CN204490860U - 一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，主要包括盒盖、盒体和衬垫，衬垫放置在盒体内，衬垫上设有容器孔和凹槽，分别放置副溶血性弧菌基因组DNA提取液、含饱和荧光染料的PCR扩增预混液、分型引物A、分型引物B、分型引物C、灭菌剪刀、灭菌取样竹签、灭菌离心管和灭菌PCR管。本实用新型试剂盒实现了副溶血性弧菌快速、自动化和高通量的分型检测，操作过程简单，使用方便。
Description
技术领域
本实用新型属于生物技术领域，涉及一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒。
背景技术
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是1953年由Fujino等从日本一起食物中毒患者体内分离到的一种病原菌。副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐杆菌，可导致患者腹泻、肠痉挛、恶心、呕吐、发烧等典型胃肠炎反应，进食含有该菌的食物会引起食物中毒，是我国大陆沿海地区食物中毒中最为常见的一种病原菌。为了便于对副溶血性弧菌引起的食物中毒进行流行病学调查，副溶血性弧菌的分型检测是必不可少的内容。随着分子生物学技术的发展，分子分型技术以其准确和分辨率高等优点，逐渐取代传统的表型分型技术，在微生物的分型中发挥巨大的作用。但是，目前常用的分子分型技术基本都需要依靠电泳来完成分型分析，操作复杂，自动化程度低，费时费力。亟需研究和开发一种简便、快速、自动化程度高的副溶血性弧菌分子分型检测方法。
发明内容
本实用新型目的是提供一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，由盒盖、盒体、衬垫、DNA提取液管、PCR扩增预混液管、分型引物A管、分型引物B管、分型引物C管、灭菌剪刀、灭菌取样竹签、灭菌离心管和灭菌PCR管组成，衬垫放置在盒体内，DNA提取液管、PCR扩增预混液管、分型引物A管、分型引物B管、分型引物C管设置在衬垫一边，灭菌剪刀放置在衬垫中部，灭菌取样竹签、灭菌离心管和灭菌PCR管设置在衬垫另一边。
在衬垫上设置容器孔分别放置DNA提取液管、PCR扩增预混液管、分型引物A管、分型引物B管、分型引物C管。
在衬垫上设置凹槽分别放置灭菌剪刀、灭菌取样竹签、灭菌离心管和灭菌PCR管。
本实用新型通过高分辨率熔解曲线技术检测副溶血性弧菌菌株数目可变串联重复序列，实现副溶血性弧菌快速、自动化和高通量的分型检测。PCR扩增和副溶血性弧菌分型分析由实时荧光定量PCR仪自动完成，省去了传统分子分型技术所需的电泳环节，不但快速、简便、自动化程度高，省时省力，而且整个过程全部在闭管情况下完成，避免了因打开PCR管造成的气溶胶污染。试剂盒中已包含了副溶血性弧菌分型所需的试剂和耗材，无需另外准备。
附图说明
图1为本实用新型打开盒盖后结构示意图。
具体实施方式
本实用新型结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例1
参见图1，一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，由盒盖1、盒体2、衬垫3、副溶血性弧菌基因组DNA提取液管4、含饱和荧光染料的PCR扩增预混液管5、分型引物A管6、分型引物B管7、分型引物C管8、灭菌剪刀9、灭菌取样竹签10、灭菌离心管11和灭菌PCR管12组成，衬垫3放置在盒体2内，DNA提取液管4、PCR扩增预混液管5、分型引物A管6、分型引物B管7、分型引物C管8分别设置在衬垫3一边，灭菌剪刀9放置在衬垫3中部，灭菌取样竹签10、灭菌离心管11和灭菌PCR管12设置在衬垫3另一边。
在衬垫3上置有容器孔，分别放置副溶血性弧菌基因组DNA提取液管4、含饱和荧光染料的PCR扩增预混液管5、分型引物A管6、分型引物B管7、分型引物C管8。在衬垫3上还设有凹槽，分别放置灭菌剪刀9、灭菌取样竹签10、灭菌离心管11和灭菌PCR管12。
实施例2
本实用新型的副溶血性弧菌分型引物序列如下：
分型引物A，上游：5’-CCTTCCTGATCCCTGATTGGTTT-3’，
下游：5’-TGGCTATTATTGTTACCATCCCCCT-3’；
分型引物B，上游：5’-CCCTGCTAACAATGTG TGTAA-3’，
下游：5’-GACATTACTCGTTCTCCTCGGTATT-3’；
分型引物C，上游：5’-GAGCTGACTGGGTAGTCGCTG CT -3’，
下游：5’-ACCTTGCTCTATGAAGCCCGGA-3’。
利用上述分型引物进行副溶血性弧菌分型检测方法，通过如下操作步骤提取副溶血性弧菌基因组DNA：吸取50μl副溶血性弧菌基因组DNA提取液于灭菌离心管中，用灭菌取样竹签刮取副溶血性弧菌菌落置于含副溶血性弧菌基因组DNA提取液的离心管中，用灭菌剪刀剪去取样竹签手接触的部分，盖上管盖，沸水浴煮5分钟，10000转/分钟离心5分钟，吸取上清作为模板DNA；按如下反应体系和分型检测程序进行检测：所述反应体系包括：18μl含有饱和荧光染料的PCR扩增预混液，1μl分型引物，1μl模板DNA。所述分型检测程序为：95℃预变性2min，95℃5s、55℃30s进行30个循环，在退火阶段采集荧光，最后进行溶解曲线监测，即完成上述最后一个循环后，温度升至75℃，保温5s后以0.1℃/s的升温速率逐渐升至90℃，在此升温过程中进行荧光强度的连续检测。
Claims (3)
1.一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，其特征在于，由盒盖（1）、盒体（2）、衬垫（3）、DNA提取液管（4）、PCR扩增预混液管（5）、分型引物A管（6）、分型引物B管（7）、分型引物C管（8）、灭菌剪刀（9）、灭菌取样竹签（10）、灭菌离心管（11）和灭菌PCR管（12）组成，衬垫（3）放置在盒体（2）内，DNA提取液管（4）、PCR扩增预混液管（5）、分型引物A管（6）、分型引物B管（7）、分型引物C管（8）分别设置在衬垫（3）一边，灭菌剪刀（9）设置在衬垫（3）中部，灭菌取样竹签（10）、灭菌离心管（11）和灭菌PCR管（12）设置在衬垫（3）另一边。
2.根据权利要求1所述的一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，其特征在于，在衬垫（3）上设置容器孔，分别放置DNA提取液管（4）、PCR扩增预混液管（5）、分型引物A管（6）、分型引物B管（7）、分型引物C管（8）。
3.根据权利要求1所述的一种副溶血性弧菌分子分型试剂盒，其特征在于，在衬垫（3）上设置凹槽，分别放置灭菌剪刀（9）、灭菌取样竹签（10）、灭菌离心管（11）和灭菌PCR管（12）。
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|---|---|---|---|---|
| CN106591466A (zh) * | 2016-12-29 | 2017-04-26 | 嘉兴市疾病预防控制中心 | 基于实时荧光pcr对副溶血性弧菌的分型方法 |
| CN110903963A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-03-24 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 一种新型家用多重致病菌分型检测试剂盒 |
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