CN1978457B - 6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,本发明是以醋酸可的松及其衍生物为原料生成6α-甲基强的松龙及其衍生物,其生产方法包括在6位引入次甲基,将次甲基转位成α-甲基,通过节杆菌生物转化法将1,2位脱氢为6α-甲基醋酸强的松,然后选择性还原11-酮为11β-羟基等步骤,用本发明可以获得较高的6α-甲基强的松龙及其衍生物的收率和质量。该方法具有位置专一性强、收率高的特点,对甾体药物制备有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于生物制药及医药工程领域。本发明具体涉及6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产工艺方法。
背景技术
6α-甲基强的松龙及其衍生物结构式如式I所示,其中R为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基中的任意一种,R1、R2为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基中的任意一种,R3为氢;当R为甲基、R1为乙酰基、R2为氢,R3为氢时结构式I表示6α-甲基强的松龙,又称6α-甲基泼尼松龙,它的化学名为11β,17α,21-三羟基-6α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮。6α-甲基强的松龙及其衍生物是一类高效的抗免疫应激反应的肾上腺类皮质激素,广泛地应用于抗免疫应激反应的临床之中。主要是脏器移植、抑制免疫作用、亦可用于急性肾上腺皮质功能不全及手术后休克等。
式I
关于6α-甲基泼尼松龙的合成有许多报道,如Upjohn的以黄体酮为原料,经过11位羟化、3,20位缩酮、过酸氧化Δ5,6、格氏反应生成5-羟基6-甲基、消去5-羟基、john’s试剂氧化11-羟基、草酸丁二酯改造侧链、二氧化硒脱氢和还原11-酮等一系列反应,得到目标产物。专利GB2318790以6-甲基黄体酮醋酸酯为原料,经过新月弯孢霉进行11β-羟化、诺卡氏节杆菌脱氢和液溴法改造侧链得到目标产物。国内也有不少研究工作。如黄鸣龙等合成了目标产物的中间体6α-甲基副皮质醇乙酸酯。蔡祖恽、骆萌等以11-酮17-羟基黄体酮为原料,通过原甲酸三乙酯醚化、mannich反应引入6-次甲基,钯/碳及环己烯还原成为6-甲基,在酸性甲醇中转化成为6α-甲基或在酸性乙二醇中缩酮保护3,20-二酮,用硼氢化钾还原11-酮为11β-羟基,上碘置换方法改造侧链,再用DDQ或微生物脱掉1,2氢成为目标产物。由于目前的生产工艺复杂,步骤繁琐,导致其收率偏低,同时需要使用如格氏试剂、重铬酸、液溴、二氧化硒或DDQ等危险试剂,所以研究一种收率高、反应条件温和、避免使用各种危险试剂的工艺方法,对甾体药物的发展有重要的意义。
发明内容
我国的醋酸可的松及其衍生物的生产在国际处于领先水平,但除了作为泼尼松和泼尼松龙系列产品的中间体外,其余的用途没有得到有效的开发。本发明的目的是提供一种以醋酸可的松为原料制备6α-甲基强的松龙及其衍生物的方法。有效拓宽了醋酸可的松及其衍生物的用途。
在6α-甲基强的松龙及其衍生物生产工艺中,上6α-甲基和Δ1,2-脱氢是其中的关键步骤。本发明提供的方法,具有反应专一性好,各步副产物少,每步的收率高,可以克服现有使用各种危险试剂,产品的收率低,质量不稳定的缺点。以下是对本发明方法的详细说明。
1、本发明以式II所示的醋酸可的松衍生物为起始原料,将3-酮进行醚化处理,同时转移3-酮Δ4为Δ3,5,制得式III所示的化合物。其中,在本专利所涉及到的所有结构式中取代基R为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基中的任意一种,R1、R2为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基中的任意一种,R3为氢。当取代基R为甲基、R1为乙酰基、R2为氢,R3为氢时式II表示醋酸可的松的结构式即17α,21-二羟基-孕甾-4-烯-3,11,20-三酮。
式II 式III
醚化反应在无水条件下进行,以式II所示化合物重量10-15倍的醚(C<10)类作为溶剂,所用的醚可以是乙醚、四氢呋喃等。所用的催化剂为式II所示化合物0.01-0.03倍的各种无水酸,所述无水酸为硫酸、高氯酸、对甲苯磺酸。所用的醚化剂为式II所示化合物0.5~1倍的原甲酸酯,反应温度为25~59℃。反应的时间为1~3小时,最佳反应温度为40~50℃,若反应不完全,可以酌情增加醚化剂,并延长反应时间。
2、式III所示化合物与N-烷基苯胺、醛或酮、卤化物、二甲基甲酰胺、三氯氧磷、钯碳酸盐、环己烯、盐酸、氢气等试剂反应,通过下述三种途径制得式IV所示化合物。
式III 式IV
(1)当R取代基为甲基、乙基、1-丙基和2-丙基时,式III所示化合物与N-烷基苯胺、醛或酮反应,其反应过程如下图所示:
式III 式VI 式IV
在步骤1的终反应液中分别加入式II所示化合物0.25~0.4倍体积的N-烷基苯胺和醛或酮反应1~2小时,所述的醛为甲醛、乙醛和丙醛,所述的酮为丙酮,反应温度20~46℃;加10~20倍的水,于20~35℃搅拌反应1小时,制得式VI所示化合物。
式VI所示化合物用5~10倍体积于它的二甲基亚砜溶解,用0.1~0.2倍体积的钯碳酸盐、以式VI所示化合物等量的环己烯反应2~4小时,反应温度为20~180℃,最佳温度为130~150℃。将反应液在温度0~120℃,真空度≥0.085atm下减压浓缩去除溶剂,调节温度为40~50℃,加入3~5倍的37%盐酸,保温0.5~1小时,加入氢氧化钠调节pH至6~8,加10~20倍的水搅拌1~3小时,即可制得式IV所示化合物。
(2)当R取代基为甲基时,式III所示化合物与卤化碳,如四溴化碳反应,反应过程如下图所示:
式III 式VII 式VIII 式IV
在上一步反应液中分别加入式III所示化合物的1~4倍卤化碳在室温下搅拌40~50小时,减压蒸发掉卤化碳,即可制得式VII所示化合物;
将式VII所示化合物用式VII所示化合物15~30倍体积的有机碱性溶剂溶解,加热至回流并持续20~50分钟,冷却后加入式VII所示化合物200倍体积的水,制得式VIII所示化合物;
将式VIII所示化合物用VII所示化合物10~20倍体积的甲醇溶解,加入1.5~4倍的三乙胺,加入0.1~0.5倍的2%钯碳酸盐,在室温并通入氢气下反应30~60分钟,直至反应液不再吸收氢气。过滤掉钯碳酸盐,将滤液用5~10倍的1mol/L盐酸室温下酸化1小时,加200倍的水,得到式IV所示化合物。
(3)当R取代基为甲基时,式III所示化合物与二甲基甲酰胺/三氯氧磷反应,反应过程如下图所示:
式III 式IX 式VI 式IV
将式III所示化合物溶入式III所示化合物1~2倍体积的二甲基甲酰胺,加入1~3倍的苯,加入式III所示化合物0.5~0.8倍的三氯氧磷,在温度不超过20℃下反应1~3小时,然后加入式III所示化合物2~3倍的醋酸钠-甲醇溶液(醋酸钠∶甲醇=1∶3~6)反应1~2小时,加入式III所示化合物5倍苯和20倍的水,分去水层。将有机层减压浓缩使式IX所示化合物结晶析出。
将式IX所示化合物用式IX所示化合物3~6倍体积的甲醇溶解,在30~50℃下加入式III所示化合物0.1~0.3倍体积的硼氢化钾,反应2~3小时。再加入式III所示化合物0.3~0.5倍体积的37%盐酸,反应1~1.5小时。加入200倍的水,制得式VI所示化合物。将式VI所示化合物按照从式IX所示化合物到式VI所示化合物的步骤进行处理,即可制得式IV所示化合物。
3、式IV所示化合物经过微生物转化,即可制得式V所示化合物,所述的微生物为能产生甾体脱氢酶的微生物。其反应过程如下图所示:
式IV 式V
该反应以含节杆菌(Arthrobacter simplex)的发酵液进行,培养基组成:玉米浆:0.6~2.0%;葡萄糖:0.3~1.0%;蛋白胨:0.1~0.8%,磷酸二氢钾:0.1~0.6%;初始pH为6.4~7.5。
节杆菌经过培养22~28小时后,将粉碎至1μm以下于121℃湿热灭菌20分钟的式IV所示化合物投入到发酵液中,继续发酵48小时后,式V所示化合物转化率可达85%以上。将发酵液酸化、过滤,得到含有式IV、式V所示化合物的滤饼,使用合适的溶剂进行重结晶,溶剂可以是二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、乙醇等,可以用其中的一种或其组合物,将滤饼溶解后,再蒸发掉部分溶剂,直到有少量的结晶析出,冷却至-5~15℃,过滤,即可获得式V所示化合物的结晶体。
4、式V所示化合物与盐酸氨基脲、硼氢化钾、亚硝酸钠反应,即可制得式I所示的6α-甲基强的松龙及其衍生物。其反应过程如下图所示:
式V 式X 式XI 式I
由式V所示化合物制成式X所示化合物的反应为缩合反应,该反应的溶剂可以是甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和二氯甲烷等极性溶剂或非极性溶剂,以能溶解式V所示化合物的量为度,盐酸氨基脲的用量为式V所示化合物的0.3~0.5倍,反应温度为30~70℃,反应时间为8~12小时,若反应不完全,可适度增加反应物和反应时间。
式X所示化合物与式V所示化合物0.2~0.4倍的硼氢化钾进行反应,可以制得式XI所示化合物,所用的溶剂同缩合反应所用溶剂,反应温度为30~60℃,反应时间为4~7小时,pH为5~8。过量的硼氢化钾可用盐酸、冰醋酸、磷酸等非氧化性酸中和。
式XI所示化合物与式V所示化合物0.2~0.4倍亚硝酸钠的反应在酸性溶液中进行,其中的酸可以是盐酸、磷酸等非氧化性中强酸,反应的H+浓度为0.5~2mol/L,反应完成后,过滤,收集滤饼,可制得6α-甲基强的松龙及其衍生物,即式I。
具体的,本发明涉及以下技术方案:
1、一种如式I所示的6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
(1)式II所示化合物与原甲酸酯和无水酸在以醚类为溶剂的无水条件下反应将式II所示化合物的3-酮醚化,转移3-酮Δ4为Δ3,5,得到式III所示化合物;
(2)对式III所示化合物进行烷基化,得到式IV所示化合物;
(3)用经培养基培养的微生物对式IV所示化合物进行微生物转化使Δ1,2-脱氢,得到式V所示化合物;
(4)式V所示化合物与盐酸氨基脲、硼氢化钾、亚硝酸钠及酸性溶液反应经由式X和式XI,生成式I所示的6α-甲基强的松龙衍生物。
2、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中步骤(2)中式III所示化合物的烷基化过程为式III所示化合物与N-烷基苯胺、醛或酮反应得到式IV所示中间化合物,式IV所示化合物在二甲基亚砜为溶剂的条件下与钯碳酸盐和环己烯反应制得式IV所示化合物。
3、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中步骤(2)中式III所示化合物的烷基化过程为式III所示化合物与卤化物反应得到式VII所示中间化合物,式VII所示化合物在有机碱溶剂中转换为式VIII化合物,式VIII化合物与三乙胺和钯碳酸盐反应制得式IV所示化合物。
4、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中步骤(2)中式III所示化合物的烷基化过程为式III所示化合物与二甲基甲酰胺、三氯氧磷反应经由式IX和式VI中间化合物制得式IV所示化合物。
5、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中所述的微生物为节杆菌。
6、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中所述的节杆菌是通过下述方法培养的:首先将培养基在115~126℃温度下,湿热灭菌20~30分钟,然后将节杆菌在培养基中培养22~28小时,培养温度为28~33℃。
7、6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其中所述的培养基由玉米浆、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾和水组成,培养基中各组分的含量为玉米浆0.6~2.0%、葡萄糖0.3~1.0%、蛋白胨0.1~0.8%、磷酸二氢钾0.1~0.6%、其余为溶剂水,培养基的初始pH为6.4~7.5。
附图说明
图1式I所示化合物精制样品的红外吸收光谱;
图2式I所示化合物精制样品的质谱光谱;
图3式I所示化合物精制样品的核磁共振光谱。
具体实施方式
以下的实施例对本发明作进一步的描述,实施例中使用菌株AS 1.754,购自于中国科学院微生物研究所,其它节杆菌同样具有转化作用,本实施例以所述菌株进行举例,不作为对本发明方法的限制。
实施例1
实施例1-1
(1)在40ml四氢呋喃中加入式II所示的4g醋酸可的松,待溶解后加入2g原甲酸三乙酯、3ml无水乙醇、0.04g对甲苯磺酸,在温度25℃反应1小时。即可制得式III所示化合物。
(2)在上述产物中加入1ml N-甲基苯胺、1ml甲醛,在20℃反应1小时,加水400ml,于20℃反应1小时,冷却至8℃保温2小时,过滤,烘干,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物用20ml的二甲基亚砜溶解,加入0.4g 7.5%Pd/CaCO3、4ml环己烯,在20℃温度下反应2小时,然后在温度0℃,真空度≥0.085atm下减压浓缩去除溶剂,降温至40℃,搅拌下滴加12ml的质量含量为37%盐酸,保温0.5小时,缓慢调节pH至6,加10倍的水搅拌1小时,过滤,烘干,即可制得R取代基为甲基的式IV所示化合物。
(3)按照玉米浆:0.6%;葡萄糖:0.3%;蛋白胨:0.1%,磷酸二氢钾:0.1%,剩余为水的比例,用传统制培养基的方法制备培养基,调节初始pH为6.4。121℃湿热灭菌20分钟,冷却至室温。接入菌种AS 1.754,在30℃培养22~28小时后,投入粉碎至1μm以下于121℃湿热灭菌20分钟的式IV所示化合物,继续发酵48小时,转化率可达85%以上。过滤,分离出发酵粗品,将其用10倍的二氯甲烷溶解后过滤菌丝,浓缩至浆状,冷却至-5℃,过滤,将滤饼用40倍的丙酮溶解,用0.1倍的活性炭脱色,蒸干溶剂,即可获得式V所示化合物。
(4)在60ml甲醇中加入由(3)中制得的2g式V所示化合物,搅拌使之溶解。然后把0.6g盐酸氨基脲溶解在5ml水中,慢慢加入碳酸氢钠,使pH为5~8,再加到含式V的甲醇溶液中,在30℃下反应8小时,加入0.4g硼氢化钾,在温度为30℃下反应时间为4小时。用盐酸中和掉过量的硼氢化钾,使pH为5。过滤,滤液转移入旋转蒸发仪,在50℃以下,减压浓缩至干,加入400ml的冷水,放冰箱过夜,过滤,烘干,制得式XI所示化合物。
在60ml水中加入37%盐酸10ml,控制好温度22±3℃,加入式XI所示化合物,澄清后,滴加含有0.4g的亚硝酸钠溶液,反应3小时,放入冰箱内冷却过夜,过滤,收集滤饼,烘干,制得6α-甲基强的松龙。
实施例1-2
(1)在48ml乙醚中加入式II所示的4g醋酸可的松,待溶解后加入3.2g原甲酸三乙酯、3ml无水乙醇、0.08g硫酸,在温度30℃反应1小时。即可制得式III所示化合物。
(2)在上述产物中加入1.2ml N-甲基苯胺、1.2ml乙醛,在35℃反应1.5小时,加水60ml,于30℃反应1小时,冷却至9℃保温2小时,过滤,烘干,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物用28ml的二甲基亚砜溶解,加入0.6g7.5%Pd/CaCO3、4ml环己烯,在100℃温度下反应3小时,然后在温度60℃,真空度≥0.085atm下减压浓缩去除溶剂,降温至45℃,搅拌下滴加16ml的质量含量为37%盐酸,保温0.75小时,缓慢调节pH至7,加15倍的水搅拌2小时,过滤,烘干,即可制得R取代基为乙基的式IV所示化合物。
(3)按照玉米浆:1.2%;葡萄糖:0.7%;蛋白胨:0.5%,磷酸二氢钾:0.3%,剩余为水的比例,用传统制培养基的方法制备培养基,调节初始pH为7.0。121℃湿热灭菌20分钟,冷却至室温。接入菌种AS 1.754,在30℃培养22~28小时后,投入粉碎至1μm以下于121℃湿热灭菌20分钟的式IV所示化合物,继续发酵48小时,转化率可达85%以上。过滤,分离出发酵粗品,将其用10倍的二氯甲烷溶解后过滤菌丝,浓缩至浆状,冷却至5℃,过滤,将滤饼用40倍的丙酮溶解,用0.1倍的活性炭脱色,蒸干溶剂,即可获得式V所示化合物。
(4)在60ml甲醇中加入由(3)中制得的2g式V所示化合物,搅拌使之溶解。然后把0.8g盐酸氨基脲溶解在5ml水中,慢慢加入碳酸氢钠,使pH为5~8,再加到含式V的甲醇溶液中,在50℃下反应10小时,加入0.6g硼氢化钾,在温度为45℃下反应时间为5小时。用盐酸中和掉过量的硼氢化钾,使pH为6.5。过滤,滤液转移入旋转蒸发仪,在50℃以下,减压浓缩至干,加入400ml的冷水,放冰箱过夜,过滤,烘干,制得式XI所示化合物。
在60ml水中加入37%盐酸10ml,控制好温度22±3℃,加入式XI所示化合物,澄清后,滴加含有0.6g的亚硝酸钠溶液,反应3小时,放入冰箱内冷却过夜,过滤,收集滤饼,烘干,制得6α-甲基强的松龙。
实施例1-3
(1)在60ml乙丙醚中加入式II所示的4g醋酸可的松,待溶解后加入4g原甲酸三乙酯、3ml无水乙醇、0.12g高氯酸,在温度40℃反应1小时。即可制得式III所示化合物。
(2)在上述产物中加入1.6ml N-1-甲基苯胺、1.6ml丙醛,在46℃反应2小时,加水80ml,于35℃反应1小时,冷却至10℃保温2小时,过滤,烘干,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物用40ml的二甲基亚砜溶解,加入0.8g7.5%Pd/CaCO3、4ml环己烯,在180℃温度下反应4小时,然后在温度120℃,真空度≥0.085atm下减压浓缩去除溶剂,降温至50℃,搅拌下滴加20ml的质量含量为37%盐酸,保温1小时,缓慢调节pH至8,加20倍的水搅拌3小时,过滤,烘干,即可制得R取代基为2-丙基的式IV所示化合物。
(3)按照玉米浆:2.0%;葡萄糖1.0%;蛋白胨:0.8%,磷酸二氢钾:0.6%,剩余为水的比例,用传统制培养基的方法制备培养基,调节初始pH为7.5。121℃湿热灭菌20分钟,冷却至室温。接入菌种AS 1.754,在30℃培养22~28小时后,投入粉碎至1μm以下于121℃湿热灭菌20分钟的式IV所示化合物,继续发酵48小时,转化率可达85%以上。过滤,分离出发酵粗品,将其用10倍的二氯甲烷溶解后过滤菌丝,浓缩至浆状,冷却至15℃,过滤,将滤饼用40倍的丙酮溶解,用0.1倍的活性炭脱色,蒸干溶剂,即可获得式V所示化合物。
(4)在60ml甲醇中加入由(3)中制得的2g式V所示化合物,搅拌使之溶解。然后把1g盐酸氨基脲溶解在5ml水中,慢慢加入碳酸氢钠,使pH为5~8,再加到含式V的甲醇溶液中,在70℃下反应12小时,加入0.8g硼氢化钾,在温度为60℃下反应时间为7小时。用盐酸中和掉过量的硼氢化钾,使pH为8。过滤,滤液转移入旋转蒸发仪,在50℃以下,减压浓缩至干,加入400ml的冷水,放冰箱过夜,过滤,烘干,制得式XI所示化合物。
在60ml水中加入37%盐酸10ml,控制好温度22±3℃,加入式XI所示化合物,澄清后,滴加含有0.8g的亚硝酸钠溶液,反应3小时,放入冰箱内冷却过夜,过滤,收集滤饼,烘干,制得6α-甲基强的松龙。
实施例1-4
(1)在60ml四氢呋喃中加入式II所示的4g醋酸可的松,待溶解后加入4g原甲酸三乙酯、3ml无水乙醇、0.12g高氯酸,在温度59℃反应1小时。即可制得式III所示化合物。
(2)在上述产物中加入1.6ml N-2-甲基苯胺、1.6ml丙酮,在46℃反应2小时,加水80ml,于35℃反应1小时,冷却至10℃保温2小时,过滤,烘干,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物用40ml的二甲基亚砜溶解,加入0.8g7.5%Pd/CaCO3、4ml环己烯,在180℃温度下反应4小时,然后在温度120℃,真空度≥0.085atm下减压浓缩去除溶剂,降温至50℃,搅拌下滴加20ml的质量含量为37%盐酸,保温1小时,缓慢调节pH至8,加20倍的水搅拌3小时,过滤,烘干,即可制得R取代基为1-丙基式IV所示化合物。
(3)按照玉米浆:2.0%;葡萄糖1.0%;蛋白胨:0.8%,磷酸二氢钾:0.6%,剩余为水的比例,用传统制培养基的方法制备培养基,调节初始pH为7.0。121℃湿热灭菌20分钟,冷却至室温。接入菌种AS 1.754,在30℃培养22~28小时后,投入粉碎至1μm以下于121℃湿热灭菌20分钟的式IV所示化合物,继续发酵48小时,转化率可达85%以上。过滤,分离出发酵粗品,将其用10倍的二氯甲烷溶解后过滤菌丝,浓缩至浆状,冷却至15℃,过滤,将滤饼用40倍的丙酮溶解,用0.1倍的活性炭脱色,蒸干溶剂,即可获得的式V所示化合物。
(4)在60ml甲醇中加入由(3)中制得的2g式V所示化合物,搅拌使之溶解。然后把1g盐酸氨基脲溶解在5ml水中,慢慢加入碳酸氢钠,使pH为5~8,再加到含式V的甲醇溶液中,在70℃下反应12小时,加入0.8g硼氢化钾,在温度为60℃下反应时间为7小时。用盐酸中和掉过量的硼氢化钾,使pH为8。过滤,滤液转移入旋转蒸发仪,在50℃以下,减压浓缩至干,加入400ml的冷水,放冰箱过夜,过滤,烘干,制得式XI所示化合物。
在60ml水中加入37%盐酸10ml,控制好温度22±3℃,加入式XI所示化合物,澄清后,滴加含有0.8g的亚硝酸钠溶液,反应3小时,放入冰箱内冷却过夜,过滤,收集滤饼,烘干,制得6α-甲基强的松龙。
实施例2
实施例2-1
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,在步骤(1)中加入7g CBr4,室温下搅拌40小时,减压蒸发掉CBr4,将滤液冷却至-5℃,再过滤,收集滤饼,烘干,滤饼用50ml吡啶溶解,加热至回流并持续20分钟,冷却后加入200倍的水,过滤收集滤饼,烘干后用40ml甲醇溶解,加入7ml三乙胺,通入氢气置换三次,加入0.5g 2%Pd/SrCO3,在室温下反应30分钟。过滤掉Pd/SrCO3,将滤液用6ml 1mol/L盐酸持续1小时,加400ml水,析出沉淀,过滤收集沉淀,滤饼用少量的甲醇洗涤,烘干,得到式IV所示化合物。式IV所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例2-2
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,在步骤(1)中加入7g CCl4,室温下搅拌45小时,减压蒸发掉CCl4,将滤液冷却至5℃,再过滤,收集滤饼,烘干,滤饼用50ml吡啶溶解,加热至回流并持续35分钟,冷却后加入200倍的水,过滤收集滤饼,烘干后用40ml甲醇溶解,加入7ml三乙胺,通入氢气置换三次,加入0.5g 2%Pd/SrCO3,在室温下反应40分钟。过滤掉Pd/SrCO3,将滤液用6ml 1mol/L盐酸持续1小时,加400ml水,析出沉淀,过滤收集沉淀,滤饼用少量的甲醇洗涤,烘干,得到式IV所示化合物。式IV所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例2-3
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,在步骤(1)中加入7g CBr4,室温下搅拌50小时,减压蒸发掉CBr4,将滤液冷却至10℃,再过滤,收集滤饼,烘干,滤饼用50ml吡啶溶解,加热至回流并持续50分钟,冷却后加入200倍的水,过滤收集滤饼,烘干后用40ml甲醇溶解,加入7ml三乙胺,通入氢气置换三次,加入0.5g 2%Pd/SrCO3,在室温下反应60分钟。过滤掉Pd/SrCO3,将滤液用6ml 1mol/L盐酸持续1小时,加400ml水,析出沉淀,过滤收集沉淀,滤饼用少量的甲醇洗涤,烘干,得到式IV所示化合物。式IV所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例3
实施例3-1
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,加入8g二甲基甲酰胺并冷却至0℃,加入5ml苯,慢慢滴加1.5ml三氯氧磷与1.0ml苯的混和溶液。温度不超过20℃。反应1小时,然后加入含5g醋酸钠的甲醇溶液(醋酸钠∶甲醇=1∶3)反应1小时,加入10ml苯和40ml水,分液,有机层减压浓缩至大量结晶析出,冷却,过滤收集滤饼,用8ml甲醇溶解滤饼,在30℃下慢慢加入0.5g硼氢化钾,反应2小时。再滴加1.0ml 37%盐酸,反应1小时。加入400ml水,分液,有机层中加入碳酸氢钠直至无气泡产生。浓缩有机层,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例3-2
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,加入8g二甲基甲酰胺并冷却至0.2℃,加入5ml苯,慢慢滴加1.5ml三氯氧磷与1.0ml苯的混和溶液。温度不超过20℃。反应2小时,然后加入含5g醋酸钠的甲醇溶液(醋酸钠∶甲醇=1∶4.5)反应1.5小时,加入10ml苯和40ml水,分液,有机层减压浓缩至大量结晶析出,冷却,过滤收集滤饼,用8ml甲醇溶解滤饼,在40℃下慢慢加入0.5g硼氢化钾,反应2.5小时。再滴加1.0ml 37%盐酸,反应1小时。加入400ml水,分液,有机层中加入碳酸氢钠直至无气泡产生。浓缩有机层,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例3-3
步骤(1)与实施例1相同,步骤(2)中,加入8g二甲基甲酰胺并冷却至0.5℃,加入5ml苯,慢慢滴加1.5ml三氯氧磷与1.0ml苯的混和溶液。温度不超过20℃。反应3小时,然后加入含5g醋酸钠的甲醇溶液(醋酸钠∶甲醇=1∶6)反应2小时,加入10ml苯和40ml水,分液,有机层减压浓缩至大量结晶析出,冷却,过滤收集滤饼,用8ml甲醇溶解滤饼,在50℃下慢慢加入0.5g硼氢化钾,反应3小时。再滴加1.0ml 37%盐酸,反应1.5小时。加入400ml水,分液,有机层中加入碳酸氢钠直至无气泡产生。浓缩有机层,制得式VI所示化合物。式VI所示化合物的处理方法同实施例1。
实施例4
本实施例基本与实施例1相同,在式V所示化合物的分离时使用了发酵粗品15倍的氯仿溶解发酵粗品,处理方法也与实施例1相同。
实施例5:本实施例方法与实施例1相同,在缩合反应时的溶剂为5倍的二甲基甲酰胺。将式I所示化合物用40倍丙酮溶解,加入0.1倍的药用活性炭回流30分钟脱色,过滤,滤液再用中性氧化铝过滤,浓缩,干燥得到式I所示化合物的精品。
实施例6:
(1)在50ml乙醚中加入4.03g式II所示醋酸可的松,待溶解后加入1.6g原甲酸三乙酯、3ml无水乙醇、加热至45℃,加入0.2g对甲苯磺酸,在温度45℃反应1.5小时,再加入0.2g对甲苯磺酸,在45℃反应2小时。滴入1ml吡啶,减压浓缩至干,得到式III所示化合物。
(2)将制得的式III所示化合物用50ml苯溶解,再加入1.4mlN-甲基苯胺、1.2ml甲醛,回流下脱水反应30分钟,加入水500ml,于30~35℃反应1小时,静置,分层,将有机层浓缩至干,制得式VI所示化合物。
(3)式VI所示化合物的处理方法同实施例1。
对实施例中获得的式I所示化合物精制样品进行红外吸收、质谱、核磁共振光谱分析数据分别见表1、2、3。
表1对式I所示化合物精制样品进行红外吸收光谱分析
样品:溴化钾压片。表1的红外吸收光谱数据指出存在α、β不饱和共轭酮系统、不饱和双键、苯环,基本符合式I的化学结构式。
表2对式I所示化合物精制样品进行质谱光谱分析
质荷数据指出质荷比为397.1,碳原子数为22,可能的分子式为:C22H30O5,按照国际原子量计算,分子量为374.15,质谱峰指出分子离子峰M/Z=397.1-22.98=374.12,上述分子式和分子量与本分析样品相符。
表3对式I所示化合物精制样品进行核磁共振光谱分析
核磁共振氢谱数据指出,氢原子数为30,其氢原子的位置与本分析样品相符。
Claims (4)
1.一种如式I所示的6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
式I 式II
(1)式II所示化合物与原甲酸酯和无水酸在以醚类为溶剂的无水条件下反应将式II所示化合物的3-酮醚化,转移3-酮Δ4为Δ3,5,得到式III所示化合物;
(2)对式III所示化合物分别按照下述(i)、(ii)、(iii)三种不同路径进行烷基化,得到式IV所示化合物,其中路径(i)得到的是R为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基的式IV化合物,路径(ii)和(iii)分别得到的是R为甲基的式IV化合物;
式III 式IV
(i)式III所示化合物与N-烷基苯胺、丙酮反应得到式VI所示中间化合物,式VI所示化合物在二甲基亚砜为溶剂的条件下与钯碳酸盐和环己烯反应制得式IV所示化合物,本路径中R取代基为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基;
式III 式VI 式IV
(ii)式III所示化合物与卤化碳反应得到式VII所示中间化合物,式VII所示化合物在有机碱溶剂中转换为式VIII化合物,式VIII化合物与三乙胺和钯碳酸盐反应制得式IV所示化合物,本路径中R取代基为甲基,反应过程如下;
式III 式VII 式VIII 式IV
(iii)式III所示化合物与二甲基甲酰胺、三氯氧磷反应经由式IX和式VI中间化合物制得式IV所示化合物,本路径中R取代基为甲基,反应过程如下;
式III 式IX 式VI 式IV
(3)用经培养基培养的节杆菌对式IV所示化合物进行微生物转化使Δ1,2-脱氢,得到式V所示化合物,本步骤中R为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基;
式V
(4)式V所示化合物与盐酸氨基脲反应得到式X所示化合物,式X所示化合物与硼氢化钾反应得到式XI所示化合物,式XI所示化合物与亚硝酸钠在H+浓度为0.5~2mol/L酸性溶液中反应,生成式I所示的6α-甲基强的松龙衍生物,本步骤中R为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基,反应过程如下:
上述步骤(1)~(4)中所有通式中的R1为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基;R2为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基;R3为氢。
2.根据权利要求1所述的6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其特征在于:步骤(2)(i)中式III所示化合物的烷基化过程为式III所示化合物与N-烷基苯胺、醛反应得到式VI所示中间化合物,式VI所示化合物在二甲基亚砜为溶剂的条件下与钯碳酸盐和环己烯反应制得式IV所示化合物,其中R取代基为甲基、乙基、1-丙基或2-丙基;R1为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基;R2为氢、乙酰基、丙酰基、丁酰基或琥珀酰基,反应过程如下:
式III 式VI 式IV。
3.根据权利要求2所述的6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其特征在于:所述的N-烷基苯胺为N-甲基苯胺,所述的醛选自甲醛、乙醛或丙醛中的一种,所述钯碳酸盐为Pd/CaCO3。
4.根据权利要求1所述的6α-甲基强的松龙及其衍生物的生产方法,其特征在于:所述的节杆菌是通过下述方法培养的:首先将培养基在115~126℃温度下,湿热灭菌20~30分钟,然后将AS 1.754菌种在培养基中培养22~28小时,培养温度为28~33℃,所述的培养基由玉米浆、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾和水组成,培养基中各组分的含量为玉米浆0.6~2.0%、葡萄糖0.3~1.0%、蛋白胨0.1~0.8%、磷酸二氢钾0.1~0.6%、其余为溶剂水,培养基的初始pH为6.4~7.5。
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