CN207904240U - 一种外泌体核酸提取试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种外泌体核酸提取试剂盒，其包括盒体和盖体，所述盖体盖合于所述盒体后形成一封闭的空间，所述盒体内包括：第一容器，所述第一容器被设置用于盛放蛋白酶混合液；第二容器，所述第二容器被设置用于盛放裂解液；第三容器，所述第三容器被设置用于盛放磁珠；第四容器，所述第四容器被设置用于盛放第一洗液；第五容器，所述第五容器被设置用于盛放第二洗液；和，第六容器，所述第六容器被设置用于盛放洗脱液。本实用新型可以快速高效地从血清、血浆、细胞培养上清中提取外泌体核酸，不仅操作简单而且各试剂分布有序，能够有效避免试剂添加错误。
Description
技术领域
本实用新型涉及生物实验器材领域，尤其涉及一种外泌体核酸提取试剂盒。
背景技术
外泌体是一种小膜泡(30-150nm)，其包含复杂的RNA和蛋白质。外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，直到1987年Johnstone将其命名为"exosome"，即为外泌体。在正常及病理状态下，多种细胞均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外。
几乎所有培养的细胞均可分泌外泌体，并且体液中本身就存在许多外泌体，例如血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中均含有大量的外泌体。而不同组织来源的外泌体在组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。肿瘤来源或肿瘤相关的外泌体是调控肿瘤发生发展的重要机制。对肿瘤外泌体的分析和检测可以辅助肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后分析。因此，外泌体及其修饰加工产物还可以作为基因或药物的有效载体，用于肿瘤治疗。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
现有技术中，外泌体纯化方法一般为超离法，采用低速离心、高速离心交替进行，即可分离获得大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单、获得的囊泡数量较多因而应用比较广泛，但整个操作过程一般要20小时以上，效率低下且回收率不稳定；另外，由于操作步骤复杂试剂种类多样很容易出现错误添加试剂的情况。
实用新型内容
本实用新型的目的是解决现有的外泌体纯化过程中操作繁琐、效率低下且添加试剂顺序容易出错等问题，进而提供了一种外泌体核酸提取试剂盒。
本实用新型提供的一种外泌体核酸提取试剂盒，所述外泌体核酸提取试剂盒包括盒体和盖体，所述盖体盖合于所述盒体后形成一封闭的空间；所述盒体内包括：第一容器，所述第一容器被设置用于盛放蛋白酶混合液；第二容器，所述第二容器被设置用于盛放裂解液；第三容器，所述第三容器被设置用于盛放磁珠；第四容器，所述第四容器被设置用于盛放第一洗液；第五容器，所述第五容器被设置用于盛放第二洗液；和，第六容器，所述第六容器被设置用于盛放洗脱液。
在另一优选例中，所述盒体内还包括第七容器，所述第七容器被设置用于盛放异丙醇。
在另一优选例中，所述盒体内还包括第八容器，所述第八容器被设置用于盛放无水乙醇。
在另一优选例中，所述盒体内还包括第九容器，所述第九容器被设置用于盛放体积分数为80％的乙醇水溶液。
在另一优选例中，所述盖体的面向所述盒体的一侧设有海绵衬垫。
在另一优选例中，所述海绵衬垫上设有容纳槽，所述容纳槽被设置用于容纳所述外泌体核酸提取试剂盒的使用说明书。
在另一优选例中，所述海绵衬垫上还设有容纳孔，所述容纳孔被设置用于容纳1.5ml或2ml离心管。
在另一优选例中，所述容纳孔的数量为5-20个；优选为15个。
在另一优选例中，所述盒体包括上层容纳腔和下层容纳腔，所述第一容器、所述第二容器、和所述第三容器位于所述上层容纳腔内；所述第四容器、所述第五容器、和所述第六容器位于所述下层容纳腔内。
在另一优选例中，所述上层容纳腔包括第一腔体、和第二腔体，其中所述第一容器和所述第二容器位于所述第一腔体内、所述第三容器、和所述第七容器位于所述第二腔体内。
在另一优选例中，所述第一腔体被第一密封膜密封，所述第一密封模的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述蛋白酶混合液和所述裂解液的使用说明；所述第一密封模还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
在另一优选例中，所述第二腔体被第二密封膜密封，所述第二密封模的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述磁珠的使用说明；所述第二密封模还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
在另一优选例中，所述下层容纳腔包括第三腔体、第四腔体、和第五腔体，所述第四容器位于所述第三腔体内、所述第五容器位于所述第四腔体内、所述第六容器位于所述第五腔体内。
在另一优选例中，所述第三腔体被第三密封膜密封，所述第三密封模的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第一洗液的使用说明；所述第三密封模还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
在另一优选例中，所述第四腔体被第四密封膜密封，所述第四密封模的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第二洗液的使用说明；所述第四密封模还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
在另一优选例中，所述第五腔体被第五密封膜密封，所述第五密封模的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述洗脱液的使用说明；所述第五密封模还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
技术效果
本实用新型可以快速高效地从血清、血浆、细胞培养上清中提取外泌体核酸，不仅操作简单而且各试剂分布有序，能够有效避免试剂添加错误。
以下将结合附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本实用新型的目的、特征和效果。
附图说明
图1为本实用新型优选实施例的整体结构示意图；
图2为本实用新型优选实施例的L型的下层容纳腔的结构示意图；
图3为本实用新型优选实施例的上层容纳腔的结构示意图；
图4为本实用新型优选实施例的盖体结构示意图；
图5为本实用新型优选实施例的密封膜结构示意图；
图6为本实用新型另一优选实施例的整体结构示意图；
图7为本实用新型另一优选实施例的上层容纳腔的结构示意图。
具体实施方式
实施例1
如图1、图2、图3、图4所示，本实施例提供的外泌体核酸提取试剂盒，包括盒体1和盖体2，所述盖体2盖合于所述盒体1后形成一封闭的空间；所述盒体1内包括：第一容器11，所述第一容器11被设置用于盛放蛋白酶混合液；第二容器12，所述第二容器12被设置用于盛放裂解液；第三容器13，所述第三容器13被设置用于盛放磁珠；第四容器14，所述第四容器14被设置用于盛放第一洗液；第五容器15，所述第五容器15被设置用于盛放第二洗液；第六容器16，所述第六容器16被设置用于盛放洗脱液。盒体1内还包括第七容器17，所述第七容器17被设置用于盛放异丙醇；第八容器18，所述第八容器18被设置用于盛放无水乙醇；第九容器19，所述第九容器19被设置用于盛放体积分数为80％的乙醇水溶液。如无特殊说明，本实施例中的各试剂均为本领域的常规试剂，其中第一洗液为Tris-EDTA缓冲液(含乙醇体积分数为75％)、第二洗液为PBS缓冲液(含乙醇体积分数为75％)。
如图4所示，所述盖体2的面向所述盒体1的一侧设有海绵衬垫21。所述海绵衬垫21上设有容纳槽211，所述容纳槽211被设置用于容纳所述外泌体核酸提取试剂盒的使用说明书。所述海绵衬垫21上还设有容纳孔212，所述容纳孔212被设置用于容纳1.5ml或2ml离心管。所述容纳孔的数量可以为5-20个；优选为18个。
如图1所示，所述盒体1包括上层容纳腔3和下层容纳腔4，所述第一容器11、所述第二容器12、和所述第三容器13位于所述上层容纳腔3内；所述第四容器14、所述第五容器15、和所述第六容器16位于所述下层容纳腔4内。本实施例中，为了在试剂盒中容纳第八容器18和第九容器19，将下层容纳腔4设置为了L型。
如图3所示，所述上层容纳腔3包括第一腔体31、和第二腔体32，其中所述第一容器11和所述第二容器12位于所述第一腔体31内；所述第三容器13、和所述第七容器17位于所述第二腔体32内。其中，所述第一腔体31被第一密封膜311密封。如图5所示，所述第一密封模311的外表面设有使用信息记载区3111，使用信息记载区3111记载有对所述蛋白酶混合液和所述裂解液的使用说明；所述第一密封模311还包括一手撕部3112，所述手撕部3112的内表面设有粘贴部。所述粘贴部包括涂布于手撕部3112底面的不干胶胶粘剂，以及贴敷于胶粘剂的涂硅保护纸。
类似地，所述第二腔体32被第二密封膜321密封，所述第二密封模321的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述磁珠的使用说明；所述第二密封模321还包括一手撕部3212，所述手撕部3212的内表面设有粘贴部。
如图2所示，L型的下层容纳腔4的平台部包括第三腔体41、第四腔体42、和第五腔体43，所述第四容器14位于所述第三腔体41内、所述第五容器15位于所述第四腔体42内、所述第六容器16位于所述第五腔体43内。
与所述第一腔体31类似，所述第三腔体41被第三密封膜411密封，所述第三密封模411的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第一洗液的使用说明；所述第三密封模411还包括一手撕部4112，所述手撕部的内表面设有粘贴部。所述第四腔体42被第四密封膜421密封，所述第四密封模421的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第二洗液的使用说明；所述第四密封模还包括一手撕部4212，所述手撕部的内表面设有粘贴部。所述第五腔体43被第五密封膜431密封，所述第五密封模431的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述洗脱液的使用说明；所述第五密封模431还包括一手撕部4312，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
L型的下层容纳腔4的竖直部包括第六腔体44、和第七腔体45，所述第八容器18位于所述第六腔体44内、所述第九容器19位于所述第七腔体45内。所述第六腔体44被第六密封膜441密封，所述第六密封模441的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述无水乙醇的使用说明；所述第六密封模441还包括一手撕部4412，所述手撕部的内表面设有粘贴部。所述第七腔体45被第七密封膜451密封，所述第七密封模451的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述体积分数为80％的乙醇水溶液的使用说明；所述第七密封模451还包括一手撕部4512，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
本实施例中，第六密封模441的外表面记载信息如下：
使用前，使用等体积的无水乙醇分别稀释第一洗液、和第二洗液。
第一密封模311的外表面记载信息如下：
步骤1.取待检外泌体样本400μL，依次加入20μL蛋白酶混合液、200μL裂解液，漩涡振荡10s,56℃孵育10分钟。
第二密封模321的外表面记载信息如下：
步骤2.然后加入300μL异丙醇和2μL磁珠，漩涡振荡10s，上下颠倒离心管10次，使管内磁珠分布均匀；静置离心管10分钟，每隔两分钟上下颠倒离心管5次，使管内磁珠分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体。
第三密封膜411的外表面记载信息如下：
步骤3.加入550μL第一洗液，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体。
第四密封模421的外表面记载信息如下：
步骤4.加入550μL第二洗液，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体。
第七密封模451的外表面记载信息如下：
步骤5.加入550μl的80％乙醇，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体；将离心管置于离心机上，8000g离心30s，用移液器吸去管内残余液体；打开管盖，室温干燥2分钟。
第五密封膜431的外表面记载信息如下：
步骤6.加入40μL洗脱液，用移液器枪头打散管壁磁珠，直至其分布均匀，56℃孵育3分钟；将离心管置于离心机上，10000g离心1min，吸取上清液至一个干净的无核酶离心管中，此即为纯化后的核酸溶液。
上述密封膜，在开始使用时按照步骤自手撕部揭开，即可使用各试剂。密封膜揭开后，可以撕掉粘贴部的涂硅保护纸，将各密封膜粘贴于实验台上，方便操作时观看。本实用新型按照实验步骤对各试剂的位置进行了科学的设置，并且通过设置密封膜指示实验人员的操作，因此，极大的降低了实验步骤出错的概率。
应用例1
实施例1的外泌体核酸提取试剂盒的使用步骤如下：
使用前，使用等体积的无水乙醇分别稀释第一洗液、和第二洗液。
步骤1.取待检外泌体样本400μL，依次加入20μL蛋白酶混合液、200μL裂解液，漩涡振荡10s,56℃孵育10分钟；
步骤2.然后加入300μL异丙醇和2μL磁珠，漩涡振荡10s，上下颠倒离心管10次，使管内磁珠分布均匀；静置离心管10分钟，每隔两分钟上下颠倒离心管5次，使管内磁珠分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体；
步骤3.加入550μL第一洗液，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体；
步骤4.加入550μL第二洗液，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体；
步骤5.加入550μl的80％乙醇，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡10s，直至其分布均匀；将离心管置于离心机上，8000g离心1min，用移液器吸去管内液体；将离心管置于离心机上，8000g离心30s，用移液器吸去管内残余液体；打开管盖，室温干燥2分钟；
步骤6.加入40μL洗脱液，用移液器枪头打散管壁磁珠，直至其分布均匀，56℃孵育3分钟；将离心管置于离心机上，10000g离心1min，吸取上清液至一个干净的无核酶离心管中，此即为纯化后的核酸溶液。
实施例2
如图6、图7所示，本实施例提供的外泌体核酸提取试剂盒的基本结构同实施例1，不同在于，本实施例提供的外泌体核酸提取试剂盒不包括盛放异丙醇的第七容器17；盛放无水乙醇的第八容器18；和盛放体积分数为80％的乙醇水溶液的第九容器19。
因此，如图6所示，本实施例的外泌体核酸提取试剂盒的所述盒体1的下层容纳腔4不为L型，去除了实施例1中L型下层容纳腔4的竖直部。并且，如图7所示，上层容纳腔3的第二腔体32仅包含第三容器13。
以上详细描述了本实用新型的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本实用新型的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本实用新型的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种外泌体核酸提取试剂盒，所述外泌体核酸提取试剂盒包括盒体和盖体，所述盖体盖合于所述盒体后形成一封闭的空间，其特征在于，所述盒体内包括：第一容器，所述第一容器被设置用于盛放蛋白酶混合液；第二容器，所述第二容器被设置用于盛放裂解液；第三容器，所述第三容器被设置用于盛放磁珠；第四容器，所述第四容器被设置用于盛放第一洗液；第五容器，所述第五容器被设置用于盛放第二洗液；和，第六容器，所述第六容器被设置用于盛放洗脱液。
2.如权利要求1所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述盖体的面向所述盒体的一侧设有海绵衬垫；并且，所述海绵衬垫上设有容纳槽，所述容纳槽被设置用于容纳所述外泌体核酸提取试剂盒的使用说明书。
3.如权利要求2所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述海绵衬垫上还设有容纳孔，所述容纳孔被设置用于容纳1.5ml或2ml离心管。
4.如权利要求1所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述盒体内还包括第七容器，所述第七容器被设置用于盛放异丙醇；并且，所述盒体内还包括第八容器，所述第八容器被设置用于盛放无水乙醇；并且，所述盒体内还包括第九容器，所述第九容器被设置用于盛放体积分数为80％的乙醇水溶液。
5.如权利要求4所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述盒体包括上层容纳腔和下层容纳腔，所述第一容器、所述第二容器、和所述第三容器位于所述上层容纳腔内；所述第四容器、所述第五容器、和所述第六容器位于所述下层容纳腔内。
6.如权利要求5所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述上层容纳腔包括第一腔体、和第二腔体，其中所述第一容器和所述第二容器位于所述第一腔体内，所述第三容器、和所述第七容器位于所述第二腔体内。
7.如权利要求6所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述第一腔体被第一密封膜密封，所述第一密封膜的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述蛋白酶混合液和所述裂解液的使用说明；所述第一密封膜还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部；和/或
所述第二腔体被第二密封膜密封，所述第二密封膜的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述磁珠的使用说明；所述第二密封膜还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
8.如权利要求5所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述下层容纳腔包括第三腔体、第四腔体、和第五腔体，所述第四容器位于所述第三腔体内、所述第五容器位于所述第四腔体内、所述第六容器位于所述第五腔体内。
9.如权利要求8所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述第三腔体被第三密封膜密封，所述第三密封膜的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第一洗液的使用说明；所述第三密封膜还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部；
所述第四腔体被第四密封膜密封，所述第四密封膜的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第一洗液的使用说明；所述第四密封膜还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部；并且，
所述第五腔体被第五密封膜密封，所述第五密封膜的外表面设有使用信息记载区，使用信息记载区记载有对所述第二洗液的使用说明；所述第五密封膜还包括一手撕部，所述手撕部的内表面设有粘贴部。
10.如权利要求3所述的外泌体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述容纳孔的数量为5-20个。
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Cited By (1)
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| CN111172153A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-05-19 | 上海纽思格生物科技有限公司 | 一种人尿液外泌体核酸提取方法 |
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2017
- 2017-12-29 CN CN201721896192.4U patent/CN207904240U/zh active Active
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| CN111172153B (zh) * | 2019-12-26 | 2023-08-22 | 上海纽思格生物科技有限公司 | 一种人尿液外泌体核酸提取方法 |
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