonem, a suší se ve vakuu nad kysličnkkem fosforčniým; zdská se tím 57,4 g (58,2 %) --(3^/-mrthoxy-4 -hydroKyTenyy)glycinu, který se rozkládá za teploty 218 až 220° (literatura 240°). Infračervená spektra a NR-sppkkra jsou v souladu se strukturou získaného produktu.

Aialýza pro C^R ,ΝΟ^ vypočteno: 54,82 % C, 5,62 % H, 7,10 % N;

nalezeno: 53,77 % C, 5,91 % H, 6,97 % N, 1,13 % H2O;

nalezeno s korekcí na obsah 1,13 % HgO 54,38 % C, 5,85 % H, 7,05 % N.

Literární odkaz: B. Block: 'Hoppe Se^e^s Z. pJhyyiol. Chem. 98, 226 (1917).

Štěpení 2-(3'-methoxyy4 hydroxyyenny J-glycinu

A. Meehχdertrr 2-(3*-methvxχ-4^z-hdírvxχferyУ.)glycinu

Do ochlazené suspenze 94 g (0,476 moo) 6-(3-~methvxχ-4^z-hydroxχfrnχl)glyciУU v 500 ml absolutního methanolu se zavádí prudkou rychlostí 20 minut plynný chlorovodík. Nejprve vznikne čistý roztok, načež se kvEanitativně vyloučí krystalický produkt. Za 20 hodin se oddiltruje hydrochhorid meehyyesteru, který se promyje malým rninzstvím methanolu; výtěžek produktu činí 99.6 g po sušení na vzduchu. Ochlazený roztok hydrochloridu v 800 ml vody se upraví přidáním roztoku hydroxidu sodného na pH asi 8, čímž se vyloučí krystalická sraženina esteru ve formě volné báze. Výtěžek činí 81,3 g. Infračervené spektra jsou v souladu s uvažovanou strukturou.

Annlýza pro vypočteno: 56,86 % C, 65,00 % H , 6,63 % N;

nalezeno: 56,46 %0 C, 6,28 %0 Η, 6>55 %0 N, 0>59 %0 H₂0.

B. D-(-)-2-(6 *-methoxy-4*-hydroxyfenyy)glycin

Směs 50 g (0,267 mol) meehyyesteru 2-(6*-methoxyy4*hydroxyfenyy)glycinu, 19 ml (0,666 mol) kyseliny octové a 1 litru isopropylalkoholu se zahřívá do varu, až dojde k částečnému rozpuštění. Za dobrého míchání se potom přidá 89,2 g (0,267 mol) moonohyrátu kyseliny dibenzoyl-D-vinné a reakční směs se zahřívá do varu pod zpětným chladičem. Ihned začne sůl krystalovat. Zuřívání se v tu chvíli přeruší a baňka s obsahem se ponechá pornalu vychladnout na teplotu .místnoosi. Po ochlazení v ledové lázni se vysrážený produkt odfiltruje, filtrát se zaHaustií asi na .třetinu počátečního objemu a získá se tím malý podíl druhé frakce soli. Celkový výtěžek obou podílů krystalů činí 54,1 g po sušení na vzduchu: viz pevný podíl A, uvedeno ještě dále. Filtrát se zbaví deesilací rozpouutědla, k viskóznímu zbytku se přidá 60Q ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a reakční směs se extrahuje za pouuití 400 ml chloroformu, roztok v chloroformu se extrahuje dvUcrát vždy za použití 100 ml 1 N roztoku chlorovodíku, spojené extrakty v kyselině chlorovodíkové se poněkud zUauutí, aby se tím odstranily zbytky chloroformu, a potom se kyselý roztok zahřívá hodinu do varu pod zpětrým chladičem.

Zahuštěním roztoku na malý objem vykrystaluje sůl aminokkysliny a kyseliny chlorovodíkové, získaný produkt se odfiltruje a překrystaluje z 50 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Potom se produkt rozpustí v 200 ml vody a jeho pH se upraví na 4,5 přidáním hydroxidu sodného.

Reakční směs se zahřeje a ochlazením se vyloučí D-(-)-2-(3*'-metho:χyy4*-Уyíroxyfenyl)r glycin ve formě chu^áčkovtě jehličkových krystalů. Reakční směs se ponechá stát přes noc, produkt se potom oddi-Hraje, promyje se mírně vodou a methanolem, načež se suší za teploty 40 °C. Ve výtěžku 8,7 g se získá látka o specifické rotaci [aliajj^ = -'66,5° (c = 1 , 1 N roztok kyseliny chlorovodíkové). Infračervená spektra a NR-sppekra jsou v souladu se strukturou.

Analýza pro^04^0 vypočteno: 50,26 % C, 6,09 % H, 6,51 % N, 8,37 %H,O;

nalezeno: 50,46 % C, 6,23 % H, б^ % N, 8,95 %H,0.

C. L-(2)-2-(3^/-Metholyy44-hydrolχrfeϊnУ )glycin

Pevný podíl A, uvedený výše, ve váze 54,1 g se suspenduje v 600 ml 1 N roztoku kysěeiny chlorovodíkové a za dobrého míchání se přidá 500 ml chloroformu. Sůl se nerozruší příliš dobře v této soustavě, a proto se chloroform o^č^d^ěí, a za dobrého míchání se přidá 600 ml MIBK.

Fáze, nerozpustná ve vodě, se extrahuje za pouužtí 200 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové ve třech podílech, extrakty v uvedené kyselině se spojní, spojený pocíí.1 se filtruje, krátce se zahuusí, aby se tím oddimU zbytek rozpouutědel, načež se kyselý poddl zahřívá hodinu k varu pod zpětnýfa chladičem (hydrolýza esteru).

DáLe se reakční směs zahuutí na malý objem, a po ochlazení v ledové lázni vyJckrTyltíaluje sůl aminokyseliny a kyseliny chlorovodíkové, tato sůl se odfiltruje, překrystaluje z 75 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, potom se za zalhátí rozpustí v 500 ml vody a pH filtrátu po filtraci se upraví přidáním hydroxidu sodného na hodnotu 4,5, čímž vykrystaluje obojaký ion kyseliny.

Reakční směs se zahřeje do varu, filtruje se a uchováváním za chladu se -vyloučí krystalický .prodat, tedy L-( + )-2-(3 *-methoxxy4 *-hydroxyyenyy)glycin. Produkt se ocdfltruje, promyje se malým množstvím vody a methanolu, načež sesušením při 40 °C získá 9,6 g'produktu o [ali'a]^4 = + 127,2° (c = 1_t 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové). Infračervené spektrim a NR-ssektrum jsou v souladu se strukturou.

Analýza pro C^H^NO^HgO vypočteno: 50,23 % C, 6,,09 % H, 6,11 % Ní, 8,37 %H₂O;

nalezeno: 50,33 % C, б^б % H , 6,,22 ·% N , 7T,46 % H₂0.

D-(-)-N·(terc.buOoxykarboyyl )-2-(3 -methoxy-4 -hydroxyyenny. ^lycin: '

Směs 8,6 g (0,04 moo) D-(-)-2-(3'-methoxyy4'-hydroxyfenyS)glyciys, 3,2 g (0,08 mol) oxidu hořečnatého, 0,7 g (0,068 moo) terc.butoyykarbonySazifu a 240 ml smmsi dioxanu a vody 1 : 1 se míchá za zahřívání na 45 až 50 ⁰ po 20 hodin pod dusíkem. Odrazená reakční směs se zředí přidáním 240 ml ledové vody, filtruje se a filtrát se extrahuje ethylesterem kyseliny octové. Vodný poddl se po okyselení na pH 2 extrahuje pětkrát ethylesterem kyseliny octové, spojené extrakty se po vysušení bezvodým sírneem sodným zahnutí ve vakuu a po odddetilování ethylesteru kyseliny octové zbude produkt ve formě viskozního oleje: 6,3 g.

L. D-(-)-N-trrc.SuOyχykarboyyl-2-(4-'acrtoyyfenyl )glycin.

Tato sloučenina se připraví za pooLuilLí výše uvedeného postupu s tím rozdílem, že se msto D-(-)-2-(3i -methyl-4 ' -hydroyyfenyS)glyciyu, použitého výše, použije ekvimooámí množství D-(-^)-2-(4-acrtoyyfryyl)glyciУu, připraveného takto:

Příprava kyseliny D-(-)-2-am.no-2-(4-acrtoxyfryyl)octové

Postup A (v kyselině octové jeko rozpouutědle):

Směs 203,5 g (1 mol) hydrochloridu D-(-)-p-hyfroyyfenylglyciyu v 800 ml kyseliny octové a 314 g (4 mooy) acetylchloridu se míchá 48 hodin za teploty místnoosi. Pevný podíl se potom odsaje, promyje se třikrát acetonem, vždy za pouuití 250 ml,· dvakrát ethenolem, vždy za pocítí 250 ml, načež se pevný poddl vysuší při 40°. Ve výtěžku 210 g (85,4 % se získá hydrochlorif, který se rozpuutí v 3,0 litrech vody, roztok se ochladí na +5 až +10 °C a jeho pH se upraví na hodnotu 4,5 přidáním 20% roztoku amoonaku. Suspenze se míchá hodinu za teploty 5 °C, pevný poddl se odfiltruje, promyje se dvakrát vodou a dvakrát acetonem .

a sušením při 40 °C se získá ve výtěžku 133 g (64 %) produbt, přepočteno na D-(-)-p-hydroyyfenylglyciy. ^alfajp = —104,5 (c = 1, 0,1 N roztok kyseliny chlorovodíkové).

Poutup B (v meehhSθnrhhloifu):

Směs 4,07 g (0,02 moo) hydrochloridu D-(-)-p-hyfroxyfrnylglycins, 30 ml methylenchloridu a 6,28 g (0,08 mol) acetylchloridu se míchá 48 hodin za teploty míutnoosi. Pevný podíl se oddí-lt^je, promyje se dvíOkrát acetonem a dvakrát ethanolem. VVtěžek činí 4,17 g (84,5 %).

Analýza pro chlor vypočteno: 14,4 %, nalezeno: 14,4 %·

Postup C (v kyselině trifluoroctové):

1,67 g (0,01 mol) D-(-)-p-hydroxyfenylglyčinu se vnese za míchání do 10 ml kyseliny trifluoroctové za teploty místnosti a po rozpuštění se přidá 1,57 g (0,02 mol) асеtylchloridu. Proběhne mírně exotermní reakce a vyloučí se pevný produkt; suspenze se míchá 90 minut za teploty místnosti, načež se kyselina trifluoroctové oddestiluje ve vakuu. Zbylý pevný podíl se odfiltruje, promyje se methylenchloridem a ethanolem. Získaná kyselina D-(-)-2-amino-2-(4-acetoxyfenyl)octová je totožná s produktem podle postupů A nebo B. Výtěžek činí 1,9 g (75 %).

M. D-(-)-N-terč.butoxykarbonyl-2-(1 *-cyklohexenyl)glycin

Tato sloučenina se připraví za použití výše uvedeného postupu tak, že se tam použitý D-(-)-2-(3 ^z-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin nahradí ekvimolárním množstvím D-(-)-2-(1'-cyklohexenyl)glycinu, připraveného podle belgického patentového spisu 773 773 (Farmdoc 25 515T) nebo amerického patentového spisu 3 824 237·

N. D-(-)-N-terč.butoxykarbonyl-2-(3'-chlor-4 *-hydroxyfenyl)glycin se připravuje například za použití postupu, který byl popsán v americkém patentovém spise 3 489 751.

O. D-(-)-N-terč.butoxykarbonyl-2-(1',4^cyklohexadienyl)glycin

Tato sloučenina se připraví za použití postupu uvedeného výše, a to tak, že se nahradí D-(-)-2-(3 '-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin ekvimolární hmotností D-(-)-2-(l' 4'-cyklohexadienyl)glycinu, který je rovněž označován názvem kyselina D-2-amino-2-(1,4-cyklohexadienyl)octová, a připravuje se postupem podle amerického patentového spisu 3 485 819.

P. Kyselina D-(-)-2-terč.butoxykarboxamido-3-(14'-cyklohexadienyl)propionová

Tato sloučenina se připraví za použití výše uvedeného postupu tak, Že se nahradí D-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycin ekvimolární hmotností kyseliny D-2-amino-3*(1,4-cyklohexadienyl)propionové, připravené podle amerického patentového spisu 3 485 819.

Q. Kyselina D-(-)-2-terč.butoxykarboxamido-3-(4'-methoxy-1',4'-cyklohexadienyl)propionová

Tato sloučenina se připraví nahrazením P-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycinu, použitého při výše popsaném postupu, ekvimolekulovou hmotností kyseliny D-2-amino-3-(4^/-methoxy-1,4-cyklohexadienyl)propionové, připravené podle amerického patentového spisu 3 485 819.

R. Kyselina 2-terc.butoxykarbonylaminomethylfenyloctová se připraví například podle amerického patentového spisu 3 766 175S. Kyselina N-terc.butoxykarbonyl-1-aminocyklohexankarboxylová

Tato sloučenina se připraví za použití výše uvedeného postupu náhradou D-(-)-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycinu ekvimolární hmotností kyseliny 1-aminocyklohexankarboxylové.

T. Kyselina D-(-)-alfa-terc.butoxykarboxamido-3-thienyloctová se připraví například za použití postupů z amerických patentových spisů 3 634 418 a

198 804 a tam uvedených citací.

U. Kyselina D-(-)-alfa-terč.butoxykarboxamido-2-2-thienyloctová se připraví například za použití postupů, popsaných v amerických patentových spisech 3 634 418 s přihlédnutím к tam uvedeným odkazům.

V. Kyselina beta-(2-terc.buto:ka£arbonylaiiinomethyl-1 ,4-cyklohexadienyl)propionová

a) Koeeina Ceta“(2-emincuiiethh0-1,4-cnklohexadienyl)propionová .

Roztok 10,74 g (60 mnoU) kyseliny Cebako-minomeelhrOfennOpropionové v 1 000 ' ml kapíaLného amoniaku (po předběžném přidáni asi 50 mg lithia k odstranění sbop vody) se opatrně zředí přidáním 300 ml suchého berc.butylalkoholu. K roztoku se přidává po částech 2,08 g (0,3 ' atom) lithia během 3 hodin,·a reakční směs se míchá po dobu jedné noci bak, že se odpaří kapalný amoniak a reakční směs se zahustí do sucha. Zbytek se rozpustí v 200· mL vody a roztok se chr(imotourťafuje na koloně IR-120 (H⁺ -forma, 500 o.) · a eluuje se kontinuálně za pouužtí 2 000 ml vody a asi 2 000 mL 5% roztoku amon0aku. Frakce, po^tivní na ninhydrin, se spo^jí, zahnutí do sucha a zbytek se krystaluje z 90% ethanolu za vzniku bezbarvých jehLiček.

Výtěžek kyseliny b'eta-( 2-^minimeehy0-1,3-cnklihexadie.oyl)-propionivé činí 9,.68 g (89 %), b.t. 228 až 229 °C. ·

Infračervené spektrum: ný ^jj⁰¹ 2 130, 1 540, 1 300 cm“'.

NIR-sppktrum: delta pj-θ 2,68 (4H, · s, CH₂CH₂C0), 2,74 (4H, s, methylenové skupiny cyklu), 3,68 (2H, · s, CH₂N), 5,79 (2H, s, vinylové vodíky v cyklu).

Aialýza pro C^H^NC^ vypočteno: 66,27 % C, 83,34 % H , 7,33 nalezeno: 66,25 % C, % H, 8,,52 % H 7,61 % N, 7,71 % N.

. b) Kyseina Ceta-(2-terc.CutoxykarCo]oУ.lamnouothyl-1,4-cyklohexadiklool)propionová

Ke směsi 1,40 g (7,7 mnmo) kyseliny Ceta-(2-aminomokty0-1,4-cyklihexadiennl)propionové a 2,02 g (20 mmo) triehhylmios v 50% vodném tetrahndoifuranu (20 m.) se přidá mz^ok 1,43 g (10 mnml) terc.Cstolesteru kyseliny azidomravenčí v 5 mL tetгhlndrifurεnu a reakční směs se míchá přes noc za teploty míst^os!. Směs se promyje · etherem (dvakrát po 20 m.) a vodná vrstva se ilt'^гopei na pH 2 přidáním zředěné kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs ·se extrahuje chlorffomnem (čtyřikrát po 30 ml) a spojené extrakty se promy^í vodou, načež se vysuáf. Zahuštěním extraktů za sníženého tlaku se získá kyselina Ceta-(2-tecc.Suio:^yk:arCioylaIninoilothhn-1,3-cnklihkxadiennl)pripionuvá ve formě bezbarvého oleje, výtěžek 2,10 g (97 %). íMračervené s^pektrim: ný 1 700, ¹ 51°, ¹ 24⁰, ^{1 160} cm“^{1 λ )R}-is^^rum: ^de3.^ta p^^{3 1,47 (9H}> p^{, b}erc.-Bu-H)^, 2^,45 ⁽4H, s, CH^CH-,),

2.69 (4H, s, methylenové skupiny v cyklu, 3,80 (2H,·d, · 5 Hz, CH2N),

5.70 (2H, s vinylové vodíky v cyklu).

W. Kyselina Ceta-2-teoc.butuxykarCooyleoioomoehyl:“1-cyklohexenyl )puopinnová

V 20 ml 3% vodného roztoku amoniaku se rozpětí 0,92 g · (3,2 mmo) kyseliny beta-^-teoc.CutixyкarCornУ-aoinouothyl-1,4-cyкlohexadiкnyl)propionivé a roztok·se hydrogenuje za tlaku 2,1 atm za pouUAtí 0,1 g 10% paládia na uh-í 3 hodiny v Parrově zařízení. Reakční směs se filtruje, filtrát se oky^^ei na pH 2 přidáním zředěné kyseliny chlorovodíkové a okyselený podíl se extrahuje třikrát vždy za pouH^tí 30 mL ethy^ste!! kyseliny octové. Spojené extrakty se promy^í malým množstvím vody в po vysušení se oddestilováním rozpouštědla za sníženého tlaku získá 0,84 g (91 %) ·olejovaté k^^^^li^ny Ceta-(2-terc.SuioxnkarCinnlaminoImehy0-1 -cyklohexenyl)poopionové.

Infračervené s^ktrum: ný ^kap* 3 35° ' ² . ⁽NH)·, 3 ²⁰⁰ - ^{2 400} (COOH), 1 75⁰ (CO), 1 250, I . 165 cm” .

(BOC).

NM-sp^trum i delt^a °^¹3· 1 ,48 (9H, s, ttrc.bwty]L)^, 1^,5 - 1,8 (4H, m^, CH^Hg), ^; 1,8 -.2,2 (4H,.m, allyl-CHg), 2,4 (4H, CH2CH₂-CO), .3,72 (2H, s,

N-CHg).

X. D-(-)-N-ttrc.b)Utoxykarb(vnl“2“(4*-УyaroχymethylfeInrУ.)βlycin .

Tato sloučenina, jež . se označuje rovněž názvem D-(-)-N-terc.buOo:yykjrbv>nye-p-lyaroχymeetylfe)nylglycin, se připravuje postupem podlt jihoafrického patentového spisu 73/4055; pro zjednodušení situace je zde reprodukován celý pracovní postup.

K roztoku 50,0 g (0,373 mol) 1,4-benzendikarboxal.dshydu v 200 riL suchého ranu se přikapává pod dusíkem a v ledové lázni roztok 104,0 g (0,410 mol) lihliitm—-tri- -(terc.buooxy)aluminia v 500 ml suchého tstrdiydrof uranu. Reiakční směs se míchá 90 minut v lidové lázni, dále se vlije do 2 litrů ledem vychlazeného 2 N roztoku ky^seliny chlorovodíkové, vodný roztok se extrahuje čtyřmi dávkami etheru po 800 m a spojené extrakty v etheru se promy^. za pouužtí 500 ml ledem vychlazeného 5% roztoku УydrogenubУečitanu sodného, dále za pouužtí 500 ml nasyceného roztokuchloridu sodného, a po vysuSení se oddestilov&iím etheru za sníženého tlaku získá 46 g surového p-УydroxymeShyrlbtnzaedeУydb. Surový produkt se chromaaografujt na 1 kg neutrálního oxidu hlinitého a etherem eebvvané frakce ве zahnutí. Chlazením vykry^a^je p-hydroxymeetyrlbenz aldehyd ve výtěžku 17,0 g (35 %), t.t. 44,5 °C.

K míchanému roztoku 10,0 g (0,0735 mol) p-УydroxymeehylbtnzaldeУydb a 17,1 g (0,15 mol) uhLičitanu. amonného v 110 ml 60% sthanolu se po zahřátí na 50 °C iřikapáíá roztok 4,0 g (0,081 mol) kyanidu sodného, rozpuštěného v 10 ml vody. Reiakční směs se míchá za zahřívání na 55 až 60 oc po 3 hodiny, načež se na hodinu zvýši teplota na 85 °C. Po ochLazení v ledové lázni se upraví pH roztoku na hodnotu 6 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové, pevný poddl, který se vyloučí chlazením přes noc, se o(d’iltrbjt, pr omyje se studenou vodou a vysušením se získá 11,0 g (72 %) 5-(li-hydrox;yleehyleenyl)Уyal^rtoinu o b.t. 189 až 196 (za rozkladu). Tato látka se použije bez jakéhokoli čištění pro přípravu odp^vídajcí aminokyseliny.

Směs 10,9 g (0,053 mol) 5-(p-УyaroxyneehylfeInУ-)-Уyaantoinu a 2,5 g (0,081 mol) oktahydrátu hydroxidu barnatého v 125 ml vody se míchá za zahřívání k varu pod zpětným clhLadičem po dobu 18 hodin. Po ochlazení v ledové lázni se reakční směs zředí.při dáním 125 ml vody. Roztok se oky přidáním končen kované kyseliny sírové na pH 1, síran barnatý se. «^11^^ jt a pH filtrátu se upraví uhličianeem olovnatým .na hodnotu 6. Síran olovnatý se otdfl·^^ je, filtrát se nasytí sirovodíkem a sirník olovnatý se Azeotropní destilací se potom zahuutí vodný roztok na objem 100 ^l, přičemž se azeotropní destilace provádí za sníženého tlaku. Ochlazením se vyloučí 5,2 g (54 %) p-Уyarox;yeetylfeτnrlglycinu o t.t. 228 až 229 °C a tato látka má po krystalizaci ze směsi sthanolu a vody t.t. 230 až 231° (za rozkladu). '

Analýza . pro C9H1NO3 .

vypočteno: 59,66 % C , 12 % H,, 7,33 % N5 .

nalizsno: 59,62 % C, 6,24 % H, 7,33 % N.

K roztoku 8,0 g (0,0.44 mo'l) i-УydroχlIlethylefnylglycinu a 8,8 g (0,087 mol) triehlyrlminu v 160 ml vody st přidá 6,95 g (0,049 mol) ttrc..butoэykarbonylaziau, rozpuštěného v 120 mL t strhy drof uranu. Reia^ní směs se míchá přts noc za teploty místnooti, načtž se promuje dvakrát za pouužtí vždy 200 ml etheru, vodný poddl se potom překryji etherem a okysel za chlazení v lidové lázni na hodnotu pH 3 až 3,5 přidáním 3 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Dále se okyselený roztok extrahuji třemi podíly po 200 ml etheru, spojené roztoky v etheru se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného a po vysušení se ether oddestiluje za sníženého tlaku. Vzniklý olej, získaný jako zbytek, se trituruje s chloroformem a hexanem, pevný podíl se odfiltruje a získá se tím DL-N-terc.butoxykarbonyl-p-hydroxymethylfenylglycin ve výtěžku 7,74 g (63 %), t.t. 139 až 141,5° (rozklad).

Analýza pro ^C14^H19^N05

vypočteno:	59,78 % C, 6,81 % H, 4,98 % N;
nalezeno :	59,67 % C, 6,76 % H, 4,69 % N.

Směs 7,560 g (0,0269 mol) DL-N-terč, butoxykarbonyl-p-hydroxymethylfenylgly činu a 10,199 g (0,0269 mol) chininu se rozpustí v 110 ml vroucího ethanolu, roztok se ochladí na teplotu místnosti a nechá se krystalovat přes noc, potom se sůl odfiltruje, a tato krystalizace se opakuje třikrát.

Z 17,76 g soli o b.t. 198 až 201° a o specifické rotaci alfa -149,8° (c - I, methanol) se získá po třech krystalizacích rozštěpená sůl ve výtěžku 4,6 g a o t.t. 205 až 206 °C, £alfajj)5 -163,4° (с = 1 , methanol). Další krystalizací se již hodnota optické rotace nezvýší.

Levotočivá sůl chininu a D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-p-hydroxymethylfenylglycinu se suspenduje v 75 ml vody a 175 ml etheru v ledové lázni a přidáním 3 N roztoku kyseliny chlorovodíkové se hodnota pH upraví na 2,5. Po oddělení vrstvy etheru se vodný podíl extrahuje do dvou dávek etheru po 100 ml, spojené roztoky v etheru se promyjí za použití 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a po vysušení se ether oddestiluje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje s chloroformem a hexanem a po filtraci se získá D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-p-hydroxyraethylfenylglycin ve výtěžku 1,68 g (98 b.t. 111 až 113,5° (rozklad), hodnota specifické rotace [alfajp* = -136,5° (c - 1 , methanol).

Použití enaminově blokované skupiny s vhodným postranním řetězcem v poloze -7-, obsahujícím volnou aminoskupinu, před acylací základní struktury, jako je struktura II, je dobře známo z amerických patentových spisů 3 223 141, 3 813 390, 3 813 391, 3 834 141 a belgického patentového spisu 773 773. Pro zjednodušení je.zde dále připojeno několik specifických příkladů.

Sodná sůl kyseliny 2- [n-(1-ethoxykarbony1propen-2~yl)aminomethyl] -1,4-cyklohexadienyloctové (4):

Do míchaného roztoku 460 mg (0,02 mol) kovového sodíku v 100 ml absolutního ethanolu se přidá 3,34 g (0,02 mol) kyseliny 2-aminomethyl-1,4-cyklohexadienyloctové a 3,1 g (0,024 mol) ethylesteru kyseliny acetoctové a reakční směs se zahřívá do varu pod zpětným chladičem za míchání po 4 hodiny. Horká reakční směs se filtruje a stáním filtrátu za chladu přes noc se vyloučí 2,0 g bezbarvých jehliček 4 o t.t. 264 °C. Další produkt ve'výtěžku 3,3 g se získá zahuštěním matečného louhu. Celkový výtěžek činí 5,3 g (88 %).

Infračervené spektrum ný 3 300, 1 635, 1 600, 1 570, 1 300, 1 275, 1 ПО, 1 090 cm’.

NMH-spektrum delta i₍₂₃ (зн, t, 7Hz,CH₂CH₃), 1,96 a 2,25 (3H, s, C=^C=CH₃, cis a trans), 2,70 (4H, s, H₂C<·), 3,04 (2H, s, CH₂C0), 3,66 a 3,95 (2H, s, СЦх-N, cis a trans), 4,07 (2H, q, 7 Hz, CH₂CH₃), 4,45 4,56 (1H, s, =^, cis a trans), 5,76 (2H, s,

Analýza pro H₂₀NO₄Na vypočteno: 59,76 % C, 6,69 % H, 4,64 % N; nalezeno: 59,69 % C, 6,76 % H, 4,75 % N.

Sodná , sŮL kyseliny S-N-^-methoxykarborol^-iemeflvinyD-aLfa-emino-aifa-^-metlhZl“ -4 ^z-lydroxyaeoyl)octoné

K míchanému roztoku 3,02 g (0,078 mol) hydroxidu sodného n 320 ml methanolu se přidá 0,08 mol D-(-)-2-(3--metlyl-^-olyrdroxyaenyltelyciou b reakční směs se zahřívá k varu pod zpětrýi chladičem za přidávání roztoku 9,6 ml. (0,088 mol) meethlesteru kyseliny acehoctoné n 80 ml methanolu během 30 minut. Po zahřívání reakční síísí do varu po dobu dalších 30 minut se methanol.oddeetiluje za současného přidávání toluenu stejnou rycíhootí, jak methanol oddeetilonáná, takže reakční směs má stále přibližně stejný mitřní objem.

Jakmile vnitřní teplota reakční smmsi dosáhne ' 100 °C, suspenze se odhadí v ledové lázni, tam se clh-adí 4 hodiny, pevný podíl se oddiltruje, dobře se promuje toluenem a po sušení na vzduchu se pevný poddl dále suší nad kysličníkem i^os^i^oeedým do konstantní váhy za vzniku pevné sodné soli kyseliny D-N-(2 . -eethocχlíbro]цn--1-meteylyiIinl. )--aaa-beinoc¢b.ab-(3 '-methyy-4 ^/-hldrc:χyfenyl)octcvé.

Sodná sůl kyseliny D-N--22methocyklíaobc0lL-methyOyivy0lL-abfa--beinoo-.afa-(3 --eethcxy-4^Z-Oldrcxyae^oyl)cctcvé. .

K míchanému roztoku 3,02 g (0,078 mol) hydroxidu sodného v 320 ml methanolu se přidá 0,08 mol D-(-)-2-(3-mtlethcxy-4^/hyrercxlaenyl)glycinu b získaná reakční směs se zahřívá do bodu varu pod zpětrým chladičem, zatímco se přidává roztok 9,6 ml (0,088 mml) etlylesteru kyseliny octové v 80 ml ϋ^ΟβηοΙπ bělem 30

Rehkční směs se dále udržuje ve varu pod zpětném chladičem po 30 minut, potom se methanol cddestiluje za současného přidávání toluenu takovou · ryclh.ootí, že se objem reakční směsi udržuje přibližně na stejné výši. Jakmile vnitřní teplota dosáhne 100 °C, chladí se suspenze v ledové vodě po 4 hodiny, pevný poddl se oodiltruje, dobře se promyje toluenem, vysuší se na vzduchu, dále ve vakuu nad kysličníkem acsforč0Jým až do konstantní véiiy, takže se tím získá jako pevný poddl D-N--22metho:ιQrXlraob01-1 -m-eeylviny0l-a-fab-bino-clfab-3 *-eethoэχrl4'-hydrcxyf enyloctová kyselina ve formě sodné soli. .

Za podobného používání protonově chráněné skupiny, jako je tomu v případě lydrocchoridu chloridu kyseliny, což je rovněž dobře známo z literatury, se postupuje takto:

HylLdoch0orid chLcrieu D-(-)-2-(3^z-eetho2χг-4^/-lydrc:χff ernyJglycinu se připraví ve vysoké · čistotě s vysokou účinnootí tímto postupem:

Ve 100 ml dioxanu se rozmíchá asi 0,06 mol D---)-2-(3'-eethocχ·l-4-hlllro2χrlaeolLglycinu b za míchání se do suspenze zavádí plynný acsgeo za udržování teploty suspenze v rozmezí 50 až 58 °C. Celkově se zavádí iosgen po dobu 3,5 hod za vzniku žlutého roztoku. Nadbytek iosgenu se potom vypudí dusíkem b do roztoku se zavádí po dobu 2,5 hod plynný. chlorovodík, dále se roztok míchá b zředěním · malého mrnoství etherem se získají krystaly, které se přidají jako očko do hlavního poddlu. Roztok se dále míchá 16 hodin za teploty 20 až 25 °C, získaná suspenze krystalického hydrochlcridu D-(-)-2-(3 ^z-eethc:Jχy-4'-lldrc:ιχl‘enol ^l^ylcHoridu se filtruje, takže se . tím získá prodidct. ·'

Poddl na filtru se promyje dioxLuiím b eeetoylenchlcriděe,· načež se sušením ve vakuovém exsikátoru nad kysličníkem aosaoreC]ým získá asi 7 g hydro echo ridu chloridu D-4-)-2-(3^z‘^θϊ]οο2Χι4 ^z-hl<iгcxyaθnyl)gllcinu.

Příprava lydroclhLoridu chloridu kyseliny D-(-)42-beinoc2-(4-acetcxyaeloyl)4Cctové

Směs 83,6 g (0,40 mol) kys^eHi-ny D-(-)-2-aeinoc2-(4-acetoxyael0l1)octové b 1,25 1 bezvodého meethyenclhoridu se ochladí na -5 °C za michíáií) potom se pomalu přidává 152 g cihori du fosforečného a ještě 4 mL dimethylforaamidu a reakční směs se míchá 4 hodiny za chLazení na 0 °C. Pevný podíl se odfiltruje) promyje se bezvodýfa methylenchloridem a sušením ve vakuu za teploty místnosti se získá 61·g (57,5 %) produktu.

Analýza pro chLor vypočteno: 26,9 %, nalezeno : 27,2 %.

Příprava kαrbkxya]nnydrifu kyseliny D-mEaidlové

C₆H5CH-COOH ^⁰°¾

OH

СбН5-<р—pO

O o

X

Karboxyanydrid kyseliny D-mεlodlLkoé (2)

Po·dobu 30 minut se zavádí fosgen do roztoku 2,0 g (0,013 mol) kyseliny D-(-)-mandlové ·(1) v suchém tetrhydrofurenu a získaný roztok se ponechá stát přes noc, načež se získaný roztok zahřívá 10 minut k varu pod zpětným chladičem. ·Odffstilo várním rozpouštědLa za sníženého tlaku se získá olejovitý zbytek, který se ztuží triuuoováním s 20 ml n-hexanu. Produkt se · odfiltruje a vysuší se ve vakuu nad hydroxidem draselným. · Ve výtěžku 2,3 g · se . takto získá karboxyanhfdrid kyseliny D-mandfové.

infračervené spektnm ný HlaX ^{1 895, 1 875, 1 780} cm*“¹.

Mezi nejúčimější · látky podle tohoto vynálezu patří ty sloučeniny, které mají konfiguraci D- na alfa-hllíkovém atomu v postranním řetězci v poloze -7-, to jsou ty, které. ' se připravují . z D-2-fenylglycinu nebo kyseliny D^j^ea^n^lové nebo z moooouussitrvaných derivátů D-2-fenylglycinu nebo kyseliny В-тш^оуё, jak je to zde popsáno. Dále pak ·konfigurace na dvou opticky aktivních, asymeerických centrech beta-laktmlOoého seskupení je taková, jako je tomu v cefalkuporiou C, který byl připraven fe]mentováoíe; jakož i v kyselině 7-amiokcefalkupkranové, jež byla připravena z těchto látek.

Další příklady jsou připojeny pro popis postupu podle tohoto vynálezu, nikoli však pro jakékoli omezování, tohoto postupu. Všechny hodnoty teplot · jsou uváděny ve stupních Celsia. Kalina 7-aeinocefalosporlnooá se zkracuje jako 7/ACA, přičemž -ACA- znamená skupinu struktury

-NH-CH-CH CH₂ o-<S-^_cZi-CH₂I

COOH takže kyselinu 7-aeinocefaL.ksportrnovou -7-ACA lze vyjác^it schematisovným vzorcem

H-ACA-O-C-CH

Pod názvem Skellyuoloe B je označována pet^L-etherová frakce o b.v. 60 až 68 °C, kterou tvoří v pod^atě n-hexan.

LA-1 pryskyřice je směs sekundárních aminů, kde každý sekundární amin má vzorec

kde každý z obecných - symbolů R¹,² a rJ znamená jedtaovazný alifatický uhlovodíkový zbytek 1 2 3 a kde R ¹ , R- a RJ znamenaaí soubor od 11 až do 14 atomů UhLíku. Tato směs sekundárních aminů, jež je někdy označována v příkladech jako kapalná směs aminů δ. II, je čirá, ambrově zbarvená kapalina s těmito dále uvedenými fyzikálními vlastnostmi: viskosita při 25 °C 70 cpd, specifická hmoonost při 20 °C činí 0,826; index lomu při 25 °C činí 1,4554, destilační rozmezí za vakua 1,3 kPa až do 170 °C 170 až 220 °C 220 až 230 °C nad 230 °C

0,5 % %

%

6,5 %

Ira-120 se rovněž označuje jEko Abebeite-120 a je to silný katex, obalující zbytky sulfonovýčh kyselin. Jde o běžně dostupný katex typu polystyrénových sulfonových kyselin, takže je to na jádře sulfonovaná polystyrénová pryskyřice, zesítěná divinylbenzenem, získaná postupem, který je popsán Krmin-em, Ion ExcJhange Reeins, druhé vydání (1958); J. Wiley Sons, lne. Temže viz například str. 84 a 87.

Příklad 1

Kysslina 7-(2-abinoobthulfennlaaetanido)-3-(1-karboxymbthylteerazoO-5-yltUiobethyl)-3-cefem-4-karboxylová ch₂nh₂

|COOH

1. Do tříhrdlé banky, obsEuJdící 100 ml vody, zbavené iontů, vybavené míchadlem a teploměrem, se vnese 7,6 g (0,021 . mol) kyseliny 7-aminao--(1-karbo)χy]btnylSeerazol-5-slthiObntUyl)· -3-cefem-4-karboxylové a 3,4 g (0,034 mol) N-шbnhuSmbгfoliaž. Roztok se za míchání vychladí za použití ledové lázně na 0 °C a udržuje se na této teplotě.

2. V jiné baňce, vybavené rovněž míchadlÉm, se vnese do 184 . ml tetrihydrofuranu 9,6 g (0,03 mol) sodné soli kyseliny 2-(1-mbehooyУarroonl-1~propena2-ylabinoobthuS)í'enyloctové a za mícháni se suspense ochladí na -30 °C za pouužtí lázně s pevným kysliěníkm uhU^čitým a acetonem. Za nepřnrušovεaLého míchání a za chlazení na -30 °C se přidá 20 kapek dimetthylbeazslaminu a 4,4 g (0,03 mol)' isobutylnstnrž kyseliny i]uLoImravenδí. Vvnňklá rnakčaí směs se míchá 5 minut.

3· Směs ze stupně 2 se najednou přidá za mícHiání do roztoku připraveného . ve stupni 1, získaný roztok se ochladí na 3 . °C a takto se udržuje za míchání hodinu.

4. Z reakční směsi se odddntilžjn tntr(Uydrofuraa za teploty 30 . °C za pouužtí vakua kPa.

5. Hocdnota pH zbylého vodného roztoku se upraví na 4,0 za použžtí koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

6. Přidá se 2,5 g aktivního uhlí (Darco G-60) к výše uvedenému roztoku a odbarvovaný roztok se míchá 20 minut; uhlí se odfiltruje.

7. Filtrát se převrství za použití 120 ml ethylesteru kyseliny octové a za míchání se hodnota pH sníží na 3,8 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Určitý podíl nahnědlých pevných látek, který se popřípadě vyloučí, se odfiltruje (uchovat pro případné další zpracování a regenerování).

8. Za použití ledové lázně se filtrát ochladí na 5 °C a hodnota pH se sníží na 2,5 až 2,8 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové, teplota se udržuje na 5 °C a v míchání reakční směsi se pokračuje hodinu.

9. Produkt, který se vyloučí, se odfiltruje, podíl na filtru se promyje za použití 5 ml studené a iontů zbavené vody, dále za použití 5 ml studeného methanolu.

10. Pevná kyselina 7-(aminomethylfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-’karboxylová se suší na vzduchu do konstantní váhy; v typicky provedeném pokusu se získá 4,1 g produktu.

11. Produkt, který se získá postupem ve stupni 10, se proseje sítem z nerezové oceli o velikosti ok 200 mesh.

12. 10 g takto tříděného produktu se rozmíchá do 100 ml chloroformu, přidá se 5 ml triethylaminu, směs se za prudkého míchání vyhřeje na 50 °C a na této teplotě se udržuje za míchání po 5 minut.

13. Směs se filtruje za horka; kyselina 7-amino-3-(1-'karboxyniethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová, pigmenty a další nečistoty jsou rozpustné v horkém chloroformu za přítomnosti triethylaminu. Podíl na filtru se promyje za použití 25 ml chloroformu a suší se na vzduchu po 2 hodiny. Výtěžek 1,8 g kyseliny 7-(2-aminomethylfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové.

14- Produkt získaný ve stupni 13 se proseje sítem o velikosti ok 0,076 mm.

15· 10 g takto vytříděného produktu se rozmíchá do 75.ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, vše se míchá 10 až 15 minut, směs se filtruje a podíl na filtru se promyje za použití 25 ml vody, 50 ml methanolu, a suší se na vzduchu po 2 až *3 hodiny za teploty místnosti. Výtěžek: až 10 g.

16. 10 g kyseliny 7-(2-aminomethylfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové ze stupně 15 se rozmíchá do 65 ml methanolu.

a) Přidají se 2 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové; získá se tím roztok nebo takřka čirý roztok a vše se míchá 5 minut.

b) Za energického míchání se к roztoku ze stupně a) přidá 130 ml vody. Vyloučí se ihned sraženina (strhující největší podíl barviv); к tomu je třeba pH v rozmezí 1,3 až 1,6.

c) Směs se míchá minutu, rychle se filtruje, přičemž pevné podíly se uchovají pro případné další zpracování a regenerování.

d) Filtrát se očkuje a mírně míchá. Krystalizace se projeví asi za 15 až 30 minut.

e) Směs se míphá za teploty místnosti nebo za teploty 4 °C po 2 hodiny po objevení se krystalizace.

f) Krystaly se odfiltrují, promni se za použití 25 ml směsi 65 % vody a 35 % methanolu (objemově), 50 ml methanolu, načež se pevný podíl suší ve vakuu za teploty 50 . °C 24 hodin. Výtěžek činí až 9 g čištěné a bílé kyseliny 7-(2-aminomeehhyffnnyacetamidf)-3-(1-karboxyethhltttrazol-5-ylthiomethyy )-3-cefem-4-karboxylové.

17. Dále jsou uvedeny 2. alternativní způsoby krystalování kyseliny 7-(2-εϋίηοιι^1^^nylacetimido)-3-(1-karboxJУlethhltttrazol-5-yl·thioitthyl)-3-cefem-4-karboxylové.

A)

1. 10 g produktu získaného ze stupně 15 se rozmíchá do 100 ml

2. Přidáním 2 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové se získá- čirý nebo takřka čirý roztok.

3. Přidá se 1,5 g aktivního zhlí (Darco G-60) a odbarvovaná sm-ěs se míchá 30 minut.

4. Ativní unii se odfiLtruje, promyje se za pouužtí . 20 ml mmthanolu a methanolový podíl z prorvání se přidá k filtrátu.

5· K filtrátu se přidá 120 ml vody; může dojít k vysrážení malého mnoství pevné látky. Tento poddl se odfiltruje a uchová pro případné další zpracování nebo regenerování.

6. Za prudkéhomíchání roztoku ze stupně 5 se přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného upraví pH na hodnotu 2,5 až 3,0. Dojde k tvorbě krystalů.

7. Směs se míchá 30 minut, krystaly se oddiltrují, promyyí se za pouužtí 20 ml směsi methanolu. a vody, (1 :1, objemově), 30 ml methanolu, načež se krystaly suší 24 hodin ve vakuu za teploty 24 °C. Výtěžek činí až 9 g čistění kyseliny 7-(2·-εamnooethylfftnУacetamilfo)-3-( 1-karbjχymethyУtetrazjl-5-yhnhjimenhyl)з--tefem-4-tarbjχyljvé.

B)

1. 10 g produktu získaného ve stupni 15 Se rozmíchá do 75 mL vody

2. Přidá se 10% roztok hydroxidu sodného tak', aby se pH udrželo v rozmezí 6,8 až 7,2. Dojde tím k rozpuštění nebo částečnému rozpuštění.

3. Přidá se 1,5 g aktivniho-uhLí (Darco . G-60”) a směs se míchá 30 minut . za udržování pH v rozmezí 6,8 až 7,2, což se provede pokračujícím přidáváním 0,1 až 1 N roztoku hydroxidu sodného.

4. A^k^ivwí uhlí se jdfilhrujt, promyje se na filtru za pouužiti. 20 mL vody, jež se přidá k filtrátu.

5. Kryytalizace roztoku o pH 6,8 až 7,2 ze stupně 4 se dá provést za pH 2,5 až 3,0, jak je to popsáno ve stupních 6 a 7 způsobu A výše, nadhodnoty pH 1,2 až 1,5 (přidáním kyseliny chlorovodíkové) a jak je to popsáno ve stupních d, e, f stupně 16. V obou případech se získá až 9 g krystalické kyseliny 7-(2-aiinoIIlithyУfftnУaaetaeildj---(1-tarboxχyethyltttraz(jl-5-ylnhjoitthyL)-Зctfteπl-4-karbjχyLjvé. Tento produkt se často získá ve formě krystaLického monnoyyrátu. PoddáM-li se tato sloučenina' ΙλΙγ^^Ι^-χ^ injekcemi v dávce 10 mg/kg váhy těla mmyž, .dosáhne se za 15 minut hladiny v .krvi 19,7 mg/m.·

Ochranná dávka pro 50 % zvířat za podání sloučeniny uvedené v názvu při lthУ-Loí int-ra• muukkú.ární dávce Eschhrichia coli A15119, K. potumoniae A9977. . a E. cloacae A21020 činí 0,39 - 0,42, 1,5 -'25 a 1 - 3,2 mg/kg, uvedeno pro . ten který druh mikroorganismu.

Příklad 2

Dvvodnáselná sůl kyseliny 7-(D-alfa-УyrrjχyftnyLacttιmifo )-3-(1-karboxjymthyltterazoll5-ylУh0oie1УLyl )зl-tftem-4-karboxyljvé

COOK

Сн₂соок

A.

Kyselina 7- (D-alfa-fonmyloxyfenylacetmido )-3- (1-karbooymethyltetrazol-5-ylthiomethyl )-3-cefem-4~karboxylová

K euepensi 500 mg (0,0134 mol) kyseliny 7-aeinno3-((-karbbiyyetlyiyetrazoO-5-yythiomeithS)-3-cefiie-4-karboyylové v 10 ml vody ei oa chlazení na teplotu 0 °C přidá oa míchání 200. mg hydrogeinhličiyanu sodného. Jakmile ei euepindovaná látka ocela rozpustí, přidá ei najednou roztok 340 mg (0,0172 mol) chloridu kyseliny D·(•y)y2yf‘oreyloyy“2-finyloctové v 10 ml aciyonu a jaktili.vznikni tražinina, přidává ei pivný lydrogeiuuiéčitan sodný a roztok ei míchá za hodnoty pH 8 po dobu 1 hodiny. Aceton ei oddeien-luji za yiployy 30 °C vi vakuu 15 Torr, poyom ei zbylý roztok přivrství přidáním· 20 ml ithylittiru kyseliny octové a okyselí ei přidáním zřiděné kyseliny fosforiíné (1 : 1). Po ixtrakci do ithylittiru kyeiliny octové ei riakíní směs filtruji, organická vrstva ei odc^^^l^zí a odpařiním rozpouštědla ei získá jako produkt v poddtatě íittá kyselina 7-(D-alfa-f O]myloyyflⁿyS-^acltaeieo)y3“(1ykary boxyyetiyrlSelУazzOl5-ylthioeeihlS )-3-cifim-4-karboyylová.

^B· .

Didraeilná shl kyseliny 7((D-alfa-lsdrlyyfenySacetaeide )-3-(1-karblУyslethlltУirazoly5yyllhloelУlyl(зЗcleheπy-4-karboyylové

Pivný podd zi stupně A ei rozpuuyí v 5 ml -ethanolu za přidání 5 kapik koncentrované ky^lli^ns chlorovodíkové, roztok ei odbarví aktivním uhlím a zahřívá ei 3 minuty na.parní lázni. Beakčnl sm!s eipotom filtruji, zřidí ei přidáním 15 ml vody, gumoovtý pivný . poddl ei triuuruji si etudinou vodou a potom s bizvodým ithireo. Zbylý pivný poddl ei rozpustí v 5 ml acitonu a k roztoku si přidá 50 mg dratilné soli kyseliny 2-ltlylllУauové. si ti- jako pivná bílá látka eieratleuá thl kyseliny 7-(D-alfa-lseroyyfiuylacltεmiel)-3-(1-karbOJysletlyltylrazol-5-ylthlo-ltlye)зЗ-ςelee-4-karboyylové, ktirá ei zítká vi výtěžku 90 mg, bt. 175° (za pomalého rozkladu).

Analýza pro C 1^2^0782 Vyppčtino: 39119 %C, 2,77 H, 14,42 % N; ' ’ ubIíziu! : 39,87 % C, 3,,50 % H, 12,58 % N.

Poddvvá-i si tato slouíinina intrmuekulárně injekcemi v dávci 10 mg/kg, připoí.tino na hmotnost těla tySi, dosáhni si za15 -inut hladiny v krvi 21,4 mg/ml.

Ochranná dávka pro 50 % zvířat, chráněných sIoučiu-uou uvidinou v názvu, v případě myši při litální intrť—udkixuární dávci E. coli A 15199, činí 0,8 mg/kg.

Příklad 3

Kselina 1- (D-alfayaeinof eInS^acetaInide )-3- (1 -karboyymtlyltelrazoO-5-s^{1 t}lⁱoe^ethУ^L )-3-cifi--4-karboyyeová

O=

CH—CONH-I NH2

COOH

Roztok 0,55 g (0,0022 mol) kyseliny D-(-)-alf--terc.boУoyykíb'Oyχmidlfinseoctové a 0,22 g (0,0022 mol) trielhyamiuu v 17 ml titr hydrof uranu si za chlazmí na 0 °C inergicky míchá za přidání 0,300 g (0,0022 mbo) isobutylittiru kyseliny cHoreravenní. ReiOkční sm^.s si míchá 30 -inut· za chlazmí na 0 °C. a polom ei přidá roztok 0,0022 mol 7yaeino-3-(1-karboxySletltlltyirazoly5yyl·lhlo-ltlyl(зУ-iehem-4-kabboyylové v 0,445 g (0,0044 mol) trieUy/aminu v 6,8 ml 50% titrhisdrof uranu. Získaný roztok ei míchá 2 hodiny při 25 °C, naíiž si tltrιhlserlfuraιn lddeleilujl při 40 °C vi vakuu 15 Torr za vzniku llljlvitéll zbytku. Tento olij si protyji dvěma dávkami ithiru po 50 -1, zřidí si polovinou vlastního objemu vodou a okyselí se na pH 3,0 přidáním zředěné kyseliny chlorovodíkové. Ředění směs se míchá hodinu v ledové lázni, načež se prodlet extrahuje do 75 mL ethylesteru kyseliny octové.

Extrakt se promyje za použití dvou podílů vody po 20 ml a dvou podílů po 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Za teploty 35. °C se ve vakuu 2 kPa oddestiluje ethylester kyseliny octové. Zbude olej, který se trituruje s Skellycolve B, a získá ·se tím 480 mg (35,3 %) kyseliny 7-(D-alfa-Serc.UutoskkabboxrmidofsnySrcetrmlde)-3-(1-krrboxJУmthyltterazol-5-ylhhόmethyl)зЗcsefem-4-karboxylové., Tento vzorek se vnese do 1 ml kyseliny tr^j^^fu^c^i^octové a roztok se míchá hodinu při 0 °C, načež se zředí přidáním 50 ml etheru. Sůl se oídfltruje, rozpustí se v 10 ml vody a pH roztoku se upraví na hodnotu 4,0 přidáním zředěného roztoku amoniaku.

Vyloučený produkt se oddiltruje, promne se vodou a acetonem, načež se sušením ve vakuu nad kysličníkem fosforč&ým za teploty 25 °C po dobu 18 hodin získá 150 mg (23,9 %) kyseliny 7-(D-rlfa-aminofsnylrcθtreido )-3-(1-írrboxχylethylteerazol-5-ylth0oeethyl)3-cff em-4-karboxylové o t.t. nad 180 °C za pomalého rozkladu.

Infračervené spektrum a Nespektrum jsou v souladu s uvedenou strukturou.

Analýza pro C^HjNOgSg. t ,5 HgO vypočteno: '42,84 % C, 4J6 % H, 183,4 · % N;

nálezem?: 43J7%C , 4J2%H , 16,,44 % N.

Příklad 4

Kyyelina 7-(2-ε^ίηοιι^}'^-1 ,4-cyklohexadienylrcstεmido)-3-(1 -karboxjymthyltterazol-5-ylthocmethyl)-3-cefem-4-karboxylová

Roztok 0,80 g (0,003 moo) kyseliny 2-tsrc.UutoxykarbooylíminoIme^h^rS-1,4-cyklohexadiensl“ octové a 0,303 g (0,003 mol) treth]sLlmiou v 19,2 ml tetrthiydroiuirenu se míchá za chlazení na 0 °C, načež se přidá 0,41 g (0,003 mmo.) itobutylsttsru kyseliny chlormravennč. ReiTkČní směs se míchá po 30 minut za teploty 0 °C, přidá se do roztoku 0,003 mol 7-amino-3-(1-karboxyIneehhStθtrazol-5-ylhhiomethyl)з-cSfrem-4-kabboxylové a 0,61 g (0,006 mol) triethylaminu v 9,2 ml 50% tetrahydrofuranu. Takto připravený roztok se míchá 1,5 hodin za teploty 25 °C, tstrιhydrofurrn se oddesSilujs za teploty 30 °C ve vakuu 2 kPa, načež se zbytek promne za pouužtí dvou dávek po 30 ml etheru a zředí se polovinou vlastního objemu vodou.

Dále se roztok okyyseí přidáním zředěné kyseliny chlorovodíkové na pH 3,5, produkt se oddil-tnuje, vysuší se ve vakuu nad kysličnkkem fosforčnjým při 25 °C po dobu 18 hodin a získá se tím 1,55 g (54 %) bílého prášku.

K výše uvedené kyselině 7-rlfa-(2t.eerc.botosíaarOnnyrminoeeShhS-1_í4-cyklohexadienylacet^ami^do )-3-(1 -íarbo?¾sletSthlSeerarzl-5-ylthiomerthS )-3-cef m-4-karboxylové se přidá 3,4 ml kyseliny tríluozozctové,a reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C hodinu. Potom se roztok zředí přidáním 150 ml etheru, sraženina se oddil-tnuje-, sůl kyseliny trifUooroctové se suspenduje v 3,4 ml vody a pH ·eueprner se upraví na hodnotu 4,5 přidáním zředěného roztoku amoniaku. . ‘

Giunmoítý zbytek, se trituruje s vodou, odfiltruje se a promuje se vodou a acetonem. Prodiukt se suší 18 hodin ve vakuu nad kytličníkem fosfo^ným při 25 °C a získá se tím 53 mg (15,72 %) kyseliny 7~(2-aminomethyl-1,4-cyklohexadienylacetamido)-3-(íkarboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, t.t. nad 160 °C (za pomalého rozkladu).

Analýza pro ^C2O^H23^N7°6^S2 * ¹ »5 HgO

vypočteno:	45,18 % C, 4,55 % H, 18,44 % N;
nalezeno :	45,46 % C, 4,68 % H, 17,09 % N.

Infračervené spektrum a NMR-spektrum jsou v souladu s uvažovanou strukturou·

Příklad 5

Kyselina 7-(alfa-amino-4-hydroxyfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová

COOH

. CH^COOH

К roztoku 2,7 g (0,01 mol) D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-p-hydroxyfenylglycinu v 92 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,1 g (0,01 mol) N-methylmorfolinu, roztok se ochladí na 0 ^QC a najednou se přidá 1,4 g (0,01 mol) isobutylesteru kyseliny chlormravenčí. V míchání se pokračuje 10 minut, načež se roztok smíšeného anhydridu přidá k roztoku 3,7 g (0,01 mol) kyseliny 7-amino-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové a 1,1 g (0,01 mol) N-methylmorfolinu v 50 ml vody, vychlazenému na 0 °C.

Připravený roztok se míchá hodinu, načež se tetrahydrofuran oddestiluje za teploty 30 °C ve vakuu 2 kPa na celkový objem 45 ml. Tento roztok se okyselí na pH 2 zředěnou kyselí nou fosforečnou (1:1) a okyselený roztok se extrahuje ethylesterem kyseliny octové, roztok v tomto rozpouštědle se promyje vodou, načež se azeotropním oddestilováním rozpouštědla získá sklovitá pevná látka (vakuová destilace se provádí za teploty 30 °C a za vakua 2 kPa.

Zbytek se trituruje s etherem, čímž se odstraní jakýkoli případný podíl výchozí kyseliny, „načež se produkt odfiltruje. Je hydroskopický a přenese se proto ihned do 5 ml kyseliny trifluoroctové a vzniklá reakční směs se míchá hodinu při 27°· Roztok se zředí přidáním 25 ml etheru, načež se produkt odfiltruje a suspenduje v 5 ml vody, pH směsi se upraví na hodnotu 3 přidáním koncentrovaného roztoku amoniaku, načež se reakční směs zředí přidáním 10 ml isopropylalkoholu.

Mírně nahnědlá pevná látka se odfiltruje a suší se ve vakuu nad kysličníkem fosforečným po 24 hodin. Získá se tím celkem 300 mg kyseliny 7-(alfa-amino-4-hydroxyfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, t.t. 175° (za pomalého rozkladu).

Analýza pro C^H^NyOySg · 3/4 iso-C^HyO vypočteno: 42,78 % C, 4,44 % H, 17,32 % N;

nalezeno : 42,86 % C, 4,55 % H, 15,39 % N.

Infračervené spektrum a NMR-spektrum jsou v souladu s uvažovanou strukturou. Z NMR-spektra není patrná přítomnost 0,75 mol isopropylalkoholu v produktu.

Příklad 6

Kyselina 7-[D-alfa-amino-alfa-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová thiolací kyseliny 7-[p-alfa-terč.butoxykarbonylamino-alfa-(p-hydroxyfenyl)acetamido]cefalosporanové s následujícím odstraněním krycích skupin

A.

Kyselina 7-[alfa-(4-hydroxyfenyl)-alf a-D-(terč, butoxykarbonylamino)acetamido]-3-(1karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl )-3-cefem-4-karboxylová

0,27 mol sodné soli kyseliny 7-[alfa-(4-hydroxyfenyl)-alfa-D-(terč.butoxykarbonylamino )acetamidojcefalosporanové se suspenduje v 1 000 ml 0,1 M fosfátového pufru o pH 6,4 a tam se přidá 0,31 mol diaodné soli l-karboxymethyl-5-merkaptotetrazolu. Itoztok se zahřívá 5 hodin pod dusíkem na teplotu 55 °C; za hodinu se pH upraví na hodnotu 6,4 přidáním malého množství 40% kyseliny fosforečné a na konci pětihodinové doby zahřívání se roztok ochladí na 23 °C a hodnota pH se upraví na 2 přidáním 3 N roztoku kyseliny chlorovodíkové pod vrstvou ethylesteru kyseliny octové. Produkt se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, roztok v tomto rozpouštědle se míchá 15 minut za teploty 23 °C з 2 g odbarvovacího uhlí Darco KB”, potom se filtruje vrstvou infusoriové hlinky (Celíte”) a oddestilováním ethylesteru kyseliny octové za vakua se získá olej, který se triturováním a diethyletherem převede na pevnou látku, ta se odfiltruje a vysuší nad kysličníkem fosforečným za vakua, čímž se získá jako pevná látka kyselina 7-alfa-(4-hydroxyfenyl)-alfa-D-(tera.butoxykarbonylamino)асеtamido-3—(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová.

B.

Kyselina 7-[D-alfa-amino-alfa-(p-hydroxyfenyl)-асеtamidoJ-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl )-3-cefem-4 -karboxylové

Za teploty 5 °C se rozpustí v 30 ml kyseliny trifluoroctové 0,1 mol kyseliny 7-[alfa- (4-hydroxyf enyl )-alfa-D- (terč. butoxykarbonylamino )acetamido]-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, teplota roztoku se potom nechá vystoupit na 23 °C a roztok se míchá dalších 30 minut. Získaný roztok se vlije pomalu do 1 000 ml bezvodého ethyletheru za energického míchání, vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje se za použití 100 ml diethyletheru a suší se nad kysličníkem fosforečným za vakua po dobu 1 hodiny.

Potom se sraženina rozpustí v 75 ml vody a po míchání reakční smési 30 minut za teploty 23 °C se peVné podíly odfiltrují, к filtrátu se přidají 2 g odbarvovacího aktivního uhlí Darco KB, načež se reakční směs míchá 10 minut za teploty 23 °C a suspense se filtruje vrstvou Celitu. Přidáním triethylaminu se pH filtrátu upraví na hodnotu 4, pevné podíly se odfiltrují, filtrát se zahustí za vysokého vakua až na olej, který se trituruje s acetonitrilem. Produkt, to jest kyselina 7-[D-alfa-amino-alfa-(p-hydroxyfenyl)acetamido]-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová, se odfiltruje a suší na vzduchu.

Příklad 7

Nahradí-li se při postupu podle příkladu 6 sodná sůl kyseliny 7-[alfa-(4-hydroxyfenyl-alfa-D-(terč.butoxykarbonylamino) асе tamidojcefalosporanové ekvimolámím množstvím kyseliny cefalosporanové připravené například acylováním kyseliny 7-aminocefalosporanové obvyklým způsobem za použití kyseliny 2-(terc.butoxykarbonylaminomethyl)-1,4-cyklohexadienyloctové, kyseliny D-(-)-alfa-terč.butoxykarboxamidofenyloctové, kyseliny 2-(terč.butoxykarbonylaminomethyl)-1,2-cyklohexenyloctové, kyseliny 2-terč.butoxykarbonylaminomethyl-4-hydroxyfenyloctové, kyseliny o-(terč.butoxykarbonylaminoethyl)fenylthiooctové, kyseliny beta-[o-terc.butoxykarbonylaminomethyl)fenyl]propionové, D-(-)-N-terc.butoxykarbony1-2-(3'-methyl-4^x-hydroxyfenyl)glycinu, D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(3 '-methoxy-4*-hydroxyfenyl)glycinu,

D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(4-acetoxyfenyl)glycinu, D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(1'-cyklohexenylJglycinu, D- (- )-N-terc .butoxykarbonyl-2- (3 '-chlor-4 '-hydroxyf enyl )glyciliu, D- (- )-N-terc .butoxykarbonyl-2- (1',4 '-cyklohexadienyl )glycinu, kyseliny D-(-)-2-terc.butoxykarboxmido-3“( 1 ',4*-cyklohexadienyl)propionové, kyseliny D-(-)·-2-·tt:ec.butoxyka:eboxknido-3“-(4^z-me·tho:^oy-1 *,4^/-cykloheokdienyl)peopionové, tyseliny 2-terc.bu0o:yykarbonylвдinomee^hУ·fenyloctové, kyseliny N-terc.butoxykarborn^rl·1-kminocyklohexιknykeboзq_lrlové, kyseliny D-(-)-klLk--terc.bu0oxykarbokmido-3“thienyloctové, k^^i^lj^ny D-(-)-klfa-terc .butoykkerboxkmido--2-thienyloctové, kyseliny beta-(2-ttřc«butoxykaebonylkmin(X][iethhyi'1 ^-cyklohexadienyOpeopionové, kyseliny betk-(2-terc.butoyykabbonlkaIlinoetthyl-1-cykloheoenyl)propionové k

D-(- )-N-terc. (4 ^z-h^ydroxyneeh1lletnl)-glyciou, získá se tíe kyselina 7-(2-aeinoileth^yl-1,4-c^ykУohУtxadennlacetamidd)-3-(1kka^booχmetttltθt^rrlzO-“-^ylthiieethhl)3-cefem---ka:eboxyl·ov,á, kyselina 7-(D-alf a-aeinofto^ylacetlmido )-3- (1 -karbojometeiylteerazol-S-ylthioeethy^-^-cef ee-4-kaeboxylová, kyselina 7- (1 -i^i^;noi^eeth^í-1 , 2-cyklohexetn^rlfIcetamido)-3- (1 -Уaebo:oy:ettyltettaazO-5-ylthioeetthyl)-3-ctfee-4-kaebooylo'vá, ' kyselina 7-(2-aeinΰmethhll4-^yrddΰэχrУlcetkeind )-3-(1“Уarbiχyleth^ylУettazzO-5-^ylt1ioeeth^yl)-3-cteee-4-karboxylová, kyselina 7- (o-aeinzmethyllennlthnokcetaendo )-3- (1 -karbiXJyeth^ylttedazol*-5-ylthioetth^yl )-3Ctete-4-karboxylová, kyselina 7--(btta-p-eeinomeethlftnylpropionkeedd)-3- (1 “karbonové thyl ttetazzo^-ylthiomeethrl·)-3-cefee-4-kkebooylová, kyselina 7- [D-kLea-keino--lla-(3 Z-eeethy.-4 Z-hydroxyf enyl)acttaeido)) -3- (1 -karbonyethhltttrazol-5-ylthioeethyl )-3-cef ee^-karboxylová, .

kyselina 7- eD-“iea-aminoo-lfa-(3 Z“Chlir-4Z-hydriχyee]nyl)kcetmido] -3- (1 -karbox;ynet]tyltttrattt,razo--“-ylthioItttУy-)-3-cef em-4-karboxylová, kyselina 7-·[D--lea-aminoo-afa-(3-acttoχ^yetn^yl)-acttaeidz}-3- (1-^kal'bziχmetttlteedelzO-5-^ylt1iieethyl)-3-cteee-4-karbix^ylivá, kyselina 7- a-(1 '-c^yklo^hexenyl )-ace^t^£^:L^do]-3“ (1 ^arboxamethylte^azc^-^-yl^- t1iieietyl)“3-c teee-4-kaгbixylivá, kyselina 7-[D-εkea-lminOi-lfa-(3 ^z-c1lie-4^Z1hydri)xyetoyl)lcttaeindij3-- - “karbony ι^ιΙΙ^γιzol-5-yl1h0oetthyl)-3-cetee-4-karboxylová, kyselina 7- [d- (1',4 ^z-cyУlΰhtxadienyl)pid^pOonмlido] -3- (1 -УarbixoУlitty1Уettrlzi-5-ylthnotthyl)-3-cetee-4-Уle’bixylová_Jýselma 7- [D- ⁽4 '-eeWoxy- -',4 ^z-c^yklo^htxaditι^nyl)^pro^piinleidd⁰“3-^{(1 -kk}e^bo^χylethyltt^edazΰl-5-ylth0oeethyl)-3-cetee-4-karboxylová, kyselina 7-(2-keinzmethhllenolacetaeidz )-3-(1 -УarboxJУleth1ltttrazdl-5-ylthiΰeethyl)--3“Cef ee-4-Уarbixylová,'j kyselina 7- (1-leioicy^klohtxknУke^bixkeidi)m3- (1 -karboχylethylУeetazzO-5-ylt1noeeetyl )-3-cefee-4-karboxylováj kyselina 7-(2-keinΰmeth1l-1,4-cyklohtxaditoylpropionkInino)-3-(1-kkrbiχylethyltttdazΰl-5-ylthizeethyl)-3-cefee-4-kad^boxylová,* kyselina 7- [beta- (aeioomeetyl---cyУlohexenyl)pdopiznlmidoJ -3-(1 -kkrboJχylete^yltettalzO-5-ylthioeet1yl)-3-cefee-4-kae¹boxylová a kyselina 7-[D-εkfa-aшinoo“lfa-(4 ^z-hydroxyietthllennl)kcttkeidzi-3-(1-karbox;yethyltterazzl-5-ylth0zeethyl)-Зctetee-4-karboxylivá..

Příklade

Neuhradili se při -postupu podle příkladu 5 D“(-)-N-ttdc.buOz2ykadbooyl-p-1ydriχyetnylgly.cin tУvi.eoláeníe eK>žstvíe kyseliny T-Cterc. butixy^kιkebinylaeinoilethhl)-1, 4-cyklihexadienyloc tové, kyseliny D-(- )-1“Ρι·^γο. butoxy^kadbox(keindieto'loctové, kyseliny 2- (terc. butoxy^kkebooylkeioimithhl )-1,2-cyklohexeIO^rloctové kyseliny 2-ttec.butixykkebooylaeioomethhl-4-hydrixy:eelOyloctivé, kyseliny · 0-(ttec.butoxy^karboiLnlεalinoethhl)-etnlthiooctivé, tyseliny' beta-to-íterc. ^butoxy^kadbor^olkeinomilhyl)-fe]ⁿyJ^lj ^o^onové,

D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(3'-methyl-4'-hydroxyfenyl)glycinu,

D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(3 '-methoxy-4-hydroxyfenyl)glycinu,

D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(4-acetoxyfenyl)glycinu, D-(-)-N-terč.butoxykarbonyl-2-(1-cyklohexenyl)glycinu, D-(-)-K-terc.butoxykarbonyl-2-(3 '-chlor-4-hydroxyfenyl)glycinu, D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-(1',4-cyklohexadienyl)glycinu, kyseliny D-(-)-2-terc.butoxykarboxamido-3-(1',4-cyklohexadienyl)propionové, kyseliny D-(-)-2-terč.butoxykarboxamido-3-(4'-methoxy-1',4-cyklohexadienylJpropionové, kyseliny 2-terč.butoxykarbonylaminomethylfenyloctové, kyseliny N-terc.butoxykarbonyl-1-aminocyklohexankarboxylové, kyseliny D-(-)-alfa-terc·butoxykarboxamido-3-thienyloctové, kyseliny D-(-)-alfa-terc.butoxykarboxamido-2-thienyloctové, kyseliny beta-(2-terč.butoxykarbonylaminomethyl-1,4-cyklohexadienyl)propionové, kyseliny beta-(2-terc.butoxykarbonylaminomethyl-1-cyklohexenyl)propionové a D-(-)-N-terc.butoxykarbonyl-2-.(4'-hydroxymethylfenyl )glycinu, v tom kterém případě za vzniku kyseliny 7-(2-aminomethyl-1,4-cyklohexadienylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(D-alfa-aminofenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(2-aminomethyl-1,2-cyklohexenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(2-aminomethyl-4-hydroxyacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-

3-cefem_r4-karboxylové, kyseliny 7-(o-aminomethylfenylthioacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-yltjiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(beta-o-aminomethylfenylpropionamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-ÍD-alfa-amino-alfa-(3-methyl-4'-hydroxyfenyl)acetemido]-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylíhiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(3-methoxy-4'-hydroxyfenyl)acetamido] -3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(3-acetoxyfenyl)acetamidoJ-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(1-cyklohexenyl)acetamido3-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(3-chlor-4'-hydroxyfenyl)-acetamidoJ-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(1',4-cyklohexadienyl)-acetamido]-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-(1, 4'-cyklohexadienyl)propionamido] -3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-[D-(4'-methóxy-1',4'-cyklohexadienyl)-propionamido3-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylově, kyseliny 7-(2-aminomethylfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(1-aminocyklohexankarboxamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl )-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7-(2-aminomethyl-1,4-cyklohexadienylpropionamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, kyseliny 7- [beta-(aminomethyl-1 -cyklohexenyl)propionamido] -3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové a kyseliny 7-[D-alfa-amino-alfa-(4-hydroxymethylfenyl)acetamido}-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové v tom kterém př/padě.

Příklad . 9

Sodná sůl kyseliny T-^D-^Lfa-ÍJ-^ffuroy^ureidoJ-^hhydro^feitylacetmidoJcefalosporanové

6,4 ml trietlyitminf (0,0454 mol) t 12,7 g (0,1039 mol) 2-ΓυΌο1ί3<^οαηάίυ 'se přidá do ledem chlazené suspense 20,8 g (0,0413 mol) kyseliny 7-(D-tlfa-lmiod-4-tydroxyferoУ-acettmidoJcefalosporanové (ve formě solvátu dioethylfomitoidu t vody) v 175 Ol 'suchého dimeťthl“ formtoidu. Asi zt minutu se ledová lázeň odejme t reakční směs se míchá hodinu, ntčež ·se temný roztok zředí přidáním 600 ml vody, převrství se ettylesterem kyseliny octové t vodný poddl se okyselí nt pH 2,5·přidělím 42% kyseliny fosforečné. Obě fáze se oddělí t vodná dioethylfomLamidová fáze se eotuttuje čtyřikrát ettylesterem kyseliny octové. Spojené ougtnické extrakty se puomj pětkrát vodou, po odbarvení aktivito uhlím se filtrují, ntčež . se zahuštěním zt sníženého tisku odstraní zbývající vodt.

Po přidání čistého rttylrstrdf kyseliny octové se přidá k míchanému roztoku · pomalu .

15,1 ml (0,0408 mol) roztoku sodné soli kyseliny 2-ethylheχjOldaé v 1-butanolu . t tím se dosáhne krostjlizjcr produktu. Získá se tím 18,1 g (75,5 %) látky. Infračervené spektrum je v soult^du se strukturou očekávaného produktu.

Dvojsodná sůl kyseliny 7-{D-alfj-|3-(2-fuooyl)ureiOoJ4-thidr;)oyfeoyljcrt joidod-3-(1-karboэo'Уletryt0ert^,aj;od-5“ylttidmeehy0 0-cefeo-4-·karbooyldvé kyseliny ^Směs 4,0 ^g (⁰,0°⁶9 mo^ sodn^é soli ^kyselⁱn^y 7“(^D-^jfa-Í3-'(^2-ffro^o1)frriⁱdЗ-⁴-^tyiddoyfenyltcetjoi(doj[cefj1Lospor trnové, 1,83 g (0,00895 ooo) disodné soli kyseliny 5-06^^^-1-tettazoloctové t 200 ml 0,1 M fosfátového pufru o pH 6,4 se zahřívá 6 hodin nt teplotu 75 °C pod dusíkem.

ReUkční směs se uskladňuje v ledničce přes noc, potom se dčdiltdfjr malé množ tví srtženiny, hodnott pH filtrátu se upraví nt 2 přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a směs se rotdjtfjr třikrát ethyl^te^H kyseliny octové. Během prvé atrakce se směs filtduje, čímž se odstraní oaLé mnoožtví nerozpustných . materiálů, spojené extrakty v ^hy^at^u kyseliny octové o objemu 500 ml se promoji dvakrát vodou t po vysušení bezvodým síranm sodným t filtraci se přidá k filtrátu 5,1 ml (0,0138 mol, 2 ekvivalenty) roztoku sodné soli kyseliny 2-etthlheχjOlové v butanolu, · čímž se vyloučí olejovitý produkt.

Část rozpouštědla se od^est-luje, čímž se odstraní vodt, směs se uchovává v ledničce, potom se rozpouštědlo oddekentuje t gumovátý produkt se tritupuje s·acetonem; získá se tím filU^vatelná látka ' ve výtěžku 2,0 g. Produkt se suší ve vakuu ntd kysličníkm fosfor^^ým. Infračervené spektrum je v souladu se strukturou tohoto produktu.

U vzorků sloučenin připravených postupem podle příkladů 1, 2, 3, 4, 5 t 9 po rozpuštění ve vodě a zředění živnou záptuou byly nalezeny tyto hodnoty oinioOlní inhibiční končen.trtce (M.I.C.) v ocgriL proti dále uvedeným 0^1^^1^00110 po inkubováií přes noc zt teploty 37 °C t zřeňování ve zkumavkách.

Antimikrobiální účinnost in vitro

Minimální inhibiční koncentrace Q^g/ml)

Organismus	+ (io~3)			Příklad 1 (rozp. asi 250 mg/ml jako sodná sůl)	2	3	4	5	6
Str.pneumoniae	*+A	9585	o,13	0,6	0,06	0,06	0,13	0,25
Str.pyogenes^	(10-3)	A	9604	0,13	0,6	0,6	0,13	0,13	1
S.aureus Smith	(10-4)	A	9537	1	1,3	2,5	0,5	nad 1	nad 1

S.aureus -50% sérum

	(10-4)	A 9537	4	16	32		nad 0,5	nad 63	16
S.aureus BX1633	(10-3)	A 9606	1	2,5	nad	2,5	1,3	2	8
S.aureus BX1633	(10-2)	A 9606	2	4	16		2,5	8	8
S.aureus Meth-Res
	(10-·3)	A 15097	4	8	16		4	63	32
Sal.enteritidis	(10'4)	A 9531	0,06	0,08	0,3		0,16	0,5	0.5
E.coli Juhl	(10-4)	A 15119	0,5	4 :	8		1,3	16	8
E.coli	do4)	A 9675	16	32	16		16	16	32
К.pneumoniae	(10-4) .	A 9977 ;	0,13	1	1		0,3	1	1
K.pneumoniae	dO4)	A 15130	2	32	8		2	125	8
Pr.mirabilis	do“4)	A 9900	0,13	0,5	1		0,3	0,5	1
Pr.morganii	do-4)	A 15153	32	16	32		8	32	125
Ps.aeruginosa	do”4)	А 9843A	nad 125	nad 125	nad	125	nad 125	16	nad 125
Ser.marcescens	do‘4)	A 20019	125	nad 125	nad	125	nad 125	nad 125	nad 125
Ent.cloacae	(10-4)	A 9656	nad 125	nad 125	nad	125	nad 125	nad 125	nad 125
Ent.cloacae	(10-4)	A 9657	0,25	2	1		0,3	63	2
Ent.cloacae	(10-4)	A 9659	32	nad 125	63		32	nad 125 125

,CH₂NH₂ ch₂—

C₆H₅-^HOH c₆H₅-CHnh₂ ,ch₂nh₂

CH₂

⁺/ 45% antibiotické testované zápary 50% živné zápary + 5% séra ⁺⁴7 ředění záparové kultury, chované přes noc.

Příklad 15

Trihydrát monosodné soli kyseliny 7~(2-aminomethylfenylacetamido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové

1. 10 g krystalické kyseliny 7-(2-aminomethylfenylacetemido)-3-(1-karboxymethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylové, jak je popsána a připravena v příkladu 1, se suspenduje v 50 ml vody, zbavené iontů.

2. Za prudkého míchání se pomalu přidává 10% roztok hydroxidu sodného tak, Že se pH udržuje nebo je. konstantní v rozmezí 7,4 až 7,7· Dosáhne se tím rozpuštění nebo takřka čirého roztoku.

3. Přidají se 2 g aktivního, uhLí (Darco G-60”) a směs se míchá 30 Hoodiota pH se udržuje v rozmezí 7,4 až 7,7 přidáváním 1 N roztoku hydroxidu sodného.

4. Ativní uhlí ' ' se odfiltruje, promyje se vodou (10 ml) a podíl z promování se přidá k filtrátu. ,

5. Roztok ze stupně 4 o hodnotě pH 7,4 až 7,7 se sterilizuje a zbaví pyrogenů za použití postupů vhodné aseptické iiltraee. .

Celkový čas, jehož je třeba pro provedení stupňů 3, 4 a 5, nepřevyšuje 5 hodin při práci za teploty míítnooti.

6. Za pouuití sterilního postupu se přidá přibližně stejný objem, tj. 65 ml sterilního acetonu, prostého pyrogenů, do prudce míchaného roztoku ze stupně 5, což trvá 5 minut.

7. Přepočteno na původní objem vodného poddlu, přidají se další dva objemy (120 mL) .

sterilního acetonu, zbaveného pyrogenů, a to za 15 až 20 minut a za prudkého míchání. Vyloučí se krystaly.

8. Redakční směs se . míchá 10 minut.

9. Během 15 minut se přidají další 3 objemy (180 ml) sterilního acetonu a suspense .se míchá 30 minut.

10. Krystaly se oddíltrují, promyjí se za pouuž-tí 75 ml sterilního acetonu a suší se ve vakuu při 45 až 50 °C nebo na vzduchu při 50' až 56 °C po 24 hodin. Výtěžek člhí přibližně

8,8 g.

Vlastnooti trihydrátu mono sodné soli kyseliny 7-(2-aminomethylferoУLaceramido)-3-(1-karboxyraeteyhteerazzo-5-ylthiomeehhl)-3-ce:^,em--^-^:^iarboxylové jsou tyto:

% HgO, vypočteno 9,05 %, nalezeno 9,2 %, % Na (plamenná iotomeerie): vypočteno 3,86· %, nalezeno 4,0 %, rozpustnost ve vodě = = nad 500 mg/ml, stabilita ve vodě: nejméně 24 hodin za teploty místnooti při konccenraci 250 mg/ml.

Příprava produktů pro injekční přípravky:

Příprava monosodné soli kyseliny 7-(2-aminoolethylfieotlceeэтmdf)-3-(1-karboxymetylterrazo----tlhh0oeethyt)-3-eeiem-4-кarboxylové in šitu:

A) 2,5 g kyseliny 7-(2-aminooethylfieotacctαeidf)-3-(1-karboJχlmthylteerazzO-5“ylthiomethyt)-3-ceiem-4-karboxylové (ve formě obojakého iontu) se suspenduje v 8,5 ml vody za prudkého míchání a přidá se sodná sůl kyseliny citrónové, moonOhlfOOgenioforečnao sodný nebo fosforečnan sodný nebo jiná vhodná báze, až se dosáhne· rozpuštění; hodnota pH nemá být vyšší než 7,8. Možžsví přidané báze se zaznamená.

B) Připraví se fyzikální směs 2,5 g kyseliny 7-(2·-aminooethylfieot-cctí^mdf)-3-(1--karbOJχlleteyhtetrazz0-5-ylthiomeehyt)-3-cefem-4-кarboχtlové·a pevné báze v pomeru, jak to bylo stanoveno při postupu uvedeném v odstavci A výše. Dalším přidáním vody se mohou dosáhnout · různé koncentrace in šitu připravené monosodné soli · kyseliny 7-(2-aminomethylferylacetaeido )-3- (1-кarboxχllethyltrerazol---llhhiomethyl)зЗe_Cieem-4-кarboxy-ové.

Tento postup může být velmi vhodný právě proto, že trihydrát monosodné soli kyseliny

7- (2-aminommehySl^,enylacetamido )---(1-kcrbl:ιqyleteylУeetaaoO-5-yltУiomeehyl)-3-ctfem-4-karboxylové není za zvýšených teplot tak stálý, jako je volná , kyselina 7-(2-rminollmthhlfienlacetamiío )-6- (1 -krrboχlleУhyУ tttrczll-5-llУhlpmttУyl-63-tfeeπl-4-karboxylová ve formě mmunohydátu lbljrkéhl iontu.

Se zřeteeem na stabilitu roztoků kyseliny , 7-(o-aminpImthhlf etnl.aceУamido l-3-(1-met]hrl- . -1,2,3,4-tetaazo-5-yylthiomeУ]syl)-3-cefmm44-karboxylové za teploty místnonti a za pH 10,6, což je nejnižěi hodnota pH, kdy še může rozpuuSiy 150 , m^ml, se zaznamená takřka akammitá 50% ztráta Ь1иГсУИЛ1. K další ztrátě, 21%, dojde během nejbližších 60 minut.

Na rozdíl od toho roztok lbsíanySící 125,0 m^gml. trihydrátu mpnesodné soli kyseliny 7-(2-aminoImthySfenylacetamido)-3-(1-karbolχmmteyУУLtrazzll-5yStУiometthSL-3-cefem-4-rarboxyllvé o pH 7,0 je stálý během nejméně 24 hodin natolik, že se nejeví žádná podstatná ztrá- . ta ЬгоСсУИЛу v té ·době.

Sloučenina, označovaná jako kyselina 7-(o-cminУlleУhylfienlaccУιa[nidol-3-(1-mee^hl-1.,2,-,-

4-tetrazo-5-lylthimmeУ]yyl)----cefmm-4-karboxylová z příkladu 1 a bodu 2 amerického patentového spisu Э 766 175 je velmi,účiiným cefaloppornnov^m deriváeem s,velmi žádoucím spektrem účinnooti zvláště proti některý grrmiegativním mikrllrgayiSmπům. Na neštěstí se tento obojrký ion vyznačuje velmi malou rozpi^s^ ^1^:S ve vodě, r zvláště v krevním oběhu, což znamená zr pH 7,2 nebo v blízko síti této hodnoty.

Pře;^j^n^;^.i řečeno, při zjišťování uvedené rozpuutnooti , bylo nalezeno rozmezí asi 1,0 rž 6,0 mg/ml , jak v pufrovanném vodném prostředí, tak i v moči psů za teploty místnoosi. Hodnota pH čerstvé moči psů činí 7,6. Tím vyvstává možnost toxických účinků u lidí při podáviání tohoto obojakého iontu, protože je třeba předpokládat vysrážení krystalické formy v ledvinách, jak se zde tato látka koncentruje během vylučování. A to je u lidí krajně nežádouuí. Běžné pokusy rozřešit tento problém za pouužtí obvyklých forem kyseliny 7-(l“aminommehylfenylacetamidc )-3-(1 -metl^y-1,2,6,4-tetrazll-5-llthiometУyl)-6-ceeeπl-4-karboxylové rozpustných ve vodě, nebo odpplídoaících derivátů byly neúspěšné, protože sůl nebo derivát se převede v lidrkém těle nr obojaký ion, r ten se právě vyznačuje přirozenou maLou rozpustností ve vodných prostředích i v krvi. i

Je jedním z úkolů tohoto vynálezu vyřeeit tento problém bez , ztráty cenných biologických vlastností r účinnooti kyseliny 7-(l-aminoImt^ylfenylrcet^mido)---(1-meelyl-1,2,-,4-tttrazol-5-llУhlomttУll-63ctftem-4-karblXllové. Po různých nezdarech byl problém vyřeěen opatřením podle tohoto vynálezu, kdymá kyselina 7-(2-cmincmethhlfetyrlacetamido)---(1-кrrboxlmeehyltttrazll-5lllУhiomeУllL-6--tfeem-4-kabbo^lllvá žádané vlastnosyi.

Přesněěi řečeno, vzorek kyseliny 7-(2-aminolleУhhlfftyl.aceУamido)-6~(1-krrblx;lmettyгlttУrazol55lylthioIteУllLl)-3-tefem44rkarboxlllvé ve fosfáoovém pufru o hodnoyě pH 7,0 má za teploty 25 °C rozpustnost v mg/ml nad 15,6 r pod 13,6; v tercovém případě není kapacita pufru 00 31^0x^^0:. r hodnota pH klesne na 6,48.

Takže kyselina 7-(2-cmirl0l1eУhylfieylaccУшmdo)-3- (1-krrboxymethyltttrazll-5-yltУilmmthyl)-6-cefem-4~karboxylová podle tohoto vynálezu, r to i v odpplííoCící formě lbojrkéУl iontu, je příliš rozpustná ve vodě a v krevním oběhu, aby mohla vyкr7УУallvaУ v, ledvinách, r důsledkem toho by byla obava z toxických výsledků nejméně u některých léčených.

Dále prk - jak to již bylo uvedeno výše - nedoSednuící rozpustnost ve vodě postavila problém, který ,byl vyřešen přípravou trilyOrátu monosodné soli kyseliny 7-(2-ímiylmeetyylftnllrcttcmi0l)·---(1-karboxχlemttyltttrazol-5-ylthlomttУyl)-Зcefeeπl-4-karboxlloíé podle tohoto vynálezu, přičemž tato sůl se vyznačuje za uvedeného pH rozpustnolSí, jež se hodí pro injekční účely, jako je tomu v případě pH 7, a stále , se vyznačuje vyhov^ící rozp^SnoH’ v krevním oběhu r vkapalinách v ledvinách, i když je tato sůl v těle převedena do formy obcja^kého iontu odpPlVíoCící kyseliny.

Ve shodě s tím, co bylo řečeno výše, je výhodou sloučenin podle tohoto vynálezu jejich zlepšená rozpustnost ve vodě, to ve srovnání s dalšími sloučeninami, jak jsou na tomto úseku známy, a dále pak hlavní výhodou je obecně vyšší hladina těchto sloučenin v krvi, at již při parenterálním, nebo při intramuskulárním podávání.

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1. Způsob výroby derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové a odpovídajících esterů obecného vzorce I,

Claims (4)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob výroby derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové a odpovídajících esterů obecného vzorce I, (I) jakož i odpovídajících netoxických a farmaceuticky vhodných solí, kde R znamená vodík nebo pivaloyloxymethylovou, acetoxymethylovou, methoxymethylovou, acetonylovou, fenacyloVou, p-nitrobenzylovou, beta,beta,beta-trichlorethylovou, 3-ftalidylovou nebo 5-indanylovou skupinu, a r! znamená některou z dále uvedených skupin, σ(ΖΗ₂~ΝΗ₂ CH₂-CO- vyznačený tím, že se působí na sloučeninu obecného vzorce II,
2. 2 1 kde R znamená vodík nebo některou ze skupin uvedených výše ve významu pro R , nebo na odpovídající snadno hydrolysovatelný ester, kde R má výše uvedené významy, nebo na odpovídá- _z jící sůl sloučeninou vzorce

   CH₂COOH za hodnoty pH v rozmezí 6,4 až 7, za přítomnosti pufru a za teploty 55 až 75 °C, a pokud R² znamená vodík, působí se na připravenou sloučeninu acylačním činidlem obecného vzorce III,

   Η¹ - X (III) kde znamená X halogen nebo funkční ekvivalent a íJ jednu z výše uvedených skupin, a to za předpokladu, že pokud acylová skupina obsahuje volnou aminoskupinu nebo volnou hydroxylovou skupinu, pak jsou tyto skupiny dočasně chráněny běžnými chránícími skupinami, jejichž odstraněním se potom získá sloučenina obecného vzorce I, která se, je-li to žádoucí, převádí z formy volné kyseliny na sůl nebo snadno hydrolysovatelný ester sloučeniny obecného vzorce I na volnou kyselinu obecného vzorce I.

   2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se připravená volná kyselina obecného vzorce I převádí na ester, obsahující pivaloyloxymethylovou, acetoxymethylovou, methoxymethylovou, acetonylovou, fenacylovou, p-nitrobenzylovou, beta,beta,beta-trichlorethylovou, 3-ftalidylovou nebo 5-indanylovou skupinu.
3. 3- Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se připravují sloučeniny obecného vzorce I, kde r! znamená skupinu асн₂нн_а

   CH₂COnebo aCHjNH, CH_aCOnačež se, je-li to žádoucí, převádí vzniklá sloučenina působením benzaldehydu nebo salicylaldehydu na odpovídající Schiffovu bázi·
4. 4. Způsob podle bodu 7, vyznačený tím, že se připravuje sloučenina obecného vzorce I s D-(-)-konfigurací zbytku R¹ vzorce

   CH—CO—

   NH₂ nebo

   HO

   -Oř-“nh₂ načež se, je-li to žádoucí, převádí vzniklá sloučenina působením acetaldehydu nebo acetonu na odpovídající deriváty.

   Srvrropifia. n. p~ Úvod 7, Moei