CN1903252B - 一种治疗心血管疾病的中药组合物的指纹图谱分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药组合物技术领域，具体为一种治疗心血管疾病的中药组合物及其指纹图谱分析方法。该中药组合物由人参、蟾酥、牛黄、肉桂、麝香、冰片、苏合香七味药材或者七味药材的提取物组成。这种中药组合物的非挥发性成分和挥发性成分的指纹图谱具有一定数量的特征峰，各特征峰的相对保留时间和相对峰面积符合一定的比例。本发明对于发展我国传统医药，促进人类健康具有十分重大的意义。

Description

一种治疗心血管疾病的中药组合物的指纹图谱分析方法
技术领域
本发明属于中药组合物技术领域，具体涉及一种治疗心血管疾病的中药组合物及其指纹图谱分析方法。
背景技术
心血管疾病是严重威胁人类健康和生命安全的重大疾病之一，我国13亿人口中，心血管疾病患者已经超过4000万，而冠心病已成为我国三大致死病因之一，所以进行治疗药物的研究非常必要，也是国内外研究的热点。目前市场上抗心血管疾病的药物中，进口药物占据绝大部分市场份额，我们自主研发的拥有自主知识产权的药物并不多。本发明基于传统中医理论，以人参、蟾酥、牛黄、肉桂、麝香、冰片、苏合香组成的中药组合物，具有芳香温通，益气强心的功效，对心绞痛、心肌缺血、心肌梗塞具有显著疗效。
指纹图谱技术是国际上得到公认的一种中药分析方法。指纹图谱技术从整体上表征中药的化学成分和质量特征。对于组成和工艺一定的中药，其指纹图谱中特征指纹峰的保留时间和峰面积也是一定的；因此，指纹图谱上的指纹峰，及其保留时间和峰面积的相对值也反应了该中药组成和工艺的变化情况。
本发明提出了一种治疗心血管疾病的中药组合物及其指纹图谱分析方法，并用指纹图谱分析结果对该中药组合物进行了描述。本发明对于发展我国传统医药，促进人类健康具有十分重大的意义。
发明内容
本发明的目的在于提出一种治疗心血管疾病的中药组合物的指纹图谱分析方法。
本发明所涉及的治疗心血管疾病的中药组合物由人参、蟾酥、牛黄、肉桂、麝香、冰片和苏合香共七种中药混合制成，其中各药材可以直接使用，可以使用药材的提取物。本发明所涉及的治疗心血管疾病的中药组合物，其中包含非挥发性成分和挥发性成分两大类。根据两类成分的不同特点，药物提取后，结合使用高效液相色谱和气相色谱两种仪器分析方法，分别得到非挥发性成分的指纹图谱和挥发性成分的指纹图谱。其中高效液相色谱分析使用蒸发光散射检测器、质谱检测器、电雾式检测器、紫外检测器中的一种或多种，气相色谱分析使用火焰离子化检测器、质谱检测器、电子俘获检测器中的一种或多种。
本发明针对中药中的非挥发性成分和易挥发性成分，用两种不同方法获取各自指纹图谱，即采用高效液相色谱和气相色谱法分别获取非挥发性成分和易挥发性成分的指纹图
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把所述中药组合物研细，用乙醇和水的混合溶剂提取，提取方法用加热回流或超声方法，提取物经离心、过滤后用高效液相色谱分析，所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％～0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度，有机相所占比例逐步升高；检测器使用蒸发光散射检测器或者质谱检测器。
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把所述中药组合物研细，用丙酮、乙酸乙酯、乙醚中的任意一种溶剂提取，提取方法使用加热回流或超声，提取物经离心、过滤、干燥后，用气相色谱法分析；所使用色谱柱为毛细管柱；进样口温度至少为180℃；炉温初始温度设定为50～120℃，程序升温方式，最高温度升至进样口温度以上；检测器使用火焰离子化检测器或者质谱检测器。
进一步的具体步骤是：
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把所述中药组合物研细，用乙醇和水的混合溶剂提取，提取方法用加热回流或超声方法，提取物经离心、过滤后用高效液相色谱分析，所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％-0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至少60分钟；检测器使用蒸发光散射检测器。
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把0.5％研细，用丙酮超声提取，提取物经离心、过滤、干燥后，用气相色谱法分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃，炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度至少6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持至少10分钟；检测器使用火焰离子化检测器。
更进一步的具体步骤是：
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把所述中药组合物研细，准确称量，用50％乙醇提取，药物与加入的50％乙醇的重量比为1∶5，超声提取至少15分钟，一共提取两次；然后离心、过滤，采用高效液相色谱分析；所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％-0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至少60分钟；检测器使用蒸发光散射检测器。
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把所述中药组合物研细，准确称量，加入丙酮，药物与加入丙酮的重量比为1∶10，超声提取至少15分钟，一共提取两次；然后离心、过滤；加入无水硫酸钠干燥，采用气相色谱分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃，炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度至少6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持10分钟；检测器使用火焰离子化检测器。
本发明所涉及的一种治疗心血管疾病的中药组合物，用上述指纹图谱方法进行分析，各得到了16个共有峰，这些共有峰的峰面积和保留时间的相对值代表了该中药组合物特定的配比和工艺。分别选取胆酸和麝香酮成分所对应的色谱峰为参照，计算所得非挥发性成分指纹图谱和易挥发性成分指纹图谱中所有共有峰的相对保留时间和相对峰面积。该心血管疾病的中药组合物全部共有峰的相对保留时间与相对峰面积应该满足以下4种情况中的任意一种：
(1)非挥发性成分指纹图谱各共有峰相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8(胆酸)
  相对保留时间   0.30～0.50   0.50～0.70   0.60～0.8   0.65～0.85   0.65～0.85   0.70～0.90   0.75～1.0   1.00
  相对峰面积   0.2～2   0.4～3   0.1～1.5   0.1～1.5   0.1～1.5   0.05～1.0   0.05～1.0   1.00
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.00～1.20   1.05～1.25   1.05～1.50   1.30～1.50   1.30～1.50   1.60～1.80   1.70～2.00   1.82～1.95
  相对峰面积   0.1～1.5   0.08～1.0   0.05～1.0   0.02～0.8   0.05～1.0   0.08～1.0   0.1～1.5   0.05～1.5
易挥发性成分指纹图谱各共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6(麝香酮)   7   8
  相对保留时间   0.40～0.65   0.40～0.70   0.50～0.75   0.50～0.85   0.80～1.10   1.00   1.00～1.30   1.00～1.30
  相对峰面积   10～120   20～200   0.3～4   0.3～4   1～12   1.00   0.2～2   0.6～8
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.10～1.40   1.10～1.45   1.20～1.50   1.20～1.50   1.25～1.55   1.30～1.60   1.30～1.65   1.30～1.70
  相对峰面积   0.1～5   0.4～5   0.4～5   1～10   0.3～10   0.3～10   0.2～8   0.3～10
(2)非挥发性成分指纹图谱各共有峰相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8(胆酸)
  相对保留时间   0.36～0.44   0.61～0.69   0.64～0.72   0.66～0.74   0.68～0.76   0.73～0.81   0.75～0.83   1.00
  相对峰面积   0.2～1   0.4～2   0.1～0.8   0.1～0.7   0.1～0.6   0.05～0.4   0.05～0.4   1.00
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.02～1.10   1.08～1.17   1.10～1.18   1.35～1.44   1.38～1.46   1.65～1.75   1.76～1.85   1.86～1.90
  相对峰面积   0.1～0.7   0.08～0.5   0.05～0.4   0.02～0.2   0.05～0.4   0.08～0.5   0.1～0.8   0.05～0.5
易挥发性成分指纹图谱各共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6(麝香酮)   7   8
  相对保留时间   0.48～0.58   0.52～0.62   0.56～0.64   0.62～0.72   0.90～1.02   1.00   1.02～1.11   1.10～1.18
  相对峰面积   10～70   20～150   0.3～1.5   0.3～2   1～6   1.00   0.2～1   0.6～4
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.14～1.22   1.26～1.36   1.30～1.38   1.32～1.40   1.34～1.42   1.38～1.46   1.40～1.50   1.42～1.52
  相对峰面积   0.1～2   0.4～3   0.4～3   1～5   0.3～3   0.3～3   0.2～2   0.3～3
(3)非挥发性成分指纹图谱各共有峰相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8(胆酸)
  相对保留时间   0.38～0.42   0.63～0.67   0.66～0.70   0.68～0.72   0.70～0.74   0.75～0.79   0.77～0.81   1.00
  相对峰面积   0.4～1   0.8～2   0.3～0.8   0.3～0.7   0.3～0.6   0.1～0.4   0.1～0.4   1.00
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.04～1.08   1.11～1.15   1.12～1.16   1.37～1.41   1.40～1.44   1.68～1.72   1.79～1.83   1.86～1.90
  相对峰面积   0.3～0.7   0.2～0.5   0.1～0.4   0.07～0.2   0.15～0.4   0.2～0.5   0.4～0.8   0.15～0.5
易挥发性成分指纹图谱各共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6(麝香酮)   7   8
  相对保留时间   0.51～0.55   0.54～0.58   0.58～0.62   0.66～0.70   0.93～0.97   1.00   1.04～1.08   1.12～1.16
  相对峰面积   30～70   80～150   0.8～1.5   0.9～2   3.5～6   1.00   0.4～1   1.8～4
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.16～1.20   1.29～1.33   1.32～1.36   1.34～1.38   1.36～1.40   1.40～1.44   1.43～1.47   1.45～1.49
  相对峰面积   0.3～2   1.2～3   1.4～3   2.8～5   1.0～3   1.0～3   0.5～2   0.8～3
(4)非挥发性成分指纹图谱各共有峰相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8(胆酸)
  相对保留时间   0.39～0.41   0.64～0.66   0.67～0.69   0.69～0.71   0.71～0.73   0.76～0.78   0.78～0.80   1.00
  相对峰面积   0.4～0.7   0.8～1.2   0.3～0.6   0.3～0.5   0.3～0.5   0.1～0.3   0.1～0.3   1.00
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.05～1.07   1.12～1.14   1.13～1.15   1.38～1.40   1.41～1.43   1.69～1.71   1.80～1.82   1.87～1.89
  相对峰面积   0.3～0.6   0.2～0.4   0.1～0.3   0.07～0.15   0.15～0.3   0.2～0.4   0.4～0.6   0.15～0.3
易挥发性成分指纹图谱各共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6(麝香酮)   7   8
  相对保留时间   0.52～0.54   0.55～0.57   0.59～0.61   0.67～0.69   0.94～0.96   1.00   1.05～1.07   1.13～1.15
  相对峰面积   30～50   80～120   0.8～1.0   0.9～1.2   3.5～4.2   1.00   0.4～0.6   1.8～2.5
  共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16
  相对保留时间   1.17～1.19   1.30～1.32   1.33～1.35   1.35～1.37   1.37～1.39   1.41～1.43   1.44～1.46   1.46～1.48
  相对峰面积   0.3～0.8   1.2～2.0   1.4～2.0   2.8～3.5   1.0～1.6   1.0～1.5   0.5～1.0   0.8～1.4
附图说明
图1为非挥发性成分指标图谱。
图2为挥发性成成指标图谱。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明。
实施例1：中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分的提取
非挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入50％乙醇10mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，并通过0.45μm的滤膜过滤。
挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入丙酮10mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，去上清液，加入无水硫酸钠1.0克干燥24小时；
实施例2：中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分的提取
非挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入50％乙醇2mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，并通过0.45μm的滤膜过滤。
挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入丙酮2mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，去上清液，加入无水硫酸钠0.2克干燥24小时；
实施例3：中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分的提取
非挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入50％乙醇20mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，并通过0.45μm的滤膜过滤。
挥发性成分提取：把该中药组合物研细，准确称量2.00克，置于锥形瓶中，加入丙酮20mL，超声提取15分钟，一共提取两次，用10000RPM的速度离心，去上清液，加入无水硫酸钠2.0克干燥24小时；
实施例4：中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分的指纹图谱分析
非挥发性成分指纹图谱：取实施例1所得非挥发性成分，使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；梯度洗脱，洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至60分钟；柱温25℃；进样量10μl；检测器为蒸发光散射检测器。所得指纹图谱如附图1所示，图中包含16个特征峰。
挥发性成分指纹图谱：取实施例1所得挥发性成分，采用气相色谱和离子化火焰检测器进行分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃，炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持10分钟；进样量1μl；分流比1∶1；所得指纹图谱如附图2所示，图中包含16个特征峰。
实施例5：中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分的指纹图谱分析
非挥发性成分指纹图谱：取实施例2所得非挥发性成分，使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％甲酸的水溶液，有机相为乙腈：梯度洗脱，洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至60分钟；柱温25℃；进样量10μl；检测器为蒸发光散射检测器.所得指纹图谱包含16个特征峰.
挥发性成分指纹图谱：取实施例2所得挥发性成分，采用气相色谱和离子化火焰检测器进行分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃，炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持10分钟；进样量1μl；分流比1∶1；所得指纹图谱包含16个特征峰。
实施例6：不同批次中药组合物中非挥发性成分和挥发性成分指纹图谱的特征峰分析
取本发明所涉及的3个批次中药组合物，按下表所示提取方法和指纹图谱分析方法分别得到非挥发性成分指纹图谱和挥发性成分指纹图谱：
  批次编号   提取方法   指纹图谱方法
  1   实施例1   实施例5
  2   实施例2   实施例4
  3   实施例3   实施例4
非挥发性成分指纹图谱如附图1。附图1中确定了16个共有峰。以胆酸所对应色谱峰(8号峰)为参照，计算得到各指纹图谱特征峰相对值如附表1。
易挥发性成分指纹图谱如附图2。附图2中确定了16个共有峰。以麝香酮所对应色谱峰(6号峰)为参照，计算得到各指纹图谱特征峰相对值如附表2。
表1   3批中药组合物中非挥发性成分指纹图谱的特征峰分析
Figure G2006100297070D00071
表2   3批中药组合物中易挥发性成分指纹图谱的特征峰分析
Figure G2006100297070D00072

Claims (6)

1.一种中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于：针对中药组合物中的非挥发性成分和易挥发性成分，用两种不同方法获取各自指纹图谱，具体步骤如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，用乙醇和水的混合溶剂提取，提取方法用加热回流或超声方法，提取物经离心、过滤后用高效液相色谱分析，所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％～0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度，有机相所占比例逐步升高：前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至少60分钟；检测器使用蒸发光散射检测器或者质谱检测器；
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，用丙酮、乙酸乙酯、乙醚中的任意一种溶剂提取，提取方法使用加热回流或超声，提取物经离心、过滤、干燥后，用气相色谱法分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃；炉温初始温度设定为65℃，分析过程中，以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度至少6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持至少10分钟；检测器使用火焰离子化检测器或者质谱检测器；
这里，所述的中药组合物由人参、蟾酥、牛黄、肉桂、麝香、冰片和苏合香7种中药混合组成；由上述步骤得到的该中药组合物的非挥发性成分指纹图谱和易挥发性成分指纹图谱如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的胆酸所对应的编号为8的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.30～0.50   0.50～0.70   0.60～0.8   0.65～0.85   0.65～0.85   0.70～0.90   0.75～1.0   1.00   相对峰面积   0.2～2   0.4～3   0.1～1.5   0.1～1.5   0.1～1.5   0.05～1.0   0.05～1.0   1.00   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.00～1.20   1.05～1.25   1.05～1.50   1.30～1.50   1.30～1.50   1.60～1.80   1.70～2.00   182～1.95   相对峰面积   0.1～1.5   0.08～1.0   0.05～1.0   0.02～0.8   0.05～10   0.08～1.0   0.1～1.5   0.05～1.5
(2)易挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的麝香酮所对应的编号为6的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.40～0.65   0.40～0.70   0.50～0.75   0.50～0.85   0.80～1.10   1.00   1.00～1.30   1.00～1.30   相对峰面积   10～120   20～200   0.3～4   0.3～4   1～12   1.00   0.2～2   0.6～8   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.10～1.40   1.10～1.45   1.20～1.50   1.20～1.50   1.25～1.55   1.30～1.60   1.30～1.65   1.30～1.70   相对峰面积   0.1～5   0.4～5   0.4～5   1～10   0.3～10   0.3～10   0.2～8   0.3～10
2.根据权利要求1所述的中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于所得到的该中药组合物的非挥发性成分指纹图谱和易挥发性成分指纹图谱如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的胆酸所对应的编号为8的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.36～0.44   0.61～0.69   0.64～0.72   0.66～0.74   0.68～0.76   0.73～0.81   0.75～0.83   1.00   相对峰面积   0.2～1   0.4～2   0.1～0.8   0.1～0.7   0.1～0.6   0.05～0.4   0.05～0.4   1.00   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.02～1.10   1.08～1.17   1.10～1.18   1.35～1.44   1.38～1.46   1.65～1.75   1.76～1.85   1.86～1.90   相对峰面积   0.1～0.7   0.08～0.5   0.05～0.4   0.02～0.2   0.05～0.4   0.08～0.5   0.1～0.8   0.05～0.5
(2)易挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的麝香酮所对应的编号为6的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.48～0.58   0.52～0.62   0.56～0.64   0.62～0.72   0.90～1.02   1.00   1.02～1.11   1.10～1.18   相对峰面积   10～70   20～150   0.3～1.5   0.3～2   1～6   1.00   0.2～1   0.6～4   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.14～1.22   1.26～1.36   1.30～1.38   1.32～1.40   1.34～1.42   1.38～1.46   1.40～1.50   1.42～1.52   相对峰面积   0.1～2   0.4～3   0.4～3   1～5   0.3～3   0.3～3   0.2～2   0.3～3
3.根据权利要求1所述的中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于所得到的该中药组合物的非挥发性成分指纹图谱和易挥发性成分指纹图谱如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的胆酸所对应的编号为8的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，那么16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.38～0.42   0.63～0.67   0.66～0.70   0.68～0.72   0.70～0.74   0.75～0.79   0.77～0.81   1.00   相对峰面积   0.4～1   0.8～2   0.3～0.8   0.3～0.7   0.3～0.6   0.1～0.4   0.1～0.4   1.00   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.04～1.08   1.11～1.15   1.12～1.16   1.37～1.41   1.40～1.44   1.68～1.72   1.79～1.83   1.86～1.90   相对峰面积   0.3～0.7   0.2～0.5   0.1～0.4   0.07～0.2   0.15～0.4   0.2～0.5   0.4～0.8   0.15～0.5
(2)易挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的麝香酮所对应的6号色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.51～0.55   0.54～0.58   0.58～0.62   0.66～0.70   0.93～0.97   1.00   1.04～1.08   1.12～1.16   相对峰面积   30～70   80～150   0.8～1.5   0.9～2   3.5～6   1.00   0.4～1   1.8～4   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.16～1.20   1.29～1.33   1.32～1.36   1.34～1.38   1.36～1.40   1.40～1.44   1.43～1.47   1.45～1.49   相对峰面积   0.3～2   1.2～3   1.4～3   2.8～5   1.0～3   1.0～3   0.5～2   0.8～3
4.根据权利要求1所述的中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于所得到的该中药组合物的非挥发性成分指纹图谱和易挥发性成分指纹图谱如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的胆酸所对应的编号为8的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.39～0.41   0.64～0.66   0.67～0.69   0.69～0.71   0.71～0.73   0.76～0.78   0.78～0.80   1.00   相对峰面积   0.4～0.7   0.8～1.2   0.3～0.6   0.3～0.5   0.3～0.5   0.1～0.3   0.1～0.3   1.00   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.05～1.07   1.12～1.14   1.13～1.15   1.38～1.40   1.41～1.43   1.69～1.71   1.80～1.82   1.87～1.89   相对峰面积   0.3～0.6   0.2～0.4   0.1～0.3   0.07～0.15   0.15～0.3   0.2～0.4   0.4～0.6   0.15～0.3
(2)易挥发性成分指纹图谱：指纹图谱中存在着16个共有峰；以其中的麝香酮所对应的编号为6的色谱峰为参照峰，以该峰的保留时间和峰面积值为基准，所有16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积为：
  共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   相对保留时间   0.52～0.54   0.55～0.57   0.59～0.61   0.67～0.69   0.94～0.96   1.00   1.05～1.07   1.13～1.15   相对峰面积   30～50   80～120   0.8～1.0   0.9～1.2   3.5～4.2   1.00   0.4～0.6   1.8～2.5   共有峰编号   9   10   11   12   13   14   15   16   相对保留时间   1.17～1.19   1.30～1.32   1.33～1.35   1.35～1.37   1.37～1.39   1.41～1.43   1.44～1.46   1.46～1.48   相对峰面积   0.3～0.8   1.2～2.0   1.4～2.0   2.8～3.5   1.0～1.6   1.0～1.5   0.5～1.0   0.8～1.4
5.权利要求1-4中任何一项所述的中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于：针对中药组合物中的非挥发性成分和易挥发性成分，用两种不同方法获取各自指纹图谱，具体步骤如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，用乙醇和水的混合溶剂提取，提取方法用加热回流或超声方法，提取物经离心、过滤后用高效液相色谱分析，所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％～0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至少60分钟；检测器使用蒸发光散射检测器；
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，用丙酮超声提取，提取物经离心、过滤、干燥后，用气相色谱法分析；所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃；炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度至少6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持至少10分钟；检测器使用火焰离子化检测器。
6.权利要求5所述的中药组合物指纹图谱分析方法，其特征在于：针对中药组合物中的非挥发性成分和易挥发性成分，用两种不同方法获取各自指纹图谱，具体步骤如下：
(1)非挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，准确称量，用50％乙醇提取，药物与加入的50％乙醇的重量比为1∶5，超声提取至少15分钟，一共提取两次；然后离心、过滤，采用高效液相色谱分析，所使用色谱柱型号为安捷伦反相碳-18色谱柱；流动相由水相和有机相组成，水相为含0.1％～0.5％甲酸的水溶液，有机相为乙腈；洗脱梯度为前27分钟，有机相所占比例从20％线性增加至58％，第27分钟至37分钟，有机相所占比例由58％线性增加至100％，并保持100％比例至少60分钟；检测器使用蒸发光散射检测器；
(2)易挥发性成分指纹图谱分析方法：把药物研细，准确称量，加入丙酮，使药粉与加入丙酮的重量比为1∶10，超声提取至少15分钟，一共提取两次；然后离心、过滤；加入无水硫酸钠干燥，采用气相色谱分析，所使用色谱柱为安捷伦CP8944VF-5毛细管柱；进样口温度为220℃，炉温初始温度设为65℃，分析过程中以每分钟6℃的速度升温至96℃，保持该温度至少6分钟，随后以每分钟18℃的速度升温至225℃，保持至少10分钟；检测器使用火焰离子化检测器。
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洪筱坤等.色谱指纹谱在中药质量标准研究中的应用.中成药23 3.2001,23(3),157-159.
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