CN206740776U - 一种糖化血红蛋白检测试条 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供一种糖化血红蛋白检测试条,包括底板,所述底板上依次设置有样品垫,反应膜,吸水纸和设置在反应膜上的第一检测线、第二检测线;所述样品垫包被有荧光乳胶颗粒分别标记的血红蛋白单克隆抗体B;所述第一检测线包被有糖化血红蛋白单克隆抗体A,所述第二检测线包被有血红蛋白单克隆抗体C。本实用新型提供的糖化血红蛋白检测试条能够简便、快速地对糖化血红蛋白进行定量检测,有效解决了现有技术检测方法操作繁琐、检测时间长、成本高的问题。
Description
技术领域
本实用新型涉及医疗技术领域,特别是涉及一种糖化血红蛋白检测试条。
背景技术
糖尿病是由胰岛素分泌缺陷、胰岛组织生物功能受损而产生高血糖的代谢性疾病,而长期存在高血糖,则是导致眼、肾、心脏、血管和神经的慢性损害及功能障碍的原因。
糖化血红蛋白于1958年首次从其他类型的血红蛋白中分离出来,并于1968 年被分类为一种糖蛋白,其由血糖和血红蛋白通过不可逆的反应结合而成,且与血糖浓度成正比,能保持120天左右,可以反映血糖8-12周内的情况,其与抽血时间,是否空腹,是否使用胰岛素等因素干扰不大。因此,国际糖尿病联盟推出了新版的亚太糖尿病防治指南,明确规定糖化血红蛋白是国际公认的糖尿病监控“金标准”。
现阶段我国的糖尿病患者已经高达9800万人,且发病率仍然呈现出不断上升的趋势,是严重威胁我国人民健康的公共卫生问题,传统的糖尿病诊断和监测大多是进行空腹血糖、餐后血糖以及糖耐量实验,随着糖化血红蛋白在糖尿病诊断监测中的地位不断提高,简便、快速地对糖化血红蛋白进行定量检测的需求也日趋扩大。
目前,临床实验中采用的糖化血红蛋白的检测方法多为定量检测,主要有两大类:一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同,如离子层析法、电泳等方法;另一类方法基于血红蛋白上糖基化基团的结构特点,如亲和层析、离子捕获法和免疫法。这些方法的缺点是检测时间长、操作繁琐、费用高,不利于推广使用,而且往往需要专业技术人员进行操作。
实用新型内容
鉴于此,本实用新型目的在于提供一种简便、快速地对糖化血红蛋白进行定量检测的检测试条。
本实用新型提供了一种糖化血红蛋白检测试条,包括底板,所述底板上依次设置有样品垫,反应膜,吸水纸和设置在反应膜上的第一检测线、第二检测线;
所述样品垫包被有荧光乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B;
所述第一检测线包被有糖化血红蛋白单克隆抗体A,所述第二检测线包被有血红蛋白单克隆抗体C。
其中,荧光乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B可以能够识别血红蛋白,也能够识别糖化血红蛋白,且荧光乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B识别血红蛋白的抗原表位与荧光乳胶颗粒标记的血红蛋白单克隆抗体B识别糖化血红蛋白的抗原表位相同。糖化血红蛋白单克隆抗体A特异性的识别糖化血红蛋白。
本实用新型提供的检测试条的反应膜上沿层析方向,依次设置第一检测线、第二检测线。第一检测线包被有糖化血红蛋白单克隆抗体A,用于检测糖化血红蛋白;第二检测线包被血红蛋白单克隆抗体C,用于检测样品中的血红蛋白。
优选地,所述荧光乳胶颗粒由甲基丙烯酸甲酯或苯乙烯聚合而成。
优选地,所述荧光乳胶颗粒采用的荧光素为罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白或碘化丙啶中的一种。
优选地,所述底板(1)的为半硬质塑料、硬质塑料或硬纸片中的一种。
其中,更优选地,半硬质塑料为PVC。
优选地,所述样品垫(2)为玻璃纤维膜或聚酯膜。
更优选的,所述样品垫(2)为玻璃纤维膜。
优选地,所述反应膜(3)为硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜中的一种。
更优选地,所述反应膜(3)为硝酸纤维素膜。
本实用新型提供的胰岛素检测试条的宽度为3.5mm~4.5mm(请提供一个合适的范围),优选地,检测试条的宽度为4.0mm。
使用本实用新型提供的糖化血红蛋白检测试条检测血样时,结果读取方法为:当荧光分析仪在第一检测线和第二检测现同时检测到荧光信号时,可判定血样中存在糖化血红蛋白。进一步,通过读数可定量检测糖化血红蛋白的含量,采用荧光分析仪读取第一检测线和第二检测线的荧光信号,通过第一检测线的荧光值与第一、第二检测线荧光值的总和的比值,来反映糖化血红蛋白含量。当第二检测线未检测到荧光信号时,表明试条已失效,不能再使用。
本实用新型提供的糖化血红蛋白检测试条能够简便、快速地对糖化血红蛋白进行定量检测,有效解决了现有技术检测方法操作繁琐、检测时间长、成本高的问题。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本实用新型的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本实用新型实施例提供的胰岛素检测试条的结构示意图;
其中,1示底板,2示样品垫,3示反应膜,4示吸水纸,5示第一检测线,6 示第二检测线。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本实用新型的技术方案,下面结合附图和具体实施方式对本实用新型进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本实用新型保护的范围。
本实用新型提供的胰岛素检测试条的制备过程中采用的仪器、试剂皆为普通市售品,皆可于市场购得。
下面结合实施例和附图,进一步阐述本实用新型:
实施例1
乳胶颗粒的制备:取180ml超纯水加入圆底烧瓶内,放置水浴锅中恒温 90℃,转速400转/分钟,依次加入50mM-200mM浓度罗单明10ml,苯乙烯10ml,然后加入引发剂过硫酸钾,使其聚合反应2小时。冷却后称取其重量,再用离心去上清,加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式,洗涤3-5遍,再待使用。
荧光乳胶颗粒标记抗体的制备:取20ml上述的乳胶颗粒溶液用0.2M NHS和 0.2MEDC溶液各30ul混合均匀,5℃,100转/分钟摇床1小时,然后称取其重量,再用离心去上清,加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式,洗涤3-5遍,再加入血红蛋白抗体(AbgreeHb02)2mg,混合均匀后,5℃,100转/分钟摇床孵育24小时。孵育完成后,加入颗粒悬浮液(pH值7.4的0.02MPB+30%蔗糖 +1%PEG2万+1%酪蛋白)80ml。
样品垫的制备:取实施例2标记好的乳胶颗粒溶液5ml,铺至3cmX30cm 玻璃纤维上,以每5ml铺3cmX30cm的量铺若干条,充分反应5min,沥干,37 度反应16h,以后备用。
反应膜的制备:先将反应膜贴到PVC底板上,再取糖化血红蛋白抗体 (HyTest75C9),血红蛋白抗体(Abgree Hb01),各用0.01MPB+3%海藻糖稀释成1mg/ml,使用量为35ul/30CM,用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(赛多利斯2 CM,95膜)上,42度反应2h。
检测试条的组装:将制备的样品垫,实施例4制备的反应膜,以及吸水纸依次贴到PVC底板上,均匀切成4.0mm宽的膜条,装壳。
实施例2
乳胶颗粒的制备:取180ml超纯水加入圆底烧瓶内,放置水浴锅中恒温90℃,转速400转/分钟,依次加入50mM-200mM浓度罗单明10mL,苯乙烯8ml,SDS 0.2g,无水乙醇2ml,然后加入引发剂过硫酸钾,使其聚合反应2小时。冷却后称取其重量,再用离心去上清,加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式,洗涤3-5遍,再待使用。
荧光乳胶颗粒标记抗体的制备:取20ml上述乳胶颗粒溶液用0.2M NHS和 0.2MEDC溶液各35ul混合均匀,5℃,100转/分钟摇床1小时,然后称取其重量,再用离心去上清,加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式,洗涤3-5遍,再加入血红蛋白抗体(AbgreeHb02)2.5mg,混合均匀后,5℃,100转/分钟摇床孵育24小时。孵育完成后,加入颗粒悬浮液(pH值7.4的0.02MPB+30%蔗糖 +1%PEG2万+1%酪蛋白)100ml。
样品垫的制备:取实施例2标记好的乳胶颗粒溶液5ml,铺至3cmX30cm 玻璃纤维上,以每5ml铺3cmX30cm的量铺若干条,充分反应5min,沥干,37 度反应16h,以后备用。
反应膜的制备:先将反应膜贴到PVC底板上,再取糖化血红蛋白抗体 (HyTest75C9),血红蛋白抗体(Abgree Hb01),各用0.01MPB+3%海藻糖稀释成1mg/ml,使用量为35ul/30CM,用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(赛多利斯2 CM,95膜)上,42度反应2h。
糖化血红蛋白检测试条的组装:将制备的样品垫,反应膜以及吸水纸依次贴到PVC底板上,均匀切成4.0mm宽的膜条,装壳。
参见图1,本实用新型实施例5提供的糖化血红蛋白检测试条,包括底板1,所述底板1上依次设置有样品垫2,反应膜3,吸水纸4和设置在反应膜3上的第一检测线5、第二检测线6;样品垫2包被有荧光乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B;第一检测线5包被有糖化血红蛋白单克隆抗体A,第二检测线6包被有血红蛋白单克隆抗体C。
使用本实用新型提供的糖化血红蛋白检测试条检测血样时,当样本流过反应膜时,样本中的糖化血红蛋白与样品垫上乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B结合后会被第一检测线上的糖化血红蛋白单克隆抗体A捕获,检测到荧光信号a,样本中的血红蛋白与样品垫上乳胶颗粒标记的血红蛋白抗体B结合后会被第二检测线上的血红蛋白单克隆抗体C捕获,检测到荧光信号b,a/(a+b)的比值对应糖化血红蛋白的含量,进而计算出糖化血红蛋白的含量。
取2%、4%、6%、8%、10%、15%的糖化血红蛋白标准品,分别测得其a/(a+b) 的比值,以测得的a/(a+b)值为纵坐标,以其对应的糖化血红蛋白含量为横坐标做标准曲线得到糖化血红蛋白含量的计算方程。每次测试时,通过荧光信号a 和b,计算出最终的出糖化血红蛋白的含量。
实施例3试纸性能检测
将糖化血红蛋白和血红蛋白抗原配制成4.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%、10.0%、15.0%的比例(浓度130g/L),分别取35条,每个条件用5条进行检测实施例1和实施例2的试纸及试剂,采用实施例1制备的试纸条进行检测时,将样本用PBS(pH值7.4,0.02M)稀释100倍(10ul样本加入到1000ul PBS中),取60ul 稀释后的样本加到试条上,反应5分钟后读取结果,采用实施例2制备的试纸条进行检测时,将样本稀释200倍,其余处理同于实施例1。将反应后的检测试条置于荧光分析仪上读取a和a+b,将a/(a+b)比值带入该方程,计算糖化血红蛋白的含量。检测结果见表1:
表1试纸性能检测结果
由表1结果来看,本实用新型实施例2提供的检测试条,在检测血红蛋白时具有良好的精密度,检测结果准确可靠。
取本实用新型实施例1制备检测试条进行上述检测,结果与实施例2相同或相近,无显著差异(P>0.05)。
实施例4临床样本检测
取糖化血红蛋白血样10份,每份标本测试3支试条,采用实施例2的试条搭配实施例3的测试方法,取其平均值与血样做比较。
检测结果如表2所示下:
表2临床样本检测结果
由表2结果可知,本实用新型提供的试条测试结果偏差小,适宜于糖化血红蛋白的检测。
取本实用新型实施例1制备检测试条进行上述检测,结果与实施例2相同或相近,无显著差异(P>0.05)。
实施例5乳胶颗粒抗体最佳修饰量比较
分别取实施例2制备的20ml乳胶颗粒溶液用0.2M NHS和0.2M EDC溶液各35ul混合均匀,5℃,100转/分钟摇床1小时,然后称取其重量,再用离心去上清,加入超纯水至原重再将颗粒重悬的洗涤方式,洗涤3-5遍,再分别加入不同量的血红蛋白抗体(Abgree Hb02)1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg,混合均匀后,5℃,100转/分钟摇床孵育24小时。孵育完成后,加入颗粒悬浮液(pH值7.4的0.02MPB+5%蔗糖+1%PEG2万+1%酪蛋白)100ml。用不同修饰量的颗粒测试浓度为130g/L,糖化血红蛋白和血红蛋白抗原比例为 6.0%的样本,每种处理测试5支试条,再用仪器读取试条检测线1的荧光值,分析抗体最佳修饰量。
检测结果如表3所示:
表3乳胶颗粒抗体最佳修饰量比较结果
由表3记载的结果可知,在实施例2的检测试条的制备过程中,乳胶颗粒在 2.5mg以下的修饰量,其荧光值并未达到最大,而大于2.5mg的修饰量,对其荧光值的提升已经有限,且可能带来其他的问题,因此,确定2.5mg为乳胶颗粒的最佳抗体修饰量。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本实用新型。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本实用新型的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本实用新型将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (9)
1.一种糖化血红蛋白检测试条,包括底板(6),所述底板(6)上依次设置有样品垫(1),反应膜(2),吸水纸(5)和设置在反应膜(2)上的第一检测线(3)、第二检测线(4);
所述样品垫(1)包被有荧光乳胶颗粒分别标记的血红蛋白单克隆抗体B;所述第一检测线(3)包被有糖化血红蛋白单克隆抗体A,所述第二检测线(4)包被有血红蛋白单克隆抗体C。
2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述荧光乳胶颗粒由甲基丙烯酸甲酯或苯乙烯聚合而成。
3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述荧光乳胶颗粒采用的荧光素为罗丹明、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白或碘化丙啶中的一种。
4.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述底板(6)为半硬质塑料、硬质塑料或硬纸片中的一种。
5.根据权利要求4所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述底板半硬质塑料为PVC。
6.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述样品垫(1)为玻璃纤维膜或聚酯膜。
7.根据权利要求6所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述样品垫(1)为玻璃纤维膜。
8.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述反应膜(2)为硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜中的一种。
9.根据权利要求8所述的糖化血红蛋白检测试条,其特征在于,所述反应膜(2)为硝酸纤维素膜。
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