CN202401072U - 乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 - Google Patents
乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN202401072U CN202401072U CN2011205694877U CN201120569487U CN202401072U CN 202401072 U CN202401072 U CN 202401072U CN 2011205694877 U CN2011205694877 U CN 2011205694877U CN 201120569487 U CN201120569487 U CN 201120569487U CN 202401072 U CN202401072 U CN 202401072U
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kit
- breast cancer
- reference substance
- test tube
- snp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本实用新型提供了一种检测乳腺癌相关风险基因位点是否发生突变从而评估个体患乳腺癌风险性的试剂盒，由包装盒体1、衬垫2、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管3、装有阳性对照品的一个试管4、装有阴性对照品的一个试管5组成，衬垫上设有容器孔，分别放置两管荧光定量PCR反应液3、阳性对照品4和阴性对照品5。本实用新型试剂盒运用荧光定量PCR技术实现了同时检测两个乳腺癌相关风险基因SNP位点基因型的目的，相对于现有的荧光定量PCR试剂盒只检测一个SNP位点，本实用新型试剂盒将与同一疾病的两个SNP位点检测整合在一个试剂盒内，使用更方便而且成本更低，对个体患乳腺癌风险性的评估也更便捷。
Description
技术领域
本实用新型涉及分子生物学和医学领域，具体明涉及检测乳腺癌相关风险基因位点是否发生突变的试剂盒，通过同时检测与乳腺癌密切相关的成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）基因和TOX3基因（TOX3）的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体患乳腺癌的风险。
背景技术
乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一。在欧美发达国家，乳腺癌的发病率居女性恶性肿瘤之首；在我国，乳腺癌发病率也呈逐渐上升趋势，并出现低龄化。FGFR2（fibroblast growth factor receptor2）基因位于10q26，这一区带在移动细胞癌中常常存在结构异常且表达下降。大量研究表明FGFR2基因的突变也可诱发肿瘤的发生。肿瘤中该基因的表达缺失很可能是突变失活的结果，其具体机制尚不明了。国外研究表明，FGFR2的单核苷酸多态性与乳腺癌有相关性。FGFR2基因的rs2912778、rs3135718、rs11020014位点多态性均增加了乳腺癌的患病风险。由于乳腺癌的发生可能与雌激素有关，且肿瘤大小、细胞学分级、淋巴结转移情况、ER/PR表达情况均影响乳腺癌术后复发危险度分组，Stacey和Garcia-Closas等研究结果也表明FGFR2与雌激素阳性、低分化以及多结节乳腺癌患者有强烈的相关性。
FGFR2基因的突变可诱发肿瘤的发生。研究表明，FGFR2突变与胃癌、肺癌、子宫内膜癌、黑色素瘤等多种恶性肿瘤均有关。Jang等发现在胃、结肠、直肠癌中也发现了与赝缝骨结合综合症相同的FGFR2/FGFR3突变，说明FGFR2/FGFR3的突变在胃、结肠、直肠癌中也起着十分重要的作用。Udler等人研究结果也表明FGFR2基因突变可增加女性患乳腺癌的风险。
乳腺癌的发生涉及细胞凋亡与增殖失衡、细胞的分化紊乱、癌基因与抑癌基因的功能失调，以及相关信号传导系统等多种生命活动的异常。Meyer等对FGFR2基因遗传变异与乳腺癌易感性的研究表明，风险等位基因在乳腺癌中的表达有所增加。Gold等们对德系犹太人种进行基因组的相关性研究，得出FGFR2的SNP位点（rs1078806）与乳腺癌存在相关性。Hunter等通过基因分型对欧洲绝经后妇女湿润型乳腺癌患者和对照组进行了研究后发现FGFR2第2内含子的rs2981579、rs2420946与乳腺癌发生有较强的关联性。Udler等人发现FGFR2第2内含子的rs2981578与乳腺癌发生有较强的关联性。Liangy等研究表明，FGFR2基因第二内含子的变异可能是中国乳腺癌发生的重要病因。
浙江大学医学院病理科Peng等报告的一项综述表明，31.7%的基因突变与乳腺癌发病相关性是显著相关的，其中又有21.7%值得进一步关注；而对于GWASs，有80%的显著相关性值得进一步关注。
随着对乳腺癌发病相关基因、全基因组关联研究（genome-wide association studies，GWASs）的深入，越来越多的证据显示基因突变与乳腺癌发病率之间有密切的相关性。
研究检索了包括PubMed、Medline在内的科学文献，其中87篇Meta分析或汇总分析的文章中共指出145个与乳腺癌相关的基因突变。其中包括FGFR2（rs2981579）和TOX3（rs4784227）
哈尔滨医科大学肿瘤防治研究所进一步证实了TOX3基因相关位点多态性与乳腺癌的关系。经过病例组和对照组的研究分析之后，得出结论：TOX3基因上rs4784227位点的基因多态性和rs9302556位点基因多态性增加乳腺危险性。
发明内容
本实用新型针对目的是提供一种采用荧光定量PCR技术同时检测两个乳腺癌相关风险基因SNP位点的试剂盒。该试剂盒由包装盒体、衬垫、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管、装有阳性对照品的一个试管、装有阴性对照品的一个试管组成，衬垫上设有容器孔，分别放置两管荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品。
其中荧光定量PCR反应液的成分包含：PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、SNP位点检测用上游引物、SNP位点检测用下游引物、SNP位点基因型一荧光探针、SNP位点基因型二荧光探针、Taq DNA聚合酶。
其中，
成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）上的SNP位点检测引物和探针为：
上游引物序列：5’- GAGGAAATACATAACCT -3’
下游引物序列：5’- TTGCTTGTTTTGGATAC -3’
基因型一荧光探针序列：5’-FAM –GATGTCTaCAGAGG – TAMRA -3’
基因型二荧光探针序列：5’-VIC- GATGTCTgCAGAGG –TAMRA -3’
TOX3上的SNP位点检测引物和探针为：
上游引物序列：5’- AAAAGTCCCAATTTGTA -3’
下游引物序列：5’- TGGGAGTATTTACATCA -3’
基因型一荧光探针序列：5’-FAM –TGTTTGCcGATTATT - TAMRA -3’
基因型二荧光探针序列：5’-VIC –TGTTTGCtGATTATT –TAMRA -3’
对照品分为阳性对照品和阴性对照品，阴性对照品为无菌双蒸水样品，阳性对照品为口腔粘膜细胞DNA样品。
本试剂盒保存于-20℃，尽量减少反复冻融。
本实用新型试剂盒使用方法：
每次检测均应设立阳性对照和阴性对照。
扩增检测在荧光定量PCR仪上进行，分为6个反应管，每一个SNP位点检测使用3个反应管，其中1个反应管为被检测样品，阳性对照和阴性对照各使用1个反应管，每管中总体积10μl，其中8μl PCR反应液，2μl检测样品（基因组DNA、阳性对照或阴性对照）。反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应完成后在荧光定量PCR仪上进行终点荧光读取，根据得到的二维荧光图和实时扩增曲线读取被检测样品的SNP位点基因型。
本实用新型提供的该试剂盒主要用于检测乳腺癌相关风险基因SNP位点，从而告知被检者患病风险数值，提前预防和控制，指导医师选择正确的临床治疗方案，有利于患者进行针对性治疗。
本实用新型的特点是：该试剂盒运用荧光定量PCR技术实现了同时检测两个乳腺癌相关风险基因SNP位点基因型的目的，相对于现有的荧光定量PCR试剂盒只检测一个SNP位点，本实用新型试剂盒将同一疾病的所有SNP位点检测整合在一个试剂盒内，使用更方便而且成本更低，对个体患乳腺癌风险性的评估也更便捷。
附图说明
图1为本实用新型的结构示意图。
具体实施方式
本实用新型结合附图和具体实施例作进一步说明。应该理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本实用新型范围。
实施例1
参见图1，本实用新型试剂盒由包装盒体1、衬垫2、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管3、装有阳性对照品的一个试管4、装有阴性对照品的一个试管5组成，衬垫上设有容器孔、分别放置两管荧光定量PCR反应液3、阳性对照品4和阴性对照品5。
其中荧光定量PCR反应液的成分包含：PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、SNP位点检测用上游引物、SNP位点检测用下游引物、SNP位点基因型一荧光探针、SNP位点基因型二荧光探针、Taq DNA聚合酶。
本试剂盒保存于-20℃，尽量减少反复冻融。
实施例2
1． 材料：
血样总DNA提取试剂盒购于美国Qiagen公司，Taq DNA聚合酶、dNTPs等PCR相关试剂购于美国Promega公司，7900型荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品。
2． 引物及探针：
成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）上的SNP位点检测引物和探针为：
上游引物序列：5’- GAGGAAATACATAACCT -3’
下游引物序列：5’- TTGCTTGTTTTGGATAC -3’
基因型一荧光探针序列：5’-FAM –GATGTCTaCAGAGG – TAMRA -3’
基因型二荧光探针序列：5’-VIC- GATGTCTgCAGAGG –TAMRA -3’
TOX3上的SNP位点检测引物和探针为：
上游引物序列：5’- AAAAGTCCCAATTTGTA -3’
下游引物序列：5’- TGGGAGTATTTACATCA -3’
基因型一荧光探针序列：5’-FAM –TGTTTGCcGATTATT - TAMRA -3’
基因型二荧光探针序列：5’-VIC –TGTTTGCtGATTATT –TAMRA -3’
3． 样本检测：
选取30例血液样本，其中已确定患乳腺癌的为18例。样本用血样总DNA提取试剂盒提取总DNA。每一例检测为12个反应管，每管中总体积10μl，其中8μl PCR反应液，每一个SNP位点检测使用3个反应管，1个反应管中加入2μl被检测DNA，另外2个反应管中加入2μl阳性对照和阴性对照，在ABI7900荧光定量PCR仪上进行扩增。反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应完成后在荧光定量PCR仪上进行终点荧光读取。
Claims (1)
1.一种乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒，其特征是由包装盒体（1）、衬垫（2）、装有检测两个SNP位点的荧光定量PCR反应液的两个试管（3）、装有阳性对照品的一个试管（4）、装有阴性对照品的一个试管（5）组成，衬垫（2）上设有容器孔，分别放置两管荧光定量PCR反应液（3）、阳性对照品（4）和阴性对照品（5）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011205694877U CN202401072U (zh) | 2011-12-31 | 2011-12-31 | 乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011205694877U CN202401072U (zh) | 2011-12-31 | 2011-12-31 | 乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN202401072U true CN202401072U (zh) | 2012-08-29 |
Family
ID=46698733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011205694877U Expired - Fee Related CN202401072U (zh) | 2011-12-31 | 2011-12-31 | 乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN202401072U (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106755349A (zh) * | 2016-12-02 | 2017-05-31 | 上海爱她基因科技有限公司 | 一种乳腺癌基因检测试剂盒 |
| CN112760379A (zh) * | 2021-01-26 | 2021-05-07 | 暨南大学 | Tox3在制备预测aml预后试剂盒中的应用 |
-
2011
- 2011-12-31 CN CN2011205694877U patent/CN202401072U/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106755349A (zh) * | 2016-12-02 | 2017-05-31 | 上海爱她基因科技有限公司 | 一种乳腺癌基因检测试剂盒 |
| CN112760379A (zh) * | 2021-01-26 | 2021-05-07 | 暨南大学 | Tox3在制备预测aml预后试剂盒中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MX2008011839A (es) | Propagacion de celulas primarias. | |
| BR112012009879A2 (pt) | "métodos diagnósticos para determinar o prognóstico de câncer de pulmão de não pequenos células" | |
| RU2014119928A (ru) | Диагностика анэплоидии у плода | |
| CN108048570A (zh) | 用于结直肠癌相关基因Septin9甲基化检测的引物对、试剂盒及方法 | |
| TWI456197B (zh) | 作為早發性大腸直腸癌之生物標記的（ｌｉｎｅ－１低甲基化作用） | |
| CN104164474A (zh) | 一种检测尿液中pca3基因和psa基因表达量的荧光定量pcr法及其诊断试剂盒 | |
| CN107904313A (zh) | 用于胃癌相关基因Reprimo、RNF180甲基化检测的引物对、试剂盒及方法 | |
| CN108728535A (zh) | hsa_circ_0049154作为前列腺癌分子靶标在制备药物和试剂盒中的应用 | |
| CN102021233A (zh) | 一种定量检测akap12甲基化水平的方法及其应用 | |
| CN109456968A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep5 | |
| Hentze et al. | Searching for new biomarkers in ovarian cancer patients: Rationale and design of a retrospective study under the Mermaid III project | |
| CN104513851B (zh) | 侦测膀胱癌的新颖表基因生物标记及其方法 | |
| Iovanna | Implementing biological markers as a tool to guide clinical care of patients with pancreatic cancer | |
| CN104498495A (zh) | 前列腺癌标志物lncRNA MALAT-1及其应用 | |
| CN106148348A (zh) | 一组胃癌rna分子标志物及其应用 | |
| CN202401072U (zh) | 乳腺癌相关风险基因位点检测试剂盒 | |
| CN102796811B (zh) | 检测kras突变的试剂及方法 | |
| CN105018639A (zh) | 胃癌预后新型分子标志物lncRNA-AB007962的检测及用途 | |
| Kowalewska et al. | Identification of suitable reference genes for gene expression measurement in uterine sarcoma and carcinosarcoma tumors | |
| CN109652541A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep6 | |
| Waldschmidt et al. | Tracking myeloma tumor DNA in peripheral blood | |
| CN102191308A (zh) | 野山参与栽培参多重pcr检测试剂盒及鉴定方法 | |
| TWI496891B (zh) | 偵測膀胱癌之新穎表基因生物標記及其方法 | |
| CN102021228B (zh) | 用于组织或全血egfr基因突变检测的特异性引物 | |
| CN104450887B (zh) | 用于检测子宫内膜癌的dna探针、基因芯片及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120829 Termination date: 20171231 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |