CS201719B1 - Process for preparing l-isoleucine - Google Patents
Process for preparing l-isoleucine Download PDFInfo
- Publication number
- CS201719B1 CS201719B1 CS784248A CS424878A CS201719B1 CS 201719 B1 CS201719 B1 CS 201719B1 CS 784248 A CS784248 A CS 784248A CS 424878 A CS424878 A CS 424878A CS 201719 B1 CS201719 B1 CS 201719B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- isoleucine
- strain
- genetics
- brevibacterium flavum
- culture
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 title abstract description 31
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 8
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 14
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 abstract description 30
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 abstract description 27
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 11
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FYCWLJLGIAUCCL-DMTCNVIQSA-N O-methyl-L-threonine Chemical compound CO[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O FYCWLJLGIAUCCL-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 4
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Chemical class CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 3
- REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypentanoic acid Chemical compound CCC(O)CC(O)=O REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 2
- 150000008543 L-isoleucines Chemical class 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940008406 diethyl sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVNSATFCUCQBGE-ZKWXMUAHSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanethioic s-acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)S)SC[C@@H]21 TVNSATFCUCQBGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000185996 Arthrobacter citreus Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001517047 Corynebacterium acetoacidophilum Species 0.000 description 1
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N D-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfate Chemical compound CCOS(=O)(=O)OCC DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002519 isoleucine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 150000003587 threonine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/84—Brevibacterium
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby L-isoleucinu pomocí mikroorganizmů. Tento vynález je proto ve vztahu k mikrobiologickému průmyslu.
L-isoleucin je nepostradatelnou aminokyselinou, která , se v širokém rozsahu používá jako složka různých živných směsí k léčebnému účelu. L-isoleucin se kromě toho využívá jako přísada do potravy pro člověka a do krmivá pro zvířata, stejně jako reagenci pro farmaceutický a chemický průmysl.
Jsou známy -způsoby získávání L-isoleucinu založené na schopnosti mikroorganismů transformovat prekurzor - syntézy L-isoleucinu, .. jako- je α-aminomáselná kyselina, . a-oxymáselná kyselina, threonin a podobně. V . těchto případech se -mikroorganizmy kultivují . v prostředí, které obsahuje prekursor, stejně - jako . zdroj uhlíku, dusíku, a jiných komponent. Zavedení prekurzoru do živného prostředí však prodražuje způsob získávání L-isoleucinu a ztěžuje jeho izolaci.
Je také znám způsob získávání L-isoleucinu založený na přímé jeho syntéze pomocí takových mutantních kmenů, jako je Serratia marcescens, Brevibacterium flavum, Corynebacterium acetoacidophilum, Arthrobacter citreus a Corynebacterium glutamicum. Při těchto způsobech se L-isoleucin získává kultivací známých mikroorganizmů na živné - pů dě, která obsahuje zdroj uhlíku, dusíku, minerální soli, růstové faktory a vitaminy. Kultivace se provádí v nepřítomnosti kteréhokoliv prekursoru L-isoleucinu. Muta-ntní kmeny se získávají z - kmenů divokého typu působením mutagenních faktorů s následující selekcí pomocí analogů aminokyselin. Zvláštní genetickou charakteristikou -těchto - mutantů, které jsou schopné produkce L-isoleucinu je buď jejich, odolnost proti a-amino-/3-hydroxyvalerové kyselině - (analog threoninu a isoleucinu) nebo spojená odolnost proti dvěma nebo i třem ' -analogům následujících - - aminokyselin: threonin, isoleucin, - valin, lysin, me- thionin a leucin. Takové mutantní - - - kmeny produkují L-isoleucin ve výtěžku - 6,7 až - 14,7 g/.litr. Avšak v těchto případech se využívá podle složení komplikované živné prostředí, které jako hlavní zdroj uhlíku obsahuje uhlohydráty (glukózu, sacharózu, melasu), - minerální dusík, vitamíny, proteinové hydrolyzáty ze sojových bobů a - v některých případech aminokyseliny.
Známé - způsoby pro - získávání L-isoleucinu proto vyžadují buď - využití prekurzorů nebo v případě přímé syntézy - L-isoleucinu, kdy výtěžek konečného - produktu - avšak není dostatečně vysoký, se využívá živné prostředí o komplikovaném složení. Kromě - - toho- - pro selekci známých mutantních - kmenů je - - zapo
Ž t^ebí využít velkého počtu analog aminokyselin.
Cílem tohoto vynálezu je - vývoj postupu pro získávání L-isoleucinu na základě přímé fermenta.ee produkčního kmene, poskytujícího vyšší výtěžek L-isoleucinu, na živné půdě jednoduššího složení.
Úkolem vynálezu je připravit -takový mutantní kmen z rodu Brevibacterium, -který _ by poskytoval L-isoleuein s vysokým. výtěžkem z živné půdy jednoduché složení.
Tento - úkol a cíl byly dosaženy tím, že se při způsobu získávání L-isoleucinu -kultivací mikroorganizmů Brevibacterium flavum na živné půdě, která obsahuje zdroj uhlíku, - dusíku, minerální soli a vitaminy, za podmínek provzdušňování podle vynálezu, jako produkčního kmene použije mutantního kmene Brevibacterium flavum WNII — Genetika 10 —89. Výraz WNII-Genetika znamená zkratku názvu Všesvazový vědecko výzkumný institut genetiky a selekce průmyslových mikroorganizmů. Jmenovaný kmen je nedávno získaná mutanta, kmen je chovávan v centrálním muzeu průmyslových mikroorganizmů Všesvazového. vědecko výzkumného institutu genetiky a selekce průmyslových mikroorganizmů pod číslem CMPM B-1507, odkud jej lze .. též získat. (CMPM jsou začáteční písmena názvu Centrální muzeum průmyslových mikroorganizmů.)
Jmenovaný kmen je schopen produkovat L-isoleucin až do 17 g/litr a výše. . Významná přednost navrženého kmene spočívá v tom, že je možné, aby byl kultivován na živné půdě jednoduchého složení, která nevyžaduje žádný -prekurzor. Kromě toho se jmenovaný kmen získá jednodušším způsobem, protože se přitom využije pouze jediného analogu L-isoleucinu.
Podstata vynálezu. spočívá ve způsobu výroby L-isoleucinu kultivací mikroorganizmů Brevibacterium flavum produkujících L-isoluecin za podmínek provzdušňování v prostředí, které obsahuje zdroj asimilovatelného uhlíku, asimilovatelného dusíku, minerální soli a vitamíny, a izolací L-isoluecinu - po skončení kultivace, který se vyznačuje tím, že se - jako producentu použije kmene Brevibacterium flavum WNII-Genetika 10—89 uloženého pod číslem „CMPM B-1507“, přičemž kmen Brevibacterium flavum WNIIGenetika 10—89 je odolný proti mhibujícímu účinku O-methylthreoninu.
Navržený kmen Brevibacterium flavum WNII-Genetika 10—89 se získá ze známého kmene Brevibacterium flavum 178, který je producentem L-lysinu a odlišuje se od kmene divokého typu potřebou homoserinu. Kmen Brevibacterium flavum - 178 a kmen divokého typu jsou uloženy v centrálním muzeu průmyslových mikroorganizmů Všesvazového vědecko výzkumného institutu genetiky a selekce průmyslových mikroorganizmů pod Číslem „CMPM B-1005“ a „CMPM B-42“.
Kmen WNII-Genetika 10—89 (CMPM B1507) se získá takto:
Buňky uvedeného kmene Brevibacterium flavum 178, který potřebuje k růstu homoserin, se kultivují '18 až 20 hodin v agarizované plnohodnotné živé půdě a vystaví se mutagennímu účinku par -diethylsulfátu - touto metodou: kapka (0,05 ml) diethylsulfátu se vnese na vnitřní plochu skleněné zkumavky (o objemu 20 ml), ve které je kultura na šikmém agaru. Zkumavka se uzavře vatovýmuzávěrem a nechá stát při teplotě 30 -°C - po dobu 6 -hodin. Potom se buňky s očky odstraní z povrchu použitého agaru a použijí pro přípravu suspenze ve fyziologickém roztoku při koncentraci buněk - 1.108. Získaná suspenze se vyseje na misky s agarizovaným minerálním prostředím, které neobsahuje homoserin. Po pětidenní inkubaci při teplotě 30 °C se izolují vyrostlé kolonie revertantů a zkoušejí na schopnost produkovat L-isoleucin v živném prostředí obsahujícím zdroj uhlíku, dusíku, minerální soli a vitaminy. Podle výsledku takové zkoušky se izoluje mutanta schopná způsobovat produkci lysinu a schopná nahromadit několik gramů L-isoleucinu. Buňky izolované mutanty se v pozdější logaritmické fázi růstu podrobí působení Nmethyl-N ‘-mtro-N-nitrosoguanidinu (0,5 mg/ml) během 30 minut při teplotě 30 °C. Po-tom se vysejí v- množství 10® na misky s agarizovným prostředím, které obsahují O-methylthreonin, který je analog L-isoleucinu, v koncentraci 5 mg/ml. Po pětidenní inkubaci vyrostlé kolonie se odeberou jako mutanty odolné proti inhibujícímu účinku analogů a. zkoušejí na schopnost izolovat isoleucin v živném roztoku. Vybere se nejlepší mutanta produkující zhruba 10 g/litr L-isoleucinu a její buňky se po zpracování s.Nmethyl-NU-nitro-N-nitoosoguanidinem metodou popsanou - svrchu, vysejí na agarové prostředí obsahující 10 mg/ml - O-methylthreoninu. Metoda izolace rezistentních mutantů a jejich zkouška na schopnost produkovat Lisoleucin je stejná, jako byla popsána výše. Výsledkem je, že se získal kmen pojmenovaný autorkami jako WNII-Genetika 10—89, při jeho selekci byl využit pouze jeden analog isoleucinu. Uvedený kmen nepotřebuje k růstu aminokyseliny, - protože - si - zachovává potřebný vitamin (bíotin a thiamim), která je vlastní kmeni divokého typu Brevibacterium flavum. - Kmen WNII-Genetika 10—89 je uložen v centrálním muzeu průmyslových mikroorganizmů Všesvazového vědecko výzkumného institutu genetiky a selekce průmyslových mikroorganizmů pod číslem CMPM B1507.
Kromě odolnosti k O-methylthreoninu- je morfologická charakteristika kultury kmene WNII-Genetika 10—89 identická s charakteristikou známého kmene Brevibacterium flavum divokého typu.
Pro lepší porozumění tomuto, vynálezu jsou uvedeny příklady, které ilustrují získávání L-šoleucinu.
Příklady provedení
Příklad 1
Kultura . kmene Brevibacterium flavum WNII-Genetika 10—89 se pěstuje 24 až 36 hodin při teplotě 30 °C na masopeptonovém šikmém agaru. Potom se očka· vysejí do baněk o objemu 750 ml, která obsahují vždy 100 ml sadbové kultury. Jako kultivační prostředí se použije maso-peptonový bujón, který byl před naočkováním sterilován. Po naočkování se baňky umístí na kruhové třepačce (s počtem otáček 220 až · 240/min.) a pěstování kultury se provádí při teplotě 30 °C po dobu 20 až 24 hodin. Takto připravená kultura se . vnese v množství 3 až 5 % objemových do baněk o objemu 750 ml, které obsahují živný roztok tohoto složení: 5
| glukóza | 130,0 | g/i |
| (NH4)2SO4 | 30,0 | g/1 |
| KH2PO4 | 1,5 | g/i |
| MgSO. | 0,5 | g/1 |
| CaCO3 | 40,0 | g/1 |
| Biotin | 200 | Ag/1 |
| Thiamin | 300 | Mg/1 |
| Vodovodní voda | doplněno na 1 litr |
Všechny složky živného prostředí se sterilují při tlaku 50 kPa během 30 minut. Hodnota pH prostředí se po sterilizaci upraví pomocí kyseliny sírové na pH 7,0 až 7,2.
Kultivace se provádí při provzdušňování za teploty 30 °C během 72 hodin až do nahromadění 17,0 g/li^rt:r L-isoleucinu.
Příklad 2
Očkovací materiál se připraví stejným způsobem, jako v příkladě 1. Kultivace se provádí jako v příkladě 1 na živném prostředí tohoto složení:
Glukóza (NH4)2SO4
KH2PO4
MgSO4
СаСОэ
Biotin
Krmný preparát B12 Vodovodní voda
100,0 g/1
30,0 g/1
1,5 g/i
0,5 g/i
40,0 g/1
200 ^g/1 g/1 doplněno na 1 litr
Po . 66 až 72 hodinách kultivace se v kulturní kapalině nahromadí 19,0 g/litr L-isoleucinu.
Odborným výrazem krmný preparát Bt2 se rozumí produkt, který se získá zkvašením odpadu z aceton-butylové produkce pomocí 'bakterií tvořících methan s . následujícím vysušením mikrobiální hmoty. Produkt se používá jako přísada do krmivá pro zvířata.
Příklad 3
Očkovací- materiál se připraví stejným způsobem, jako je uvedeno v příkladě 1. Kultivace se provádí jako v . příkladě 1 na živném prostředí tohoto složen i:
Sacharóza (NH4)2-SO4
KH2PO4
MgSO<
CaCOa
Thiamin
De^t^ioibi^-^itin
Vodovodní voda
130,0 g/1
30,0 g/i
1,5 g/1
0,5 g/1
40,0 g/1
300 ^/1
500 ^g/l doplněno na 1 litr
Po 72 . hodinách kultivace ' se nahromadí 17,3 g/litr L-isoleucinu.
Přiklá.d.4
Očkovací materiál se připraví stejným způsobem, jako je uvedeno v příkladě 1. Kultivace se provádí jako v příkladě 1 na živném prostředí tohoto složem:
Sacharóza (NH4)2SO4
KH2PO4
MgSO4
CaCO3
De^t^iobio^tin
Krmný preparát Β12
Vodovodní voda
130,0 g/i
30,0 g/1
1,5 g/1
0,5 g/1
40,0 g/1
500 ^g/l
5,0 g/1 doplněno na 1 litr
Po 66 až 72 hodinách růstu kultury v kulturní tekutině se nahromadí . 17,2 g/litr L-isolencmu.
V uvedených příkladech se L-isoleucin získává obvyklým způsobem.
Claims (1)
- PREDMET VYNÁLEZUZpůsob výroby L-iso^u^nu kultivací mikroorganizmů Brevibacterium flavum produkujících L-isoluečin za podmínek provzdušňování v prostředí, které obsahuje zdroj asimilovatelného uhlíku, asimilovatrlného dusíku, minerální soli .a vitamíny, a izolací Lisoleucinu po skončení kultivace, vyznačují cí se tím že . se jako produkčního kmene použije Brevibacterium flavum ^VNU-Genetika 10—89 uloženého pod číslem „CMPM B1507“, přičemž kmen Brrv1bactrrium flavum W^I-Genetika 10—89 je odolný proti inhibujícímu účinku O-methylthrronmu.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU772501219A SU751829A1 (ru) | 1977-06-29 | 1977-06-29 | Штамм вниигенетика-10-89-продуцент изолейцина |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS201719B1 true CS201719B1 (en) | 1980-11-28 |
Family
ID=20715372
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS784248A CS201719B1 (en) | 1977-06-29 | 1978-06-28 | Process for preparing l-isoleucine |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4237228A (cs) |
| CS (1) | CS201719B1 (cs) |
| DE (1) | DE2828387A1 (cs) |
| FR (1) | FR2396080A1 (cs) |
| HU (1) | HU178140B (cs) |
| IT (1) | IT7841604A0 (cs) |
| SU (1) | SU751829A1 (cs) |
| YU (1) | YU40982B (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4329427A (en) * | 1980-10-06 | 1982-05-11 | W. R. Grace & Co. | Fermentative preparation of L-isoleucine |
| JPS58893A (ja) * | 1981-06-25 | 1983-01-06 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
| US4421853A (en) * | 1982-06-16 | 1983-12-20 | W. R. Grace & Co. | Fermentative preparation of L-leucine |
| US4421854A (en) * | 1982-06-16 | 1983-12-20 | W. R. Grace & Co. | Fermentative preparation of L-leucine |
| EP0167132B1 (en) * | 1984-06-29 | 1992-01-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-isoleucine by fermentation |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL253211A (cs) * | 1959-07-02 | |||
| US3058888A (en) * | 1959-10-30 | 1962-10-16 | Tanabe Seiyaku Co | Process for producing alpha-isoleucine |
| GB959229A (en) * | 1960-11-18 | 1964-05-27 | Kyowa Hakko Kogyo Company Ltd | Method for producing l-isoleucine by fermentation process |
| US3231478A (en) * | 1962-10-29 | 1966-01-25 | Ajinomoto Kk | Method of preparing l-isoleucine by fermentation |
| US3502544A (en) * | 1966-10-31 | 1970-03-24 | Noda Inst For Scientific Res | Process for producing l-isoleucine by fermentation |
| JPS4820316B1 (cs) * | 1970-02-16 | 1973-06-20 | ||
| JPS5121077B2 (cs) * | 1973-01-19 | 1976-06-30 | ||
| JPS516237A (ja) * | 1974-07-05 | 1976-01-19 | Tokyo Shibaura Electric Co | Tofuhoshiki |
| JPS5121077A (ja) * | 1974-08-13 | 1976-02-19 | Kurita Machinery Manuf | Ryutainokyuhaisochi |
-
1977
- 1977-06-29 SU SU772501219A patent/SU751829A1/ru active
-
1978
- 1978-06-22 US US05/917,989 patent/US4237228A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-06-26 FR FR7818980A patent/FR2396080A1/fr active Granted
- 1978-06-28 YU YU1538/78A patent/YU40982B/xx unknown
- 1978-06-28 DE DE19782828387 patent/DE2828387A1/de not_active Ceased
- 1978-06-28 IT IT7841604A patent/IT7841604A0/it unknown
- 1978-06-28 CS CS784248A patent/CS201719B1/cs unknown
- 1978-06-29 HU HU78VE872A patent/HU178140B/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT7841604A0 (it) | 1978-06-28 |
| US4237228A (en) | 1980-12-02 |
| DE2828387A1 (de) | 1979-02-01 |
| YU153878A (en) | 1982-10-31 |
| FR2396080A1 (fr) | 1979-01-26 |
| YU40982B (en) | 1986-10-31 |
| FR2396080B1 (cs) | 1980-10-31 |
| SU751829A1 (ru) | 1980-07-30 |
| HU178140B (en) | 1982-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR960016135B1 (ko) | L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법 | |
| Starr | Nutrition of Phytopathogenic Bacteria: I. Minimal Nutritive Requirements of Genus Xanthomonas | |
| SU1719433A1 (ru) | Способ получени L-аланина | |
| KR0150465B1 (ko) | 발효법에 의한 아미노산의 제조법 | |
| CS201719B1 (en) | Process for preparing l-isoleucine | |
| KR0181297B1 (ko) | 발효에 의한 엘-리신의 제조방법 | |
| US2978383A (en) | Method for the production of 1-glutamic acid | |
| KR100220018B1 (ko) | L-루이신을 생산하는 신규한 미생물 코리네박테리움 글루타미컴(Corynebacterium glutamicum) CH45 | |
| EP0054311B1 (en) | Process for producing l-glutamic acid | |
| EP0205849A2 (en) | Process for producing L-Threonine by Fermentation | |
| RU2549690C1 (ru) | L-ЛИЗИН-ПРОДУЦИРУЮЩАЯ БАКТЕРИЯ Corynebacterium glutamicum ИЛИ Brevibacterium flavum, УСТОЙЧИВАЯ К ФУЗИДИНОВОЙ КИСЛОТЕ, И СПОСОБ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА L-ЛИЗИНА С ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ | |
| Sen et al. | Extracellular lysine production from hydrocarbons by Arthrobacter globiformis | |
| US5302521A (en) | Process for producing L-lysine by iodothyronine resistant strains of Mucorynebacterium glutamicum | |
| US3663373A (en) | Process for the preparation of iodinin | |
| SU908092A1 (ru) | Способ получени рибофлавина | |
| US3850750A (en) | Preparation of d-({31 ) pantoic acid and/or d-({31 ) pantoyl lactone | |
| DK171744B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af pyrodruesyre | |
| KR100273950B1 (ko) | L-라이신을 생산하는 코리네박테리움 글루타미컴 cj31-0210및 그를 이용한 l-라이신의 생산방법 | |
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| KR930001389B1 (ko) | 고 인산에너지 생산 세포융합주에 의한 l-아르기닌의 제조방법. | |
| KR0146493B1 (ko) | 발효법에 의한 l-알라닌의 제조 방법 | |
| KR0134131B1 (ko) | 세파로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세파로스포린 c의 제조방법 | |
| CA2037832A1 (en) | Process for producing l-threonine | |
| RU2059726C1 (ru) | Штамм бактерий corynebacterium sp. - продуцент l-лейцина | |
| Kamel et al. | Optimization of a growth medium for antibiotic production by Streptomyces anandii var. taifiensis |