CS159092A3

CS159092A3 - Chemical modification 2''-amino group of elsamycin a

Info

Publication number: CS159092A3
Application number: CS921590A
Authority: CS
Inventors: Toda Soichiro; Yamashita Haruhiro; Naito Takayuki; Nishiyama Yuji
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1991-05-30
Filing date: 1992-05-26
Publication date: 1992-12-16
Also published as: FI922442A; EP0516156A1; KR920021572A; IE921766A1; HU210418B; JPH05208992A; HUT61775A; CA2069717A1; MX9202570A; US5374711A; OA09752A; ZA923818B; IL102000A0; HU9201733D0; AU1723992A; AU655023B2; TW218881B; FI922442A0

Description

Chemická modifikace 2 z> ř—’

aminoskupiny eisaaycinu a

Oblast vynálezu

Vynález se týká nových derivátů elsamycinu A, které jsoulépe rozpustné ve vodě, mají zvýšený protinádorový účineka/nebo sníženou toxicitu, jejich výroby, kompozic, které jeobsahují jako účinnou složku a therapeutických metod využíva-jících těchto kompozic.

Dosavadní stav techniky

Elsamycin A je antibiotikum s protinádorovým účinkem,vyráběné kultivací kmene aktinomycet, produkujícího elsamycinA, označeného jako kmen J907-21 /ATCC 39417/, nebo jeho mu-tanty. Elsamycin A projevuje antibakteriální účinek vůči ae-robním gram-positivním bakteriím a vůči anaerobním bakteriím.

Povněž vykazuje účinek proti různým buňkám tumoru u myší, zahr-nující leukémii P388, lymfoidní leukémii L1210 a melanotickýmelanom B1ó,in vitro a in vivo. Konishi, et al., Elsamicins,new antitumor antibiotics related to chartreusin. I. Production,isolation, characterization and antitumor activity, J. Antibiotics,39: 784 - 791, /1986/; US patent č. 4 518 589, Konishi, et al,zvěr. 21.května 1985.

Struktura elsamycinu A /vzorec I uvedený dále/ byla stanovena a ukázala se být v úzkém vztahu k char-treusinu /vzorec II uvedený dále/. Sugawara, et al, ElsamicinsA and 3, new antitumor antibiotics related to chartreusin. II.Structures of elsamicins A and 3. J. Org. Chem., 52: 996 -1001, /1987/.

I

II - 3 -

Jak elsamycin A, tak chartreusin mají týž aglykon, char-tarin, ale obě antibiotika se lisí disacharidovým zbytkem.Leach, et al, Chartreusin, a new antibiotic produced by Streptmyces chartreusis, a new species, J. Am. Chem. Soc., 75: 40114012, /1953/; Beisler, J.A. , Chartreusin, a glycosidic anti-tumor antibiotic for Streptomyces, In progress in MedicinalChemistry, Ed., G.P. Ellis and G.B. West ££: str. 247 - 268,Elsevier Biomedical Press Amsterdam, /1982/; Simonitsch, et al tl

Uber die Struktur des Chartreusins I, Helv. Chim. Acta, 47:1459 - 1475, /1964/; Eisenhuth, et al, Uber die Struktur desChartreusins II, Helv. Chim. Acta, 47., 1475 - 1484, /1964/.Vzájemná konverze obou sloučenin chemickou cestou dosud neby-la uvedena. Během chemické modifikace elsamycinu A jsme zjistili,že 2 **-aminoskupina elsamycinu A selektivně modifikována acylací nebo alkylácí poskytla nové deriváty elsamycinu A,které jsou lépe rozpustné ve vodě, mají zvýšenou proti- nádorovou aktivitu a/nebo sníženou toxicitu. Předložený vynález poskytuje nové deriváty elsamycinu A,které vykazují lepší rozpustnost ve vodě, zvýšený protinádo-rový účinek a/nebo sníženou toxicitu.Zejména popisuje předlo-žený vynález syntnesu 2 *-N-alkyl, -acyl a -formimidoyl deri-vátů elsamycinu A.

Vynález dále poskytuje protinádorový prostředek, obsahu-jící jako účinnou složku alespoň jeden derivát vybraný ze sku-piny zahrnující deriváty elsamycinu A podle vynálezu. Dále vynález poskytuje způsob léčení rakoviny s použi-tím shora uvedeného protinádorového prostředku. Dále je poskytnut způsob výroby shora uvedeného derivá-tu elsamycinu A. US patent č. 4 518 589, Konishi et al, popisuje produkci - 4 - a isolaci protinádorováho činidla, označeného elsamycin A /vzorec I uvedený snora/. ilhorauvedená sloučenina, elsamycin A,je hlavní komponentou fermentace kmene aktinomycet, produkují-cího elsamycin A, označeného jako kmen J907-21 /ATCC 39417/.

Nyní bylo podle předloženého vynálezu nalezeno, žeacylace nebo alkylace 2 -aminoskupiny elsamycinu A poskytnenové deriváty mající zvýšený protinádorový účinek, lepší roz-pustnost ve vodě a/nebo nižší toxicitu.

Deriváty elsamycinu A podle vynálezu mají obecný vzo-rec III a IV uvedené dále

III kde H je alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, nesubstituovaný nebosubstituovaný karboxylovou skupinou, aminoskupinou nebo ftal-imidoskupinou;

IV 1 kde ti a R nezávisle znamenají vodík, alkyl s 1 až 3 atomyuhlíku, aralkyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidinyl,s tou podmínkou, že R a R1 nemohou současně znamenat vodíka že R a r\ pokud společně s atomem dusíku, k němuž jsouvázány tvoří kruh, může to být morfolino, piperidino nebopyrrolidino. Výrazem "alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku", užitým zde iv nárocích, se /pokud není uvedeno jinak/ míní přímý neborozvětvený řetězec uhlovodíkové skupiny mající 1 až 3 uhlí-kové atomy, jako je methyl, ethyl, propyl a isopropyl.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou vyrábět napříkladsynthetickým postupem graficky znázorněným v tabulkách 2 a 3. Jak je znázorněno v tabulce 2, oyl elsamycin A N-acylovánkyselinou octovou a jantarovou pomocí anhydridové metody, zavzniku sloučenin 3_a a 3b, N-glycylový derivát 3d byl připra-ven acylací aktivním esterem ftalylglycinu a následným odštěpěním chránící skupiny hydrazinem v dobrém výtěžku. 6

Jak je znázorněno v tabulce 3, reduktivní N-alkylaceelsamycinu n aldehydy nebo ketonem poskytla N-alkylderiváty.Reakce elsamycinu A s acetonem v přítomnosti kyanborohydridusodného /NaBíkCN/ poskytla N-isopropylelsamycin A /4a/.

Reakce elsamycinu A s přebytkem formaldehydu a NaBH^CN poskyt-la N,N-dimetnylelsamycin A /4e/ v 54 %ním výtěžku. Jestližese provádí N-methylace omezeným množstvím formaldehydu aNaBHjCN, vznikne směs amino, monometnylamino a dimethylamino-derivátd, N-monomethylace elsamycinu A se zkoušela provéstpostupem podobným tomu, který se používá při přípravě derivá-tu N-monomethylamikacinu. Tak například elsamyein A se nechalreagovat s 2,4-dimethoxybenzaldehydem a NaBH^CN za vznikuN-/2,4-dimethoxy/benzylderivátu /4b/', který se podrobil reduk-tivní N-methylaci formaldehydem a NaBH-^CN a poskytlN-/2,4-dimethoxy/benzyl-N-methylderivát /4c/. Debenzylace slouceniny 4c katalytickou hydrogenací poskytla N-monoraethylelsa-mycin A /4d/. Příprava morfolinového derivátu _4f elsamycinu Ase provedla reakcí elsamycinu A s 2,2 -oxydiacetaldehydem aNaBH^CN.

Formimidoylderivát se připravil konvenční metodou, t.j.reakcí elsamycinu Ashydrochloridem ethylformimidu, kterou sezískala sloučenina 5. ve 38 %ním výtěžku. V tabulce 1 jsou uvedeny sloučeniny podle vynálezu ajejich číselné označení. TABULKA 1

Sloučeniny podle vynálezu a jejich číselné označení sloučenina č. název 1

Elsamyein A - 7 - TABULKA 1 /pokračování/ 2 Chartreusin 3a Z z 2 -N-acetylelsamycin A 3b 2'*-N-/3-karboxypropionyl/elsamycin A 3c 2'*-N-/ftalimidoacetyl/elsamycin A 3d 2**-N-glycylelsamycin A 4a 2*#-N-isopropylelsamycin A 4b 2 **-N-/2,4-dimethoxybenzyl/elsamycin A 4c 2 *-N-/2,4-dimethoxybenzyl/-2 * *-N-methyl-elsamycin A 4d Z z 2 -N-methylelsamycin A 4e Z z 2 -Ν,Ν-dimethylelsamycin A 4f z Z Z Z 2 -deamino-2 -morfolinoelsamycin A 5 2 -N-formimidoylelsamycin A -hydrochlorid 8 tabulka 2

N-Acylace elsamycinu A

Reakce

Produkt

č. R

2c * NHjNHj 3d CH2NHj 9 TABULKa 3

N-Alkylace a formimidace elsamycinu A

Reakce

Produkt č. NRR1

J » CH3COCH3 4· NaBHjCN da -NHCKCH3D2 2 db dc 3 3 3

och3 CHjO-^^-CHO + NaBHjCN db -NHCH2^K)CH3 HjCO 4 HCHO * NaBHjCN dc -NCCHjJCHj^HOi a3co 4 H/Pd-C dd -NHCHj 4 HCHO * NaBHjCN de -NCCHjJj 4 OCCHjCHO32 ♦ NaBH3CN dl -U \) \_! * NhfeCHOEt. -HCI 5 -NHCH=NH

Protinádorový účinek derivátů 2' '-N-alkyl-, -acyl a formimidoyl-elsamycinu A

Bylo syntnetizováno osm derivátů 2**-N-alkyl, -acyl nebo-formimidoylelsamycinu A, které se následně testovaly ve srov-nání s mateřskou sloučeninou na cytotoxicitu proti buňkámmelanomu 316 in vitro a na protinádorový účinek proti leukémiiP388 a melanomu 316 in vivo.

Pro zkoušku cytotoxicity in vitro se vypěstovaly buňkymyšího melanomu B16-F10 a udržovaly se v minimálním esenciál-ním mediu podle Eaglea /Nissui/, které obsahuje 60 yUg/mlkanamycinu, doplněné tepelně inaktivovaným fetálním telecímsérem /10%/ a neesenciálními aminokyselinami /0,6 %/ při37 °C ve zvlhčené atmosféře v 5 % CO? inkubátoru. Exponenciál-

V ně rostoucí buňky B1 6-F10 se shromáždily, spočítaly a suspen-dovaly v kultivačním mediu v koncentraci 2,0 x 10^ buněk/ml.Buněčná suspenze /180 yul/ se pěstovala v jamkách 96 jamkovémikrotitrační destičky a inkubovala se 24 hodin. Testovanésloučeniny /20 yul/ se přidaly do jamek a destičky se dáleinkubovaly 72 hodiri. Cytotoxický účinek se stanovil kolorimet-ricky při 540 nm po obarvení životaschopných buněk neutrálnímčerveným roztokem. Všechny testované deriváty vykázaly in vit-ro průměrnou a menší cytotoxicitu proti buňkám 316-F10 neželsamycin A /tabulka 4/.

Protinádorový účinek in vivo šesti z testovaných derivá-tů vykázal relativně silný cytotoxický účinek v systémechlymfocytární leukemie P388 a 316 melanomu. Samice myší CDF^/pro P388/ a samci myší BDF. /pro 316/ se naočkovali i.p.injekcí 10° buněk P388 a 0,5 ml 10 % 316 suspenze na myš /den0/. Testované sloučeniny se podávaly myším intraperitoneálně,jedenkrát denně ve dnech 1 až 3 /Q1D x 3/ v systému P388 ne-bo jedenkrát denně ve dnech 1, 5 a 9 /Q4D x 3/ v systému B16a zvířata byla pozorována 50 dní.

Percentuální vzrůst střední doby přežití /MST/ ošetřenýchzvířat ve srovnání s neošetřenou skupinou kontrolních zví-řat pyl stanoven a označen jako T/C %, Sloučeniny vykazují-cí hodnoty T/C % 125 nebo vyšší jsou považovány za výrazněprotinádorově účinné. Jak je ukázáno v tabulce 4, 2 -N-iso-propylelsamycin A /4a/, 2' *-N-methylelsamycin A /4d/, 2**-N,N-dimethylelsamycin A /4e/ a 2 z-N-formimidoylelsamycin A -hydrochlorid /5/ byly 10 až 30 krát méně účinné než mateř-ská sloučenina v údajích minimálních účinných dávek /MED/a vykazují poměrně omezenou prolongaci délky života u myšítrpících leukémií P388. Další nevykázaly účinek v testovanýchdávkách. Deriváty 4d, 4e a 5. , pokud byly testovány v systé-mu B16, rovněž poskytly 10 až 30 krát menší protinádorovýúčinek než elsamycin A v údajích MED /tabulka 5/. TABULKA 4

Cytotoxicita proti melanomu B16-F10 in vitro a protinádorovýúčinek proti leukémii P388 u myší in vivo T/C % MST+1 slouč. R nebo -NRR1 cytotox. IG50^/ug/Zl 20+2 Ql/ 10 3 1 0,3 0,1 3a ch3 55 neprováděno CH2CH2COOH 56 neprováděno 3d CH2NH2 4,1 110 110 95 4a -íNHCH/CH3/2 1,5 140 120 1 1 0 4d -nhch3 1,7 145 130 120 100 100 TABULKA 4 /pokračování/ slouč. R nebo -NRR1 cytotox. T/C % MST+1 IC50//ug/ml/ 20+2 10 3 1 0,3 0,1 4e -n/ch3/2 0,36 140 130 1 1 0 4f -N 0 11 1 00 105 1 00 5 -NHCH=NH 0,47 140 130 1 20 100 100 Elsamycin A /]_/ 0,07 tox 205 170 150 137 120 +1 střední doba přežití ve dnech +2 dávka v mg/kg/den, Q1D x 3, ip TABULKA 5

Protinádorový účinek in vivo proti melanomu B16 u myší T/C % MST+1 slouč♦ 1 0+2 3 1 0,3 0,1 4d 135 115 1 00 1 06 4e 132 109 103 5. 150 126 103 100 282 /4/8/+3 208 1 68 128 115 13 - +1 střední doba přežití ve dnech + 2 dávka v mg/kg/den, 34 D x 3 ip +3 počet přeživších/testovaných 50.den Předložený vynález zahrnuje ve svém rozsahu způsob vý-roby derivátů elsamycinu A podle vynálezu.

Dalším aspektem vynálezu jsou farmaceutické kompozice,které obsahují účinné, tumor iniiibující množství sloučeninyvzorce III nebo IV v kombinaci s inertním, farmaceuticky při-jatelným nosičem nebo ředidlem.

Podle dalšího aspektu vynálezu je nalezen způsob thera-peutického ošetřování živočichů, především savců, zasa- žených tumorem, který spočívá v podávání účinné, tumor inhibu-jící dávky antibiotika, sloučeniny vzorce III nebo IV. Příklady vhodných kompozic zahrnují pevné prostředkypro orální podávání, jako jsou tablety, tobolky, pastilky,pudry a granule, kapalné prostředky pro orální podávání, jakojsou roztoky, suspenze, sirupy a elixíry a přípravky pro par-enterální podávání, jako jsou sterilní roztoky, suspenze neboemulze. Tyto mohou být vyrobeny ve formě sterilních pevnýchprostředků, které se mohou rozpustit ve sterilní vodě, fysio-logickém roztoku nebo jiných sterilních injektovatelných me-diích bezprostředně před použitím.

Rozumí se, že vlastní výhodné dávkování derivátu elsa-mycinu A podle vynálezu se může měnit podle konkrétní použi-té sloučeniny, konkrétní formy prostředku, způsobu aplikacea místa, postiženého a choroby, která se léčí. Odborníkem voboru budou brány v potaz mnohé faktory, které modifikujípůsobení léčiva, jako například věk, tělesná hmotnost, pohla-ví, strava, doba podávání, rychlost exkrece, kondice pacienta,kombinace léků, reakční citlivost a obtížnost onemocnění. Po- 14 dávání se může provádět kontinuálně nebo periodicky v rámcimaximální tolerované dávky. Optimální aplikační rychlostipro daný soubor podmínek mohou být odborníkem v oboru snad-no zjištěny užitím testů ke stanovení konvenčního dávkování. Předložený vynález je ilustrován následujícími příkla-dy, které nepředstavují omezení rozsahu vynálezu. Příklady provedení vynálezu Příklad 1

Synthesa 2 -N-acetylelsamycinu Á /ja/

Směs 65,4 mg elsamycinu A a 0,1 ml acetanhydridu ve 2 mlsuchého methanolu se míchala při teplotě místnosti 1 hodinu.Přidalo se 1 ml vody a směs se odpařila ve vakuu za vznikužlutého oleje, který se vyčistil sloupcovou chromatografiína silikagelu, získalo se 70,5 mg /100 %/ žádaného produktu. T.t. 195 - 196 °C. ^^max /KBr/ Gm~1 342θ» 1725} 1690’ 1615’ 151θ’ 1380> 1255>1240, 1170, 1120. υνλ max /Me0H/ nm /£/ 236 /35200/, 265 /34500/, 333 /6050/,379 /8000/, 400 /13400/, 423 /14800/. 1H NMP /CDC13/<T0,88 /3H, s/, 1,38 /9H, m/, 2,68 /3H, s/, 3,32 /3H, s/, 5,36 /1H, d, J = 7 Hz/, 5,70/1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro ^35^37^14 x E^O: C 58,90, H 5,51, N 1,96nalezeno: C 58,59, H 5,36, N 2,10 15 Příklad 2

Synthesa 2**-N-/3-karboxypropionyl/elsamycinu A /3b/

Směs 65,4 mg elsamycinu A a 20 mg anhydridu kyselinyjantarové v 6,5 ml suchého dioxanu se míchala při teplotěmístnosti 3 hodiny. Při teplotě 5 °C se přidaly 3 ml metha-nolu-a směs se odpařila dosucha. Zbytek se přečistil prepa-rativní TLC, vyvolání se provádělo pomocí směsi C^ClgíMeOH:AcOH=80:20:2 a získalo se 75 mg žlutého prášku, který se roz-pustil ve zředěném vodném roztoku NaHCO^. Reakce roztoku seupravila na pH 3 a roztok se podrobil chromatografii na sloup·ci Diaion HP-20. Sloupec se následně eluoval vodou a 50 %vodným CH^CN. Frakce obsahující žádaný produkt se spojily,odpařily a lyofilizovaly. Získalo se 44 mg /55%/ sloučeniny 3.b ve formě žlutého prášku. T.t. 198 - 200 °C /rozkl./ IR^ v /KBr/ cm'1 3400, 1715, 1640, 1610, 1505.max UVλ v /MeOH/ nm /<£/ 236 /39700/, 265 /36900/, 334 /6010/, 380 /8350/, 400 /13800/, 423 /16000/. NMR /CDjOD/^2,83 /3H, s/, 3,30 /3H, s/, 5,52 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,83 /1H, d, J = 4 Hz/, 8,15 /1H, d, J = 8 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^yH^jNO^Na x 3/2 ^0: C 55,36, H 5,15, N 1,74nalezeno: C 55,40, H 4,87, N 1,92 Příklad 3

Synthesa 2**-N-/ftalimidoacetyl/elsamycinu A /3c/ K roztoku 65,5 mg elsamycinu λ ve 4 ml dioxanu se při- dalo 60,4 mg N-hydroxysukcinimidesterx^řtaloylglycinu a 20 mg NEt^. Směs se míchala při teplotě místnosti 2 dny a odpařilase ve vakuu. Zbytek se rozetřel s vodou za vzniku žluté pev-né látky, která se přečistila sloupcovou cnromatografií nasilikagelu. Získalo se 76 mg /90 %/ sloučeniny 3c· T.t. 187 - 189 °C. IRjmax /KBr/ cm~1 1770’ 1715’ 1250’ 1l40> 1110’ 1 065’ 775‘UV^max /Me0H/ nm /<5/ 220 /56700/, 235 /47600/, 266 /37000/, 333 /6050/, 379 /8480/, 399 /14200/, 422 /15700/. ]H NMR /CD3OD/<T 1,32 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,43 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,45 /3H, s/, 2,78 /3H, s/, 3,30 /3H, s/, 5,58 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,90 /1H, d, J = 4 Hz/, 7,08 /4H, s/.

Analýza vypočteno pro C43H40N2°16 x 2H20: C 58,90, H 5,06, N 3,19nalezeno: G 58,71, H 4,71, N 3,03 Příklad 4

Synthesa 2 **-N-glycylelsamycinu A /3d/ K roztoku 62 mg ftalimidového derivátu Jc v 0,5 ml EtOHse přidalo 1 0 ^ul 80 %ního vodného a směs se udržovala 6 hodin při teplotě místnosti, načež se zahustila ve vakuu.Zbytek se přečistil preparativní TLC, vyvolání se prvádělopomocí 2 % MeOH v CHCl^ a získalo se 52 mg pevné látky, kteráse dále čistila sloupcovou cnromatografií na HP-20, získalose 45 mg /86 %/ sloučeniny 3d. T.t. 203 - 210 °C /rozkl./. /K8r/ cm-1 1685, 1375, 1250, 1 150, 1110, 1070, 1 045, 775. /MeOH/ nm /ČV 236 /37000/, 266 /32900/, 332 /5540/, 379 /7530/, 400/12400/, 422 /13900/, 17 1τΗ NMR /CD^OD/tTl ,32 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,40 /3H, s/, 1,41/3H, d, J = 6 Hz/, 1,82 /2H, s/, 2,80 /3H,s/, 3,30 /'3H, s/, 5,46 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,81 /ΊΗ, d, J = 4 Hz/. EI-MS /ve svazku/: m/z: 710 /M+/, 494, 376, 334, 217. Příklad 5

Synthesa 2**-N-isopropylelsamycinu A /4a/

Směs 65,4 mg elsamycinu A, 0,1 ml acetonu a 30 mg NaBH^CNv 5 ml dioxanu se míchala při teplotě místnosti 17 hodin.Reskční směs se odpařila ve vakuu za vzniku žluté hmoty, kte-rá se rozpustila ve zředěném vodném roztoku HC1 a podrobilase eluci na sloupci Diaion HP-20 50 %ním methanolem. Frakceobsahující žádaný produkt se spojily a odpařily za vznikužlutého prášku, který se dále přečistil preparativní TLC zavzniku 19 mg /27 %/ titulní sloučeniny. T.t. 175 - 180 °C /rozkl./. IRt^max /KBr/ cm~1 343θ’ 169θ» l610> 15θ5> 137θ, 1250’ 1145»1110, 1040, 780. υνλ m-ax /MeOH/ nm /£/ 237 /44000/, 265 /39100/, 333 /6840/, 378 /9370/, 398 /14900/, 421 /17100/. 1H NMR /CDC13/<T0,28 /3H, d, J = 7 Hz/, 0,52 /3H, d, J = 7 Hz/, 1,33 /9H, m/, 2,64 /3H, s/, 3,41 /3H, s/, 5,48 /1H, d, J = 7 Hz/, 5,58 /1H, d, J = 4 Hz/, EI-MS /ve svazku/: m/z: 334, 202. Příklad 6

Synthesa 2**-N-/2,4-dimethoxybenzyl/elsamycinu A /4b/ K roztoku 65 mg elsamycinu A a 85 mg 2,4-dimetnoxybenz- 1 8 aldehydu v 5 ml 70 /ní no vodného roztoku CH^CN se přidalo 30mg NaBH^CN a směs se míchala při teplotě místnosti přes noc,zředila se 1N vodným roztokem HC1 a extrahovala pomocí CHCl^.Organický extrakt se promyl 1N vodným roztokem NH^OH, vysu-šil nad Na2S0^ a odpařil ve vakuu. Odparek se rozetřel s vod-ným t-BuOH a získalo se 44 mg /55 %/ titulní sloučeniny veformě krystalů. Další podíl /35 mg, 44 %/ se získal z mateč-ného louhu lyofilizací. T.t. 159 - 161 °C. IRu>max /KBr/ cm~1 3400> 1659> 16Ί5> 151θ» 137θ» 125°» 121°» 1105, 1075, 1045, 780. υνλ max /MeOH/ nm /£/ 235 /35300/, 267 /28900/, 336 /5080/, 401 /10900/, 424 /12300/. 1H NMR /CDCl3/<Tl ,33 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,40 /3H, d, J = 6 Hz/,1,44 /3H, s/, 2,78 /3H, s/, 3,06 /3H, s/, 3,39/3H, s/, 3,53 /3H, s/, 5,28 /1H, dd, J = 8 a2 Hz/, 5,52 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,64 /1H, d, J = 2 Hz/, 5,85 /1H, d, J = 4 Hz/, 6,32 /1H, d, J = 8 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO^ x 3/2H2O: C 60,71, H 5,82, N 1,69nalezeno: C 60,89, H 6,39, N 1,72 Příklad 7

Synthesa 2zz-N-/2,4-dimethoxybenzyl/-2zz-N-methylelsamycinu A /4c/

Ke směsi 119 mg N-benzylderivátu /4b/ a 47 mg 37 /níhovodného roztoku HCHO v 2,4 ml 70 /ního vodného roztoku CH^CNse přidalo 47 mg NaBHjCN a směs se míchala při teplotě míst-nosti 22 hodin. Reakční směs se zředila 1N HC1 a extrahovalapomocí CHCl^. Extrakt se promyl 1N NH^OH a odpařil za snížené- 19 - ho tlaku. Odparek se přečistil sloupcovou chromatografií nasilikagelu. Získalo se 105 mg /57 %/ monomethylderivátu 4c. T.t. 141 - 543 °C. IR U /KBr/ cm-1 3400, 1720,/sh/, 1690, 1505, 1375, 1250,1070, 1050, 780. υνλ /MeOH/ nm /<£/ 235 /42800/, 267 /33500/, 335 /5580/,max 381 /7700/, 400 /12100/, 422 /14100/. 1H NMR /CDCl3/<Tl,25 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,39 /3H, d, J = 6 Hz/, 1.40 /3H, s/, 2,28 /3H, s/, 2,58 /3H, s/, 3.40 /3H, s/, 3,47 /3H, s/, 3,60 /3H, s/, 5.40 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,60 /1H, d, J = 4 Hz/, 5,72 /1H, dd, J = 8 a 2 Hz/, 6,12 /1H, d. 2 Hz/, 6,73 /1H, d, J = 8 Hz/.

Analýzavypočteno pronalezeno:

C43H47N015 x H20: G

C 61 ,79, H 5,91, N 1,6861 ,75, H 5,94, N 2,40 Příklad 8

Synthesa 2**-N-methylelsamycinu A /4d/

Roztok 4c /100 mg/ ve směsi 3 ml 70 %ního vodného roz-toku THF a 0,8 ml 1N HC1 se hydrogenoval v přítomnosti 100 mg10 % Pd-C při teplotě místnosti 7 hodin za atmosferickéhotlaku. Katalyzátor se odfiltroval a filtrát se odpařil vevakuu. Odparek se přečistil sloupcovou chromatografií na si-likagelu, získalo se 52 mg /61 %/ titulní sloučeniny. T.t. 192 - 194 °C /rozkl./. IR ^max /KBr/ cm”1 3400» 1690> 1375’ 1250> 1°70’ 1 045> 78°*UVX _ /MeOH/ nm /ť=V 236 /34100/, 266 /29800/, 332 /5430/, 337 /6820/, 398 /10600/, 420 /11700/.1H NMR /CDCl-j + OD^OD/Č* 1,23 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,28 /3H, d, 20 J = 6 Hz/, 1,40 /3H, s/, 2,36 /3H, s/, 2,82 /3H, s/, 3,43 /3H, s/, 5,61 /1H,d, J = 8 Hz/, 5,92 /1H, d, J = 4 Hz/. SI-IVÍS: m/z 668 /M + H/+, 334, 174, 100. Příklad 9

Synthesa 2 -Ν,Ν-dimethylelsamycinu ά /4e/

Ke směsi 65,5 mg elsamycinu A a 85 yul 37 %ního vodnéhoroztoku HCHO ve 4 ml dioxanu se přidalo 30 mg NaSH^CN a směsse míchala při teplotě místnosti 3 hodiny. Reakční směs se od-pařila ve vakuu za vzniku pevné žluté látky, která se podrobi-la chromatografii na sloupci silikagelu. Frakce obsahující žá-daný produkt se spojily a zahustily dosucha. Odparek se pře-čistil pomocí preparativní TLC a získalo se 36,7 mg /54 %/dimethylderivátu £e. T.t. 180 - 185 °C. IR^max/K3r/ cm"1 1720, 1700, 1690, 1505, 1375, 1235, 1145, 775.UVλ /MeOH/ nm /£/ 236 /37200/, 266 /33600/, 333 /5650/,

1,39 /3H, s/, 2,05 /6H, s/, 2,72 /3H, s/, 3,36/3H, s/, 5,50 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,85 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C-, 5H39NOlnalezeno: x 2H2O: C 58,57, H 6,04, N 1,95C 58,32, H 5,79, N 2,07 Příklad 10

Synthesa 2 **-deamino-2* '-morfolinoelsamycinu A /4f/ - 21

Ke směsi 98,5 mg elsamycinu A a 2,2z-oxydiacetaldehydu,připraveného ozonolýzou 2,5-dihydrofuranu ve 4,5 ml CH^CN sepřidalo 47 mg NaBH^GN a směs se míchala při teplotě místnosti 1,5 hodiny. Organické rozpouštědlo se odpařilo ve vakuu a ' zbylý vodný roztok se podrooil chromatografii na sloup-ci HP-20. Frakce obsahující žádaný produkt se spojily a odpa-řily ve vakuu, získala se žlutá hmota, která se přečistila po-mocí preparativní TLC a získalo se 35,5 mg /33 // požadované-ho produktu. T.t. 162 - 186 °C /rozkl./ IP^max /KBr/cm"1 1720, 1690, 1375, 1255, 1235, 1150, 1120,1070, 780. UV^max /Me0H/ 31111 /e/ 236 /39400/, 265 /38800/, 334 /6440/,379 /8790/, 400 /15000/, 423 /16800/. NMR /CD3OD/5l,28 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,38 /3H, s/, 1,42 /3H, d, J = 6 Hz/, 2,80 /3K, s/, 3,3 /3H, s/, 5,38 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,78 /1H, d, J = 4 Hz/ EI-MS /ve svazku/: m/z 723 /M+/, 492, 389, 334, 230.

Analýza: vypočteno pro x 2^0: G 58,49, H 5,97, N 1,84 nalezeno: C 58,60, H 5,48, N 1,94 Příklad 11

Synthesa 2 -N-formimidoylelsamycin . A -hydrochloridu /5/ K suspenzi 131 mg elsamycinu A ve směsi CHCl^ a MeOHv poměru 9:1/4 ml/ se přidalo 66 mg hydrochloridu ethyl-formimidátu při 0 °C a směs se míchala při teplotě místnos-ti 39 hodin. K reakční směsi se přidalo 8 ml MeOH a 2 ml kyse-liny octové a čirý roztok se míchal při teplotě místnosti 0,5hodiny, načež se odpařil ve vakuu. Odparek se přečistil pre- parativní TLC a získalo se 52 mg /38 %/ sloučeniny 5.· T.t. 228 - 230 °C /rozkl./. IRpfflax /KBr/ cm"1 338°, 171θ> 163θ> 1δ1θ, 159θ> T 505. UVXmax /Me0H/ nm /£/ 237 /40900/, 266 /37400/, 333 /6640/, 379 /8930/, 399 /14500/, 422 /16400/.]H NMR /CCC13 + CD3OD/Í1,0 - 1,6 /9H, m/, 2,60 /3H, s/, 3,35 /3H, s/, 5,65 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,85/1H, brs/.

Analýza vypočteno pro C34H36N2°13 x 3íiC1: G 51,69, H 4,98, N 3,55nalezeno: C 51,57, H 4,74, N 3,52

Claims

23 11 c-í > Ό er QC NÁROKY

1. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce

kde R je alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, který je nesubstituova·ný nebo substituovaný karooxylovou skupinou, amino nebo ftalimidoskupinou, vyznačující se tím, že se elsamycin AN-acyluje anhydridem kyseliny jantarové. sloučeniny obecného vzorce
2. Způsob výroby 0 OH

CH3 0 NHCOR OH >ch3 0 3 - 24 - kde i? znamená alkyl s 1 až 3 atorny uhlíku, nesubstituovanýneoo suostitaovaný karboxylovou skupinou, aminoskupinou neboΓ ta1i m id o 3 ku pi no u, v y z n a č u j í c í se ti m, že se N-acyluje elsa.my-cin n aktivním esterem ftaloylglycinu, načež se odštěpí chrá-nící skupina pomocí hydrazinu.
3. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce

kde R a R1 znamenají nezávisle vodík, alkyl s 1 až 3 atomyuhlíku, aralkyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidinyl,s tou podmínkou, že R a R1 nemohou současně znamenat vodík'a pokud R a R1 tvoří společně s atomem dusíku, ke kterémujsou vázány kruh, může pýt morfolinový, piperidinový nebopyrrolidinový, vyznačující se tím, že elsamycin A reduk-tivně N-alkyluje reakcí s aldehydy nebo ketony. - 25 -
4. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce - ?C

kde R a R^ nezávisle znamenají vodík, alkyl s 1 až 3 atomyuhlíku, aralkyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidinyl, stou podmínkou, že R a R^ nemohou současně znamenat vodík apokud R a R1 tvoří společně s atomem dusíku, ke kterému jsouvázány kruh, může být morfolinový, piperidinový nebo pyrroli-dinový, vyznačující se tím,že se reduktivně N-alky-luje N-chráněný elsamycin A a následně se odštěpí chránícískupina.
5. Sloučenina připravená způsobem nárokovaným v kte-rémkoliv z nároků 1 nebo 2, kterou je 2',-N-/3-karboxypropionyl/elsamycin A, 2 -N-Zítalimidoacetyl/elsamycin A nebo 2 ''-N-glycylelsamycin A.
6. Sloučenina připravená způsobem nárokovaným v kte-rémkoliv z nároků 3 nebo 4, kterou je 2* -N-isopropylelsamycin A, 2 ' *-N-Z2,4-dimethoxybenzyl/elsamycin A, - 26 - 2 * *-N-/2,4-dimethoxybenzyl/-2 * '-N-methylelsamycin A,2 -N-methylelsamycin A, 2 "-Ν,Ν-dimethylelsamycin A, z z z z 2 -deamino-2 -morfolinoelsamycin A nebo 2 "-N-formimidoylelsamyein A -hydrochlorid.
7. Způsob výroby hydrochloridu 2'-N-formimidoylelsa- mycinu A, vyznačující. se tím, že se nechá reagovatelsamycin A s ethylformimidáthydrochloridem.
8. Způsob přípravy farmaceutického přípravku,vyznačující se tím, že se smísí sloučeninapodle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 s jedním nebo vícefarmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly.
9. Sloučenina nárokovaná v kterémkoliv z nároků1 až 6 pro použití jako protinádorové činidlo. Assoairrr» cJUTz. Petr Kalii?11=04 Pra. ' 1,Ži'..-u. Czecňcstovaka 'CES i