SU1207396A3 - Способ выделени винкристина - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к усовершенствованному , способу вьщелени  вин кристина, примен ющегос  в медицине при лечении лимфогранулематоза.

Цель изобретени  - возможность обеспечени  получени  целевого продукта с более высоким выходом.

Пример 1. Вьщеление вин- кристина.

10 кг сухого остатка Catharan thus roseus экстрагируют три раза, каждый раз в течение 1 ч, 32 объема ми воды при 50 С, подкисленной до значени  рН 3,0 добавлением 30%-ной (вес.% на объем) серной кислотой в качестве экстрагирующей среды. Водные экстракты декантируют с волокнистого материала, объедин ют и фильтруют, Фильтра т экстрагируют дважды равными объемами бензола и бензольные экстракты отбрасывают. Значение рН фильтрата повышают до 6,0 добавлением концентрированной гидроокиси аммони , Водную фазу при значении рН 6,0 экстрагируют три равными объемами бензола. Бензольные экстракты объедин ют, концентрируют в вакууме и получают в качестве остатка 57 г сырой алкалоидной смеси.

5 г смеси, полученной таким образом , раствор ют в 250 мл 1,0 М цитрата аммони  в качестве буфера при значении рН 3,0 и результирующий фильтрат хроматографируют на 600 г декстранового гел  (сефадекс С-25 Г) в 5М40 см стекл нной колонке. 0,1М буфер цитрата аммони  (рН 3,0) примен ют в качестве подвижной фазы. Колонку элюируют под давлением в головной части 1,05 кг/см при скорости потока вытекающей жидкости в пределах 10-14 мл/мин. Фракции собирают и идентифицируют как содержащие преимущественно мономерные или димерные алкалоиды с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции которые содержат димерные алкалоиды злюируют первыми, они содержат под данным тонкослойной хроматографии винбластин, винкристин, лейрозин и винрозидин. Водные фракции, содержащие преимущественно данные димерные алкалоиды, объедин ют, значение рН довод т до 7,0 с помощью гидроокси аммони  и результирующий водный нейтральный раствор экстрагируют тр раза по 0,5 от его объема бензолом.

07396

Бензольные экстракты собирают и фильтруют через безводный сульфат натри . Концентрирование фильтрата до сухого остатка в вакууме дает

5 1,0 г смеси димерных алкалоидов. Смесь раствор ют в 7,5 объемах безводного этанола. При этом происходит кристаллизаци  лейрозина, которьш отдел ют центрифугированием. Выход со10 ставл ет 157 мг лейрозина. Верхний слой довод т до значени  рН 4,2 3%-ной этано;:ъной серной кислотой. Сульфаты остальных димерных алкалоидов выдел ютс  сразу же в виде

15 игольчатых кристаллов и кристаллизацию продолжают в течение двух дней. Кристаллы отдел ют центрифугирова-. нием, промывают этанолом и сушат. Выход составл ет 241 мг смеси суль20 фатных солей винбластина и винкрис- тина с примесью небольшого количеси- ва сульфата лейрозина. Соли превращают в соответствующие свободные осно- в.ани  растворением в воде, доведе25 нием значени  рН водного раствора до 8,0 с помощью 14 н. гидроокиси аммони  и последующим экстрагированием водонерастворимых оснований метиленхлоридом. Метиленхлоридный

-,.-, экстр)акт фильтруют и растворитель

удал ют выпариванием в вакууме.-Образующийс  остаток хроматографируют на 400 г окиси алюмини  (активность Ш. 200 ), с использованием в качестве элюента системы растворителей метилацетат;метиленхлорид:вода (48:51:1), Хроматографирование провод т в колонке из нержавеющей стали (8 мм на 7 м) при давлении 17,6 - 22,8 кг/см . Соотношение количества окиси алюмини  и смеси алкалоидов составл ет приблизительно 2000/1. Выход элюата контролируют по поглощению при 254 мм, и фракции отдел ют в соответствии с максимумами в УФ- спектре поглощени . Идентифицируют фракции, содержащие преимущественно лейрозин, винбластин, дез-К-метил- винбластин и винкристин. Концентрирование объединенных фракций, содержащих винкристин, до сухого остатка дает 18,7,мг алкалоида. Остаток раствор ют в 20 объемах безводного этанола , нерастворимую часть отдел ют центрифугированием и довод т значе- - ние рН верхнего сло  до 4,2 с помощью 3%-ной этанольной серной кисло- Tbi, при этом происходит кристаллизаци  винкристинсульфата. Кристал3S

50

лизацию смеси провод т путем выдерживани  ее при комнатной температур в течение двух, дней. Затем отдел5пот винкристинсульфат центрифугированием , центрифугат промывают этанолом и сушат в вакууме. Вес получен1ного при этом винкристина составл ет 12,3 мг (эквивалентно 14,1 мг/кг экстрагированного остатка). Свойства винкристинсульфата, полученного предлагаемым способом, идентичны пр веденным в литературе.

Пример 2. Юг смеси алкалоидов , полученной в услови х примера 1 на стадии, предшествующей хроматографии высокого давлени , раствор ют в 5 объемах безводного эталона. Значение рН раствора довод т до 4,2 добавлением 3%-ной серной кислоты (этанольный раствор). Смесь сульфатов затравливают вин- бластинсульфатом. Кристаллизацию смеси провод т выдерживанием ее в течение 48 ч и смесь сульфатов ди- метральных алкалоидов выдел ют центрифугированием . Описанна  процедура , сопровождающа с  затем стадией гельпроникающей хроматографии с хро матографированием на дезактивированной окиси алюмини  под высоким давлением , приводит к получению 20,6мг винкриптинсульфата, что эквивалентно 11,8 мг/кг экстрагированного остатка .

Пример 3, Перевод дез-N- метилвинбластина в винкристин.

270 кг сухих остатков Catharan thus roseus обрабатывают в услови х примера 1. Фракции, идентифицированные с помощью тонкослойной хроматографии , как содержащее дез-М-метил- винбластин, выдел ют с помощью жидкостной хроматографии под высоким

Редактор Е.Папп Заказ 8745/61

Составитель Ю,Хропов Техред А.Бабинец

Тираж 379 ВННИПИ Государственного комитета СССР

По делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб,, д, 4/5

Филиал Ш1П Патент, г, Ужгород, ул. Проектна , 4

10

15

20

207396

давлением и концентрируют в вакууме до сухого остатка. Полученные 7,73 г сырого дез-Ы-метилвинбластина перевод т в винкристин при комнатной с температуре добавлением раствора, содержащего 927 мл 98%-ной муравьиной кислоты и 154 мл уксусного ангидрида . После завершени  реакции, (что устанавливают с помощью тонкослойной хроматографии) реакционную смесь концентрируют в вакууме до сиропа . Концентрат раствор ют в 100 объемах воды, а алкалоиды превращают в соответствующие свободные основани  экстрагированием водного раствора при значении рН 5,8 метиленхлоридом (троекратным), Концентрирование объединенных метиленхлоридных экстрактов под вакуумом приводит к образованию 7,84 г свободного основани  винкристина. Свободное основание далее очищают с помощью жидкостной хроматографии под высоким давлением (14,1-21,1 кг/смМ, и колонке 2,5 см 730 см из нержавеющей стали с ис- .пользованием 3200 г нейтральной окиси алюмини  (активность Ш-1У) в качестве адсорбента и смеси этилацетат: метиленхлорид:вода (25:75:0,4) в качестве подвижной фазы. Выход винкристина , полученного после концентрировани  до сухого остатка соответствующих фракций, составл ет 2,64 г, Это вещество дважды перекристаллизо- вывают из этанола, повторно хрома- тографируют с использованием смеси метилацетат:метиленхлорид:вода (48:51:1) в качестве подвижной фазы, кристаллизуют из метанола и прзвра- щают в сульфат в этаноле с выходом 1,4 г винкристинсульфата (эквивалентно 5,3 мг/кг экстрагированного остатка ) .

25

30

35

40

Корректор Л.Патай Подписное

Claims (1)

1. СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВИНКРИСТИНА из природного источника, содержащего винкалкалоиды, включающий стадии экстрации целевого продукта, · подкисления экстракта кислотой, например серной, промывки кислого экстракта бензолом, подщелачивания экстракта водным аммиаком, экстракции целевого продукта из полученного' раствора бензолом, упаривания бензольного экстракта, растворение остатка в этаноле, переведения целевого продукта в сульфат, кристаллизации из этанола, переведения в свободное.основание с помощью водного аммиака, колоночной хроматографии на окиси алюминия с последующим выделением целевого продукта или в свободном виде или в виде соли, например сульфата, отличающийся тем, что в качестве источника винкалкалоидов используют Catharan thus roseus, экстракцию проводят водой,, подкисленной серной кислотой, перед кристаллизацией целевого продукта в виде сульфата проводят его гельфильтрацию хроматографией на сефадексе в кислой среде с последующей нейтрализацией фракции, содержащей целевой продукт, и экстракцией продукта бензолом, упариванием экстракта и выделением целевого продукта с помощью хроматографии высокого давления при 17-22,8 ати.