CN1939445B - 一种枇杷叶水提取物的制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种枇杷叶水提取物的制备方法与用途。该制备方法的特征在于：以枇杷叶为原料，以水为溶剂，提取以枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物；该枇杷叶水提取物具有制备化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂的用途。本发明不仅构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且提取中医临床常用中药材枇杷叶的药效成分制成国际通行的中药提取物，具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带、能适应和满足现代中医临床用药需求的特点，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。

Description

一种枇杷叶水提取物的制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种从植物中提取药用活性成分的绿色化工制备方法，更具体涉及一种枇杷叶水提取物的制备方法与用途。

背景技术

中国是世界上最主要的枇杷生产国，枇杷栽培面积和产量约占全球的2/3以上，主要分布在长江以南各省，其主产区为福建莆田、浙江塘栖和江苏洞庭山。目前，国内主要的高产枇杷品种有解放钟、早钟6号、长红3号和太城4号等。

福建莆田的枇杷为“三大兴化名果”，为福建省重要的“名、特、优”水果。全市现有枇杷种植面积16万亩，约占全球枇杷种植面积的1/6、全国的1/4和福建省的1/2。福建省莆田市常太镇的枇杷种植面积达7万亩，被农业部评为“亚热带作物名优基地”，并被授予“中国枇杷第一乡”的称号，生产的枇杷被授予“绿色食品”、“福建省名牌农产品”和“原产地标记产品”等称号。

枇杷叶系蔷薇科植物枇杷[Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.]的叶子，性微寒，味苦辛，止咳平喘，清肺和胃，降气化痰，收载于历版中国药典[梁敬钰等，海峡药学，2006，18(1)：6-11]。

传统中医临床常以蜜炙枇杷叶或枇杷叶与其它中药配伍成复方药入药，取得了一定的临床疗效。中医验方清燥救肺汤、辛润止咳汤等就采用枇杷叶与半夏、细辛等其它中药配伍用于慢支痰黄、粘稠等症状的治疗；由枇杷叶与党参、桑叶、半夏等药制成的气管炎片则用于急慢性支气管炎咳嗽、哮喘、多痰症状的缓解[刘传安等，安徽农业科学，2005，33(11)：2117-2118]。

鉴于枇杷叶制剂在临床应用中具有高效低毒的特点，对其活性成分的分离、药理药效学评价等研究已引起人们的广泛关注。现代药理药效学研究表明，枇杷叶含有皂苷、苦杏仁苷、黄酮、鞣质、维生素等化学成分。枇杷叶水提取物具有广泛的生理活性，有望开发成高效低毒的治疗呼吸道炎症性疾病的新型中成药或天然保健食品。

枇杷叶皂苷主要以齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜类为主，枇杷叶黄酮以山奈酚、槲皮素为苷元的黄酮苷居多，其糖苷部分由1～3个葡萄糖、半乳糖等单糖组成。通常，枇杷叶皂苷、黄酮苷易溶于热水、乙醇等极性溶剂。枇杷叶苦杏仁苷则是由苯甲醛、氢氰酸和葡萄糖组成的氰苷，分子式为C₂₀H₂₇NO₁₁，在沸水中溶解度很大，可溶于乙醇、水等极性溶剂中，在25℃水中的溶解度约为8％，与沸乙醇中的溶解度相当，但在冷乙醇中的溶解度很小，几乎不溶于乙醚、正己烷等脂溶性有机溶剂。正因如此，中医临床用药时，常采用水提法提取枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷。

枇杷全身皆宝，枇杷叶、花、果、核等部位含有丰富的挥发油、苦杏仁苷、皂苷、黄酮、三萜酸、水溶性多糖和有机酸等成分，但目前主要是以鲜果供应，尚未进行枇杷的深度开发和综合利用。在中国，枇杷叶资源丰富，价廉易得，药效明确，民间广泛用于食物和药物中，为不可多得的大宗天然药用植物资源。通常，在不影响枇杷果生产的前提下，福建莆田全市可年采收枇杷叶干品5万吨。但在枇杷产地，大量枇杷叶被作为废弃物而未被合理利用，造成资源的极大浪费，也带来一定程度的环境污染。研究以枇杷叶总皂苷、总黄酮和苦杏仁苷为主要药用成分的提取物的制备方法与用途，对于枇杷叶的综合利用和系列产品开发具有一定的指导意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种枇杷叶水提取物的制备方法，该制备方法不仅工艺简单、提取效率高、生产成本低，而且提取的枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷的收率高，能适应和满足现代中医临床用药需求。

本发明的目的之二在于提取中医临床常用中药材枇杷叶的主要药用成分制成国际通行的中药提取物，具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带的特点，能克服传统中医临床以复方药入药形式所存在的药效成分不明确、疗效波动性大、产品质量控制难的不足。

本发明的目的之三在于提供一种将制备的枇杷叶水提取物用于制备临床上具有止咳、化痰、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂的用途，所述的口服药剂可以是胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。

本发明枇杷叶水提取物的制备方法的特征在于：以枇杷叶为原料，以水为溶剂，提取以枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。

本发明制备方法的主要优点在于：采用单味药入药形式，充分考虑了传统中医临床用药习惯，利用了枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷等活性成分与蛋白质、多糖、蜡质、酯类、挥发油、树胶等杂质成分在热水溶液中溶解度的明显差异，达到了枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷等药用活性成分与杂质成分的高效分离，能克服传统中医临床以复方药入药形式的不足。

本发明利用枇杷叶水提取物制备口服药剂的用途具有以下优点：提取枇杷叶主要药用活性成分制成国际通行的中药提取物，不仅疗效高、毒副作用小、使用方便，而且易于保存和携带、能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策。

具体实施方式

本发明实施例的制备方法为：以枇杷叶为原料，采用10～30倍枇杷叶干重(W/W)的水，于50～90℃条件下提取1～3次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。

上述的枇杷叶水提取物用于制备临床上具有化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂的用途，所述的口服药剂可以是：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。

本发明各制备物的理化参数测定方法如下：

(1)枇杷叶黄酮含量的测定：采用高效液相色谱法，以槲皮素为对照。色谱条件：色谱柱选用Waters Nova-Pak C₁₈柱(Φ3.9×15mm，4μm)，C₁₈预柱(3.9mm×15mm)，紫外检测器，流动相为甲醇：0.2％磷酸水溶液(45∶55)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长365nm，进样量20μL。

样品的测定：取待测液4mL(或待测物粉末0.1g，溶于4mL溶剂中)，加甲醇6mL及12mol/L盐酸1mL，摇匀后置90℃水浴回流水解1h。而后将水解液转入50mL容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，作为HPLC待测液。HPLC测定过程中采用外标法定量，以槲皮素为对照，计算水解后各苷元的含量，统一用因子2.51计算枇杷叶黄酮含量。

(2)枇杷叶苦杏仁苷含量的测定：采用高效液相色谱法，以苦杏仁苷为对照。色谱条件：色谱柱选用Waters Nova-Pak C₁₈柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C₁₈(3.9mm×15mm)，紫外检测器，流动相为甲醇：0.01％磷酸水溶液(20∶80)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长215nm，进样量20μL。

(3)枇杷叶皂苷含量的测定：采用香兰素-浓硫酸比色法，以齐墩果酸为对照。取已经稀释适当倍数的样品液1ml，加入0.5ml香兰素，再加2.5ml浓硫酸，反应10min后，于580nm波长下测定其吸光度值，以水作为空白。

(4)枇杷叶总多糖采用苯酚-硫酸法测定，以葡萄糖或D-半乳糖为对照。枇杷叶总蛋白质采用FoLin-酚法测定，以小牛血清白蛋白为对照。含水量采用快速水分测定仪测定。

经测定，实验所用的莆田产枇杷叶(含水量4.2％)中皂苷、黄酮和苦杏仁苷等主要药用活性成分的含量分别为56.9～61.2g/kg、10.8～13.5g/kg和1.5～2.8g/kg。

本发明口服药剂制备方法如下：

(1)喷雾干燥条件为：进料液浓度10～20波美度(60℃)，PG-5型喷雾干燥机进口温度160～250℃，出口温度60～110℃，离心转头工作压力1.6～3.0kgf/cm²。

(2)胶囊剂制备：按照常规的制剂方法，选择1号硬胶囊，每粒内容物装填量约0.30g，于NJP-1000B型全自动硬胶囊充填机上进行药粉充填，于JPB-25IIB型平板式自动泡罩包装机上进行铝箔泡罩包装，可制成临床适用的枇杷叶提取物口服胶囊剂。

(3)滴丸剂制备：按照常规的制剂方法，调整TZDW-1型通用滴丸机的温度控制系统，使滴头温度保持在50～85℃，液体石蜡等冷却剂的温度保持在-4～40℃；取枇杷叶提取物及其1～9倍重量的甘油明胶，置于加热器中，在搅拌条件下加热制成混悬液，将其置于滴丸机的滴头罐内，通过滴头滴入冷却剂中，由滴丸机出口将收缩成型的滴丸取出，去掉表面的冷却剂，干燥成枇杷叶提取物口服滴丸剂。

(4)颗粒剂制备：按照常规的制剂方法，于SHK-220型高效湿法混合制粒机上造粒，于JXD-30A型颗粒自动包装机上进行包装，可制成临床适用的枇杷叶提取物口服颗粒剂。

本发明制备方法的实施例陈述如下：

实施例1

以福建省莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将3.6kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用枇杷叶粉末10倍重量(W/W)的水，于78℃提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为46.0％，枇杷叶黄酮的提取率为76.0％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为86.2％。

实施例2

将20～30目枇杷叶粉末1.8kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末30倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取2次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为43.6％，枇杷叶黄酮的提取率为72.0％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为82.5％。

实施例3

将20～30目枇杷叶粉末2.8kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末20倍重量(W/W)的水，于90℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为41.7％，枇杷叶黄酮的提取率为71.4％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为80.8％。

实施例4

以福建省莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将1.7kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用枇杷叶粉末30倍重量(W/W)的水，于90℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为41.4％，枇杷叶黄酮的提取率为70.5％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为80.6％。

实施例5

将20～30目枇杷叶粉末2.1kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末25倍重量(W/W)的水，于85℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为45.1％，枇杷叶黄酮的提取率为73.7％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为81.0％。

实施例6

将20～30目枇杷叶粉末3.5kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末10倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为46.6％，枇杷叶黄酮的提取率为74.2％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为84.2％。

实施例7

以福建省莆田产枇杷叶为原料，将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷叶粉末，将1.9kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用枇杷叶粉末28倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为48.1％，枇杷叶黄酮的提取率为75.2％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为83.0％。

实施例8

将20～30目枇杷叶粉末3.6kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末10倍重量(W/W)的水，于90℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为43.3％，枇杷叶黄酮的提取率为71.1％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为83.3％。

实施例9

将20～30目枇杷叶粉末1.8kg放入提取罐中，用枇杷叶粉末30倍重量(W/W)的水，于65℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。经测定，制备的枇杷叶水提取物中，枇杷叶皂苷的提取率为40.2％，枇杷叶黄酮的提取率为74.6％，枇杷叶苦杏仁苷的提取率为80.9％。

关于本发明枇杷叶提取物用途的说明

将前述实施例1制备的枇杷叶水提取物进行喷雾干燥，然后制成具有化痰、止咳、平喘、消炎功能的口服胶囊。

化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学评价实验说明如下。

1材料

清洁级雄性小鼠(体重22±2g)和基础饲料，购自福建医科大学动物中心。数据用SPSS软件进行，采用Independent-Sample T Test方法对各组数据进行均值、标准误计算以及显著性检验。

2方法

(1)止咳实验

采用浓氨水喷雾引咳法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给可待因溶液(0.125g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，灌胃给药1h后，将小鼠放入实验装置内，用超声波医用雾化器喷入浓氨水溶液的雾化气体，喷雾40s，记录5min内每只小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数，组间比较t检验。

(2)祛痰实验

采用腹腔注射酚红祛痰法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给氯化铵溶液(5.0g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，灌胃给药1h后，0.6ml/只腹腔注射0.25％酚红溶液，30min后拉颈椎处死小鼠，分离气管，插入7号针头，5％碳酸氢钠冲洗3次，每次0.5mL，合并冲洗液，以酚红标准管比色，组间比较t检验，计算增加率。

(3)平喘实验

采用组胺喷雾致喘法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给氨茶碱溶液(0.5g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，灌胃给药1h后，将小鼠放入实验装置内，用超声波医用雾化器喷入2％氯化乙酰胆碱和0.1％磷酸组胺等量混合溶液的雾化气体，喷雾15s，记录6min内每只小鼠的自喷雾开始至动物发生抽搐、翻滚反应的潜伏期，组间比较t检验，计算延长率。

(4)抗炎实验

采用二甲苯致肿法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。对照组给生理盐水，阳性对照组给氢化可的松溶液(0.375g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，各组每日灌胃给药1次，连续3次，于末次给药1h后，分别以二甲苯棉球接触小鼠右耳5s，15min后拉颈椎处死小鼠。以直径8mm打孔器将小鼠双耳同部位切下，测定左右耳重量差，组间比较t检验，计算抑肿率。

3化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学实验结果

枇杷叶水提取物的化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学实验结果分别示于表1～表4。从结果可见，所制备的枇杷叶水提取物能明显延长小鼠氨水致咳潜伏期和减少小鼠的咳嗽次数，能显著促进酚红排泄量，能延长动物发生抽搐、翻滚反应的潜伏期，具有一定的抑制二甲苯所致耳肿胀的能力。

研究结果表明，本发明制备的枇杷叶提取物具有明显的止咳、化痰作用和一定的平喘、消炎功能，有望进一步开发成高效低毒的治疗呼吸道炎症性疾病的新型中成药或天然保健食品。

表1枇杷叶水提取物止咳动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10

与生理盐水阴性对照组比较^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001。

表2枇杷叶水提取物化痰动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10

与生理盐水阴性对照组比较^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001。

表3枇杷叶水提取物平喘动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10

与生理盐水阴性对照组比较^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001。

表4枇杷叶水提取物消炎动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10

与生理盐水阴性对照组比较^*：P＜0.05；^**：P＜0.01；^***：P＜0.001。

以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。

本发明不仅构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且提取中医临床常用中药材枇杷叶的药效成分制成国际通行的中药提取物，具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带、能适应和满足现代中医临床用药需求的特点，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。

Claims (3)

1.一种枇杷叶水提取物的制备方法，其特征在于：以枇杷叶为原料，以水为溶剂，提取以枇杷叶皂苷、黄酮和苦杏仁苷为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物：以枇杷叶为原料，采用10～30倍枇杷叶干重(W/W)的水，于50～90℃条件下提取1～3次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷叶水提取物。

2.一种如权利要求1所述的枇杷叶水提取物用于制备具有化痰、止咳、平喘或消炎作用的口服药剂的用途。

3.根据权利要求2所述的枇杷叶水提取物用于制备具有化痰、止咳、平喘或消炎作用的口服药剂的用途，其特征在于：所述的口服药剂为：胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、微囊剂、散剂或丸剂。