CN1986775A - 适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 - Google Patents
适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1986775A CN1986775A CN 200610155430 CN200610155430A CN1986775A CN 1986775 A CN1986775 A CN 1986775A CN 200610155430 CN200610155430 CN 200610155430 CN 200610155430 A CN200610155430 A CN 200610155430A CN 1986775 A CN1986775 A CN 1986775A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- subtilis strain
- fermented soybean
- fermentation
- dandc1
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 12
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 12
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 title claims abstract description 12
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 title claims abstract description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 abstract 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 2
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 235000001405 Artemisia annua Nutrition 0.000 description 2
- 240000000011 Artemisia annua Species 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 2
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000001431 Psychomotor Agitation Diseases 0.000 description 2
- 206010038743 Restlessness Diseases 0.000 description 2
- 235000012735 amaranth Nutrition 0.000 description 2
- 239000004178 amaranth Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术领域，涉及微生物发酵菌株。提供了一种适于淡豆豉生产的枯草芽孢杆菌菌株。该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNo.1863，菌株命名为DANDC1，菌株的16srDNA部分序列如本发明的序列表所示：SEQIDDANDC1。本发明提供的枯草芽孢杆菌菌株来源于以淡豆豉为原料的筛选。采用本发明的菌株可提高淡豆豉发酵生产的稳定性和发酵产品的安全性，确保发酵产品的营养和功能品质的一致和减少病原微生物的侵入。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及微生物发酵菌株的确定，特别是适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株。
背景技术
淡豆豉是我国特产的以大豆为原料的发酵类中药，根据我国历代医书，其主要功能为解表、除烦、宣发郁热，用于感冒、寒热头痛、烦躁胸闷、虚烦不眠。现代研究表明，其还具有降血糖、调节血脂、抗氧化、体外抗肝癌细胞的作用。目前，由于淡豆豉的生产还是靠自然发酵，因而存在多种问题：1、来自于原料、器具及自然环境中的多种微生物会相互竞争生长，那些最适合于食品底物和生产条件的微生物会快速生长并渐渐成为优势菌种，因此发酵中的优势菌种往往会因生产条件的差异存在可变性，从而导致发酵产品的营养和功能品质的不一致性；2、更糟的是，该优势菌种可能并不适合发酵生产淡豆豉，造成发酵的失败，使得发酵生产的稳定性差。3、有些污染菌可能还是病原菌，如黄曲霉的某些菌株会产生引起人、畜肝脏致癌的黄曲霉毒素，给食品安全带来影响。因此，有必要找到适合淡豆豉生产的发酵菌株，采用纯种发酵来改变当前这种不利的局面，对发酵进行科学化管理，提高其竞争力，发扬我国传统中药。
本发明的目的就是提供一种适用于淡豆豉纯种发酵的菌株，以改变现有淡豆豉生产技术存在的上述问题。
发明内容
本发明提供了一种适于淡豆豉生产的枯草芽孢杆菌菌株，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：CGMCC No.1863。菌株命名为DANDC1，菌株的16srDNA部分序列如本发明的序列表所示：SEQID DANDC1。
本发明提供的适于淡豆豉生产的枯草芽孢杆菌菌株来源于下述方法：
以淡豆豉为原料，采用常规梯度稀释法，接种于KMB培养基37℃培养24小时，挑选出菌落形态不同的数量占优的两种菌株进行划线分离纯化，得到纯培养物，分别命名为DANDC1、DANDC2。经革兰氏染色、芽孢染色、接触酶实验检验都为阳性，证实其符合芽孢杆菌属的特征。再通过提取细菌总DNA，根据芽孢杆菌16srDNA的保守序列设计引物，利用PCR反应扩增得到各菌株的16srDNA，经纯化后用自动核酸测序仪测定16srDNA序列的组成，将测序结果与genebank中的序列进行比对，鉴定其为枯草芽孢杆菌。用这两种菌株进行了淡豆豉的试制研究，结果表明：产品表面黑色、皱缩不平，断面棕黑色，质柔软，气香，味微甘。经1％吲哚醌∶醋酸(10∶1)的混合溶液检验显紫红色，1％硫酸铜溶液与40％氢氧化钾溶液检验无紫红色出现。以上特征都符合《中国药典》对淡豆豉的要求。
菌种保藏方法如下：
用LB培养基(胰蛋白胨5g、酵母粉2.5g、氯化钠5g、500ml蒸馏水、pH值7.5左右)37℃150rpm培养过夜，添加无菌甘油并使其终浓度为20％左右，放于-70℃保藏。
菌种保藏
菌种分类命名：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；保藏日期：2006年11月10日；保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称：CGMCC；保藏编号：NO.1863。
具体实施方式
本发明为验证以上枯草芽孢杆菌DANDC1用于淡豆豉工艺的生产效果，用其作为制曲菌种，以大豆为主料，桑叶、青蒿为辅料来生产淡豆豉，具体工艺路线如下：
(1)大豆的浸泡和蒸煮
取桑叶、青蒿各100克加水2500克煎煮，过滤，煎液拌入1000克洗净的大豆中，待吸尽后，0.1MPa高压蒸煮40分钟。
(2)种子液的制备
采用KMB液体培养基，无菌条件下接入枯草芽孢杆菌DANDC1菌种，摇床150rpm培养18小时后根据营养琼脂平板菌落计数，用无菌生理盐水将其稀释成含活菌数107个/毫升的种子液。
(3)接种制曲和后酵
按蒸煮大豆∶种子液＝100∶1(w/v)的量接种后，在37℃放置48小时，洗曲，再于密闭容器中45℃放置7天，取出干燥。
本产品表面黑色、皱缩不平，断面棕黑色，质柔软，气香，味微甘。经1％吲哚醌∶醋酸(10∶1)的混合溶液检验显紫红色，1％硫酸铜溶液与40％氢氧化钾溶液检验无紫红色出现。本发明的有益效果是：
(1)为淡豆豉生产的制曲工艺提供了纯种菌，有利于提高发酵生产的稳定性，保证发酵产品的营养和功能品质的一致性。
(2)减少了发酵过程中病原微生物的侵入，有利于提高发酵产品的卫生和安全。
本发明所述枯草芽孢杆菌菌株DANDC1的16srDNA部分序列如以下序列表所示：
序列表：
SEQID DANDC1
gctccctgat gttagcggcg gacgggtgag taacacgtgg gtaacctgcc tgtaagactg 60
ggataactcc gggaaaccgg ggctaatacc ggatggttgt ttgaaccgca tggttcaaac 120
ataaaaggtg gcttcggcta ccacttacag atggacccgc ggcgcattag ctagttggtg 180
aggtaacggc tcaccaaggc aacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact 240
gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg 300
acgaaagtct gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct 360
gttgttaggg aagaacaagt accgttcgaa tagggcggta ccttgacggt acctaaccag 420
aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc 480
ggaattattg ggcgtaaagg gctcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccccg 540
gctcaaccgg ggagggtcat tggaaactgg ggaacttgag tgcagaagag gagagtggaa 600
ttccacgtgt agcggtgaaa tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc gaaggcgact 660
ctctggtctg taactgacgc tgaggagcga aagcgtgggg agcgaacagg attagatacc 720
ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttag ggggtttccg ccccttagtg 780
ctgcagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa 840
ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa 900
gaaccttacc aggtcttgac atcctctgac aatcctagag ataggacgtc cccttcgggg 960
gcagagtgac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1020
cccgcaacga gcgcaaccct tgatcttagt tgccagcatt cagttgggca ctctaaggtg 1080
actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga 1140
cctgggctac acacgtgcta caatggacag aacaaagggc agcgaaaccg cgaggttaag 1200
ccaatcccac aaatctgttc tcagttcgga tcgcagtctg caactcgact gcgtgaagct 1260
ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca 1320
caccgcccgt gcaca 1335
Claims (1)
1、适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.1863，菌株的16srDNA序列组成如SEQIDDANDC1所述。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610155430 CN1986775A (zh) | 2006-12-25 | 2006-12-25 | 适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610155430 CN1986775A (zh) | 2006-12-25 | 2006-12-25 | 适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1986775A true CN1986775A (zh) | 2007-06-27 |
Family
ID=38183719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200610155430 Pending CN1986775A (zh) | 2006-12-25 | 2006-12-25 | 适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1986775A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101305785B (zh) * | 2008-07-01 | 2011-03-16 | 华南理工大学 | 一种溶血栓豆豉的生产方法 |
| CN104473062A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-01 | 重庆市永川区君意食品厂 | 一种薄荷味豆豉的制备方法 |
| CN108396037A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-14 | 刘文永 | 一种用于曲类中药的发酵方法 |
| CN115919922A (zh) * | 2022-12-06 | 2023-04-07 | 黑河冯了性中药饮片有限公司 | 一种混菌发酵制备淡豆豉的方法 |
-
2006
- 2006-12-25 CN CN 200610155430 patent/CN1986775A/zh active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101305785B (zh) * | 2008-07-01 | 2011-03-16 | 华南理工大学 | 一种溶血栓豆豉的生产方法 |
| CN104473062A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-01 | 重庆市永川区君意食品厂 | 一种薄荷味豆豉的制备方法 |
| CN108396037A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-14 | 刘文永 | 一种用于曲类中药的发酵方法 |
| CN115919922A (zh) * | 2022-12-06 | 2023-04-07 | 黑河冯了性中药饮片有限公司 | 一种混菌发酵制备淡豆豉的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105779297B (zh) | 一株产高活性多酚氧化酶的酵母菌及其在普洱茶生产中的应用 | |
| CN1994116A (zh) | 生产淡豆豉的纯种发酵工艺 | |
| CN113604395B (zh) | 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌 | |
| CN105132321A (zh) | 一种屎肠球菌及其高密度固态发酵的培养基及方法 | |
| CN104745503B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其在淡雅型白酒中的应用 | |
| CN110982759A (zh) | 一株具有抗氧化能力的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN101270336A (zh) | 热带假丝酵母zd-3菌株及其用途及用以生产生物蛋白饲料的方法 | |
| CN1986775A (zh) | 适用于淡豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 | |
| CN107151638A (zh) | 一株改善肝功能的植物乳杆菌zy001及其在发酵乳中的应用 | |
| CN114032190A (zh) | 一株可发酵石斛且其发酵液可有效修复日光皮炎的罗伊氏乳杆菌 | |
| CN111607621A (zh) | 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用 | |
| CN104894026B (zh) | 纳豆芽孢杆菌的培养方法及其应用 | |
| JP2019517810A (ja) | α−グルコシダーゼ阻害剤を多量生産するバチルス・リケニフォルミスＮＹ１５０５菌株 | |
| CN112940967B (zh) | 一株发酵乳杆菌mf423及其发酵米糠提取物和它们的应用 | |
| CN103782794A (zh) | 一种促进冬虫夏草菌产分生孢子的方法 | |
| CN113875975B (zh) | 一种利用小麦加工副产物制备后生元的发酵工艺 | |
| CN100441680C (zh) | 适用于细菌型豆豉纯种发酵的枯草芽孢杆菌菌株 | |
| CN111363692B (zh) | 一种复合菌剂及其发酵产物的应用 | |
| CN114032179B (zh) | 一株产cbd的工业大麻内生真菌及其应用 | |
| CN115975864A (zh) | 一种祁术内生贝莱斯芽孢杆菌、筛选方法及其应用 | |
| CN108741087A (zh) | 一种通过益生菌发酵植物细胞果粒或器官制作酵素的方法 | |
| CN108239616A (zh) | 一株屎肠球菌菌株及其在酸浆豆腐加工中的应用 | |
| CN103589660A (zh) | 一株产雷公藤甲素的内生细菌 | |
| CN105647812B (zh) | 一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用 | |
| CN108004181B (zh) | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其培养物和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20070627 |