CN86103448B - 由原生质体再生稻株的方法 - Google Patents
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Abstract
由原生质体生成完全的水稻植株的方法。为得到此原生质体,由稻种的坯、盾片或坯根衍生出愈伤组织,在液体培养基中培养愈伤组织以形成易放出原生质体的细胞团。用原生质体释放酶溶液处理细胞团以得到原生质体。然后将原生质体培养成愈伤组织,再在分化培养基中培养此愈伤组织,再生出整株稻。
Description
本发明涉及一种用所谓原生质体法形成稻株的方法。更确切地说,本发明涉及一种由原生质体衍生出愈伤组织,再由它再生出稻株的方法,原生质体则来自于由稻种的胚、盾片或胚根产生的愈伤组织。
原生质体是植物、细菌、真菌之类的除去了细胞壁的细胞。因为原生质体没有细胞壁,故易于经受人工处理,例如细胞融合、基因控制、以及人为的体细胞突变等。于是,如果能由所处理的原生质体再生出一个完整的植株,则可能获得一种植物,它具有野生植物所没有的优点。作为发展这种所谓的原生质体法的第一步,对于所要研究的每个具体的有机体,都必须建立能够由原生质体再生出完整植株的方法。
对于双子叶植物,例如烟草,已知有一些方法可用来从原生质体中再生出完整的植株。在这方面常用的方法包括将原生质体埋置在半固态的琼脂培养基中、悬在液体培养基中、或利用喂养细胞培养等各种培养原生质体的方法。但是已经发现这些方法对于水稻原生质体的培养是无效的,如果用上述常规方法之一进行水稻原生质体的培养,原生质体不是死掉就是不能生长。
关于水稻原生物体的培养技术已有报导,由缺乏硝酸还原酶的细胞得到的原生质体衍生出愈伤组织(Wakasa et al.,J.plant physiol.117:pp.223-231,1984)。还有报导说,由花粉的愈伤组织得到的原生质体衍生出愈伤组织,从它产生出苗(ohno et al.,Japanese Journal of Breeding35:pp.54-55,1985)。但是还未曾有从水稻原生质体中再生出完整稻株的报导。
另一方面,很多研究者报导过,由水稻的培养细胞再生出完整植株(Nishi et al.,Nature 219:pp.508-509,1968)。但是,这些方法没有利用原生质体。另外还发现,用这些方法由具有高度分化能力的细胞很难得到原生质体。而且原生质体难以培养。
于是,如果建立起一种能由原生质体再生出完整水稻植株的方法,关于创造具有优异性能的水稻品种的研究就会前进一大步。
因此,本发明的目的是提供一种能够由原生质体再生出完整稻株[稻属作物,例如亚洲稻(Oryza sativa)、非洲稻(Oryza glaberrima)、多年生稻(Oryza perennis)等等]的方法。
在本发明的方法中,由水稻种子的胚、盾片或胚根中衍生出第一个愈伤组织,然后将其在液体培养基中培养,形成易于释放出原生质的细胞团。此细胞团用释放原生质的酶溶液处理以形成原生质体。将原生质体培养成第二个愈伤组织,在分化培养基中培养,再生出完整的植株。
利用本发明,第一次由原生质体再生出一个完整的稻株(属于稻属,例如亚洲稻、非洲稻、多年生稻等等)。
在本发明的方法中的第一步,由水稻种子的胚、盾片和胚根衍生出具有高度分化能力的愈伤组织,这可以用在琼脂培养基中培养得自水稻种子的胚、盾片或胚根的细胞来实现。培养基可以是MS培养基(Murashige和Skoog,physiol.plant.15,pp.473-479,(1962)),B5培养基[Gamborg et al.,Exp.Cell Res.50,pp.151-158,(1968)],或N6培养基(Chu et al.Scientia Scinica 18 pp.659-663),R2培养基(Ohira et al.,plant Cell physiol.14,pp.1113-1121)。每种培养基含有:(1)0.01-1%(重量)的酵母抽提取,0.01-1%(重量)的麦芽汁,0.01-1%(重量)的酪蛋白水解物,或5-20%(重量)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-二氯苯氧基乙酸(以后称作2,4-D),它是一种植物激素,和(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。培养温度可以从约20℃至约30℃,最好是26℃左右。可以采用继代培养的方式进行培养,由继代培养中得到愈伤组织。例如,可以每四周一次进行继代培养,直至得到愈伤组织。
这样得到的愈伤组织具有高度分化能力,但是难以从这些愈伤组织直接得到原生质体。于是在本发明中,先从愈伤组织得到小的细胞团,再由它们得到原生质。这些细胞团仍具有高的分化能力,但易于形成原生质体。
因此,本发明的第二步是由上述的第一步得到的愈伤组织形成一个细胞团,它仍保持着高度分化能力,但容易释放出原生质体。这一步可以通过在MS、N6或R2的液体培养基中培养愈伤组织来进行。每种培养基中含有:(1)0.1-1%(重量)的酵母抽提物,0.1-1(重量)的麦芽汁,0.1-1%(重量)的酪蛋白水解物,或5-20%(重量)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D,和(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。培养基中细胞的群体密度最好是0.3到3%(重量)。培养温度可为约20至30℃,可以继代培养的方式进行培养,由继代培养中得到细胞团。继代培养可以一周一次地进行。还可以采用转动培养的方式进行培养的方式进行培养,此时液体培养基的容器在某一转速,例如70转/分下水平地旋转。通过这种培养,可以得到直径为1到3mm的、仍保持高度分化能力的细胞团。
本发明的第三步是从第二步得到的细胞团中得出原生质体。这可以通过用形成原生质体的酶溶液处理细胞团来完成。举例来说,此溶液可以含有0.1-10%、最好是1-5%(重量)的纤维素酶,0.1-5%,最好是0.5-2%(重量)的浸解酶,0-5%、最好是0.1-1%(重量)的氯化钙,以及0-5%、最好是0.1-1%(重量)的葡聚糖硫酸酯的钾盐。此溶液还可以含有3-15%(重量)的甘露糖醇作为调节渗透作用的渗压剂。溶液的pH可为5.5,细胞团可在摇动下于酶溶液中在20-30℃孵化四至八小时。经过这样处理,细胞团可释放出大量的原生质体。将含有原生质体的酶溶液过滤以除去未消化的细胞团,在例如50克下离心滤液,收集原生质体。
本发明的第四步是培养这样得到的原生质体以产生愈伤组织。已经知道当愈伤组织连续地继代培养时其分化能力急剧下降。如果愈伤组织的分化能力低,则不能由它得到完整植株,因此,在这一步维持所要培养的细胞的高分化能力很重要。根据本发明,这可以用在N6、B5或R2培养基的条件培养基中培养原生质体来实现,每一种培养基中含有:(1)0.1-1%(重量)的酵母抽提物,0.1-1%(重量)的麦芽汁,0.1-1%(重量)的酪蛋白水解物,或5-20%(重量)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D,和(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。在上述第二步中使用的培养基的滤液可以方便地用作条件培养基。这时可以在滤液中补充新鲜的培养基。另外,本发明人曾发现,不用常规的渗压剂、例如甘露糖醇或它与蔗糖的混合物,而用蔗糖来调节培养基的渗透作用,可以促进原生质的分裂。于是,条件培养基中可以含有例如0.4M的蔗糖。培养基的pH最好是用盐酸调到5.2或更低。条件培养基中最好补加2,4-D以促进原生质体的增殖能力。另外,培养基的容器最好涂上亲水支持体,例如半固态的琼脂、藻酸、明胶等等,支持体中含有渗压剂,培养基置于亲水支持体层之上,其厚度为100-400微米、最好是200-300微米。与将介质放在未涂琼脂的容器中的情形相比,这样作的结果使细胞更多地与空气或氧接触。这是因为,若无琼脂涂层,培养基由于自身的表面张力而形成球形水滴,故每单位体积的介质与空气的接触面积减小;而当培养基置于琼脂层上时,琼脂层降低了培养基的表面张力,从而得到了200-300微米厚的培养基层,它具有较大的空气接触面积。本发明人发现,培养的需养条件对原生质生长很重要。琼脂层的厚度应为1毫米或更小。最好是200微米或更薄。随着培养的进行,培养基可能被补加的含有较低浓度渗压剂(例如蔗糖)的新鲜培养基所稀释。培养可以在大约20°-30℃的温度下进行,最好是27℃左右,直到得到愈伤组织。原生质体的群体密度应为104-107原生质体/毫升,最好是105-5×106原生质体/毫升。
在本发明的第五步中,通过在分化培养基中培养第四步中得到的愈伤组织的方法,再生出完整的水稻植株。这一步用的分化培养基可以是MS培养基,它含有;(1)0.1-1%(重量)的酵母抽提物,0.1-1%(重量)的麦芽汁,0.1-1%(重量)的酪蛋白水解物,或5-20%(重量)的马铃薯抽提物,和(2)0-10mg/l的苄基腺嘌呤或0-10mg/l的激动素,培养温度可为约20至30℃。在分化培养基中培养愈伤组织之前,最好先在生长培养基中培养。生长培养基可以是R2、N6或MS培养基,每一种里含有:(1)0.1-1%(重量)的酵母抽提物,0.1-1%(重量)的麦芽汁,0.1-1%(重量)的酪蛋白水解物,或5-20%(重量)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D,以及(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。培养温度可为约20至30℃。
通过下列例证将更易了解本发明。应该注意,下列例证仅作为说明用,本发明的应用范围决不限于此。
例1-Ⅰ具有高度分化能力的愈伤组织的诱导及其继代培养
水稻种(亚洲稻Oryza sativa栽培品系,品种:Nihonbare)在70%的乙醇水溶液中浸渍1分钟,而后在次氯酸钠水溶液[氯含量5%(重量)]中浸15分钟。用已灭菌的水洗种子三次,将种子种在N6琼脂培养基上,培养基中含有0.3%(重量)的酪蛋白水解物,2ppm的2,4-D和1ppm的苄基腺嘌呤。在26℃培养三周之后,由种子的盾片形成了愈伤组织。将这些愈伤组织在同样的条件下每四周继代培养一次。
例1-Ⅱ具有高度分化能力的愈伤组织的诱导及继代培养
将未成熟的水稻种(亚洲稻Oryza Sativa栽培品系,品种:Sasanishiki)在70%乙醇水溶液中浸泡1分钟以消毒其外表面,然后用已灭菌的水洗。由具外果壳的种子中取出未成熟的胚,将其种在含有0.3%(重量)酵母抽提物和2ppm2,4-D的MS琼脂培养基上。在26℃培养三周后生成愈伤组织。这些愈伤组织在同样条件下每四周一次进行继代培养。
例1-Ⅲ具有高度分化能力的愈伤组织的诱导与继代培养
将灭过菌的水稻(Oryza sativa栽培品系,品种:Koshihikari)种在由琼脂构成的培养基上,一周后,将长出的胚芽割下种在含有2ppm2,4-D的B5培养基上。在26℃下培养三周后生成了愈伤组织。这些愈伤组织在同样条件下每四周一次进行继代培养。
例2衍生出的愈伤组织在液体在培养基中的培养
将由例1-Ⅰ、1-Ⅱ。和1-Ⅲ中继代培养得到的愈伤组织转移到表1所列的液体培养基中进行继代培养。取30ml的各种液体培养基置于100ml瓶中,细胞在这些培养基中培养,其间在26℃下以70转/分的速度转动该瓶。每周进行一次继代培养。培养基中的细胞含量在培养开始时约为0.3%(重量),在结束时约为3%(重量)。
表1 液体培养基的成分
基础培养基 | 有其添加物 | 2,4-D | 激动素 | BA |
MS | CH0.1%(重量) | 2.0mg/l | 0 | 0 |
N6 | YE0.3%(重量) | 2.0mg/l | 0 | 1.0mg/l |
R2 | PE10.0%(重量) | 5.0mg/l | 2.0mg/l | 0 |
R2 | CH0.2%(重量) | 1.0mg/l | 1.0mg/l | 0 |
CH:酪蛋白水解物
YE:酵母抽提物
PE:马铃薯抽提物
BA:苄基腺嘌呤
例3 原生质体的分离
在继代培养后培养了七天的细胞用作为这一步的起始物。释放原生质的酶溶液中含有4.0%(重量)的纤维素酶(Cellulase)Onozuka RS(Yakult药厂有商品供应),1.0%(重量)的浸解酶(Macerozyme)R-10(Yakult药厂有商品供应),0.5%(重量)的氯化钙,0.5%(重量)的葡聚糖硫酸酯钾盐以及0.4M的甘露糖醇。在27℃下轻轻摇荡含有细胞的溶液6小时以得到原生质体。然后将含原生质体的酶溶液过滤,以除去未消化的细胞团。滤液在50g下离心5分钟使原生质体沉淀。沉下来的原生质体用0.4M的葡萄糖水溶液洗三次,在下一步培养。
例4 原生质体培养基的配方(条件培养基)
将上述例2中的培养基离心以除去细胞,在10ml培养物滤液中加入50μl 100ppm的2,4-D溶液和0.4M蔗糖,溶液的pH用0.1N的盐酸调至4.5。在此培养基中,按其体积的1/4加入同样的但是新鲜的基础培养基(例如,在例2中若用R2培养基,则是R2培养基),其中含有0.4M的蔗糖。
例5原生质体的培养
将200ml上述配方的条件培养基放在直径35mm的塑料的陪替氏培养皿中,培养皿底面上涂有一薄层琼脂。再加入30μl含有106原生质/ml的原生质体悬浮液,使混合物均匀铺展。在培养皿封口之后,在27℃下于暗处进行培养。
大约一周之后,观察到第一次分裂,大约一个月后形成了直径约100μm的小细胞团(见表2)。这时往培养物中加入200μl的同样的新鲜基础培养基,但它含的蔗糖较少,为3%(重量)。再过两周,重复同样的操作。在原生质起始培养的两个月之后,形成了直径1mm的小的愈伤组织。
表2
在培养一周之后,每个陪替氏培养皿中小细胞团的数目
基础 培养基 | 有机添加物 | 2,4-D | 激动素 | BA 每个培养 皿中小细 胞团的数 目 |
N6 N6 B5 R2 R2 MS | CH0.3%(重量) YE0.3%(重量) ME0.3%(重量) PE10.0%(重量) YE0.2%(重量) YE0.3%(重量) | 2.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 5.0mg/l 1.0mg/l 2.0mg/l | 2.0mg/l 1.0mg/l | 1.0mg/l 1500 |
1500 | ||||
1.0mg/l 1200 | ||||
500 | ||||
1000 | ||||
300 | ||||
MS N6 B5 R2 | 2.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 5.0mg/l | 2.0mg/l | 0 | |
0 | ||||
1.0mg/l 0 | ||||
30 |
例6 愈伤组织的生长
将由原生质体衍生出的愈伤组织转移到愈伤组织生长培养基中,使愈伤组织在26℃下生长约二周。生长培养基(琼脂)的成分及愈伤组织的生长速度如表3所示。
表3 生长培养基的成分与生长速度
培养基 编号 | 基础 培养基 | 有机添加物 | 2,4-D | 激动素 | BA | *生长 速度 |
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 | N6 N6 B5 R2 R2 MS MS N6 B5 R2 | CH0.3%(重量) YE0.3%(重量) ME0.5%(重量) PE10.0%(重量) YE0.2%(重量) YE0.3%(重量) | 2.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 5.0mg/l 1.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 2.0mg/l 5.0mg/l | 2.0mg/l 1.0mg/l | 1.0mg/l 1.0mg/l 1.0mg/l 2.0mg/l | ++ ++ + ± ++ +++ ++ ++ + + |
*+++很高 ++高 +中等 ±几乎不生长
例7完整植株的再生
长在生长培养基上的愈伤组织于26℃下在表4所列的分化培养基(琼脂)上分化成完整的植株。在移载一周以后,形成了绿色斑点,移栽一个月以后再生出小时的完整植株。将它移载到盛在大试管里的琼脂上,得到了中等大小的完整植株。
表4 分化培养基的成分与完整植株的再生
分化培养基 | |||||
基础 培养基 | 有机添加物 | 激动素 | BA | GM* | 再分化** |
MS | YE0.3%(重量) | 5mg/l | 1 | 好 | |
MS | YE0.3%(重量) | 5mg/l | 8 | 未观察到 | |
MS | ME0.5%(重量) | 5mg/l | 1 | 观察到 | |
MS | ME0.5%(重量) | 5mg/l | 1 | 观察到 | |
MS | PE10.0%(重量) | 5mg/l | 2 | 观察到 | |
MS | PE10.0%(重量) | 5mg/l | 8 | 未观察到 | |
MS | 5mg/l | 3 | 观察到 | ||
MS | 5mg/l | 9 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 6 | 观察到 | ||
MS | 5mg/l | 7 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 1 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 8 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 1 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 8mg/l | 8 | 未观察到 | |
MS | 5mg/l | 3 | 未观察到 | ||
MS | 5mg/l | 9 | 未观察到 | ||
N6 | CH0.3%(重量) | 5mg/l | 1 | 未观察到 | |
B5 | YE0.3%(重量) | 5mg/l | 1 | 未观察到 | |
R2 | ME0.5%(重量) | 5mg/l | 1 | 未观察到 |
*GM:生长培养基(栏中的编号与表3中培养基编号相同)
**再分化成完整植株
Claims (12)
1、一种形成水稻植株的方法,其特征在于包括下述步骤:
第一步是在MS、B5,N6或R2琼脂培养基中培养水稻种子的胚、盾片或胚根,再由水稻种子的胚、盾片或胚根衍生出第一个愈伤组织,而其中每种培养基中含有(1)0.01-1%(重)的酵母抽提物,0.01-1%(重)的麦芽汁,0.01-1%(重)的酪蛋白水解物,或5-20%(重)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D,以及(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤0-5mg/l的激动素,
第二步是将第一个愈伤组织在R2,N6或MS培养基中培养成易释放出原生质体的细胞团,而其中每种培养基中含有(1)0.1-1%(重)的酵母抽提物,0.1-1%(重)的麦芽汁,0.1-1%(重)的酪蛋白水解物,或5-20%(重)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D以及(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素,培养基中的细胞浓度为0.3-3%(重),
第三步是用释放原生质体的酶溶液处理细胞团以释放出原生质体,而所述的酶溶液含有0.1-10%(重)的纤维素酶,0.1-5%(重)的浸解酶,0-5%(重)的氯化钙,0-5%(重)的葡聚糖硫酸酯的钾盐,以及3-15%(重)甘露糖醇,
第四步是在条件培养基中培养所述的原生质体,以培养出第二个愈伤组织,而所述的条件培养基是由第二步所用的培养基得到,并且放在含有渗压剂的亲水支持体层上,亲水支持体层上条件培养基的厚度为200-300μm,
第五步是将所述的第二个愈伤组织在分化培养基中培养,以再生出水稻植株,而所述的培养基是MS培养基,它含有0.1-1%(重)的酵母抽提物,0.1-1%(重)的麦芽汁,0.1-1%(重)的酪蛋白水解物或5-20%(重)的马铃薯抽提物,(2)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。
2、根据权利要求1所述的方法,其中以继代培养方式培养胚、盾片或胚根。
3、根据权利要求1所述的方法,其中以继代培养的方式培养第一个愈伤组织。
4、根据权利要求1所述的方法,其中条件培养基的渗透作用用蔗糖调节,pH不大于5.2。
5、根据权利要求1所述的方法,其中亲水支持体采用琼脂、藻酸或明胶。
6、根据权利要求1所述的方法,其中水稻是稻(Oryza sativa)。
7、根据权利要求1所述的方法,其中第五步骤还包括在第二个愈伤组织在分化培养基中培养之前,先将它放在MS、B5、N6或R2培养基中生长,上述各培养基含有(1)0.1-1%(重)的酵母抽提物,0.1-1%(重)的麦芽汁,0.1-1%(重)的酪蛋白水解物,或5-20%(重)的马铃薯抽提物,(2)0.1-10mg/l的2,4-D,以及(3)0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。
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Families Citing this family (14)
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JPS61265087A (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-22 | Mitsui Toatsu Chem Inc | プロトプラストの培養方法 |
JPS61265086A (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-22 | Mitsui Toatsu Chem Inc | プロトプラストの培養法 |
JPH062054B2 (ja) * | 1985-09-19 | 1994-01-12 | 農林水産省農業生物資源研究所長 | プロトプラスト培養によるイネ科穀物の育種方法 |
US5250433A (en) * | 1986-09-20 | 1993-10-05 | Mitsubishi Kasei Corporation | Gramineous hybrid plants and process for preparing them |
US5360725A (en) * | 1988-02-02 | 1994-11-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Method of producing rice cybrid cells |
JPH01196239A (ja) * | 1988-02-02 | 1989-08-08 | Mitsui Toatsu Chem Inc | イネのサイブリッド植物の作出方法 |
WO1990004027A1 (en) * | 1988-10-07 | 1990-04-19 | Dna Plant Technology Corporation | Regeneration of indica-type rice |
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JPH03247273A (ja) * | 1990-01-17 | 1991-11-05 | Shiseido Co Ltd | イリス属植物のプロトプラストならびにその単離および培養方法 |
JP5794610B2 (ja) * | 2010-02-01 | 2015-10-14 | 国立大学法人金沢大学 | 赤かび病抵抗性植物の作製方法およびその利用 |
JP2019129705A (ja) * | 2016-03-31 | 2019-08-08 | 日本たばこ産業株式会社 | 植物に物質を導入する方法 |
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