SU576950A3 - Способ получени винкристина - Google Patents

Description

(54)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИНКРИСТИНА

1

Изобретение относитс  к усовериюнствованному способу получени  винкристина.

Винкристин находит применение в клинической практике как .химикотерапевтиюское средство против рака, прежде всего дл  лечени  лейкемии в детском возрасте 1 .

Известны способы получени  винкристина экстракцией Vinca rosea 1, 2. Из обшей смеси, содержащей приблизительно 70 различных алкалоидов , можно с трудом получить 0,1% винкристина.

Известен также способ получени  вннкристина из винбластина, заключающийс  в том, что винбластин в резу;гьтате микробиологического окислени  в присутствии перекиси водорода превращаетс  в N дезметилнинбластин , который одним из известных способов формилировани  превращаетс  в винкристип 3.

Таким образом по 7ишюму способу винкристин П()л чают из винбластина довольно сложным путем в две стадии.

Целью данного изобретени   вл етс  уменьщение числа стадий при получении винкристина из винбластина и упрощение процесса. Указанна  цель дости1-аетс  за счет того, что винбластин и;ш его соль подвергают окислению с помо1Ц ю хромовой

кислоты или се соли при охлаждении,, полученный продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной среды, экстракт выпаривают досуха и выдел ют целевой продукт. Процесс окислени  провод т при температуре от 30° до - 90° С, в органическом растворителе или в смеси растворителей, например ацетон - лед на  уксусна  кислота в соотношешт 4:1.

Пример. Юг (0,011 мол ) сульфата

винбластина раствор ют в 2200 мл ацетона, добавл ют 500 мл лед ной уксусной кислоты и охлаждают до -60° С. Одновременно 4,96 г (0,0494 мол ) хромовой кислоты раствор ют в 1860мл уксусного ангидрида, охлаждают до - 60° С и затем

прикапывают при перемешивании в раствор сульфата винкристина- После 8 - минутного перемешивани  прикапьшают 4400 мл концентрированного аммиака, который охлаждалс  от - 40 до - .50° С, до величины рН 8. Температура раствора во врем 

нейтрализации не должна превьщлать (+) 50° С. Подщелоченна  реакционна  смесь смешиваетс  с 10 л воды и экстрагируетс  хлористым метиленом до отсутстви  алкалоида. Фазы хлористого метилена соедин ют, образованшзш при нейтрализации и перещедший в органическую фазу ацетат аммони 

дважды промывают водой (по 3000 мл). После jToro высушенный раствор хлористого метилена выпаривают лри пониженном давлении досуха. Получают 8,5 г аморфного сырого винкрист}ша, который в качестве примеси содержит еще N - дезметилвинбластин . Аморфный сырой винкристан раствор ют в 30 мл бензола и хроматографируют на колонке, котора  содержит пронитанную бензолом окись алюмини . Вначале производ т элюирование с 1300мл бензола, носле этого с 5500мл смеси бензола-хлороформа (2:1) и, наконец, с 4250 мл смеси бензола-хлороформа (1:1). Собирают фрак1ШИ по 250 мл. Отдельные фракции исследуют методом хроматографии на бумаге или методом тонкослойной хроматографии. Смесь бензола - хлороформа с отношением 2:1 вымывает полученную в качестве побочного продукта окислени  примесь N - дезметилвинбластина, а смесь с отношением 1:1 - образованный винкристин. Содержащие идентичные алкалоиды фракции, идентифицированные посредством хроматографии на бумаге или тонкослойной хроматографии, соедин ют и выпаривают при пониженном давлении. Таким путем получают 5,9 г аморфного винкристина или 2,7 г аморфного N дезметилвинбластина .

Аморфный N - дезметилвинбластин раствор ют в 27 мл безводного :)танола и при помонди 1%-ного ра.створа серной кислоты в этаноле устанавливают величину рН -4, причем, сульфат N - дезметилвинбластина выпадает в кристаллический осадок. Получают 2,5 г сульфата N - дезметилвинбластина, который раствор ют в 13 мл метанола. К раствору добавл ют 60 мл безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре, после чего отфильтровьшают выкристаллизованный сульфат N - дезметилвинбластина.

Выход: 2,2 г (0,0024 мол ) сульфата N - дезметилвинбластина (20%).

Из одной части сульфата N дезметил винбластина освобождаетс  основание и идеитифицируетс  на основании следующих данных: точка плавлени : 212-215 °С (Боетиус), а) 0° - 5,8 (с-1, хлороформ).

Образованный при окислении винбластина N дезметилвинбластин и.гш его соль может известным образом формилироватьс , причем получаетс  винкристин или его соль.

Полученные 5,9 г аморфного винкристина раствор ют в 60 мл безводного этанола и подкисл ют раствором серной кислоты в этаноле до величины рН 4, причем сульфат винкристина выпадает в кристаллический осадок. Получают 5,6 г сульфата винкристина. Последний раствор ют в 30 мл метанола и к раствору добавл ют 120 мп безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре и затем отфильтровывают выкристаллизованный сульфат винкристина . Выход: 5,2 г (0,0055 мол ) сульфата винкристкнз (507с).

rt 2 -:-(+) 1 1 -- (+) 1 2 (с . вода).

Rf 0,30 (по вл етс  с  ркч).- олубой окраской ).

Продукт индентифицнруетс  но инфракрасному спектру, который по сравнешпо с инфракрасным спектром винбластина имеет при 5,94 мкм сильную полосу поглон1е1ш .

Исследовани  методом тонкослойной хроматографии проводились с окисью алюмини  марки G. Merck. Элюирование осуществл лось хлороформом с содержа1шем 0,5% метанола, дл  про влени  использовалась концентрированна  фосфорна  кислота, содержаща  1% сульфата цераммони . Пример2. 5 г (0,0055 мол ) сульфата винбластина раствор ют в 1100 мл ацетона и добавл ют 250 мл 99,5% очищенной лед ной уксусной кислоты, котора  не содержит окисл емых веществ . Раствор охлаждают до - 60° С. Одновременно 2,48 г (0,0297 мол ) хромовой кислоты раствор ют в 930 мл уксусного ангидрида, охлаждают до (-) 60° С и при перемещивании добавл ют к раствору сульфата винбластина. Реакционную смесь перемешивают в течение 8 мин и затем добавлением охлажденного от (-) 40 до (-) 50° С концентрированного аммиака устанав;тивают величину рН 9. Во врем  нейтрализации температура реакционной смеси не должна превышать (+) 50° С. Подщелоченную реакционную смесь разбавл ют 5000 мл воды и экстрагируют 3 раза по 1000 мл хлористым метиленом до отсутстви  алкалоида. Фазы хлористого метилена соедин ют и образованный при нейтрализации и перещедший в органическую фазу ацетат аммони  промьтают 2 раза по 1500 мл воды. После этого фазу хлористого метилена сушат и выпаривают при пониженном давлении досуха. Остаток раствор ют в смеси из 75 мл концентрированной муравьиной кислоты и 12,5 мл уксусного ангидрида и вьщерживают 5 мин при комнатной температуре . Затем кислый раствор разбавл ют водой в три раза и с помощью концентрированного аммиака при охлаждении устанавливают Бе:гшчину рН 9. Алкалоиды экстрагируют 3 раза порци ми по 100 мл хлористого метилена. Фазы хлористого метилена соедин ют и при пониженном давлении вьшаривают досуха. Сухой остаток, который содержит винкристин , раствор ют в 20 мл бензола и хроматографируют на колонке, содержащей пропитанную бензолом окись алюмини  с активностью IV-V. Сначала производ т элюирование при помощи 500 мл бензола , затем 1000 мл смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1, после этого 700 мл смеси бензола хлороформа в отношении 8,5; 1,5, затем 2300мл смеси в отношении 8:2 и, наконец, при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Улавливают фракции по 250 мл. Бензол и смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1 и 8,5:1,5 служат дл  лучшего разделени  веществ на адсорбенте; первые алкалоидсодержашие фракции по вл ютс  при элюировании с первой половиной смеси бензола - хлороформа в отношении 8:2. Эти фракции соедин ют и вьшаривают при понижетшом

давлении, причем получают 5-10% побочного продукта , в пересчете на вес образованного при окислении конечного продукта, сульфата винкристипа. Содержащие винкристин фракции получают при элюировании со второй половиной смеси бензола хлороформа в отношении 8:2, удаление винкрисTtffla растворением заканчивают при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Содержащие винкристин фракции, идентифицированные посредством тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, соедин ют и вьшаривают при пониженном давлении досуха. Получают 3,8 г сухого остатку который раствор ют в 40 мл безводного этанрла, и раствор при помощи 1%-ного раствора серной кислоты в этаноле доводитс  до величины рН 4. Винкристин осаждают в форме своего сульфата, отдел ют, раствор ют в 30 мл метанола, и раствор смешивают с 120 мл безводного этанола. Сульфат винкристина выкристаллизовывают при одночасовой выдержке. Продукт отфильтровьшают, промывают и сушат. Выход 3,5 г (0,0039 мол ) сульфата винкристина (70%). Физические константы сульфата винкристина совпадают с названными в примере 1.

Claims (3)

1.Способ ползчени  винкристина на основе винбластина с применением процесса окислени , отличающийс  тем, что, с целью упрощени  процесса , винбластин или его соль подвергают окислению с помощью хромовой кислоты или ее соли при охлаждении, полученный продзтст экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной среды, экстракт выпаривают досуха и целевой продукт выдел ют.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что процесс провод т при температуре от - 30 до - 90° С, в органическом растворителе или в смеси растворителей, преимущественно в смеси ацетон лед на  уксусна  кислота в соотношении 4:1.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1.Патент США №3205220, кл. 260-236, 07.09.65.

2.Патент ВНР № 160967, кл. С 07 g 5/00, 01.12.72.

3.ПатентСША№3354163,кл. 260-287, 21.11.67.