CN1947738A - 番泻叶中番泻总苷的医药新用途及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
番泻叶中番泻总苷的医药新用途及其制备方法是涉及植物中含羧基的蒽醌类和二蒽酮类的医药新用途及其制备方法,确切地说是中药番泻叶中番泻总苷的医药新用途及制备方法。本发明就是提供一种番泻叶中番泻总苷治疗骨质疏松的药物;提供从番泻叶中提取番泻总苷成本低、杂质含量少、并对环境污染小的制备方法。本发明提供的制备番泻总苷的方法包括番泻叶的浸泡和渗漉、回收、干燥的步骤,其主要特点是在浸泡和渗漉步骤之后,在回收、干燥的步骤之前依次增加碱性下大孔吸附树脂柱吸附杂质和有毒物质,其中番泻总苷不被吸附而流出,在酸性下大孔吸附树脂柱吸附番泻总苷并脱盐。
Description
技术领域:
本发明涉及植物中含羧基的蒽醌类和二蒽酮类的医药新用途及其制备方法,确切地说是中药番泻叶中番泻总苷(化学结构上属于含羧基的蒽醌类和二蒽酮类)的医药新用途及制备方法。
背景技术:
番泻叶(Folium sennae)是常用中药之一,为中国药典2000年版一部收载的常用泻下导滞药之一,为豆科植物狭叶番泻叶(Cassia angustifolia Vahl)或尖叶番泻叶(C.acutifolia Delile)的干燥叶[1]。
番泻叶味甘、苦、性寒,有泻热行滞、通便的功能。主要用于热结便秘、积滞腹胀。近些年来发现番泻叶可治疗流行性出血热、急性胰腺炎及中毒性肠麻痹等[2][3]。本品长期以来依靠进口,主要进口国是印度。二十世纪80年代以来,我国在海南、广西等省引种成功,但商品售价仅为进口的1/3~1/2左右[4]。番泻总苷是中药番泻叶中的主要活性成分,但对其活性研究报道较少,主要集中在泻下导滞方面。本课题组对其进行了较全面的药理实验研究,并首次发现番泻总苷具有雌性激素样抗骨质疏松作用。
骨质疏松(osteoporosis)是老年人的常见病、多发病。更年期后的妇女由于体内雌性激素的减少,易患骨质疏松症。随着人口的老龄化,骨质疏松将成为医疗和社会的重大问题[5]。目前可供选择的治疗骨质疏松的药物种类虽然比较多,但疗效欠佳,一些进口药物价格昂贵,实难为大多数患者所接受。本世纪初,一种含有植物雌性激素(phytoestrogen)的蔬菜复合剂因其副作用小在美国和日本成为畅销药物。中老年人80%以上有老年便秘,同时又有骨质疏松。因此,番泻叶中番泻总苷具有极高的应用价值及前景。
番泻总苷具有广泛的医药用途、极高的应用价值及前景。因此包括我国在内的许多国家的专家、学者都对从番泻叶中提取番泻总苷的方法进行了广泛而深入的研究,取得可喜的成就。但归纳起来最常用的方法是将番泻叶的醇提取物或水提取物悬浮于水中,依次用不同极性的溶剂萃取,常用的溶剂有乙酸乙酯和水饱和的正丁醇。番泻总苷多集中于正丁醇层。减压回收正丁醇;浸膏用浓度为95%的乙醇溶解,并使其通过三氧化二铝层析柱[6];收集流出液并减压回收乙醇,制得成品。利用这种方法制取番泻总苷存在的主要问题是:(1)产品成本较高,每公斤成品造价高达2800元人民币;(2)产品中的杂质,特别是有害物质的含量较高,其中重金属含量超过5ppm,农药残留量大于8ppm,超过规定限度,同时还不可避免地有毒性溶剂正丁醇的残留,有效成分Sennoside A和B的含量仅有本发明工艺的制备方法的1/5~1/7。
发明内容:
本发明就是针对上述问题,提供一种番泻叶中番泻总苷治疗骨质疏松的药物;提供从番泻叶中提取番泻总苷成本低、杂质含量少、并对环境污染小的制备方法。
番泻叶中番泻总苷具有雌性激素样抗骨质疏松作用,可从以下三个方面试验得以证明。
番泻叶是我国药典(1995~2005年版)收载的常用中药,其主要成分为番泻苷A、B、C、D和大黄酸苷等成分,统称为番泻总苷(Sennosides)。我们对番泻总苷的抗骨质疏松作用进行了研究:
动物:昆明种雌性小鼠,体重20.0±2.0g。
实验方法:在乙醚麻醉下取出小鼠双侧卵巢,术后5天开始作阴道涂片,每天1次,连续6天。将无动情周期的小鼠随机分组,每组20只。伪去势对照组的小鼠在乙醚麻醉下,于第十二肋骨下缘与脊柱交骨处外侧做两个纵行切口,长约1厘米,不去除卵巢。以灌胃方式给药。在给药过程中每天做小鼠阴道涂片观察动情期出现情况。连续给药49天,于末次给药24小时后眼眶取血,分离血清,测血钙、血磷和降钙素的含量,记录小鼠体重、副性器官子宫重和左侧股骨重,计算脏器系数。结果见表1~3。
(1)番泻总苷(Sennosides)对去势雌性小鼠动情周期的影响,结果见表1
表1.番泻总苷对去势雌性小鼠动情周期的影响
天数 | 去势组 | 模型组 | 番泻总苷(SS) | 己烯雌酚2.00mg/kg | |
3.00mg/kg | 6.00mg/kg | ||||
123456 | 5258 | 6104 | 785 | 497 |
注:每组动物数均为20。
实验结果表明,番泻总苷可使去势小鼠重新出现动情周期,表明番泻总苷具有雌性激素样作用。
(2)番泻总苷对去势雌性小鼠子宫重和左股骨重的影响,结果见表2
表2.番泻总苷对去势雌性小鼠子宫重和左股骨重的影响
组别 | 动物数(n) | 剂量(mg/kg) | 子宫重系数(mg/100g体重) | 左股骨重系数(mg/g体重) |
去势组模型组番泻总苷己烯雌酚 | 1820202020 | 3.006.002.00 | 255.0±15.024.5±10.5##115.5±24.0**143.6±34.0**220.0±45.5** | 2.64±0.411.26±0.44#2.52±0.34*2.56±0.52*2.77±0.48* |
#p<0.05 ##p<0.01与去势组比较;*p<0.05 **p<0.01与模型组比较
实验结果表明,去势模型组子宫系数和左股骨系数与伪去势组间均有显著性差异;己烯雌酚组和番泻总苷高低剂量组子宫系数和左股骨系数与去势模型组之间均有显著性差异。说明番泻总苷有雌性激素样促进子宫增生和使骨质钙化加重的作用。
(3)番泻总苷对去势小鼠血钙、血磷和降钙素含量的影响,结果见表3
表3.番泻总苷对去势小鼠血钙、血磷和降钙素含量的影响
组别 | 动物数(n) | 剂量(mg/kg) | 血钙(mmol/L) | 血磷(mmol/L) | 降钙素(pg/dl) |
去势组模型组番泻总苷己烯雌酚 | 2018202020 | 3.006.002.00 | 2.97±0.223.82±0.22#3.20±0.21*3.16±0.25*3.13±0.24* | 2.73±0.222.25±0.592.08±0.252.84±0.282.64±0.41 | 184.8±50.7139.5±52.8165.3±43.4178.6±47.1188.6±63.4 |
#p<0.05与去势组比较;*p<0.05与模型组比较
以血钙为指标,去势模型组与伪去势组间有显著性差异;番泻总苷高低剂量组与去势模型组间有显著性差异,说明番泻总苷可以降低血钙,使骨质钙化。
以血磷为指标,伪去势组和给药组与去势模型组之间没有显著性差异。
以降钙素为指标,与伪去势组比较,去势模型组小鼠血清降钙素下降,番泻总苷组与去势模型组比较血清降钙素呈上升趋势,但没有显著差异。
以上三个方面的实验结果充分表明从中药番泻叶中制备的番泻总苷具有雌性激素样抗骨质疏松作用。
本发明的番泻叶中番泻总苷的制备方法如下:
本发明提供的制备番泻总苷的方法包括番泻叶的浸泡和渗漉、回收、干燥的步骤(以上为常规工艺),其主要特点是在浸泡和渗漉步骤之后,在回收、干燥的步骤之前依次增加碱性下大孔吸附树脂柱吸附杂质和有毒物质,其中番泻总苷不被吸附而流出,在酸性下大孔吸附树脂柱吸附番泻总苷并脱盐;所述的浸泡和渗漉后制取的液体分别通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱或混合一起后通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,收集流出液,调节至酸性;酸性药液通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的0.1~4倍的蒸馏水冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为10~50%的乙醇或甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
本发明与已有技术相比具有以下优点:(1)产品成本低,每公斤成品为600元人民币左右;(2)成品中的杂质含量低:重金属含量小于5ppm,农药残留量小于10ppb;(3)消除毒性溶剂正丁醇的残留;(4)生产过程对环境几乎无污染。
实施例1
步骤1:番泻叶浸泡和渗漉:
(A)番泻叶与碱水(5%NaHCO3,或pH为8-10的Na2CO3(或NaOH、K2CO3、KOH的水溶液))按重量份数比为1∶6~24,向番泻叶中加入碱水,常温浸泡0.5~2小时,然后,离心,滤渣取液,或渗漉取液;
(B)按所述番泻叶与碱水的重量份数比为1∶6~12向工步(A)滤出的渣中加入碱水,离心,滤渣取液,或渗漉取液;
(C)按所述番泻叶与碱水的重量份数比为1∶6~12向工步(B)滤出的渣中加入碱水,离心,滤渣取液,或渗漉取液。
步骤2:碱性下吸附杂质:
将步骤1制取的液体分别通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱或混合一起后通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,收集流出液,用酸调节至pH1~4;
步骤3:吸附番泻总苷并脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的0.1~4倍的蒸馏水冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为10~50%的乙醇或甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液;
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质干燥后,即可得到番泻叶中番泻总苷成品。
实施例2
步骤1:番泻叶浸泡:
(A)取狭叶番泻叶(Folium sennae)1Kg放入容器内,再向容器中加入5%NaHCO3水溶液8公斤,在随时搅拌下常温浸泡1小时,然后,用离心机离心分离之后,收取滤液;
(B)向工步(A)滤出的渣中加入5%NaHCO3水溶液6公斤,在随时搅拌下常温浸泡40分钟,然后,用离心机离心分离之后,收取滤液;
(C)向工步(B)滤出的渣中加入5%NaHCO3水溶液6公斤,在随时搅拌下常温浸泡30分钟,之后,离心分离,滤渣取液;
步骤2:碱性下吸附杂质:
将上述各工步(A)、(B)、(C)制取的碱性液体分别通过经活化处理后的2公斤的D101型大孔吸附树脂柱,收集流出液约15.5公斤,用10%盐酸调节至pH2.5;
步骤3:酸性下吸附番泻总苷脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的2Kg的D101型大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的1倍的蒸馏水3000ml冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为30%的乙醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质在80℃以下干燥后,即得到番泻叶中番泻总苷成品33.6g。
实施例3
步骤1:番泻叶浸泡:
(A)取尖叶番泻叶(C.acutifolia Delile)的干燥叶1Kg放入渗漉容器内,逐步向容器中加入pH为8.5的碱性水溶液8公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时1公斤左右,收取滤液;
(B)向工步(A)第一次渗漉滤出的渣中加入pH为8.5的碱性水溶液6公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时0.7公斤左右,收取滤液;
(C)向工步(B)第二次渗漉滤出的渣中加入pH为8.5的碱性水溶液6公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时0.5公斤左右,收取滤液;
步骤2:碱性下吸附杂质:
将步骤1制取的碱性液体分别通过经活化处理后的2Kg的AB-8型大孔吸附树脂柱,收集流出液约15公斤,用10%盐酸调节至pH3.0;
步骤3:酸性下吸附番泻总苷脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的2Kg的AB-8型大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的2倍的蒸馏水6000ml冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为40%的甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质在80℃以下干燥后,即得到番泻叶中番泻总苷成品43.6g。
按本实施例方法制取的番泻叶中番泻总苷产品:
1.收率(重量百分比):为4.1~4.5%。
2.按薄层扫描法检测:该产品番泻总苷(以番泻苷A、B计)≥20%。
3.按分光光度法:该产品总蒽醌类,以大黄酸计含量为56-60%。
4.按HPLC法检测:该产品所含番泻苷A和番泻苷B含量之和≥20%
5.成分:番泻苷A、番泻苷B、番泻苷C、番泻苷D、大黄酸、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、山奈酚等。
6.杂质含量:重金属≤5ppm、农药残留量,既“666”、“DDT”、“5氯硝基苯”的残留量均≤10ppb。
参考文献:
[1]中华人民共和国药典2000版一部.285.
[2]肖培根主编.新编中药志(第三卷).509.
[3]姚开炳等.中医杂志,1988,29:535.
[4]商品价格目录(及饮片).中国公司2001年6月编.248.
[5]丁桂芝等.骨质疏松症的防治及其研究方向.临床内科杂志,1991,8(2):44-45.
[6]Atzorn R,et al.Planta Med.1981,41:1-8.
Claims (5)
1、番泻叶中番泻总苷的药物,其特征在于番泻叶中番泻总苷是治疗骨质疏松的药物。
2、番泻叶中番泻总苷的药物制备方法,包括番泻叶的浸泡和渗漉、回收、干燥的步骤,其特征在于在浸泡和渗漉步骤之后,在回收、干燥的步骤之前依次增加碱性下大孔吸附树脂柱吸附杂质和有毒物质,其中番泻总苷不被吸附而流出,在酸性下大孔吸附树脂柱吸附番泻总苷并脱盐;所述的浸泡和渗漉后制取的液体分别通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱或混合一起后通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,收集流出液,调节至酸性;酸性药液通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的0.1~4倍的蒸馏水冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为10~50%的乙醇或甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
3、根据权利要求2所述的番泻叶中番泻总苷的药物制备方法,其特征在于
步骤1:番泻叶浸泡和渗漉:
(A)番泻叶与碱水按重量份数比为1∶6~24,向番泻叶中加入碱水,常温浸泡0.5~2小时,然后,离心,滤渣取液,或渗漉取液;
(B)按所述番泻叶与碱水的重量份数比为1∶6~12向工步(A)滤出的渣中加入碱水,离心,滤渣取液,或渗漉取液;
(C)按所述番泻叶与碱水的重量份数比为1∶6~12向工步(B)滤出的渣中加入碱水,离心,滤渣取液,或渗漉取液。
步骤2:碱性下吸附杂质:
将步骤1制取的液体分别通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱或混合一起后通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,收集流出液,用酸调节至pH1~4;
步骤3:吸附番泻总苷并脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的0.1~4倍的蒸馏水冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为10~50%的乙醇或甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液;
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质干燥后,即可得到番泻叶中番泻总苷成品。
4、根据权利要求2所述的番泻叶中番泻总苷的药物制备方法,其特征在于
步骤1:番泻叶浸泡:
(A)取狭叶番泻叶(Folium sennae)1Kg放入容器内,再向容器中加入5%NaHCO3水溶液8公斤,在随时搅拌下常温浸泡1小时,然后,用离心机离心分离之后,收取滤液;
(B)向工步(A)滤出的渣中加入5%NaHCO3水溶液6公斤,在随时搅拌下常温浸泡40分钟,然后,用离心机离心分离之后,收取滤液;
(C)向工步(B)滤出的渣中加入5%NaHCO3水溶液6公斤,在随时搅拌下常温浸泡30分钟,之后,离心分离,滤渣取液;
步骤2:碱性下吸附杂质:
将上述各工步(A)、(B)、(C)制取的碱性液体分别通过经活化处理后的2公斤的D101型大孔吸附树脂柱,收集流出液约15.5公斤,用10%盐酸调节至pH2.5;
步骤3:酸性下吸附番泻总苷脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的2Kg的D101型大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的1倍的蒸馏水3000ml冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为30%的乙醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质在80℃以下干燥后,即得到番泻叶中番泻总苷成品33.6g。
5、根据权利要求2所述的番泻叶中番泻总苷的医药制备方法,其特征在于
步骤1:番泻叶浸泡:
(A)取尖叶番泻叶(C.acutifolia Delile)的干燥叶1Kg放入渗漉容器内,逐步向容器中加入pH为8.5的碱性水溶液8公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时1公斤左右,收取滤液;
(B)向工步(A)第一次渗漉滤出的渣中加入pH为8.5的碱性水溶液6公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时0.7公斤左右,收取滤液;
(C)向工步(B)第二次渗漉滤出的渣中加入pH为8.5的碱性水溶液6公斤,按渗漉方法,调控流速为每小时0.5公斤左右,收取滤液;
步骤2:碱性下吸附杂质:
将步骤1制取的碱性液体分别通过经活化处理后的2Kg的AB-8型大孔吸附树脂柱,收集流出液约15公斤,用10%盐酸调节至pH3.0;
步骤3:酸性下吸附番泻总苷脱盐:
将步骤2的酸性药液通过经活化处理后的2Kg的AB-8型大孔吸附树脂柱,使液体中的番泻总苷被大孔吸附树脂柱吸附,弃去流出液,再按大孔吸附树脂柱保留体积的2倍的蒸馏水6000ml冲洗大孔吸附树脂柱,水洗液弃去,继用浓度为40%的甲醇清洗大孔吸附树脂柱,使吸附于其上的番泻总苷被完全洗脱,并收集洗脱液。
步骤4:回收、干燥:
回收步骤3制得的洗脱液中的乙醇,余留物质在80℃以下干燥后,即得到番泻叶中番泻总苷成品43.6g。
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