CN1987462B - 检测母系遗传线粒体耳聋基因a1555g突变的试剂盒 - Google Patents

检测母系遗传线粒体耳聋基因a1555g突变的试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，包括提取血样DNA的试剂、PCR扩增反应试剂混合液、实时荧光定量探针和扩增实时荧光定量探针的正向引物和反向引物，实时荧光定量探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ？ID？NO：5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ？ID？NO：1所示的核苷酸序列AGAGGAGGCA？AGTCGTAACA？TG，并且在实时荧光定量探针片段的5’末端标记了荧光报告基团、3’末端标记了荧光淬灭基团。该试剂盒特异性强、敏感性高，检测结果直观、准确可靠，适用于对母系遗传耳聋线粒体基因A1555G突变的大规模的筛查或预防性检查。

Description

检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体用于诊断母系线粒体遗传耳聋疾病的探针及其用途，更具体的是涉及用于检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的实时荧光定量探针及其用途。本发明还涉及所述探针及其相关产品在制备用于诊断母系遗传线粒体耳聋疾病的试剂盒或类似产品中的应用。
背景技术
氨基糖甙类抗生素(链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素及小诺霉素等)因其广谱高效的抗菌作用以及低廉的价格在临床上被广泛用于控制革兰氏阴性和阳性菌感染，但此类抗生素具有严重的耳毒性副作用，可使患者发生不可逆转的听力损失。近十年来研究发现，部分氨基糖甙类抗生素致聋患者有母系遗传家族史，并与线粒体DNA 12S rRNA基因(以下简称为线粒体基因，或mtDNA)第1555位A→G(以下简称A1555G突变)均质性点突变有关(Prezant TR等，Nat Genet,1993,4:289-294；袁慧军等，中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33：67-70)。单次剂量的氨基糖甙类药物应用即可导致携带此突变个体的重度听力损失。根据目前己有的研究结果可知，几乎携带此突变的个体在应用不同剂量的氨基糖甙类抗生素后均发生严重或较严重的听力损失，是后天性获得性耳聋发生的重要原因。鉴于这一耳聋有明确的基因变化和诱发因素，使得该种耳聋成为一种可以预防的疾病。
在中国已报道的线粒体基因mtDNA的A1555G突变的母系遗传耳聋家系已超过100个，各家系发病人数从2-50人不等，考虑到尚有很多同类家系尚未被发现、报道，以及此突变在散发性耳聋的致病机制中占有一定的比例，对这种耳聋的预防变得更为重要。其预防的关键环节在于通过筛查，检测发现携带mtDNA的A1555G突变的个体，绝对禁止此类个体接触氨基糖甙类抗生素，从而避免严重的耳毒性反应发生。
自1993年以来，对此突变的检测除了直接测序外，最常用的筛选方法为BsmAI(Alw26I)酶切法(Fischel-Ghodsian等，Am J Otolaryngol,1993,14:399-403；Fischel-Ghodsian等，AmJ Otolaryngol,1997b,18:173-178；袁慧军等，中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33：67-70)。在国外，普遍应用限制性酶BsmAI(Alw26I)酶切配合序列分析鉴定有无mtDNA的A1555G突变，酶切鉴定方便快捷，结果可靠，但不足的是BsmA I(Alw26I)价格较贵，与常用的限制性酶相比，价格差异达50-100倍；国内目前主要应用线粒体基因A1555G突变检测试剂盒(专利号：ZL03156762.2)，该技术在线粒体基因的1555位邻近引入一个包括1555位在内的新的限制性酶切位点，然后用Hae III限制性内切酶消化(戴朴等，中国听力语言康复科学，2004，6：21-23)，虽然较BsmAI(Alw26I)相比具有成本低的明显优势，但仍需聚合酶链反应后的繁琐处理，耗时较长，为克服这一缺点我们设计了一种更为简单、快速、准确、减少污染而且成本低廉的检测方法，以满足对mt DNA的A1555G突变进行广泛筛查的需要。
发明内容
本发明目的通过下述原理实现：为了检测在母系遗传线粒体基因序列(SEQ ID NO:5)中的A1555G突变，设计覆盖所述基因序列的1555bp位点在内的探针，并且在该探针片段的5’末端标记了荧光报告基团、3’末端标记了荧光淬灭基团，其中：如果探针在1555bp相应的碱基A被替换为G，则称为突变型实时荧光定量探针(或突变型探针、突变型Taqman探针)；如果探针在1555bp相应的碱基仍旧是A，则称为野生型实时荧光定量探针(或野生型探针、野生型Taqman探针)；由于突变型和野生型两种探针的5’端荧光报告基团不同，即二者发射波长不同的荧光(不同波长的荧光在在实时定量荧光PCR仪器上能被分别记录下来，在分析软件中以不同的颜色或不同的标记反映出来)，因此，突变型探针能与发生A1555G突变的模板完全匹配而不能与野生型模板完全匹配；而野生型探针不能与发生A1555G突变的模板完全匹配、而只能与野生型模板完全匹配；并且荧光报告基团不同的探针结合模板可发射不同波长的荧光。
在实时荧光定量PCR扩增体系中，加入用于扩增母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ IDNO:5的正向引物和反向引物(可以根据任何生物引物软件进行设计)，并加入突变型实时荧光定量探针，如果需要，还可加入野生型实时荧光定量探针。
由于荧光探针很短(13-30bp左右)，5′端荧光报告基团吸收能量后可将能量转移给邻近的3′端荧光淬灭基团，而3′端荧光淬灭基团则可抑制5’端荧光报告基团的荧光发射。因此，探针完整时，即5’端荧光报告基团未脱离3’荧光淬灭基团的屏蔽时，检测不到探针5′端荧光基团发出的荧光。
在一个实施方案中，将引物和突变型探针和野生型探针同时加入实时定量PCR反应体系中。当体系中的模板变性后低温退火时，引物与探针均与模板结合。在引物的介导下，沿模板向前延伸至探针结合处，Taq酶的5′-3′外切酶活性(此活性是双链特异性的，游离的单链探针不受影响)将探针5′端连接的荧光报告基团从探针上切割下来，游离于反应体系中，从而脱离3′端荧光淬灭基团的屏蔽，接受光刺激发出荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，也就是荧光信号的强度与相应PCR产物量成线性函数关系。当模板为A1555G突变型时，则突变型探针会与之全匹配结合，PCR反应中5’端荧光报告基团不断被Taq酶切下，脱离3′端荧光淬灭基团的屏蔽，其荧光强度随PCR产物量的增多而不断增加。而野生型探针因与之存在一个碱基的差别不能结合，故只检测到突变型探针发射所对应的荧光信号；当模板为A1555A野生型时，野生型探针会与模板全匹配结合，突变型探针因与之存在一个碱基的差别不能结合，故只检测到野生型探针发射所对应的荧光信号。由于突变型和野生型探针的5’端分别连接不同的荧光报告基团，因此根据实时荧光定量PCR仪器分析软件记录到的由不同颜色或标记区别的波长不同的荧光即可分辨出荧光所对应的模板，也就检测出样品中是否含有母系遗传线粒体耳聋基因。
在另一个实施方案中，在实时定量PCR反应体系中也可仅加入突变型探针，当模板是突变型时，则最终可检测到突变型探针发射所对应的荧光信号，因而确定样本含有母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变，从而确定患者患有母系线粒体遗传耳聋疾病；当模板是野生型时，则最终不能检测到突变型探针发射所对应的荧光信号，因而确定样本不含有母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变，从而确定患者未患有母系线粒体遗传耳聋疾病。
也就是说，理论上，一个体系中仅加入针对A1555G突变型模板的突变型探针即可进行检测。但是当同时加入的针对A1555A野生型模板的野生型探针时，可以起到反向校正的双保险作用，从而使结果更为准确可靠。
本发明的实时荧光定量探针，所述实时荧光定量探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列AGAGGAGGCA AGTCGTAACA TG，并且在实时荧光定量探针片段的5’末端标记了荧光报告基团、3’末端标记了荧光淬灭基团，称之为突变型实时荧光定量探针。
本发明的实时荧光定量探针，其中还包含野生型实时荧光定量探针，野生型实时荧光探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列AGAGGAGACA AGTCGTAACA TG，并且5’端荧光报告基团不同于突变型实时荧光定量探针的5’端荧光报告基团、3’末端标记了与突变型实时荧光定量探针相同的荧光淬灭基团。
本发明的实时荧光定量探针，其中所述突变型探针5’末端的荧光报告基团是FAM荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，所述突变型实时荧光定量探针的结构如下：
5'FAM-AGAGGAGGCA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'
所述野生型探针5’末端的荧光报告基团是HEX荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，所述野生型实时荧光定量探针结构如下：
5'HEX-AGAGGAGACA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'。
本发明的扩增所述的实时荧光定量探针的正向引物和反向引物，正向引物(F1)是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1467-1483bp核苷酸序列，即如SEQIDNO:3所示的核苷酸序列CTGAAGCGCG TACACAC；反向引物(R1)则是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ IDNO:5所示的1650-1668bp的核苷酸序列，即如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列AGAGCGGTCAAGTTAAGTT。
本发明的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，包括提取血样DNA的试剂、PCR扩增反应试剂混合液、实时荧光定量探针和扩增所述实时荧光定量探针的正向引物和反向引物，所述实时荧光定量探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ IDNO:5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列AGAGGAGGCA AGTCGTAACATG，并且在实时荧光定量探针片段的5’末端标记了荧光报告基团、3’末端标记了荧光淬灭基团，称之为突变型实时荧光定量探针，所述正向引物(F1)是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1467-1483bp核苷酸序列，即如SEQIDNO:3所示的核苷酸序列CTGAAGCGCGTACACAC；反向引物(R1)则是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1650-1668bp的核苷酸序列，即如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列AGAGCGGTCA AGTTAAGTT。
本发明的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其中所述的反应试剂混合液是Hotstar Mastermix混合液；所述的正向引物和反向引物是等比例混和的；所述的提取血样DNA的试剂的主要成分为Chelex。
本发明的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其中还包含野生型实时荧光定量探针，野生型实时荧光探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ IDNO:5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列AGAGGAGACA AGTCGTAACATG，并且5’端荧光报告基团不同于突变型实时荧光定量探针的5’端荧光报告基团、3’末端标记了与突变型实时荧光定量探针相同的荧光淬灭基团。
本发明的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其中所述突变型探针5’末端的荧光报告基团是FAM荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，所述突变型实时荧光定量探针的结构如下：
5'FAM-AGAGGAGGCA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'
所述野生型探针5’末端的荧光报告基团是HEX荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，所述野生型实时荧光定量探针结构如下：
5'HEX-AGAGGAGACA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'。
应当指出，5’端荧光报告基团及其相应的3’端荧光淬灭基团可以是本领域中任何可用的荧光基团，并且对于本领域技术人员而言，选择这些荧光报告基团及其相应的荧光淬灭基团也是众所周知的常规技术。例如，荧光染料FAM和HEX可以由其他荧光基团或染料代替，如VIC、JOE等。
上述试剂盒中所述的提取血样DNA的试剂为提取足根血DNA的溶液I，其主要成分为Chelex(ABI公司产品)；或者提取血样DNA的试剂为外周血DNA提取试剂，选用市售产品配套使用。
应当指出，术语“试剂盒”是还应当包括具有不同于试剂盒的名称，但与试剂盒具有类似结构或组分以及生物学功能的生物学产品。
本发明的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的实时荧光定量探针及正、反向引物及试剂盒与现有技术(如Hae III酶切鉴定方法)相比有以下优点：
1.本发明检测线粒体耳聋基因A1555G突变操作步骤和反应时间均比现有技术(如Hae III酶切鉴定方法)有明显优势：本发明仅需一次PCR过程即可检测出是否存在A1555G突变，比现有技术(如Hae III酶切鉴定方法)简省了PCR后的琼脂糖凝胶电泳检测、酶切反应和酶切后琼脂糖凝胶电泳检测三个步骤，不仅减少了PCR反应后处理带来的污染风险，还将反应时间由原来的将近6小时缩短到1.5小时。
2.本发明两条探针设计分别针对A1555G突变型和A1555A野生型，当共同存在于同一体系时每种探针只与序列与其完全匹配的模板结合，故特异性极强。对一份模板而言，如果检测到突变型探针的5’端荧光(如FAM荧光)，未检测到野生型探针的5’端荧光(如HEX荧光)可以肯定为A1555G突变型；如果反之则可肯定为A1555A野生型。并且理论上，一个体系中仅加入针对A1555G突变型模板的突变型探针即可进行诊断。但是当同时加入两种探针时，可以起到反向校正的双保险作用，从而使结果更为准确可靠。此外，探针技术的高特异性和光谱技术的敏感性赋予了本发明重复性好、特异性强、敏感性高和易操作等优点。
3.本发明的结果判读在实时定量PCR仪器的分析软件支持下进行，具有自动化的优点，减少了人为的误差。
4.应用本发明提供的试剂盒或相关产品进行A1555G突变检测，成本较其他常规检测方法更低。
由此可见，本发明的探针及其试剂盒填补了国内相关检测领域的空白，并且其操作简便、判读直观、特异性强、敏感性高、价格低廉等优点为在全国范围内实行母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的筛查和抗生素应用前预防性检测提供了更为便利的条件，从而根本上减少对氨基糖甙类抗生素敏感的个体发生药物性耳聋的机会。
附图说明
图1所示132例不同基因型的实时荧光定量PCR检测的部分结果图(Allelic data forCycling A.FAM/Sybr,Cycling A.JOE)。
图2所示132例不同基因型的实时荧光定量PCR检测的部分结果图的图例。
具体实施方式
母系遗传耳聋线粒体基因A1555G突变的检测
1.检测样本
从中国人民解放军总医院聋病分子诊断中心聋病资源库选取感音神经性耳聋患者132人，从被检个体提取外周全血DNA(袁慧军等，中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33(2)：67-70；李为民等，临床耳鼻咽喉科杂志，2001，15(增刊):53-58)，作为检测样本。
2.探针和引物设计
根据己公开的线粒体基因序列(Cambridge Sequence或NCBI人线粒体基因组序列NC_001807.4或NT_006713.14等，或序列号SEQ ID NO:5)，使用Genetool Lite程序协助设计引物和Taqman探针序列，其中：
突变型荧光探针(T1)的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1548-1569bp区域中(如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列)，并且荧光报告基团是FAM荧光报告基团，荧光淬灭基团是TAMRA荧光淬灭基团，探针结构如下：
5'FAM-AGAGGAGGCAAGTCGTAACATG-TAMRA 3'
野生型荧光探针(T2)的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1548-1569bp区域中(如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列)，并且荧光报告基团是HEX荧光报告基团，荧光淬灭基团是TAMRA荧光淬灭基团，探针结构如下：
5'HEX-AGAGGAGACAAGTCGTAACATG-TAMRA 3'
正向引物(F1)是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1467-1483bp核苷酸序列，其序列为序列表中的SEQIDNO:3；反向引物(R1)是则是其所示的1650-1668bp的核苷酸序列，其序列为序列表中的SEQ ID NO:4。
3.PCR扩增反应
根据上述设计的探针核苷酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、以及引物序列SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4，通过人工合成得到探针T1、T2、正向引物F1和反向引物R1，并以上述提取的被测样本的外周血DNA为模板，进行实时定量PCR扩增反应：
反应体系：
Figure GDA0000604055410000071
另外，如果需要，加入1μl的T2(2pmol/ml)
加三蒸水至20μl体积。
反应条件如表1所示：
95℃变性10分钟后，接着95℃变性30秒，59℃退火30秒,，共进行40个循环，在每个循环退火时采集荧光。
表1
4.结果
132名受检对象中以实时荧光定量Taqman探针法共检测到32人携带mtDNA的A1555G突变。
5.实时定量Taqman探针法可靠性的检验
所有被检测个体的1555bp位点均经过Alw26I酶切和直接测序两种方法进行验证，结果证明根据实时荧光定量Taqman探针法检测到的携带A1555G突变的32个耳聋患者，其含有1555位点的扩增产物均不能被Alw26I切开；而不携带A1555G突变的100名个体，其含有1555位点的扩增产物均能被Alw26I切开。直接测序法证实了Taqman探针法的结果。三种方法的吻合率为100％，说明使用本发明方法检测A1555G突变的可靠性和稳定性。具体数据参见表2。
表2
Figure GDA0000604055410000081
Figure GDA0000604055410000091
Figure GDA0000604055410000111
Figure GDA0000604055410000121
Figure GDA0000604055410000141
Figure GDA0000604055410000151

Claims (3)

1.一种检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其特征在于：包括提取血样DNA的试剂、PCR扩增反应试剂混合液、实时荧光定量探针和扩增所述实时荧光定量探针的正向引物和反向引物，所述实时荧光定量探针的核苷酸序列位于如母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1548-1569bp区域中，即如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列AGAGGAGGCAAGTCGTAACA TG，并且在实时荧光定量探针片段的5’末端标记了荧光报告基团、3’末端标记了荧光淬灭基团，称之为突变型实时荧光定量探针，所述正向引物(F1)是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1467-1483bp核苷酸序列，即如SEQIDNO:3所示的核苷酸序列CTGAAGCGCG TACACAC；反向引物(R1)则是母系遗传线粒体耳聋基因序列SEQ ID NO:5所示的1650-1668bp的核苷酸序列，即如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列AGAGCGGTCA AGTTAAGTT。
2.根据权利要求1所述的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其特征在于：所述的反应试剂混合液是Hotstar Mastermix混合液；所述的正向引物和反向引物是等比例混和的；所述的提取血样DNA的试剂的主要成分为Chelex。
3.根据权利要求2所述的检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的试剂盒，其特征在于：突变型探针5’末端的荧光报告基团是FAM荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，突变型实时荧光定量探针的结构如下：
5'FAM-AGAGGAGGCA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'
野生型探针5’末端的荧光报告基团是HEX荧光报告基团，3’末端的荧光淬灭基团的是TAMRA荧光淬灭基团，野生型实时荧光定量探针结构如下：
5'HEX-AGAGGAGACA AGTCGTAACA TG-TAMRA 3'。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1987462B (zh) * 2006-12-26 2015-03-25 金政策 检测母系遗传线粒体耳聋基因a1555g突变的试剂盒
CN101818193B (zh) * 2009-11-13 2012-09-05 中国人民解放军总医院 筛查检测线粒体dna片段缺失的序列及试剂盒
CN102154481B (zh) * 2011-02-11 2013-01-02 智海生物工程（北京）有限公司 一种线粒体突变检测方法及试剂盒
CN103571846B (zh) * 2012-07-18 2017-07-18 中国人民解放军总医院 Atp6v1b2基因突变体及其应用
CN102994643B (zh) * 2012-12-27 2014-05-07 北京市农林科学院 用于检测鸡fmo3基因a1034t突变的引物和探针
CN107287303A (zh) * 2017-06-28 2017-10-24 浙江大学 线粒体耳聋a1555g突变的荧光定量pcr检测试剂盒及其应用
CN112746105A (zh) * 2021-01-26 2021-05-04 上海博奥颐和医学检验所有限公司 一种遗传性耳聋基因检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1490415A (zh) * 2003-09-10 2004-04-21 朴 戴 母系遗传耳聋线粒体基因1555位a→g突变的检测方法及其试剂盒
WO2004046388A1 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Murdoch Childrens Research Institute Genotyping of deafness by oligonucleotide microarray analysis

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5506101A (en) * 1993-06-30 1996-04-09 Cedars-Sinai Medical Center Method for detection of susceptibility mutations for ototoxic deafness
JP4366921B2 (ja) * 2002-07-12 2009-11-18 セイコーエプソン株式会社 本人照合装置、カード型情報記録媒体及びそれを用いた情報処理システム
US7700750B2 (en) * 2003-01-09 2010-04-20 Third Wave Technologies, Inc. Connexin allele detection assays
US20040166495A1 (en) * 2003-02-24 2004-08-26 Greinwald John H. Microarray-based diagnosis of pediatric hearing impairment-construction of a deafness gene chip
CN1624154A (zh) * 2003-12-01 2005-06-08 北京诺赛基因组研究中心有限公司 用RFLP法检测人体组织微量样品中线粒体12s rRNA基因突变的方法
CN1987462B (zh) * 2006-12-26 2015-03-25 金政策 检测母系遗传线粒体耳聋基因a1555g突变的试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004046388A1 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Murdoch Childrens Research Institute Genotyping of deafness by oligonucleotide microarray analysis
CN1490415A (zh) * 2003-09-10 2004-04-21 朴 戴 母系遗传耳聋线粒体基因1555位a→g突变的检测方法及其试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chang-Hung Hsu, et al..Hearing Loss in Mitochondrial Disorders.《New York Academy of Sciences》.2006,第2005年卷36-47. *
袁永一等.实时荧光定量Taqman探针法检测线粒体基因1555 A>G突变.《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》.2009,第44卷(第2期),160-164. *

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