CS199648B2 - Method for separating diindole alkaloids - Google Patents

Description

Vynález se týká nového způsobu dělení diindolových alkaloidů získaných a obohacených extrakcí z rostlin rodu Apocynaceae, zejména dvou diindolových alkaloidů vinleuroslnu (dále označovaného obvyklým zkráceným názvem leurosin) a vincaleukoblastinu (dále označovaném vinblastin), získatelných z rostliny Catharantus roseus G. Don (popřípadě Vinca rosea L.), popřípadě adičních solí s kyselinami, zejména sulfátů těchto alkaloidů.

Jak známo, vykazují alkaloidy barvínku leurosin, vinblastin a vincristin cytostatické vlastnosti a používají se ve stále větší míře jako cytostatické prostředky. Proto je důležitým úkolem výzkumu vypracovávat stále účinnější metody к získání těchto alkaloidů (viz pat. spisy USA 3 097137 a

205 220; maďarské pat. spisy čís. 153 200 a 154 715). Pro všechny způsoby popsané v citovaných patentových spisech je charakteristické, že všech asi 80 indolových alkaloidů přítomných v extraktu získaném z rostliny lze po různých fázových .přeměnách vzájemně oddělit.

Naproti tomu je v maďarském patentovém spise čís. 160 967 (rakouský pat. spis čís.

313 485) popsán způsob, podle něhož lze oddělit, popřípadě obohatit až na 70 až 80 % obsahu diindolových alkaloidů tři uvedené diindolové alkaloidy leurosin, vinblastin a vincristin získané z extraktu po odstranění průvodních nečistot ve formě jejich edičních solí s kyselinami, s výhodou sulfátů, takže je třeba rozdělit sloupcovou chromatograií pouze tuto směs edičních solí obohacených tří diindolových alkaloidů.

Ze tří uvedených diindolových alkaloidů je z terapeutického hlediska vincristin nejžádanější cytostatickým prostředkem. V maďarském patentovém spise čís. 165 599 (rakouský pat. spis čís. 326 839) je popsán způsob polosyntetické výroby vincristinu selektivní oxidací vinblastinu. Touto možností dále stoupl praktický význam v terapii použitelného vinblastinu, protože se tato látka dá použít jako výchozí látka pro polosyntézu vincristinu, a to tím spíše, že z rostliny Vinca rosea lze získat asi desetkrát více vinblastinu než vincristinu a tento vinblastin lze nyní uvedeným způsobem převést s velkým výtěžkem na vincristin, známý jako velmi účinné cytostatikum.

Rovněž praktický význam leurosinu v posslední době silně stoupl, protože se poznalo, že tuto látku lze oxidací převést na novou, dosud v literatuře nepopsanou sloučeninu, na rovněž cytostaticky účinný N-formylleurosin. Tento produkt má zejména proto velký význam, že působí staticky na taková

199848

199848 zhoubná onemocnění (například Hardingův-Passeyův melanom, VX-karcinom epitelu zajíců, indukovaný a pak transplantovaný sarkom), na která nebylo až dosud možno známými cytostatiky vykonávat téměř žádný nebo žádný vliv [viz maďarský pat. spis čís. 165 986 (rakouský pat. spis čís. 332 566)].

Clem vynálezu bylo nalézt jednodušší a účinnější způsob dělení shora uvedené směsi edičních solí diindolových alkaloidů s kyselinami, při němž se získá vinblastin bez použití sloupcové chromatografie o tak vysoké čistotě, že získaný produkt lze použít bezprostředně pro výrobu vincristinu selektivní oxidací, při němž lze izolovat též ostatní diindolové alkaloidy.

Bylo zjištěno, že leurosin lze izolovat , ze směsi adičních solí diindolových alkaloidů s kyselinami s velkým výtěžkem, přidá-li se k roztoku směsi uvedených solí pro uvolnění diindolových alkaloidů organická báze a směs se pak ochladí; tím se z roztoku vyloučí asi 90 až 95 °/o přítomného leurosinu ve formě' volné báze. Surový leurosin lze oddělit filtrací; odpaří-li . se nyní filtrát k suchu pak lze z odparku extrahovat ostatní báze diindolových alkaloidů kapalným uhlovodíkem přičemž zbude pouze adiční sůl s kyselinami organické báze použité k uvolnění diindolových alkaloidů. Z takto získaného organického roztoku se mohou báze diindolových alkaloidů převést vodným roztokem fosforečnanového pufru o hodnotě pH = 3,7 až 4,3 do vodné fáze; z této pak lze extrahovat vinblastin okyselením vodné fáze kyselinou fosforečnou na pH = 3,5 až 4,1 chlorovanými uhlovodíky a tak převést do organické fáze, zatímco diindolové alkaloidy zůstávají ve vodné fázi.

Podle toho se způsob podle vynálezu pro dělení dindolových alkaloidů získaných extrakcí z rostlin rodu Apocynaceae vyznačuje tím, že se směs adičních solí s kyselinami, zejména sulfáty diindolových alkaloidů, rozpustí v rozpouštědle neomezeně nebo omezeně mísitelném s vodou, výhodně alkoholu, k roztoku se přidá organická báze, vyloučená báze - leurosinu se oddělí, matečný louh zbylý po oddělení báze leurosinu se odpaří k suchu, z odparku se extrahují diindolové alkaloidy kapalným uhlovodíkem, výhodně . benzenem, získaný organický roztok se extrahuje vodným roztokem fosforečnanového pufru o hodnotě pH 3,7 až 4,3 výhodně 4,0 + 0,1, pak se chlorovaným uhlovodíkem, výhodně dichlormetanem, fáze oddělí a z organické fáze se izoluje báze vinblastinu a popřípadě se diindolové alkaloidy izolované ve formě báze převedou na adiční soli s kyselinami.

Způsob podle vynálezu se provede účelně tak, že se. směs adičních solí diindolových alkaloidů s kyselinami rozpustí ve 3 až lOnásobném množství organického rozpouštědla, například acetonu nebo nižším alifatickém alkoholu, například metanolu, etanolu, isopropanolu nebo n-propanolu, při až 50 °C, vhodně při teplotě místnosti, a pak se k - roztoku . přidá malý přebytek (počítáno na směs alkaloidových solí) ' organické ' báze, například monoetylaminu, dietylaminu nebo pyridinu. Z takto uvolněných bází diindolových alkaloidů se nyní vyloučí báze leurosinu při 0 až 25 °C; vyloučení leuroslnu lze zdokonalit ochlazením roztoku na 0 °C. Vyloučený leurosin se odfiltruje, promyje stejným, rovněž ochlazeným rozpouštědlem, vysuší a popřípadě známým způsobem, například překrystalováním, vyčistí. Takto získaná báze leurosinu se může popřípadě' převést na adiční sůl s kyselinami, vhodně na sulfát. Za tím - účelem se například k etanolovému roztoku báze přidá 0,5'%- obj. roztok kyseliny sírové v absolutním alkoholu až k dosažení hodnoty pH 4.

Matečný louh získaný- po vyloučení báze leurosinu se odpaří za sníženého tlaku k suchu. Odparek se pak rozpustí v organickém rozpouštědle, například uhlovodíku benzenové řady, například toluenu, xylenu nebo výhodně benzenu. Přitom se - vyloučí sulfát organické báze použité k uvolnění diindolových alkaloidů -z roztoku a odfiltruje se. Filtrát se opakovaně extrahuje vodným - roztokem fosforečnanového pufru o hodnotě pH 3,7 až 4,3, výhodně 4,0 + 0,1, a- takto získaný kyselý vodný roztok se opakovaně extrahuje chlorovaným uhlovodíkem, výhodně dichlormetanem. Organické - extrakty se spojí, vysuší nad bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku se odpaří k suchu. Jako odparek se získá vinblastin, jejž lze popřípadě převést na adiční sůl s kyselinami, -výhodně na sulfát. Takto získaný vinblastinsulfát je prakticky čistý a může se bez dalšího čištění použít jako výchozí látka pro výrobu vincristinu.

Způsob podle vynálezu je blíže objasněn následujícím příkladem provedení'.

Příklad provedení g směsi sulfátů diindolových alkaloidů se rozpustí - při teplotě - místnosti ve - 300 ml metanolu, poté - se přidá za míchání 13 ml dietylaminu. Roztok se odstaví na jednu hodinu - při, 0 °C. Během této doby vykrystaluje báze leurosinu z roztoku. Vyloučené krystaly se odfiltrují, promyjí malým množstvím metanolu a vysuší ve - vakuu. Získá se 6,4 g báze leurosinu. Tento produkt obsahuje 90 až 95 % celkového obsahu - leurosinu ve směsi sulfátů diindolových alkaloidů použitých jako výchozí látka.

Surová báze leurosinu získaná uvedeným způsobem se - dá vyčistit překrystalováním a popřípadě známým způsobem převést na sulfátovou adiční sůl. .

Filtrát získaný - po odfiltrování báze leurosinu se za sníženého tlaku odpaří k suchu a odparek se rozpustí ve 2500 ml benzenu.

Přitom se vyloučí dietylaminsulfát v krystalické formě. Krystaly se odfiltrují, promyjí malým množstvím benzenu a - mohou se použít pro regeneraci dietylaminu.

199 S

Benzenový filtrát se extrahuje třikrát vždy 2500 ml vodného roztoku fosforečnanového pufru o hodnotě pH 4,0 + 0,1. (Pro přípravu roztoku fosforečnanového ' pufru se rozpustí 10 hmot, o/o bezvodého primárního fosforečnanu sodného v destilované vodě a získaný roztok se upraví N roztokem kyseliny fosforečné na uvedenou hodnotu pH)

Oddělené vodné fáze se spojí a další N-kyselinou fosforečnou upraví opět na hodnotu pH 4,0 + 0.1 a pak extrahují čtyřikrát po 2500 ml dichlormetanu. Oddělené dichlor-

Claims (3)

1. PŘEDMĚT

   - 1. Způsob dělení diindolových alkaloidů získaných extrakcí z rostlin rodu Apocyanaceae, vyznačující se tím, že se směs adičních solí s kyselinami, zejména sulfáty diindolových alkaloidů, rozpustí v rozpouštědle neomezeně nebo omezeně mísitelném s vodou, výhodně alkoholu, k roztoku se přidá organická báze, vyloučená báze leurosinu se oddělí, matečný louh zbylý po oddělení báze leurosinu se odpaří k suchu, z odparku se extrahují diindolové alkaloidy kapalným uhlovodíkem, výhodně benzenem, získaný organický roztok se extrahuje vodným roztokem fosforečnanového pufru o hodnotě pH ./ metanové fáze se spojí, vysuší bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku odpaří k suchu. Získá se 25 g vinblastinu jako odparek. Tento produkt je prakticky čistý a může se bez dalšího· čištění použít jako výchozí látka pro polosyntézu . vincristinu.

   Pro výrobu sulfátové soli se získaná báze vinblastinu (25 g) rozpustí v 80 ml metanolu a roztok se upraví 0,3% obj. etanolovou kyselinou sírovou na hodnotu pH 5 a odstaví, přičemž se· vyloučí krystalický vinblastinsulfát.

   yNALEZU

   3,7 až 4,3, výhodně 4,0 + 0,1, pak se chlorovaným uhlovodíkem, výhodně díchlormetanem, oddělí fáze a z organické fáze se izoluje báze vinblastinu a popřípadě se diindolové alkaloidy' ' izolované ve formě báze převedou na adiční soli s kyselinami.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se jako rozpouštědla neomezeně nebo omezeně mísitelného s vodou používá metanolu nebo etanolu.
3. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se jako organické báze použije pyridinu, monoetylaminu nebo dietylaminu.