CN1981845B

CN1981845B - 一种中药组合物及其制备方法与应用

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Publication number: CN1981845B
Application number: CN2005101296070A
Authority: CN
Inventors: 孙耀志; 李长春; 高松; 郭水柱
Original assignee: WANXI PHARMACEUTICAL CO Ltd HENAN PROV
Current assignee: ZHONGJING WANXI PHARMACEUTICAL CO., LTD.
Priority date: 2005-12-15
Filing date: 2005-12-15
Publication date: 2011-04-20
Anticipated expiration: 2025-12-15
Also published as: CN1981845A

Abstract

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法与应用，该中药组合物由西洋参、熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻的原料药制备得到，所述组合物具有增强免疫力的作用，并对辐射危害有辅助保护功能。

Description

一种中药组合物及其制备方法与应用

技术领域

背景技术

目前，随着社会的进步，科技的发展，人类的自然生存环境也产生了变化，为人类的健康带来了隐患。首先是环境的电磁辐射污染，不久前，美国一个研究气候变化的专家委员会得出结论认为，到2050年全球气温将平均提高2度。全球气温变暖和大气臭氧层破坏而引起的紫外辐射增强，破坏了人体的抗病能力，损害人体的免疫系统而诱发许多疾病，紫外辐射的增加对人类造成的威胁将越来越严重。与此同时，随着各种电器的普遍使用，人工生成的电磁辐射污染日益严重，人们长期处于电视、电脑、手机、空调等等电器的包围中，如果不加注意，其产生的电磁辐射污染就可能会破坏你的免疫、循环、生殖和代谢等功能，使得白细胞减少，甚至诱发癌症。其次，自然环境的变化还表现在环境污染方面。比如，随着工业化的进程，其产生的废烟、废气、废水、废渣和噪音污染日趋严重；交通工具(所有的燃油车辆、轮船、飞机等)的大量使用排出的废气和噪音；大量使用化肥、杀虫剂、除草剂等化学物质的农田流出的水，激素、农药在食物中的残留等等均会对人体的健康产生不同程度的危害，使得人们免疫力降低，抵抗能力下降而导致各种疾病的发生。再者，随着时代的进步，科技的发展，知识的更新周期不断缩短，各行业的竞争日益激烈，为了能在竞争中生存、发展，无论是体力，还是脑力，人们的付出都在不断增加，长期处于紧张状态，天旷日久，均会导致人体免疫力的低下。

经过国内有关方面应用现代医学及药理学等方法，对中医“肾”的藏象学说作了深入的研究，认为肾的实质，除肾脏本身外，与下丘脑—垂体—肾上腺皮质系统和下丘脑—垂体—性腺系统有密切关系，肾亏或者肾气过早衰退的人，可呈现内分泌系统功能的减退，免疫功能的低下，并且影响其它内脏器官的生理功能。为了增强人体免疫力、防止电磁辐射污染对人体产生的危害，充分发挥中医药在生活保健中的作用，根据传统的中医药理论，结合现代的临床及药理学研究结果，选择了在六味地黄汤基础上加减化裁而得本发明的中药组合物。该中药组合物的配方由西洋参、熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻组成，易滋阴名方为气阴双补之剂，具有滋补肝肾，益气养阴之功，在“滋阴补肾”名方六味地黄汤的基础上加减而成，更增气阴双补之功。西洋参补气养阴，清火生津，《医学衷中参西录》说：“西洋参性凉而补，凡欲用人参而不受人参之温补者，可以此代之”，熟地滋阴补肾，生血填精益髓，以固封藏之本；配西洋参既可增强滋阴生津之力，又能补气以生阴，补阴以化气，奏气阴双补之效，故并列用为主药。山茱萸滋养肝肾，酸涩固精，怀山药补益脾肾，益气养阴而固精，共为辅药，主辅四药互配，滋补肝、脾、肾，益气养阴，补其不足以治本。配泽泻泄肾利湿，疏水道之滞，并防熟地之滋腻、山茱萸之酸收；茯苓淡渗脾湿，而通肾交心，以助怀山药之健运。以上二药泻湿浊平其偏胜以治标，均为佐药。全方配合，四补二泻，以补为主，肝脾肾三阴并调，气阴双补，尤以补肾为要，相辅相成，构成通补开合之剂。故具滋补肝肾，益气养阴之功。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药组合物，该组合物具有增强免疫力的作用，并对辐射危害有辅助保护功能。

为实现上述目的，本发明的中药组合物的活性成分是由下列原料药制备得到：

西洋参20-100重量份熟地黄120重量份山茱萸60重量份

山药60重量份茯苓45重量份泽泻45重量份。

本发明的另一目的是提供上述中药组合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后60～90℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，在烘干过程中既可充分去除水分，经验证也可达到杀灭微生物的效果，粉碎在10万级洁净区进行。

(2)山茱萸的处理：筛检山茱萸，确保原料的清洁卫生，然后蒸制。

(3)熟地黄、泽泻和茯苓的处理：筛检熟地黄、泽泻和茯苓，确保原料的清洁卫生，切厚片。

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.40(20℃)的稠膏。经验证在上述煎煮条件下可达到杀灭各种微生物的效果，过滤在10万级洁净区进行。

(5)将步骤(1)的西洋参和山药细粉与步骤(4)所得山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓的提取浓缩稠膏混合，得到本发明中药组合物的活性成分。

将上述所得活性成分采用常规方法制成各种所需剂型，例如：

(a)采用常规塑制法制丸，干燥，打光，制得浓缩丸剂；或者

(b)制粒，然后压制成片，制成片剂；或者

(c)制粒，然后填充胶囊，制成胶囊剂。

上述西洋参、山药打细粉，熟地黄、山茱萸、泽泻、茯苓的提取液出口处以及浓缩、烘干、打光、制粒、压片、包装等步骤都在干燥的洁净室(10万级)中进行。

本发明的中药组合物的口服液剂型可采用如下方法制备：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，切片；

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓合并，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.20(20℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达到58～75％，搅匀，静置24～48小时，吸上清液，回收乙醇，滤过，浓缩至适量，加入蒸馏水至1000(w/v)，搅匀，过滤，灌封，最后高压蒸汽灭菌，制成口服液。

本发明的中药组合物的颗粒剂可采用如下方法制备：

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓合并，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30(20℃)的清膏，加入适量辅料糊精及蔗糖，制粒，包装，即得颗粒剂。

本发明的中药组合物可制备成任何一种可药用剂型，优选制备为口服剂型，如浓缩丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液等。

本发明中药组合物采用的原料符合《中华人民共和国药典》2005年版的标准。

附图说明

图1为本发明中药组合物的实施例之一的活性成分以及丸剂的制备工艺流程图。

具体实施方式

制备实施例

实施例1：本发明中药组合物的浓缩丸剂制备

丸剂原料药配方如下：

西洋参20g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后60℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，在烘干过程中既可充分去除水分，经验证也可达到杀灭微生物的效果，粉碎在10万级洁净区进行。

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水6倍量，煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.40(20℃)的稠膏。经验证在上述煎煮条件下可达到杀灭各种微生物的效果，过滤在10万级洁净区进行。

(5)将步骤(1)的西洋参和山药细粉与步骤4所得山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓的提取浓缩稠膏混合，得到本发明中药组合物的活性成分。

然后，用上述混合物制丸，干燥，打光，制得浓缩丸剂。

实施例2：本发明中药组合物的丸剂制备

丸剂原料药的配方如下：

西洋参45g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后80℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，在烘干过程中既可充分去除水分，经验证也可达到杀灭微生物的效果，粉碎在10万级洁净区进行。

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水8倍量煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.40(20℃)的稠膏。经验证在上述煎煮条件下可达到杀灭各种微生物的效果，过滤在10万级洁净区进行。

然后，用上述混合物制丸，干燥，打光，制得浓缩丸剂。

实施例3：本发明中药组合物的片剂制备

片剂原料药的配方如下：

西洋参65g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后70℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，在烘干过程中既可充分去除水分，经验证也可达到杀灭微生物的效果，粉碎在10万级洁净区进行。

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水10倍量煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.40(20℃)的稠膏。经验证在上述煎煮条件下可达到杀灭各种微生物的效果，过滤在10万级洁净区进行。

(5)将步骤(1)的西洋参和山药细粉与步骤(4)所得山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓的提取浓缩稠膏混合，得到本发明中药组合物的活性成分；然后，用上述混合物制粒，干燥，压片，制成片剂。

实施例4：本发明中药组合物的口服液制备

口服液原料药的配方如下：

西洋参80g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，切片。

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水11倍量煎煮二次，每次2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15(20℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达到70％，搅匀，静置48小时，吸上清液，回收乙醇，滤过，浓缩至适量，加入蒸馏水至1000(w/v)，搅匀，过滤，灌封，最后高压蒸汽灭菌，制成口服液。

实施例5：本发明中药组合物的胶囊剂制备

胶囊剂原料药配方如下：

西洋参100g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后90℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，在烘干过程中既可充分去除水分，经验证也可达到杀灭微生物的效果，粉碎在10万级洁净区进行。

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水12倍量煎煮二次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.35～1.40(20℃)的稠膏。经验证在上述煎煮条件下可达到杀灭各种微生物的效果，过滤在10万级洁净区进行。

(5)将步骤(1)的西洋参和山药细粉与步骤(4)所得山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓的提取浓缩稠膏混合，得到本发明中药组合物的活性成分；然后，用上述混合物制粒，干燥，填充胶囊，制成胶囊剂。

实施例6：本发明中药组合物的颗粒剂的制备

颗粒剂原料药的配方如下：

西洋参70g 熟地黄120g 山茱萸60g

山药60g 茯苓45g 泽泻45g。

制备方法：

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水9倍量煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25(20℃)的清膏，加入适量辅料糊精及蔗糖，制粒，包装，即得颗粒剂。

生物活性实验例

一、本发明中药组合物增强免疫力的实验：

1.材料和方法

1.1样品：实施例2的黑色浓缩丸，人体推荐摄入量为1600mg/人/日。

1.2试验动物及分组：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的F1代健康雄性小鼠120只，BALB/C健康雄性小鼠80只，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2003-0002，合格证号：0005718。

其中18.0～23.8gF1代小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，作为I组，进行二硝基氟苯诱导小鼠DTH试验；18.2～23.4g F1代小鼠40只，随机分为4组，每组10只，作为II组，进行小鼠碳廓清试验；18.5～23.8g F1代小鼠40只，随机分为4组，每组10只，作为III组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验；17.0～20.4g BALB/C小鼠40只，随机分为4组，每组10只，作为IV组，进行小鼠抗体生成细胞及半数溶血值(HC₅₀)试验；17.0～20.9g BALB/C小鼠40只，随机分为4组，每组10只，作为V组，进行小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化、NK细胞活性试验。

1.3剂量：每人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为1600mg，相当于26.7mg/d/kg.bw。分别按人体推荐摄入量5倍、10倍、30倍设计三个剂量组即133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw，另设0mg/kg.bw组以无菌水代替受试物。受试物配制浓度低、中、高剂量分别为13.3mg/mL、26.7mg/mL、80mg/mL，经口每日一次给予小鼠相应浓度的受试物，小鼠灌胃量为10mL/kg.bw，连续灌胃30d后测各项增强免疫力功能指标。

1.4饲养条件：小鼠在温度为18～22℃、相对湿度为40％～70％的屏障系统中饲养。实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2002-0014。小鼠辐照灭菌饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供。

1.5主要试剂：DNFB、SRBC、豚鼠血清、印度墨汁、RPMI1640、ConA、MTT、异丙醇、SA缓冲液、都氏试剂、YAC-1细胞、LDH基质液。

1.6主要仪器：打孔器、T-1000型电子天平、JA2003型电子天平、722型分光光度计、超净工作台、酶标仪、二氧化碳培养箱。

1.7试验方法：按《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》之增强免疫力功能检验方法进行。

1.7.1ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)：

各剂量组动物连续灌胃1个月，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mL RPMI1640完全培养液中，台酚蓝染色计数活细胞数(均在95％以上)，用RPMI1640完全培养液将细胞浓度调整为3×10⁶个/mL。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液，另一孔作为对照，置5％CO2、37℃孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。将溶解液移入96孔培养板中，波长570nm，酶标仪测定光密度值。

1.7.2二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)(耳肿胀法)：

各剂量组动物连续灌胃1个月，每鼠用剃毛机将腹部毛剃去，范围约3cm×3cm，用浓度为10mg/mL DNFB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油＝1∶1)50μL均匀涂抹致敏。5日后用浓度为10mg/mLDNFB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油＝1∶1)10μL均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重。同时取小鼠脾脏、胸腺并称重，计算脏/体比值。

1.7.3血清溶血素测定：

各剂量组动物连续灌胃1个月，制备2％(v/v)的绵羊红细胞(SRBC)悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫，4d后摘除眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，分离并收集血清。血清200倍稀释后，按检验方法测定样品管及SRBC半数溶血时的光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示。

1.7.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：

各剂量组动物连续灌胃1个月，每只鼠腹腔注射2％(v/v)的SRBC悬液0.2mL进行免疫，4d后小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮于5mLRPMI1640培养液中，计数细胞数，用RPMI1640完全培养液将细胞浓度调整为5×106个/mL。将表层培养基加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2～7.4两倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％SRBC(v/v，用SA缓冲液配制)50μL，20μL脾细胞悬液(5×106个/mL)，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入CO2培养箱中孵育1.5h，然后将制备好的补体1∶8稀释后加入到玻片架凹槽内，继续孵育1.5h后，计数溶血空斑数。

1.7.5小鼠碳廓清试验：

各剂量组动物连续灌胃1个月，每鼠尾静脉注入4倍稀释的印度墨汁(0.1mL/10g.bw)，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2min及10min分别从眼内眦静脉丛取血20μL，并将其加到2mL 0.1％Na₂CO₃溶液中，用722分光光度计在600nm波长处测光密度值。

1.7.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)：

各剂量组动物连续灌胃1个月，制备20％(v/v)的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃温箱孵育30min，然后，于生理盐水中漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干，光镜下观察。

1.7.7NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)：

各剂量组动物连续灌胃1个月，颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mLHank’s液，离心10min(1000r/min)，用1mL含10％小牛血清RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰乙酸稀释后计数，台酚蓝染色计数活细胞数(均在95％以上)，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/mL。

试验前24h将靶细胞(YAC-1细胞)传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/mL。取YAC-1细胞和脾细胞各100μL(效靶比50∶1)加入U型96孔培养板中，YAC-1细胞自然释放孔加YAC-1细胞和培养液各100μL，YAC-1细胞最大释放孔加YAC-1细胞和1％NP40各100μL，上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO₂培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清液100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应10min，每孔加入1mol/L的HCl 30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值。

1.8数据分析：用SPSS10.0软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

2结果

2.1对小鼠体重的影响

由表1可见，小鼠的初始体重在133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。表明小鼠的初始体重在各组间较为均衡。

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，各剂量组体重增长值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表2、表3结果可见133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠体重增长值与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即本发明中药组合物对小鼠的体重增长无影响。

表1各组小鼠的初始体重(x±SD)

续表1

表2各组小鼠的中期体重(x±SD)

表3本发明中药组合物对小鼠体重的影响(x±SD)

续表3

续表3

续表3

2.2本发明中药组合物对小鼠胸腺、脾脏器官的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定的胸腺/体比、脾/体比值进行方差齐性检验，满足方差齐性的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表4结果可见，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表4本发明中药组合物对小鼠胸腺、脾脏器官的影响(x±SD)

2.3本发明中药组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，将加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表5结果可见，800mg/kg.bw组小鼠加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.01)。

表5本发明中药组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响(x±SD)

2.4本发明中药组合物对DNFB诱导小鼠DTH(耳肿胀法)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表6结果可见，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠耳壳增重与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表6本发明中药组合物对DNFB诱导小鼠DTH的影响(x±SD)

2.5本发明中药组合物对小鼠血清半数溶血值(HC₅₀)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表7结果可见，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表7本发明中药组合物对小鼠HC₅₀的影响(x±SD)

2.6本发明中药组合物对小鼠抗体生成细胞(溶血空斑数)的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表8结果可见，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表8本发明中药组合物对溶血空斑数的影响(x±SD)

2.7对小鼠碳廓清能力的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定值进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表9结果可见，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠碳廓清能力显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.05或P＜0.01)。

表9本发明中药组合物对小鼠碳廓清能力的影响(x±SD)

2.8本发明中药组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，将所测定的吞噬指数、吞噬百分率经sin^-1P^1/2(P为吞噬百分率，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表10结果可见，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.05或P＜0.01)。

表10对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率及吞噬指数的影响(x±SD)

2.9本发明中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响

经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物1个月，所测定值经sin^-1P^1/2(P为NK细胞活性，用小数表示)转化后进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表11结果可见，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠NK细胞活性显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.01)。

表11本发明中药组合物对小鼠NK细胞活性的影响(x±SD)

3.结论

本发明中药组合物以133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw连续给样1个月，结果显示：

(1)细胞免疫功能：800mg/kg.bw组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化显著高于0mg/kg.bw组。

(2)单核-巨噬细胞免疫功能：267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠碳廓清能力显著高于0mg/kg.bw组；267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数显著高于0mg/kg.bw组。

(3)NK细胞活性：267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠NK细胞活性显著高于0mg/kg.bw组。

可见，本发明中药组合物具有增强免疫力功能。

二、本发明中药组合物对辐射危害的辅助保护功能实验：

1.材料与方法

1.1受试样品：实施例2的本发明中药组合物，黑色浓缩丸，密封置阴凉干燥处保存，供实验用。

1.2试验动物：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的ICR健康雌性小鼠180只，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2003-0002。其中18.0～23.1g小鼠60只，按体重随机分为4组，每组15只，作为辐射I组，进行小鼠骨髓细胞DNA含量测定；18.1～23.3g小鼠60只，按体重随机分为4组，每组15只，作为辐射II组，进行小鼠血清半数溶血值(HC₅₀)测定；18.2～23.7g小鼠60只，按体重随机分为4组，每组15只，作为辐射III组，进行小鼠外周血白细胞计数。

1.3剂量：每人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为1600mg，相当于26.7mg/d/kg.bw。分别按人体推荐摄入量5倍、10倍、30倍设计三个剂量组即133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw，另设0mg/kg.bw辐射模型对照组以无菌水代替受试物。样品配制浓度高、中、低剂量分别为80mg/mL、26.7mg/mL、13.3mg/mL，小鼠灌胃量为10mL/kg.bw，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物。

1.4饲养条件：小鼠在温度为18～22℃、相对湿度为40％～70％的屏障系统中饲养。实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2002-0014。小鼠辐照灭菌颗粒饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供。

1.5主要仪器：Celly HY-318型血细胞分析仪、T-1000型电子天平、紫外分光光度计、722分光光度计。

1.6主要试剂：Hank’s液、SRBC、豚鼠血清。

1.7试验方法：按《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》之对辐射危害有辅助保护功能检验方法进行。

1.7.1小鼠外周血白细胞计数

经口连续给予小鼠相应剂量的本发明中药组合物19d，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量⁶⁰Co-γ射线全身照射一次，照射剂量为4Gy，照射后继续给予小鼠相应剂量受试物。分别于照射前、照射后第3d、照射后第14d三次取小鼠眼眶血进行白细胞计数。

1.7.2小鼠骨髓细胞DNA含量

经口连续给予小鼠相应剂量的本发明中药组合物19d，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量⁶⁰Co-γ射线全身照射一次，照射剂量为4Gy，照射后继续给予小鼠相应剂量受试物。照射后第3d，用颈椎脱臼法处死小鼠，剥离股骨，取3mL Hank’s液，冲出股骨中的全部骨髓细胞，让细胞悬液通过4号针头的注射器，使细胞在悬液中充分分散，用紫外分光光度计于260nm处测光密度值。

1.7.3小鼠半数溶血值(HC₅₀)

经口连续给予小鼠相应剂量的本发明中药组合物19d，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量⁶⁰Co-γ射线全身照射一次，照射剂量为2Gy，照射后继续给予小鼠相应剂量受试物。照射后第9d，制备2％(v/v)的绵羊红细胞(SRBC)悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫，5d后摘除眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，分离并收集血清。血清200倍稀释后，测定样品管及SRBC半数溶血时的光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示。

1.8数据分析：用SPSS10.0软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

2结果

2.1本发明中药组合物对小鼠体重的影响

由表1a可见，小鼠的初始体重在133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。

⁶⁰Co-γ射线照射前，经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物19d，各剂量组小鼠体重进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表2a结果可见133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表1a各组小鼠的初始体重(x±SD)

表2a各组小鼠的终末体重(x±SD)

2.2本发明中药组合物对照射后小鼠白细胞总数的影响

⁶⁰Co-γ射线照射前后，经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物32d，所测定的照射前、照射后第3d、照射后第14d白细胞总数进行正态、方差齐性检验，满足正态分布、方差齐的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表3a结果可见，133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组与0mg/kg.bw组相比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表3a本发明中药组合物对小鼠白细胞总数的影响

2.3本发明中药组合物对照射后小鼠骨髓细胞DNA含量的影响

⁶⁰Co-γ射线照射前后，经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物22d，所测定的各剂量组小鼠骨髓细胞DNA含量进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表4a结果可见267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠骨髓细胞DNA含量显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.05或P＜0.01)。

表4a本发明中药组合物对照射后小鼠骨髓细胞DNA含量的影响(x±SD)

2.4本发明中药组合物对照射后小鼠半数溶血值HC₅₀的影响

⁶⁰Co-γ射线照射前后，经口给予小鼠不同剂量的本发明中药组合物32d，所测定的各剂量组小鼠半数溶血值进行正态、方差齐性检验，满足正态分布要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表5a结果可见800mg/kg.bw组小鼠HC₅₀显著高于0mg/kg.bw组(P＜0.05)。

表5a本发明中药组合物对小鼠HC₅₀的影响(x±SD)

3结论

用一次照射⁶⁰Co-γ射线的方法评价了本发明中药组合物对辐射危害有辅助保护功能的作用。本发明中药组合物以133mg/kg.bw、267mg/kg.bw、800mg/kg.bw剂量连续给予受试物19d，一次照射⁶⁰Co-γ射线，照射后继续给予受试物。结果显示，267mg/kg.bw、800mg/kg.bw组小鼠骨髓细胞DNA含量显著高于0mg/kg.bw组；800mg/kg.bw组小鼠HC₅₀显著高于0mg/kg.bw组。因此认为本发明中药组合物对辐射危害有辅助保护功能。

Claims

1.一种中药组合物，其特征在于，该中药组合物由下述原料药制成：

西洋参20-100重量份熟地黄120重量份山茱萸60重量份

山药60重量份茯苓45重量份泽泻45重量份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述原料药中的西洋参为20重量份、45重量份、65重量份、70重量份、80重量份或100重量份。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，其特征在于所述组合物的形式为口服剂型。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的形式为浓缩丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。

5.一种制备权利要求1至4任意一种中药组合物的方法，其特征在于所述中药组合物的制备包括如下步骤：

(1)西洋参和山药的处理：筛检西洋参和山药，确保原料的清洁卫生，然后60～90℃烘干粉碎成过100目筛的细粉，粉碎在10万级洁净区进行；

(2)山茱萸的处理：筛检山茱萸，确保原料的清洁卫生，然后蒸制；

(3)熟地黄、泽泻和茯苓的处理：筛检熟地黄、泽泻和茯苓，确保原料的清洁卫生，切厚片；

(4)将步骤(2)、(3)所得的山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水6～12倍量煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至20℃时的相对密度为1.35～1.40的稠膏，过滤在10万级洁净区进行；

(5)将步骤(1)的西洋参和山药细粉与步骤(4)所得山茱萸、地黄、泽泻和茯苓的提取浓缩稠膏混合，得到中药组合物的活性成分；

(6)将该活性成分制成所需剂型。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)制备剂型的步骤为：

(a)采用常规塑制法制丸，干燥，打光，制得浓缩丸剂；或者

(b)制粒，然后压制成片，制成片剂；或者

(c)制粒，然后填充胶囊，制成胶囊剂。

7.一种制备权利要求4所述的中药组合物的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓加水6～12倍量煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至20℃时的相对密度为1.15的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达到70％，搅匀，静置48小时，吸上清液，回收乙醇，滤过，浓缩至适量，加入蒸馏水至1000w/v，搅匀，过滤，灌封，最后高压蒸汽灭菌，制成口服液。

8.一种制备权利要求4所述的中药组合物的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(4)将步骤(1)、(2)、(3)所得的西洋参、山药、山茱萸、熟地黄、泽泻和茯苓合并，加水6～12倍量，煎煮二次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至20℃时的相对密度为1.10～1.30的清膏，加入适量辅料糊精及蔗糖，制粒，包装，即得颗粒剂。

9.权利要求1至4任意一种中药组合物在制备增强免疫力药物中的应用。

10.权利要求1至4任意一种中药组合物在制备保护辐射危害作用的药物中的应用。