CN1976903A

CN1976903A - 因子VⅡa抑制剂

Info

Publication number: CN1976903A
Application number: CNA2005800179398A
Authority: CN
Inventors: 史蒂文·M·托克尔松; 托马斯·沃伊克弗斯凯
Original assignee: Pharmacyclics LLC
Current assignee: Pharmacyclics LLC
Priority date: 2004-06-02
Filing date: 2005-06-02
Publication date: 2007-06-06
Also published as: MXPA06014066A; IL179669A0; BRPI0511714A; US20080242644A1; WO2005121102A2; EP1751114A2; JP2008501702A; AU2005252214A1; KR20070038496A; CA2569170A1; WO2005121102A3

Abstract

本发明涉及新的因子VIIa、IXa、Xa、XIa抑制剂，特别是因子VIIa的抑制剂；包括这些抑制剂的药用组合物；和使用这些抑制剂治疗或预防血栓栓塞性疾病、癌症或类风湿性关节炎的方法。还公开了制备这些抑制剂的方法。

Description

因子VⅡa抑制剂

技术领域

本发明涉及新的因子VIIa抑制剂、包括这些抑制剂的药用组合物和使用这些抑制剂治疗或预防血栓栓塞性疾病的方法。还公开了制备这些抑制剂的方法。

背景技术

血栓形成由被称为凝固级联的复杂顺序的生物化学事件引起。凝固的触发事件是在循环中发现的丝氨酸蛋白酶因子VIIa(FVIIa)对在损伤或炎症之后的血管表面上发现的组织因子(TF)的结合。一旦结合于TF，因子VIIa催化丝氨酸蛋白酶因子Xa的形成，其随后形成级联中的最终蛋白酶-凝血酶。

血栓形成的临床表现不等，从在心脏的关键血管(冠状动脉脉管系统)中发生的急性心肌梗塞(AMI或心脏病发作)和不稳定型绞痛(UA)，到在较低末端形成血块并且经常在臀部和膝部的矫形术、以及一般腹部外科和瘫痪之后形成的深静脉血栓形成(DVT)。DVT的形成是肺栓塞(PE)形成的危险因素，其中在较低末端形成的血块的一部分脱落并且行进到肺，在那里阻断血液流动。不可预知的PE形成经常导致致命的结果。血栓形成也可系统地形成，在整个血管系统中形成微血块。这种状况，被称为弥漫性血管内凝血(DIC)，可以是由于某些病毒性疾病如埃博拉病(Ebola)、某些癌症、脓毒病和类风湿性关节炎所引起。严重的DIC可以由于凝固应答的过度活化而导致凝血因子的急剧减少，其可引起多个器官衰竭、出血和死亡。

脑的脑血管中血块的形成或栓塞是引起缺血性卒中的关键事件。引起中风的引发因素是心脏的心房纤颤或心房的节奏异常和动脉粥样硬化之后在从心脏到脑的主要动脉(颈动脉)中的血栓形成。在美国每年有超过600,000人发生中风。这些中风患者的三分之二发生某些残疾，三分之一发生永久性和严重的残疾。因此，需要用于治疗多种血栓形成状况的抗血栓形成剂。本发明满足这些和相关的需要。

发明内容

在一个方面，本发明涉及选自以下化合物(a)-(k)的化合物：

或其可药用盐。

在第二方面，本发明涉及药用组合物，其包括可药用的载体和治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。

在第三方面，本发明涉及治疗动物中的由因子VIIa、IXa、Xa和/或XIa，优选由因子VIIa介导的疾病的方法，该方法包括对所述动物给用治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。优选地，所述疾病为血栓栓塞性疾病或癌症或类风湿性关节炎，更优选为血栓栓塞性疾病，更优选所述疾病为深静脉血栓形成。优选地，本发明的化合物用于预防性给用。

在第四方面，本发明涉及治疗动物中的血栓栓塞性疾病的方法，该方法包括对所述动物给用与另一种抗独立地选自凝血酶抑制剂、因子IXa抑制剂、因子Xa抑制剂、Aspirin_和Plavix_的抗凝血剂组合的治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。

在第五方面，本发明涉及抑制生物样品(如，储存的血液制品和样品)凝固的方法，该方法包括提供化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。

在第六方面，本发明涉及化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐在制备用于治疗动物中的血栓栓塞性疾病或癌症或类风湿性关节炎的药物中的应用。优选地，所述疾病为血栓栓塞性疾病如深静脉血栓形成。

发明的详细说明

定义

除非另外说明，用于本发明的说明书和权利要求中的以下术语意在具有以下所定义的含义。

本发明还包括本发明的化合物的前药。术语前药意在表示在对哺乳动物主体给用前药时能够释放本发明的活性化合物的共价结合的载体。活性成分的释放在体内发生。前药可以通过本领域技术人员已知的技术制备。这些技术通常修饰给定化合物中适当的官能团。然而，这些被修饰的官能团通过常规处理或在体内能重新生成最初的官能团。本发明的化合物的前药包括其中羟基、甲脒基(carbamimidoyl)、氨基、羧基或类似基团被修饰的化合物。前药的例子包括但不限于本发明的化合物中的羟基官能团的酯(如，乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(如，N，N-二甲氨基羰基)等等。本发明的化合物的前药也在本发明的范围内。

本发明还包括本发明的化合物的衍生物和被保护的衍生物。例如，当本发明的化合物包含可氧化的氮原子时，氮原子可通过本领域中公知的方法转化为N-氧化物。

另外，当本发明的化合物包含基团如羟基、羧基、羰基、硫醇或任何含氮原子的基团时，这些基团可以用适当的保护基保护。适当的保护基的全面的列举可以在T.W.Greene，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Sons，Inc.1999中找到，其公开被全文并入本文作为参考。本发明的化合物的被保护的衍生物可以通过本领域中公知的方法制备。

化合物的“可药用盐”是指可药用的并且具有所需的母体化合物的药理学活性的盐。这种盐包括：

与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)-苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二碘酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、葡庚糖酸、4，4′-亚甲基-双(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成的酸加成盐；或

在母体化合物中存在酸性质子时，其被金属离子如碱金属离子、碱土离子或铝离子代替形成的盐；或酸性质子与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。应该理解，可药用盐是无毒的。对于适当的可药用盐的另外的信息可以在Remington′s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985中找到，其公开被并入本文作为参考。

本发明的化合物可能具有不对称中心。包含被不对称取代的原子的本发明的化合物可被分离为旋光活性形式或消旋形式。本领域中公知如何制备旋光活性形式，例如通过对物质进行拆分实现。本发明化合物的所有的手性形式、对映体形式、非对映体形式和消旋形式都在本发明的范围内。

本发明的化合物以互变异构平衡态存在。所有可能的互变异构体意在都被这种名称、说明和描述羧所包含，并且在本发明的范围内。例如，基团-C(＝NR¹³)NH₂可互变为-C(＝NH)NHR¹³基团。

“可药用的载体或赋形剂”是指可用于制备药用组合物的载体或赋形剂，其通常是安全的、无毒的，并且不是生物学不希望的或其它方面不希望的，其包括适用于兽医应用以及人类药用的载体或赋形剂。在说明书和权利要求中使用的“可药用的载体/赋形剂”包括一种或多种的所述赋形剂。

疾病的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括：

(1)疾病的预防，即使得在暴露于所述疾病或易患有所述疾病但是仍未经历或表现所述疾病症状的哺乳动物中不能形成该疾病的临床症状；

(2)疾病的抑制，即，阻止或减少疾病或其临床症状的发展；或

(3)减轻疾病，即，使疾病或其临床症状的减退。

“治疗有效量”是指在对哺乳动物给用用于治疗疾病时足够实现对所述疾病的治疗的本发明的化合物的量。“治疗有效量”根据化合物、疾病及其严重程度和被治疗的哺乳动物的年龄和体重等的不同而变化。

一般合成图解

本发明的化合物可通过如下所示的反应图解中所述的方法产生。

用于制备这些化合物的起始原料和试剂或者是购自商业供应商如Aldrich Chemical Co.，(Milwaukee，Wis.)、Bachem(Torrance，Calif.)或Sigma(St.Louis，Mo.)，或者通过本领域技术人员已知的方法根据在参考文献如Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，Volumes1-17(John Wiley and Sons，1991)；Rodd′s Chemistry of CarbonCompounds，Volumes 1-5 and Supplementals(Elsevier Science Publishers，1989)；Organic Reactions，Volumes 1-40(John Wiley and Sons，1991)；March′s Advanced Organic Chemistry，(John Wiley and Sons，4thEdition)；和Larock′s Comprehensive Organic Transformations(VCHPublishers Inc.，1989)中提出的工艺过程制备。这些图解仅是对可以合成本发明的化合物的一些方法的说明，可进行对这些图解的多种改进，并且对于参考了本公开的本领域技术人员来说是有所暗示的。

如果需要，可使用常规技术将反应的起始原料和中间体分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。这些物质可使用常规方法(包括物理常数和光谱数据)进行表征。

除非相反地说明，本文中所述的反应在大气压力下在约-78℃到约150℃的温度范围内进行，更优选在约0℃到约125℃内，最优选室温(或环境温度)，如20℃。

本发明的化合物可如以下图解I中所述制备。

图解1

式1的酚衍生物(其中R为氢或羟基保护基，优选羟基，R′为烷基)的甲酰化得到式2的化合物。甲酰化反应在氯化镁和有机碱如三乙胺等的存在下在适当的有机溶剂如乙腈等中进行。用适当的卤化剂如N-溴代琥珀酰亚胺、N-碘代琥珀酰亚胺等并在适当的有机溶剂如二甲基甲酰胺等中将式2卤化，得到式3的化合物，其中X为卤代。

式1的化合物可通过本领域中公知的方法制备。

将3(其中R为氢)的羟基用适当的羟基保护基如烷基、甲氧基乙氧基甲基、苄基等保护，得到式4的化合物。对于其它适当的羟基保护基的详尽列举可以在T.W.Greene，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Sons，Inc.1999中找到，其公开被全文并入本文作为参考。优选的羟基保护基是2-甲氧基乙氧基甲基和苄基。反应通常在碱如二异丙基乙胺等的存在下在卤代有机溶剂如二氯甲烷、四氯化碳、氯仿等中进行。

用式5的硼酸化合物(其中R^z为-SO₂NHPG或氰基)处理式4，得到式6的联苯化合物。反应在钯催化剂如四(三苯基膦)钯的存在下并在适当的有机溶剂如甲苯或二甲氧基乙烷和碱如含水碳酸钠、碳酸钾等中进行。或者，反应可以在PdCl₂(dPPf)·CH₂Cl₂复合物的存在下在二异丙胺的存在下在适当的有机溶剂如四氢呋喃等中进行。式5的化合物可通过本领域中公知的方法制备。

式6与式7的1，2-二氨基化合物在适当的氧化剂如苯醌、空气氧化或FeCl₃和O₂的存在下并在适当的有机溶剂如甲醇、乙醇等中缩合得到式8的化合物。或者，反应利用在醇溶剂如异丙醇中的焦亚硫酸钠水溶液并且在氧的存在下进行。

然后将化合物8转化为本发明的化合物。用于这种转化的方法根据存在于本发明化合物中的联苯-3-基上的取代基的性质而定。例如，当联苯-3-基上的取代基为-SO₂NH₂时，使用其中R^z为-SO₂NHPG(其中PG是适当的氨基保护基)的化合物8。除去氨基保护基，随后将酯基水解，得到式10的化合物。然后将式10的化合物与式NHR^aR^b的胺(其中R^a为氢，R^b为(R)或(S)-CH(CONH₂)CONH₂，或者R^a为甲基和R^b为R，S，S，S-N(CH₃)CH₂CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH₂OH)偶联，分别得到化合物(h)、(i)或(j)。在联苯-3基环上的取代基为被取代的氨甲基时，首先通过酯基的水解将化合物8转化为式10的化合物，其在与氨反应时得到化合物11。胺化反应在适当的偶联剂如苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基膦六氟磷酸盐(PyBOP_)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基-脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)的存在下，任选地在1-羟基苯并三唑(HOBT)和碱如N，N-二异丙基乙胺、三乙胺、N-甲基吗啉等的存在下在进行。反应通常在20到30℃进行，优选在约25℃进行，并且需要2到24小时完成。适当的反应溶剂为惰性有机溶剂，如N，N-二甲基甲酰胺等。

然后在氢化反应条件下将氰基转化为氨甲基，然后其在与适当的酸反应时得到化合物(a)-(g)和(k)。利用上述方法详细合成本发明的化合物在以下实施例中提供。

制备式(I)的化合物的其它方法在Hu，Huiyong等人的在2003年6月19日公布的美国专利申请20030114457A1中公开，其公开被全文并入本文作为参考。

应用

本发明的化合物抑制因子VIIa、IXa、Xa和XIa，特别是因子VIIa，因此可用作抗凝血剂，用于治疗或预防哺乳动物中的血栓栓塞性疾病。

可以提及的具体的疾病状况包括治疗和预防静脉血栓形成(如DVT)和肺栓塞、动脉血栓形成(如在心肌梗塞、不稳定型心绞痛、基于血栓形成的中风和外周动脉血栓形成中)，和通常由心房纤颤过程中的心房或由在透壁性心肌梗塞之后的左心室或由充血性心力衰竭引起的系统性栓塞；预防血栓溶解、经皮腔内血管成形术(PTA)和冠脉架桥手术之后的再闭塞(即，血栓形成)；预防通常在显微术和血管术之后的再栓塞。

另外的适应症包括治疗和预防由细菌、多发伤、中毒或任何其它机制引起的弥漫性血管内凝血；在血液接触体内外来物表面如血管移植物、血管支架、血管导管、机械和生物假体阀或任何其它医疗装置时的抗凝血治疗；和在血液接触体外医疗装置时的抗凝血治疗，如在心血管手术过程中使用心肺机或在血液透析中；治疗和/或预防特发性成人呼吸窘迫综合征、辐射或化疗处理后的肺纤维化、脓毒性休克、败血病、炎症性反应，其包括但不限于浮肿、急性或慢性动脉粥样硬化如冠状动脉疾病和动脉粥样硬化性斑块形成、脑动脉疾病、脑梗塞、脑血栓形成、脑栓塞、外周动脉疾病、缺血、心绞痛(包括不稳定型心绞痛)、再灌注损伤、经皮经腔血管成形术(PTA)和冠状动脉旁路手术之后的再狭窄。

本发明的化合物也可用于癌症或类风湿性关节炎的治疗。

试验

本发明的化合物抑制因子VIIa和Xa的能力可以在以下生物试验实施例1和2中所述的体外和体内试验中进行试验。

给药和药用组合物

通常，本发明的化合物以用于给用具有类似应用的药物的任何接受的给用方式以治疗有效量给用。本发明的化合物，即活性成分的实际用量根据多种因素如被治疗的疾病的严重程度、主体的年龄和相对健康状态，使用的化合物的效力、给药途径和形式和其它因素而定。

本发明的化合物的治疗有效量可为每天每千克接受者体重约0.01-50mg；优选约0.1-20mg/kg/天，更优选约0.25mg/kg/天到10mg/kg/天。因此，为了对70kg的人给用，最优选剂量范围为每天约7mg到1.4g。

通常，本发明的化合物作为药用组合物通过以下途径的任一种给用：口服给用，系统给用(如，透皮、鼻内或通过栓剂给用)，或非肠道给用(如，肌肉内、静脉内或皮下给用)。优选的给用方式是使用方便的日剂量方案的口服或非肠道给用，其可以根据痛苦程度进行调整。口服组合物可为片剂、丸剂、胶囊、半固体剂、粉末剂、持续释放制剂、溶液剂、悬浮剂、酏剂、气雾剂或任何其它适当的组合物形式。

制剂的选择根据多种因素而定，如药物的给用方式(如，对于口服给用优选片剂、丸剂或胶囊形式)和药用物质的生物利用度。最近，已经根据通过提高表面积(即减小粒径)可增加生物利用度的原理开发了特别适合生物利用度差的药物的药用制剂。例如，美国专利4,107,288描述了其中活性物质被支持在交联高分子基质上的具有粒度为10到1,000nm的粒子的药用制剂。美国专利5,145,684描述了药用制剂的生产，其中在表面改性剂的存在下将药物粉碎为纳米粒子(平均粒度400nm)、然后分散在液体基质中，以得到表现出显著高的生物利用度的药用制剂。

组合物通常由与至少一种可药用的赋形剂组合的本发明的化合物组成。可药用的赋形剂是无毒的、有助于给用、并且不会不利地影响本发明的化合物的治疗学益处。所述的赋形剂可为任何的固体、液体、半固体，或者在气雾剂组合物的情况中，为本领域技术人员通常可用的气态赋形剂。

固体药用赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉等。液体和半固体赋形剂可选自甘油、丙二醇、水、乙醇和多种油类，包括得自石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液体载体，特别是用于可注射溶液的液体载体，包括水、盐水、右旋糖水溶液和二醇类。

压缩气体可用于以气雾剂形式分散本发明的化合物。适合于此目的的惰性气体为氮气、二氧化碳等。

其它适当的可药用赋形剂和它们的配制组成如Remington′sPharmaceutical Sciences，edited by E.W.Martin(Mack PublishingCompany，18th ed.，1990)中所述。

制剂中化合物的量可以在本领域技术人员采用的整个范围内变化。通常，制剂包含基于全部制剂为约0.01-99.99重量％的本发明的化合物，余量为一种或多种适当的可药用赋形剂。优选地，化合物以约1-80重量％的水平存在。包含本发明的化合物的代表性的药用制剂描述如下。

本发明的化合物可单独给用，或与本发明的其它化合物或与一种或多种其它活性成分组合给用。例如，本发明的化合物可与独立地选自凝血酶抑制剂、因子IXa和因子Xa抑制剂的其它抗凝血剂组合。优选地，凝血酶抑制剂为在PCT申请公开WO 94/29336和WO 97/23499中公开的Inogatran_、Melagatran_或其前药，所述专利公开的每一个被全文并入本文作为参考。可用于本发明的组合产品中的因子Xa抑制剂包括在Current Opinion in Therapeutic Patents，1993，1173-1179和国际专利申请WO 00/20416、WO 00/12479、WO 00/09480、WO 00/08005、WO 99/64392、WO 99/62904、WO 99/57096、WO 99/52895、WO99/50263、WO 99/50257、WO 99/50255、WO 99/50254、WO 99/48870、WO 99/47503、WO 99/42462、WO 99/42439、WO 99/40075、WO99/37304、WO 99/36428、WO 99/33805、WO 99/33800、WO 99/32477、WO 99/32454、WO 99/31092、WID 99/26941、WO 99/26933、WO99/26932、WO 99/26919、WO 99/26918、WO 99/25720、WO 99/16751、WO 99/16747、WO 99/12935、WO 99/12903、WO 99/11658、WO99/11617、WO 99/10316、WO 99/07732、WO 9/07731、WO 99/05124、WO 99/00356、WO 99/00128、WO 99/00127、WO 99/00126、WO 9/00121、WO 98/57951、WO 98/57937、WO 98/57934、WO 98/54164、WO98/46591、WO 98/31661、WO 98/28282、WO 98/28269、WO 98/25611、WO 98/24784、WO 98/22483、WO 98/16547、WO 98/16525、WO98/16524、WO 98/16523、WO 98/15547、WO 98/11094、WO 98/07725、WO 98/06694、WO 98/01428、WO 7/48706、WO 97/46576、WO 97/46523、WO 97/38984、WO 97/30971、WO 97/30073、WO 97/29067、WO97/24118、WO 97/23212、WO 97/21437、WO 97/08165、WO 97/05161、WO 96/40744、WO 96/40743、WO 96/40679、WO 96/40100、WO96/38421、WO 96/28427、WO 96/19493、WO 96/16940、WO 95/28420、WO 94/13693、WO 00/24718、WO 99/55355、WO 99/51571、WO99/40072、WO 99/26926、WO 98/51684、WO 97/48706、WO 97/24135、WO 97/11693、WO 00/01704、WO 00/71493、WO 00/71507、WO00/71508、WO 00/71509、WO 00/71511、WO 00/71512、WO 00/71515、WO 00/71516、WO 00/13707、WO 00/31068、WO 00/32590、WO00/33844、WO 00/35859、WO 00/35886、WO 00/38683、WO 00/39087、WO 00/39092、WO 00/39102、WO 00/39108、WO 00/39111、WO00/39117、WO 00/39118、WO 00/39131、WO 00/40548、WO 00/40571、WO 00/40583、WO 00/40601、WO 00/47207、WO 00/47553、WO00/47554、WO 00/47563、WO 00/47578、WO 00/51989、WO 00/53264、WO 00/59876、WO 00/59902、WO 00/71510、WO 00/76970、WO00/76971、WO 00/78747、WO 01/02356、WO 01/02397、WO 01/05784、W001/09093、WO 01/12600、WO 01/19788、WO 01/19795、WO01/19798、WO 93/15756、WO 94/17817、WO 95/29189、WO 96/18644、WO 96/20689、WO 96/39380、WO 97/22712、WO 97/36580、WO97/36865、WO 97/48687、WO 98/09987、WO 98/46626、WO 98/46627、WO 98/46628、WO 98/54132、WO 99/07730、WO 99/33458、WO 99/37643和WO 99/64446；在美国专利6,034,093、6,020,357、5,994,375、5,886,191、5,849,519、5,783,421、5,731,315、5,721,214、5,693,641、5,633,381、5,612,378、6,034,127、5,670,479、5,658,939、5,658,930、5,656,645、5,656,600、5,639,739、5,741,819、6,057,342、6,060,491、6,080,767、6,087,487、6,140,351、6,395,731和5,646,165；在日本专利申请JP 99152269、JP 10017549、JP 10001467、JP 98017549、JP00178243、JP 11140040、JP 12143623、JP 12204081、JP 12302765、JP6327488和JP 98001467；在欧洲专利申请EP 937 723、EP 937 711、EP874 629、EP 842 941、EP 728 758、EP 540 051、EP 419 099、EP 686 642、EP 1 016 663和EP 529 715；和在德国专利申请DE 19845153、DE19835950、DE 19743435、DE 19829964、DE 19834751、DE 19839499、DE19900355、DE19900471和DE 19530996中描述的那些，所有上述参考文献的具体和一般的公开被并入本文作为参考。

因子Xa抑制剂包括在国际专利申请WO 96/10022、WO 97/28129、WO 97/29104、WO 98/21188、WO 99/06371、WO 99/57099、WO99/57112、WO 00/47573、WO 00/78749、WO 99/09027和WO 99/57113中公开的那些，所有参考文献的具体和一般的公开都被并入本文作为参考，以及4-{4-[4-(5-氯吲哚-2-基磺酰基)哌嗪-1-羰基]苯基}-吡啶-1-氧化物及其可药用衍生物。优选的因子Xa抑制剂包括antistatin；蜱源抗凝血蛋白；和已知为SQ-311和SQ-315(参见国际专利申请WO98/57951)，SN-292(参见国际专利申请WO 98/28282)，SN-429和SN116(参见国际专利申请WO 98/28269)，RPR-208707(参见国际专利申请WO 98/25611，实施例48)，XU-817(参见国际专利申请WO 98/01428)，SF-324和SF-303(参见国际专利申请WO 97/23212)，YM 60828(参见国际专利申请WO 96/16940，实施例75)，FACTOREX(参见US专利5,783,421)，SF-324(参见欧洲专利申请EP 874629)，DX9065A(参见欧洲专利申请EP 540051，实施例39)，1-(4-甲脒基苄基)-4-(6-氯萘-2-基磺酰基)-哌嗪-2-酮(参见JP 12204081，实施例2)，M55555(参见国际专利申请WO 99/33805，实施例39)，DPC423(1-(3-甲脒基苯基)-2-(2′-氨基磺酰基[1，1′-联苯]-4-基氨基羰基)-4-溴吡咯(参见国际专利申请WO98/28269)，3-(3，5-二氟-6-[3-(4，5-二氢-1-甲基-咪唑-2-基)-苯氧基]-4-[2，3-二羟基-丙氧基]-吡啶-2-基氧基)-4-羟基-苄脒(参见国际专利申请WO 00/31068)，ZK-807834(参见国际专利申请WO 7/29067)，1，4-二氮杂-4-(6-氯萘-2-基磺酰基)-6-(甲氧基甲基)-7-氧杂-1’-(吡啶-4-基)-螺[双环-[4-3.0]-壬烷-8，4′-哌啶]-2-酮(参见国际专利申请WO 01/02397)，(S)-1-(4-氨基喹唑啉-7-基甲基)-4-[2-(5-氯噻吩-2-基氧基)-乙酰基]-3-甲氧基-甲基哌嗪-2-酮(参见国际专利申请WO 00/32590)，3-(2-[4-(2-氨基磺酰基-苯基)苯甲酰基苯氧基)-苄脒(参见国际专利申请WO 01/19788)，和4-(2-[4-(5-氯吲哚-2-基-磺酰基)-2-(吡咯烷-1-基-羰基甲基)哌嗪-1-基-羰基]-噻唑-5-基)吡啶N-氧化物(参见日本专利申请JP 12143623)的那些；以及国际专利申请WO 98/21188的实施例7的化合物，WO99/57113的实施例3和6的化合物，国际专利申请WO 00/78747的实施例6的化合物，US专利6,080,767的实施例188、211和167的化合物，国际专利申请WO 99/33805的实施例40、54和55的化合物，国际专利申请WO 01/05784的实施例5、6、8、9、10、11、12、13、15、16和17的化合物，国际专利申请WO 01/12600的实施例6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、22、23、25、26、28、29、30、31、32、33、34、38、39、40、41、42和43的化合物，和国际专利申请WO 00/35886的实施例802和877的化合物。可用于组合治疗的其它抗凝血剂为在美国治疗申请20020065303、20020061842、20020058677、20020058657、20020055522、20020055469、20020052368、20020040144、20020035109、20020032223、20020028820、20020025963、20020019395、20020019394、20020016326、20020013314、20020002183、20010046974、20010044537、20010044536、20010025108、20010023292、20010023291、20010021775、20010020020033、20010018423、20010018414和20010000179中公开的那些，其都被全文并入本文作为参考。

用于给用美拉加群及其衍生物(包括前药)的适当的制剂在文献中有所描述，如特别在WO 94/29336、WO 96/14084、WO 96/16671、WO97/23499、WO 97/39770、WO 97/45138、WO 98/16252、WO 99/27912、WO 99/27913、WO 00/12043和WO 00/13671中所述的，每个文献的公开都被并入本文作为参考。

同样地，用于给用因子Xa抑制剂及其衍生物(包括前药)的适当的制剂在文献中有所描述，例如在上述的与因子Xa抑制剂有关的现有技术文献中描述，每种文献的公开都被并入本文作为参考。另外，适当的制剂(特别是包括美拉加群/衍生物和因子Xa抑制剂/衍生物的组合制剂)的制备可以通过本领域技术人员使用常规技术无需付出创造性的劳动而实现。美拉加群、因子Xa抑制剂或二者中任一种的衍生物在各自制剂中的量根据状况的严重程度和被治疗的患者及采用的化合物而定，但是可由本领域技术人员无需付出创造性的劳动而确定。

美拉加群、因子Xa抑制剂和二者中任一种的衍生物在用于哺乳动物(特别是人类患者)的治疗性和/或预防性治疗时适当的剂量通常可由职业医师或其它技术人员决定，并且包括在涉及美拉加群(或其衍生物(包括前药))、涉及上述的因子Xa抑制剂的现有技术文献中讨论的各自的剂量，每个文献的公开都被并入本文作为参考。

实施例

除非另有说明，所有的溶剂和试剂购自Aldrich并且直接使用。所有的反应和产物都使用HPLC分析，采用装备有二极管阵列检测器和Phenomenex Prodigy 5μ ODS-3100A柱、150mm×3.0mm ID[Phenomenex商品目录#00D4096-Y0]的Agilent HP1100系统。色谱分离在40℃的柱温下进行，化合物检测同时在214和254nm进行。采用梯度洗脱，使用乙腈-水流动相系统，TFA作为酸缓冲剂，通常为5-10分钟的梯度。

参考例A

3，4-二氨基苄脒单盐酸盐的合成

步骤1

将4-氨基-3-硝基苄腈(63.3g，388mmol)在1，4-二氧杂环己烷(600mL)和无水乙醇(600mL)中的混合物在冰水浴中冷却到0-5℃并用气体HCl处理1.5小时。将反应混合物密封并允许其在搅拌下回温到室温，维持18小时。然后小心地将烧瓶开封并将反应混合物用无水乙醚(约2.4L)稀释，直到得到混浊溶液。然后加入得到透明溶液所需的最小量的绝对乙醇，并且搅拌得到的溶液，直到观察到4-氨基-3-硝基亚氨代苯甲酸乙酯(benzimidic acid)的晶体。然后小心地加入乙醚以完成结晶过程，并使悬浮液静置约30分钟。将晶体过滤并用无水乙醚洗涤，然后使其在抽吸器真空下干燥。晶体在真空中干燥得到4-氨基-3-硝基-亚氨代苯甲酸乙酯(84.6g)，为灰白色晶体。

步骤2

将4-氨基-3-硝基-亚氨代苯甲酸乙酯盐酸盐(84.5g，344mmol)悬浮在绝对乙醇(750mL)中，然后冷却到0℃。然后将氨气通过溶液，维持2小时。将烧瓶密封并允许其在搅拌下在18小时内回温到室温。采用与上述步骤1中所述那些相似的方法将产物用乙醚结晶并将得到的固体过滤，洗涤并干燥，得到4-氨基-3-硝基苄脒单盐酸盐(70.7g)，为灰白色粉末。

步骤3

4-氨基-3-硝基苄脒单盐酸盐(15g，69mmol)和Pearlman′s催化剂[Pd(OH)₂，1.0g，7.12mmol)在甲醇(200mL)中的悬浮液在50psi的氢气气氛下摇动1.5小时。将悬浮液过滤通过硅藻土并将滤液滴加到无水乙醚(400mL)中以沉淀3，4-二氨基苄脒单盐酸盐，为棕褐色固体。

参考例B

N-叔丁基4-甲氧基-5-(苯磺酰胺基)-3-硼酸的合成

步骤1

将2-碘代苯甲醚(221.2g，966mmol)的二氯甲烷(2.3L)溶液冷却到0℃并在搅拌下在15分钟内滴加氯磺酸(64.5mL，112.6g，966mmol)。使反应混合物在3小时内回温到10℃。将氮气通过溶液并将气体出口鼓泡通过氢氧化钠水溶液以洗涤反应产生的气态氯化氢。将反应的一部分用HPLC分析，其表明2-碘代苯甲醚已经耗尽。反应混合物用五氯化磷(217.8g，1.045mol)处理并在室温搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩以除去大部分的挥发性组分，然后在100℃的浴温进一步浓缩，以除去反应产生的POCl₃。将得到的油状残余物溶解于CH₂Cl₂(2.8L)并将该溶液与水(3L)搅拌，同时加入固体碳酸氢钠以保持pH为约7。分液并将有机相冷却到0℃，然后加入叔丁胺(230mL，160g)，其加入速率使得保持内部温度≤10℃。允许反应混合物回温到环境温度过夜，然后用5％氢氧化钠洗涤。将有机相真空浓缩，得到N-叔丁基3-碘代-4-甲氧基苯磺酰胺(340g)，为灰白色固体。

步骤2

将N-叔丁基3-碘代-4-甲氧基苯磺酰胺(335g，907mmol)溶解于二氯甲烷(3L)并将得到的溶液冷却到-20℃的内部温度。将溶液通过在0.5小时内滴加3.0M的甲基溴化镁的乙醚溶液(308mL，925mmol)处理，保持烧瓶的内部温度在-20±5℃。将反应混合物在-20±5℃搅拌2.5小时，然后在约-35℃下加入2.13M的异丙基溴化镁的乙醚溶液(511mL，1.09mol)。将得到的溶液在-35±5℃搅拌1.5小时。将反应混合物回温到0℃并加入另外的异丙基溴化镁的乙醚溶液(86.0mL，183mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时，然后加入异丙基溴化镁的乙醚溶液(25.0mL，53.3mmol)的另外小份。将反应混合物用含硼酸三甲酯(320mL；2.90mol)的THF(175mL)一次性处理，引起温度升高到27℃。将反应混合物在这个温度下搅拌4小时，然后倾倒在水(1.3L)中并且加入85％磷酸，直到溶液pH为2。分层并将有机相用1.5N NaOH水溶液(2L)洗涤，随后用1％NaOH水溶液(2L)洗涤。将合并的水相用磷酸酸化到pH 2并将得到的酸性溶液用9∶1的二氯甲烷/THF溶液(2L，随后用1L)提取。将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩，得到约250g的白色固体，将其溶解于乙醇(1L)中。溶液用水稀释，得到4L的总量，并将得到的溶液在室温搅拌过夜。将得到的结晶固体过滤并在高真空下干燥过夜，得到N-叔丁基4-甲氧基-5-(苯磺酰胺基)-3-硼酸(221g)，为白色固体，其为二水合物(近似)。滤液用9∶1的二氯甲烷/THF溶液提取并将提取液蒸发。粗固体(23g)从3∶1的水/乙醇溶液(500mL)结晶，得到另外19g的产物，为白色固体。

参考例C

4-苄基氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺的合成

步骤1

向1L圆底烧瓶中加入2-碘代苯酚(50g)和硝基甲烷(250mL)并将反应混合物冷却到0℃。滴加发烟硫酸(42mL，30％SO₃)并使反应混合物回温到室温。在2小时之后，反应完成，将其倾倒在水(400mL)中并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。然后将有机物用水(300mL)反提取并凝缩得到油状物，将其与原来的水层合并。水层然后用5M氢氧化钠水溶液(300mL)中和并转移到2L RBF中。然后加入氢氧化钠小粒(11g)、乙醇(150mL)和溴苄(50mL)并将反应混合物加热到82℃的油浴温度并搅拌16小时。在反应完成之后，将乙醇通过真空蒸馏除去，引起产物从溶液沉淀出来。然后将产物过滤并在高真空下干燥，得到4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酸(61g，70％收率)。

步骤2

向2L RBF中加入4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酸(49.87g)和二氯甲烷(1000mL)。将悬浮液搅拌并加入五氯化磷(53g)，反应变为溶液。在将反应混合物在40℃加热1小时之后，缓慢加入氢氧化钠水溶液(400mL，20％)并且继续搅拌直到水相为pH 7。将有机层分离并与50％饱和碳酸氢钠水溶液(125mL)搅拌30分钟(pH 10)。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥，移入到2L RBF中并加入叔丁胺(34mL)。在16小时之后，用5％氢氧化钠水溶液将反应混合物碱化到pH 13-14。将有机层分离并浓缩为固体，然后将该固体在乙酸异丙酯中打浆、冷却并过滤，得到4-苄基氧基-N-叔丁基-3-碘代-苯磺酰胺(46g，两步收率80％)。

步骤3

向1L RBF中加入4-苄基氧基-N-叔丁基-3-碘代-苯磺酰胺(32g)和二氯甲烷(320mL)并将反应混合物搅拌并冷却到-20到-25℃。滴加甲基溴化镁(24.4mL，3M，在乙醚中)。将反应混合物搅拌2小时，然后冷却到-35到-40℃。滴加异丙基溴化镁(54mL，2.13M，在乙醚中)。然后加入四氢呋喃(17mL)和硼酸三甲酯(6mL)，沉淀出白色固体并使反应混合物的内部温度升高到0℃。使反应混合物回温到室温并在12小时之后加入磷酸(250mL，1M，在500mL水中)。将有机层分离并用2.5％氢氧化钠水溶液(500mL)碱化，引起一些产物沉淀。水层以及一些沉淀的固体用浓磷酸酸化到pH 2并用含10％四氢呋喃的二氯甲烷溶液提取。固体被有机物挟带，然后将其浓缩，得到白色固体，然后将其在1L水中打浆30分钟。将固体过滤并在高真空下干燥，得到4-苄基氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺(23g，88％收率)。

标题化合物的替代合成方法：

步骤1

对3颈的3L圆底烧瓶装备高架搅拌器、温度计、N₂导管、250mL恒压滴液漏斗和气体排出洗涤器(接NaOH溶液)。烧瓶用N₂吹扫并加入购得的2-碘代苯酚(Alfa Aesar；201.95，0.918mol)和无水二氯甲烷(920mL)。在反应顶部空间形成温和的N₂流，然后将反应容器浸入盐水-冰浴中并冷却到-5℃。对滴液漏斗加入无水二氯甲烷(175mL)，然后加入氯磺酸(Aldrich；106.96g，0.918mol，1.00eq.)并将得到的混合物用Teflon搅拌棒搅拌。然后在约90分钟内将氯磺酸的稀溶液滴加到反应混合物中。在加入过程中形成浓粉红色浆状物。在加入完成三十分钟之后，除去冰浴并将反应混合物在环境温度搅拌。在2小时之后，将反应浸在冷水浴中并在几分钟内向反应混合物加入水(500mL)。将得到的混合物剧烈搅拌直到其在沉降时为双相的/均质的。将混合物与水一起转移到分液漏斗中并用二氯甲烷提取。将包含4-羟基-3-碘代-苯磺酸的水层转移回到原来的反应容器，用于下一步。

步骤2

将氢氧化钠(小粒，110g，2.75mol，3.00eq)分批加入到剧烈搅拌的4-羟基-3-碘代-苯磺酸水溶液中。在加入完成10-15分钟之后，加入异丙醇(150mL)到得到的白色悬浮液中。向滴液漏斗加入溴苄(Aldrich；164.9g，0.964mol，1.05eq.)并在约5分钟内加入到反应混合物中，并将反应混合物加热到80℃≤T_内≤84℃。在约25分钟之后，测定发现没有进行进一步的反应，因此向反应混合物中加入另外的氢氧化钠(3.67g，91.8mmol，0.1eq.)，然后加入另外的溴苄(15.7g，91.8mmol，0.1eq.)，得到均质溶液。在从最初的溴苄加入70分钟之后，停止加热并允许反应在搅拌下在油浴中慢慢冷却。在7.5小时，反应混合物表现为细粒反光性沉淀物在褐色液体中的悬浮液。用3∶1的水-硫酸将反应混合物从pH 13+酸化为pH 7.5到8(需要约70mL)。然后将反应混合物逐渐冷却到约5℃并在该温度下搅拌～1小时。通过过滤收集蜡质白色片状物，用二氯甲烷洗涤并在高真空下干燥(冷冻干燥器，100-200mTorr)～24小时，得到4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酸钠，为光亮的白色结晶固体(267.7g，71％)。

步骤3

对3颈的3L圆底烧瓶装备高架搅拌器、回流冷凝器(具有接通NaOH洗涤液的气体出口)和具有N₂导管的恒压滴液漏斗。将烧瓶用N₂吹扫，加入4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酸钠(234g，0.568mol)、二氯甲烷(1.15L)和催化量的二甲基甲酰胺(910mg，11.7mmol，2.1mol％)。将白色悬浮液在温和的氮气流下搅拌并在设置为40-45℃的油浴中加热。然后在3-5分钟内加入草酰氯(90.1g，0.710mol，1.25eq)。在2.5小时之后，将反应在冷水浴中冷却到25℃，然后在约5分钟内通过滴加水(60mL)淬灭。一次性加入另外部分的水(450mL)并将反应混合物剧烈搅拌5-10分钟。将有机层分离并用水洗涤，直到水层的pH增加到pH 4到5。将得到的4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酰氯的二氯甲烷溶液用于下一步。

步骤4

对3颈的3L圆底烧瓶装备高架搅拌器、温度计和加有4-苄基氧基-3-碘代-苯磺酰氯的溶液的恒压滴液漏斗。将烧瓶浸在冷水浴(T_内＝22℃)中并滴加叔丁胺(90.1g，0.710mol，2.1eq)(T_内无变化)。将得到的反应混合物在环境水浴温度下搅拌过夜。在17小时之后，对反应混合物进行后处理，将有机层分离并浓缩为其原来量的约1/3(～500mL)，这时产物开始沉淀。使反应混合物在环境压力下回温到35-40℃直到固体再次溶解。然后使溶液在温和的搅拌下冷却到室温。在2天内形成白色沉淀物。将悬浮液剧烈搅拌同时缓慢加入己烷(1.5L)，然后搅拌过夜，然后在冰浴中冷却1-2小时。通过过滤收集沉淀物。并用己烷洗涤，干燥，首先在抽吸下干燥，得到4-苄基氧基-N-叔丁基-3-碘代-苯磺酰胺(238，94％)。

步骤5

对3颈的2L圆底烧瓶装备高架搅拌器、温度计、恒压滴液漏斗和N₂导管。烧瓶用N₂吹扫，然后加入4-苄基氧基-N-叔丁基-3-碘代-苯磺酰胺(198.6g，0.446mol)和二氯甲烷(600mL)。将白色悬浮液在温和的N₂流下搅拌并在冰水浴(0℃≤T_内≤5℃)中冷却。向滴液漏斗加入甲基溴化镁(Aldrich；3.0M，在乙醚中，167g，～171mL，0.513mol，1.15eq)，将其滴加到悬浮液，滴加速率使得T_内＜5℃(需要向冷却浴中加入盐)，在加入～1/3时得到无色的均质混合物。在加入完成之后，向滴液漏斗中加入异丙基溴化镁(Boulder Scientific；2.13M，在乙醚中；250mL，0.533mol，1.2eq)，将其滴加到反应混合物中，滴加速率使得T_内＜5℃。在加入完成之后，将反应混合物搅拌15-20分钟。取下滴液漏斗并换为隔膜和套管，并在2小时内将反应混合物转移到包含硼酸三甲酯(106.6g，1.03mol，2.30eq)和四氢呋喃(600mL)的3颈的3L圆底烧瓶中，并在氮气氛下用冰水浴保持在(T_内＜5℃)。在加入完成之后，将溶液在＜5℃搅拌30分钟，然后转移到分液漏斗并用等量的2∶1(水∶磷酸)溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥。向溶液加入乙酸乙酯并将合并的有机层浓缩，得到4-苄基氧基-N-叔丁基-3-硼酸-苯磺酰胺(129g，80％)。

参考例D

2-(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)-2-甲基丙酸甲酯的合成

步骤1

对3L的3颈圆底烧瓶装备高架搅拌器、温度计和恒压加料漏斗。向烧瓶加入1.0M的t-BuOK的THF溶液(Aldrich；1822g，2.020L，2.020mol)，然后用氮气吹扫，将溶液搅拌并浸在冷自来水的冷却浴中(内部温度18℃)。在～30分钟内通过加料漏斗加入纯4-甲氧基苯基乙腈(148.7g，1.010mol)。加料漏斗用THF洗涤并将洗液加入反应中。将反应搅拌20分钟，然后为加料漏斗加入碘甲烷(286.7g，2.020mol)，在55分钟内将其滴加，得到乳状橙红色悬浮液。调节加入速率以保持内部温度为21-27℃，并且向冷却浴加入冰以帮助维持这一温度范围。在加入完成之后，将反应混合物搅拌另外的60分钟，然后将其倾倒在饱和氯化钠水溶液和水的混合物(2∶1；1.5L)中并将反应容器用多份的饱和氯化钠水溶液(250mL)和THF(100mL)漂洗。将合并的液体摇动并将得到的各层分离，然后将有机相真空浓缩。将得到的残余物在高真空下干燥过夜，得到2-(4-甲氧基苯基)-2-甲基丙腈，为橙-棕褐色油状物，包含少量的白色沉淀物。这个物质不经另外的处理直接用于下一步。

步骤2

将2-(4-甲氧基苯基)-2-甲基丙腈(358g，2.04mol)、KOH(284.8g，5.08mol)、乙二醇(750mL)，和水(100mL)的混合物在150-160℃加热7小时在装配有bump flask和fermentation lock的1L圆底烧瓶中，然后使其冷却并静置过夜。继续加热另外的7小时，没有观察到任何另外的转化。使反应冷却并且倾倒在水(2L)中，然后通过在搅拌下加入浓HCl(～250mL)酸化到pH 10-11。得到的溶液用乙酸异丙酯提取(1×1L，随后用2×500mL)，然后过滤以除去少量的白色沉淀物。将反应混合物剧烈搅拌并且慢慢地用浓HCl(～250mL)进一步酸化到约pH＝2。在pH 6-7时产物开始沉淀。将悬浮液在环境温度下搅拌30分钟然后保存在冷冻器中过夜。混合物过滤并将沉淀物用冷的1M HCl(500mL)洗涤，随后用冷水(2×150mL)洗涤。将固体在抽吸下干燥，随后高真空干燥(冷冻干燥器)过夜，得到2-(4-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸(314g，80％)，为浅黄-橙色晶体，包含约2.0％的单甲基杂质。

步骤3

在氮气下将2-(4-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸(45.3g；233mmol)和吡啶盐酸盐(150g；1.30mol)的混合物在180-190℃的油浴温度下加热5小时。使反应混合物冷却到90℃，然后用水(400mL)和浓HCl(30mL)稀释。得到的溶液用乙酸乙酯(55mL)提取并将有机层用水洗涤(5×500mL)。合并的含水提取液用乙酸乙酯洗涤(400mL)并将合并的有机相干燥(MgSO₄)并真空浓缩。将固体残余物(40.9g)溶解于预先加热到回流的乙酸乙酯(60mL)和苯(200mL)的混合物中。向回流的混合物加入己烷(100mL)并将得到的浆状物冷却到室温过夜。将固体过滤，用己烷-苯(1∶1)洗涤并真空干燥，得到α，α-二甲基4-甲氧基苯基乙酸(35.70g；85％)，为白色固体，包含约2.3％的单-甲基杂质。

步骤4

将α，α-二甲基4-甲氧基苯基乙酸(108g；0.556mol)与吡啶·HCl(324g；2.80mol)加热到180℃，维持5小时。使反应混合物冷却到约90℃然后将其加入到等量的10％氢氧化钠水溶液和碎冰中，得到碱性溶液。水溶液用乙醚洗涤，然后用85％的H₃PO₄酸化到pH＝3。水相用乙酸乙酯提取并将合并的有机提取物真空浓缩，得到固体，其从水结晶，得到α，α-二甲基4-羟基苯基乙酸。

替代方法

在搅拌下将α，α-二甲基4-甲氧基苯基乙酸(100g；0.515mol)和吡啶·HCl(297g；2.57mol)在180℃下加热5小时。使反应混合物冷却到室温，然后静置过夜。在18小时之后，将反应再加热，使得其为均质的，以便取样，然后将其冷却到～100℃并倾倒在1L碎冰和10％NaOH水溶液(1.5L)的混合物上。水层用乙醚提取，然后用85％H₃PO₄水溶液酸化到pH＝3(～130mL)，然后用EtOAc(500mL，随后用250mL)提取。合并的有机提取液真空浓缩，得到固体，其从热水结晶。一旦晶体已经显著地形成，开始搅拌，其速度使得保持整个沉淀物的流动性，然后继续搅拌过夜。将混合物在冰箱中冷却2小时，然后通过过滤收集晶体。将晶体用最少量的冷水(～100mL)洗涤，然后干燥，首先在抽吸下干燥，然后在高真空下(冷冻干燥器)，得到α，α-二甲基4-羟基苯基乙酸(76.3g，82％)，为棕褐色结晶固体。

步骤5

α，α-二甲基4-羟基苯基乙酸(90.0g；499mmol)和甲醇(1L)的混合物在冰水浴中冷却到0℃。在搅拌下向该溶液中滴加二氯亚砜(72.9mL；119g)。将得到的溶液在回流下加热2小时。将溶液冷却到室温并真空浓缩，得到固体，其从甲苯(900mL)结晶，得到2-(4-羟基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(92g，95％)。

替代方法：

在20分钟内将二氯亚砜(92.4g；777mmol；200mol％)加入到搅拌的α，α-二甲基4-羟基苯基乙酸(70.0g；388mmmol)的甲醇(390mL)溶液中。将得到的溶液在环境温度搅拌40分钟，浓缩，并进一步在高真空下干燥，得到2-(4-羟基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(75.3g，100％)，为浅褐色半结晶固体。

步骤6

向装备有高架搅拌器、冷凝器、热电偶和加热罩的5L RBF中加入2-(4-羟基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(90.0g，0.463mol)，随后加入乙腈(2250mL)。然后加入三乙胺(260mL；189g)，随后加入无水氯化镁(88.0g；924mmol)。将反应混合物搅拌30-45分钟，加入颗粒状多聚甲醛(99.0g；3.30mol)并将反应加热到回流。通过HPLC分析反应混合物，显示反应在约2小时之后完成。然后将反应冷却并用乙醚(3L)和1N HCl水溶液(3L)稀释。分液并将有机相用1N HCl(3×3L)和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)。将溶液浓缩，得到油状物，通过将其在干冰浴中与己烷搅拌使其结晶，得到(4-羟基-3-甲酰基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(94.7g，92％)，为白色固体。

替代方法：

向装备有高架搅拌器、冷凝器和温度计的3L的3颈圆底烧瓶中加入2-(4-羟基苯基)-2-甲基丙酸酯(75.3g；388mmol)和乙腈(400mL)。在搅拌下，一次性加入三乙胺(47.1g；0.466mol；120mol％)，然后在3-5分钟内分批加入无水氯化镁(40.6g；427mmol；110mol％)。将反应混合物在80-82℃搅拌30分钟，然后在5分钟内分批加入多聚甲醛(23.3，776mmol；200mol％)。在几分钟内，反应开始从浅褐色悬浮液变为均质的黄色溶液。将反应在80-82℃搅拌并通过HPLC监控起始原料的转化。将反应混合物冷却到～60℃，然后加入1M的H₃PO₄水溶液(～100mL)，并将得到的浓的黄色悬浮液真空浓缩为糊状固体。加入二氯甲烷(1L)和水(1L)，将混合物用高架搅拌器剧烈搅拌，并加入85％的H₃PO₄水溶液，直到固体溶解和达到pH＝3(～70mL)。分层并将有机层用1MH₃PO₄(200mL)、盐水(200mL)洗涤，并浓缩，得到(4-羟基-3-甲酰基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(84.5g，98％质量收率)的橙-褐色油状物，其包含一些未反应的起始原料。

步骤7

向装备有高架搅拌器和热电偶的5L RBF中加入(4-羟基-3-甲酰基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(121g，547mmol)，随后加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF；1600mL)。然后将溶液冷却到5℃并滴加N-溴代琥珀酰亚胺(117g，657mmol)的DMF(700mL)溶液，其加入速率使得维持内部温度低于10℃。在加入完成之后，使反应混合物回温到室温，反应在3小时内完成。反应混合物用乙醚(3L)稀释并将得到的溶液用水洗涤(4×1L)。将第一份水洗液用乙醚(1L)反提取并合并用于其余的洗涤。然后将有机相用饱和氯化钠水溶液(2×1L)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩，得到红橙色固体。将固体溶解于热异丙醇(120mL)中并使其在搅拌下冷却。然后将结晶产物过滤并用等量的冷IPA(-20℃；120mL)洗涤，得到(5-溴-4-羟基-3-甲酰基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(132g，80.1％)，为灰白色固体。

实施例1

N-[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-(1-氨基甲酰基-1-甲基-乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]-(2S)-2，3-二羟基丙酰胺二盐酸盐的合成

步骤1

向装备有磁力搅拌棒的3-L圆底烧瓶中加入2-(3-溴-5-甲酰基-4-羟基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(132g，438mmol)、碳酸钾(66.7g，483mmol)和DMF(1L)。将溶液在室温搅拌0.5小时。在剧烈搅拌下滴加碘甲烷(31.5mL，506mmol)。反应在3小时之后完成。向该溶液中加入甲基叔丁基醚(MTBE)(3L)并将溶液过滤，以除去无机盐。溶液用水洗涤，随后用冷的0.5％NaOH水溶液(1L)洗涤，随后用盐水洗涤。水层用MTBE(1L)反提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩。可通过接近完全除去MTBE随后加入冷的己烷以从溶液沉淀产物而分离最终产物。然后将固体趁冷过滤，得到2-(3-溴-5-甲酰基-4-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸甲酯(130g，94％)，为灰白色固体。

步骤2

向装备有加料漏斗和机械搅拌器的5-L的3颈烧瓶中加入3-溴-4-甲氧基苄腈(Lancaster；159.0g；750mmol)、无水THF(3.0L)和硼酸三异丙基酯(345mL；282g；1.50mol)。将溶液在干冰/丙酮浴中冷却到-78℃然后在20分钟的时间内加入2.44M正丁基锂的己烷溶液(461mL；1.12mol)。在加入完成之后，将反应混合物在-78℃搅拌1小时。反应混合物用7％磷酸水溶液(2L)淬灭并使反应混合物回温到室温。停止搅拌并使反应混合物静置过夜。分层，将水层弃去，有机相用二氯甲烷(2L)稀释并将有机相用5％氢氧化钠水溶液(2×1.7L)提取。水相用MTBE(1.5L)洗涤然后用85％磷酸水溶液酸化到pH＝2.5，形成白色沉淀。将沉淀物过滤并用水洗涤，得到2-甲氧基-5-氰基苯基硼酸(104g，78％)，为白色固体。

步骤3

向装备有搅拌棒、加热罩、回流冷凝器和温度计的5-L圆底烧瓶加入2-(3-溴-5-甲酰基-4-甲氧基苯基)-2-甲基-丙酸甲酯(114.5g，363mmol)、2-甲氧基-5-氰基苯基硼酸(77.5g，438mmol)、THF(2.3L)和N，N-二异丙基胺(169mL；1.21mol)。将该溶液在室温下脱气并在室温下加入PdCl₂(dppf)·二氯甲烷复合物(3.4g；4.1mmol)。将反应混合物的温度提高到70℃并将其在该温度下搅拌过夜。第二天，通过HPLC分析显示反应完成，使溶液冷却到室温。在真空中除去溶剂。向该溶液中加入乙酸乙酯(2L)并将溶液用5％碳酸钾水溶液(1.5L)提取，随后另外用盐水(2.0L)洗涤。然后将有机层用DARCO-60炭(5.7g)处理并将溶液在室温下搅拌4小时。然后将溶液用硫酸钠(200g)干燥。然后将有机层过滤通过覆盖有硅藻土(300g)、硅胶(300g)和硅藻土(300g)的烧结过滤器。将固体用95∶5的二氯甲烷∶甲醇溶液(1L)洗涤。然后将得到的溶液浓缩，得到2-(5′-氰基-5-甲酰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基)-2-甲基丙酸甲酯(133g)，为油状物，其不经任何另外的纯化用于下一步。

步骤4

向装备有机械搅拌棒的3L圆底烧瓶加入粗2-(5′-氰基-5-甲酰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基)-2-甲基丙酸甲酯(133g)和异丙醇(1.65L)。将溶液加热到70℃并且一次性加入偏亚硫酸氢钠(69.0g，363mmol)的水溶液(650mL)。将溶液在70℃搅拌1.5小时，然后加入3，4-二氨基苄脒单盐酸盐(81.0g，434mmol)。将溶液对空气敞开在75-80℃搅拌过夜。将反应混合物在高温浓缩以除去约75％的异丙醇，并向溶液中加入水(2.0L)。将溶液冷却到0℃并过滤。沉淀物用冷水(300mL)洗涤并干燥，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-氰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基]-2-甲基丙酸甲酯(155g)。

步骤5

向装备有机械搅拌器、Dean-Stark冷凝器、加热罩和氮气入口的12-L的2颈圆底烧瓶中加入盐酸吡啶(2.0kg，17.31mol)和甲苯(1L)。将溶液加热至回流过夜以除去40mL过量的水。第二天，将2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-氰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基]-2-甲基丙酸甲酯(155g，290mmol)与甲苯(500mL)一起加入。将烧瓶的内部温度提高到175℃，然后用加热罩的温度控制器将其在15分钟内提高到190℃，将其关闭。反应在190℃在0.5小时之后完成。从溶液除去搅拌桨叶并使熔融物冷却到室温，这时其固化。向该溶液中加入水(8L)并使溶液在室温下搅拌过夜。第二天早晨，通过过滤从溶液取出沉淀的固体并将其用水(100mL)洗涤，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-氰基-6，2′-二羟基联苯-3-基]-2-甲基丙酸(135g，95％)，通过HPLC分析，其具有大于98％的纯度。

步骤6

将2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-氰基-6，2′-二羟基-联苯-3-基]-2-甲基丙酸(0.762g；1.552mmol)和HATU(0.768g；2.02mmol)溶解于10mL的无水N，N-二甲基乙酰胺中。加入吡啶(2.0mL；24.7mmol)并将混合物搅拌1小时，然后冷却到0℃。然后使氨气通过反应混合物历时45分钟。为反应容器盖上盖子并将混合物在室温下搅拌1天。然后将反应混合物真空浓缩并将残余物悬浮在乙腈(40mL)中并且超声处理20分钟。将固体过滤，用乙腈(20mL)洗涤然后真空干燥，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-氰基联苯-3-基]异丁酰胺盐酸盐，为灰白色粉末。

步骤7

将在三氟乙酸(50mL)中的炭载氢氧化钯(Pearlman′s催化剂；50％湿；6.0g)在50psi下氢化10分钟。将粗2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-氰基联苯-3-基]异丁酰胺盐酸盐加入到还原的催化剂悬浮液中，随后加入另外量的TFA(100mL)。将反应混合物在50psi下氢化，直到通过HPLC-UV分析测定认为完成。需要5小时的总反应时间。将反应混合物过滤通过硅藻土并将滤液真空浓缩。残余物通过制备性反相HPLC纯化，使用乙腈和水梯度洗脱，得到2-[5′-氨基甲基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基联苯-3-基]异丁酰胺二盐酸盐(457mg，55％)，为浅黄色粉末。

步骤8

将(S)-(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-羧酸甲酯(5.33g，33.28mmol；Aldrich目录编号25，460-6)溶解于包含等摩尔量的LiOH一水合物(1.40g；33.28mmol)的THF/水(1∶1：220mL)并在室温下搅拌90分钟。将溶液真空浓缩并干燥，得到(5.00g，99％)的(S)-(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-羧酸的锂盐，为白色固体。将一部分(S)-(-)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-羧酸的锂盐(105mg；0.65mmol)和HATU(0.243g；0.64mmol)在DMA(10mL)中混合并超声处理15分钟，直到实现溶解。

在单独的烧瓶中，将2-[5′-氨基甲基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基联苯-3-基]异丁酰胺(0.31g；0.58mmol)、N，N-二异丙基乙基胺(0.113mL；0.65mmol)、吡啶(3.4mL)和N，N-二甲基乙酰胺(15mL)搅拌20分钟，直到得到透明溶液。然后将两种溶液合并并搅拌3-4小时，使用HPLC-UV分析监控反应的进程。在测定反应完成之后，加入氨水(2mL)并将混合物搅拌4小时。将反应混合物在高真空下浓缩并将残余物悬浮在乙腈(30mL)中，然后超声处理30分钟。将沉淀物过滤，用乙腈洗涤并干燥，得到N-[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5’-(1-氨基甲酰基-1-甲基-乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]-(S)-2，3-二羟基丙酰胺(440mg)，通过HPLC-UV分析(AUC)测定为95％纯度。这个物质不直接用于下一步。

步骤9

将N-[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-(1-氨基甲酰基-1-甲基乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]-(S)-2，3-二羟基丙酰胺(0.41g，0.66mmol)溶解于1N HCl水溶液(5-6mL)中并在室温下搅拌2小时。将溶液置于冷冻器中1小时，将得到的结晶产物通过过滤分离并用冷的1N HCl洗涤两次，再溶解在水(12mL)中并且冷冻干燥，得到标题化合物(290mg，71％)，为浅黄色固体，HPLC-UV和质子NMR分析测定为97％的纯度。测量值(LCMS)547.3(M+1)⁺，545.4(M-I)^-。C₂₈H₃₀N₆O₆的计算值546.22。

实施例2

N-[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-(1-氨基甲酰基-1-甲基-乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]-(2S，3R)-2，3-二羟基丁酰胺的合成

步骤1

将(2S，3R)-2，3-O-亚异丙基-2，3-二羟基丁酸甲酯(5.27g，30.25mmol；Fluka目录编号59437)溶解于包含等摩尔量的氢氧化锂一水化物(1.27g；30.25mmol)的THF/水(1∶1；220mL)溶液并搅拌90分钟。将溶液真空浓缩，得到(2S，3R)-2，3-O-亚异丙基-2，3-二羟基丁酸的锂盐(4.90g，98％)，为白色固体。将一部分的(2S，3R)-2，3-O-亚异丙基-2，3-二羟基丁酸的锂盐和HATU(0.243g；0.64mmol)在DMA(10mL)中混合，然后超声处理15分钟，直到实现溶解。

在单独的烧瓶中，2-[5′-氨基甲基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基联苯-3-基]异丁酰胺盐酸盐(310mg；0.58mmol)、N，N-二异丙基胺(0.113mL；0.65mmol)、吡啶(3.4mL)在DMA(15mL)中的混合物搅拌20分钟，直到溶解完成。将两种溶液合并并搅拌3-4小时，使用HPLC-UV分析监控反应的进程。一旦认为反应完成(4小时)，加入氨水(2.0mL)并将反应混合物搅拌4小时。将反应混合物在高真空下浓缩并将残余物悬浮在乙腈(30mL)中并超声处理。将得到的沉淀物过滤并用乙腈洗涤并干燥，得到(4S，5R)-2，2，5-三甲基-[1，3]二氧杂环戊烷-4-羧酸[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-(1-氨基甲酰基-1-甲基乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]酰胺盐酸盐(390mg)，通过HPLC-UV分析，其为93％纯度(AUC)。

步骤2

将粗(4S，5R)-2，2，5-三甲基-[1，3]二氧杂环戊烷-4-羧酸[3′-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-5′-(1-氨基甲酰基-1-甲基乙基)-6，2′-二羟基联苯-3-基甲基]酰胺(440mg；0.691mmol)溶解于1N HCl(5-6mL)中并在室温下搅拌2小时。将反应混合物置于冷冻器中并使其静置3小时。将得到的沉淀物通过过滤收集，用冷的1N HCl水溶液洗涤并在高真空下干燥过夜，得到标题化合物(250mg，57％)，其通过HPLC-UV和质子NMR分析测定为97％纯度。测量值(LCMS)561.3(M+1)⁺，559.4(M-I)^-。C₂₉H₃₂N₆O₆的计算值560.24。

实施例3

2S-{2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酰基氨基}琥珀酰胺的合成

步骤1

向溶解于甲醇(36mL)的2-甲氧基-5-叔丁基氨磺酰基苯基硼酸(4.08g，14.28mmol)溶液中加入2-(3-溴-5-甲酰基-4-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸酯(3.0g，9.50mmol)和甲苯(90mL)。加入碳酸钾溶液(7.14mL，2M，14.28mmol)并将反应混合物用氮气吹扫。加入四(三苯膦)钯(1.10g，0.95mmol)并将反应混合物回流3小时。在冷却之后，将反应混合物用5％柠檬酸溶液分配并将有机相干燥并蒸发。通过柱色谱法纯化(40％EtOAc/己烷)，得到2-{5’-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基)-2-甲基-丙酸甲酯(3.79g，84％)。

步骤2

将2-(5′-叔丁基氨磺酰基-5-甲酰基-6，2′-二甲氧基联苯-3-基)-2-甲基丙酸甲酯(3.79g，7.94mmol)溶解于甲醇(150mL)，加入3，4-二氨基苄脒HCl(1.35g，7.25mmol)和对苯醌(0.78g)并将反应混合物回流过夜。将反应混合物冷却并蒸发到干燥，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-叔丁基氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酸甲酯，将其溶解于三氟乙酸(25mL)并搅拌一小时。将挥发性物质蒸发，得到粗2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酸甲酯。向粗2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酸甲酯加入吡啶-HCl(20g)并将混合物在180℃加热3小时。在冷却之后，将固体溶解于5％MeCN/水中并通过制备性HPLC纯化，并将包含产物的洗脱液冷冻干燥，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2’-二羟基-5’-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酸(3.57g，82％)。

步骤3

将2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-氨磺酰基联苯-3-基]-2-甲基丙酸(250mg，0.458mmol)溶解于DMA(100mL)并向溶液中加入HATU(192mg，0.504mmol)和可力丁(243μL，1.83mmol)并搅拌二小时。向天冬酰胺酸酰胺-HCl(0.154g，0.916mmol)中加入TEA(139μL)。将反应混合物搅拌过夜，调节pH到约3并且将溶剂蒸发。粗产物通过制备性HPLC纯化，将包含产物的级分冷冻干燥，得到标题化合物(228mg，66％)。LCMS，计算值＝622.65，观察值(MH+)＝623.3，(MH-)＝621.2。NMR(400MHz)(DMSO-d₆)δ1.62(s，6H)，2.68(m，1H)，3.10(m，1H)，3.60(m，1H)，4.57(m，4H)，7.08(d，J＝5Hz，1H)，7.18(br.s，2H)，7.35(d，J＝1.5Hz，1H)，7.42(br.s，1H)，7.67(m，2H)，7.76(dd，J＝1，5Hz，1H)，7.88(d，J＝5Hz，1H)，8.18(br.s，1H)，8.21(d，J＝1.5Hz，1H)，9.12，9.43(2s，4H)。

如上所述进行但是用N-甲基-D-葡糖胺代替天冬酰胺酸酰胺-HCl，得到2-[5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5-氨磺酰基联苯基-3-基]-N-甲基-N-(2R，3S，4S，5S，6-五羟基己基)-异丁酰胺，LCMS，计算值＝686.73；观察值(MH+)＝687.5，(MH-)＝685.4。NMR(400MHz)(DMSO-d₆)δ1.60(4s，6H)，2.65(s，3H)，3.20-4.10(m，13H)，7.08(d，J＝5Hz，1H)，7.18(br.s，2H)，7.41(d，J＝1.5Hz，1H)，7.68(m，2H)，7.82(dd，J＝1,5Hz，1H)，8.03(d，J＝5Hz，1H)，8.20(br.s，1H)，8.21(d，J＝1.5Hz，1H)，8.95，9.18(2s，4H)，10.35(s，1H)。

实施例4

2-{5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-5′-[(2S-羟基丙酰基氨基)甲基]联苯-3-基}异丁酰胺二盐酸盐的合成

步骤1

将二异丙基乙基氨(3.5mL，20mmol)加入到4-硝基苯酚(2.78g，20mmol)在二氯甲烷(60mL)中的悬浮液中。将溶液冷却到-20℃并在15分钟内滴加(S)-2-乙酰氧基丙酰氯(3.01g，20mmol)的二氯甲烷(12mL)溶液。将反应混合物在该温度下搅拌3小时，然后倾倒在0.5N HCl水溶液(300mL)中。有机层用二氯甲烷(100mL)稀释，用水、盐水洗涤并用硫酸镁干燥。在蒸发溶剂之后，得到(S)-2-乙酰氧基丙酸4-硝基-苯基酯(5.08g，100％)。

步骤2

将(S)-2-乙酰氧基丙酸4-硝基苯基酯(0.046g，0.18mmol)的二甲基乙酰胺(1mL)溶液加入到2-[5′-氨基甲基-5-(5-甲脒基-1H-苯并咪唑-2-基)-6，2′-二羟基-联苯-3-基]-异丁酰胺二盐酸盐(0.0905g，0.17mmol)和三乙胺(0.05mL，0.357mmol)在二甲基乙酰胺(3mL)中的混合物中。将反应混合物搅拌3小时，通过滴加3ml的浓氨水淬灭反应并静置14小时。将溶剂在高真空下旋转蒸发，并将残余物再溶解于水中。通过RP-HPLC纯化(乙腈梯度)，得到标题化合物(0.08g，78％)，在冷冻干燥之后为浅黄色无定形固体。测量值(LCMS)531.3(M+1)⁺，529.4(M-I)^-。C₂₈H₃₀N₆O₅的计算值530.23。

实施例1

因子VIIa抑制剂的体外试验

将人类因子VIIa(通常以7nM供应)和试验化合物(作为不同浓度存在)在试验介质(包括：NaCl，150mM(pH 7.4)；CaCl₂，5mM；吐温20，0.05％；Dade Innovin组织因子[Dade Behring，Newark，DE，USA]；EDTA，1.5mM；和二甲基亚砜，10％)中的混合物在室温下培养30分钟。然后加入底物[500μM的CH₃SO₂-D-Cha-But-Arg-pNA(得自Centerchem，Norwalk，CT，USA)]引发反应。通过在405nm下用分光光度法跟踪发色底物的水解五分钟。使用通过动力学分析程序(Batch Ki；BioKin，Ltd.，Pullman，WA)从进展曲线计算的初速度测量值测定表观抑制常数(表观Ki)。

通过上述试验测定本发明的化合物表现出对因子VIIa的抑制。

实施例2

因子Xa抑制剂的体外试验

将人类因子Xa(通常以3nM供应，得自Haematologic Technologies，Essex Junction，VT，USA)和试验化合物(不同浓度)在试验介质(包括：Tris，50mM(pH 7.4)；NaCl，50mM；CaCl₂，5mM；吐温20，0.05％；EDTA，1mM，和二甲基亚砜，10％)中的混合物在室温下培养30分钟。然后加入底物[500μM的CH₃CO₂-D-Cha-Gly-Arg-pNA(得自Centerchem，Norwalk，CT，USA)]引发反应。通过在405nm下用分光光度法测定跟踪发色底物的水解五分钟。使用标准数学模型从酶进展曲线计算表观抑制常数(表观Ki)。

通过上述试验测定本发明的化合物表现出对因子Xa的抑制。

实施例3

药代动力学试验

从Charles River购得具有预植入的颈静脉导管(在运输之前为其充满肝素/盐水/PVP封闭)的大鼠。每项研究选择三只大鼠，称重，并通过尾静脉注射给用试验化合物。保留任何剩余的试验化合物并且在-70℃储存，用于随后的分析。在120小时内在给定时间从留置导管收集血样(每次0.25mL)。在每次收集之后立即将导管用生理盐水冲洗并在每次8、24和48小时收集之后充满肝素化盐水。在导管无效的情况中，在异氟烷麻醉下在适当的时间通过后眼窝窦收集血样。

将血样置于0.5mL Microtainer_管(肝素锂)中，温和地摇动并且储存在湿冰上。将样品在冷冻离心机中在2400rpm下离心10分钟。将每个管的血浆样品(0.1mL)转移到0.5mL Unison聚丙烯小瓶(Sun-500210)中并在-70℃储存，用于随后通过LC/MS-MS分析。

实施例4

体外凝固试验......aPTT和PT

根据Hougie，C.Hematology(Williams，W.J.，Beutler，B.，Erslev，A.J.和Lichtman，M.A.，Eds.)，pp.1766-1770(1990)，McGraw-Hill，NewYork中所述的方法进行凝固试验，活化部分凝血活酶时间(aPTT)和前凝血酶时间(PT)。

简而言之，试验使用正常的人枸橼酸钠处理(citrated)血浆进行并且根据生产商的说明书(Medical Laboratory Automation-Pleasantville，NewYork)在37℃下在血凝度测量器(Electra 800)上进行。在即将收集具有抑制剂的样品的凝固时间之前将仪器校准。通过将抑制剂剂量反应曲线拟合于Hill方程的改进形式计算aPTT和PT的双重浓度。

药用组合物实施例

以下是包含本发明的化合物的代表性的药用制剂。

片剂

将以下成分密切混合并压缩为单独的刻痕片。

成分每片剂的量，mg

本发明的化合物 400

玉米淀粉 50

交联羧甲纤维素钠 25

乳糖 120

硬脂酸镁 5

胶囊剂

将以下成分密切混合并装入硬明胶壳胶囊中。

成分每粒胶囊的量，mg

本发明的化合物 200

乳糖(喷雾干燥的) 148

硬脂酸镁 2

悬浮剂

将以下成分混合以形成口服悬浮液。

成分量

本发明的化合物 1g

富马酸 0.5g

氯化钠 2.0g

对羟基苯甲酸甲酯 0.15g

对羟基苯甲酸丙酯 0.05g

砂糖 25.5g

山梨醇(70％溶液) 12.85g

Veegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g

调味剂 0.035mL

着色剂 0.5mg

蒸馏水定量到100mL

注射剂

将以下成分混合以形成注射剂。

成分量

本发明的化合物 1.2g

乙酸钠缓冲溶液 0.4M，2.0mL

HCl(1N)或NaOH(1N) 定量到适当的pH

水(蒸馏的，无菌的) 定量到20mL

将除水之外的所有上述成分混合并在搅拌下加热到60-70℃。然后在剧烈搅拌下加入足够量的60℃的水，以将所述成分乳化，然后加入水，定量到100g。

栓剂

通过将本发明的化合物与Witepsol_H-15(饱和植物脂肪酸的甘油三酯；Riches-Nelson，Inc.，New York)混合制备总重量为2.5g的栓剂，并且其具有以下组成：

本发明的化合物 500mg

Witepsol_H-15 余量

非肠道制剂

本发明的化合物 40mg/mL

羟丙基-β-环糊精 200mg/mL

用1.0N氢氧化钠调节pH到7.4

为了清楚和理解，已经通过说明和实施例相当详细地描述了前述的本发明。对于本领域技术人员来说，显而易见，可在权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解，上述说明是说明性的而非限制性的。因此，本发明的范围不参考上述说明确定，而是参考权利要求以及与这种权利要求要求的同等意义的完整范围而确定。

Claims

1.选自以下化合物(a)-(k)的化合物：

或其可药用盐。

2.药用组合物，其包括可药用的载体和治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。

3.治疗动物中由因子VIIa、IXa、Xa和/或XIa介导的疾病的方法，该方法包括对所述动物给用治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。

4.权利要求3的方法，其中疾病是由因子VIIa介导的。

5.治疗动物中的血栓栓塞性疾病的方法，该方法包括对所述动物给用与独立地选自凝血酶抑制剂、因子IXa抑制剂、因子Xa抑制剂、Aspirin_和Plavix_的其它抗凝血剂组合的治疗有效量的化合物(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)或其可药用盐。