CN1883646A - 一种醒酒剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种醒酒剂及其制备方法，它以开口箭正丁醇提取物、筒鞘蛇菰乙酸乙酯取物为活性成分，通过对开口箭、筒鞘蛇菰的干燥，粉碎，加入乙醇回流，过滤，萃取等操作得到。单独使用或者复方使用都具有良好的解除急性酒精中毒及降低血液中乙醇含量的作用，解除醉酒效果好。
Description
技术领域
本发明涉及一种醒酒剂，特别是一种采用开口箭和/或简鞘蛇菰为主要原料的醒酒剂，本发明还涉及这种醒酒剂的制备方法。
背景技术
背景技术
开口箭(Tupistra chinensis Bak.)，为百合科铃兰族开口箭属植物，具有清热解毒，散淤止痛的功效；筒鞘蛇菰(Balanophora involucrata HK.f.)，为双子叶植物纲蔷薇亚纲蛇菰科植物，又称葛菌、葛花、葛藤菌、地红果、仙人头，具有止血、生肌、镇痛的功效，将开口箭、筒鞘蛇菰进行提取后用于醒酒未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是要提供一种采用开口箭和/或筒鞘蛇菰提取物为原料的醒酒剂及其制备方法。
本发明的目的是这样实现的：一种醒酒剂，它含有开口箭正丁醇提取物或筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物或开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物的混合物。
醒酒剂含有以下重量配比的组份：开口箭正丁醇提取物0-3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物0-20份。
醒酒剂含有以下重量配比的组份：开口箭正丁醇提取物3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物10份。
一种醒酒剂的制备方法，开口箭正丁醇提取物的制备：将开口箭干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；
筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物的制备：将筒鞘蛇菰干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到筒鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的乙酸乙酯萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；将得到的开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物混合后得到本醒酒剂。开口箭、筒鞘蛇菰干燥温度为40-60度。开口箭、筒鞘蛇菰功能成分提取溶剂为甲醇、乙醇、丁醇及其30％-100％浓度的水溶液。
本发明所提供的醒酒剂及其制备方法，得到开口箭的正丁醇提取物以及筒鞘蛇菰乙酸
乙酯提取物，单独使用或者复方使用都具有良好的解除急性酒精中毒及降低血液中乙醇含量的作用，解除醉酒效果好。
具体实施方式
本发明提供的醒酒剂，以开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物作为有效成分。
醒酒剂中以重量份计，开口箭正丁醇提取物0-3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物0-20份。最佳的配比为以重份计开口箭正丁醇提取物3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物10份。
制备本醒酒剂的方法如下：
开口箭正丁醇提取物的制备：将开口箭在40-60℃温度下干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；
筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物的制备：将筒鞘蛇菰在40-60℃温度干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到筒鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的乙酸乙酯萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；
单独的开口箭正丁醇提取物或筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物可作为醒酒剂使用，也可将得到的开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物混合后得到本醒酒剂。
第一部分开口箭、筒鞘蛇菰提取物醒酒作用实验
实验材料
1.1药材
开口箭根茎采挖自湖北省神农架林区，其原植物标本于2002年7月采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为Tupistra chinensis Bak.，原植物及药材现保存于湖北省天然产物研究与利用重点实验室(编号：TC200207SNJ)。
筒鞘蛇菰药材采挖自湖北省神农架林区，其原植物标本于2005年8月采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为Balanophora involucrata HK.f.，原植物及药材现保存于湖北省天然产物研究与利用重点实验室(编号：BI200508SNJ)。
1.2药品
乙醇(工业)；39度金三星枝江大曲，湖北枝江酒业股份有限公司，批号：ZJA39001/0；康华酒友解酒晶，洛阳康华生物制品有限公司，批号：豫卫特食字(2000)第0140号；超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；谷胱肝肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。
1.3试剂
0.9％生理盐水；浓硫酸；20％三氯乙酸；
重铬酸钾硫酸试剂：0.42g分析纯重铬酸钾溶于200ml 4mol/L H2SO4。
pH8.8焦磷酸钠缓冲液(测ADH活力用)：1.427g十水焦磷酸钠(Na2P2O7·10H2O)溶于蒸馏水，用1mol/LNaOH溶液将pH调至8.8，并定容到100ml。
乙醇底物溶液：取12.12ml浓度为95％乙醇溶于蒸馏水中，并定容至100ml。
乙醛底物溶液：40％乙醛。
氧化型辅酶I溶液：称取30mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)，加蒸馏水并定容至10ml冰箱保存。
pH7.4蔗糖缓冲溶液：含5mM Tris-HCI，0.1mM EDTA，0.25mM蔗糖。
1.4仪器
药物粉碎机(FE130型)，河北黄骅市航天仪器厂；旋转蒸发仪，无锡市星海王生化设备有限公司；低温冷冻干燥箱，美国LABCONCO公司；ZYC-1型小鼠自主活动仪，安徽省濉溪正华教学实验器械厂；微型台式高速离心机(5415D)，德国eppendof公司；U-2800紫外可见分光光度计，HITACHI公司；UV-2100紫外分光光度计，美国Unico公司。
1.5动物
昆明种小鼠，雄性，体重(20±2)g，由华中科技大学同济医学部实验动物中心提供，合格证号：19-052。
一.开口箭、筒鞘蛇菰提取物醒酒行为学研究
1实验方法
1.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物的制备
1.1.1开口箭、筒鞘蛇菰醇提取物的制备
开口箭、筒鞘蛇菰药材于50℃干燥过夜，粉碎，将粉碎后的粉末放入圆底烧瓶中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭、筒鞘蛇菰95％乙醇提取物。
2.1.2开口箭、筒鞘蛇菰水提物的制备
取开口箭、筒鞘蛇菰粉碎后的药材用水浸泡1h，85℃水浴40min，过滤得滤液，滤渣再85℃水浴30min，过滤得滤液，合并两次滤液，然后将合并后的滤液用旋转蒸发仪浓缩，得到开口箭、筒鞘蛇菰水提取物。
1.2小鼠致醉给酒量的测定
昆明种小鼠20只，随机分成5组，每组四只，雌雄各半，禁食12h后，采取灌胃给酒，其给酒量设五个梯度0.30ml/20g，0.34ml/20g，0.37ml/20g，0.45ml/20g，0.53ml/20g，观察小鼠醉倒和死亡情况。
1.3开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠翻正反射的影响
昆明种小鼠48只，随机分成6组，每组8只，禁食12h后，给药组分别ig开口箭95％醇提取物(5.4g/kg)，开口箭水提物(5.4g/kg)，筒鞘蛇菰95％乙醇提取物(6g/kg)，筒鞘蛇菰水提取物(6g/kg)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)，模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20gig给酒。小鼠醉酒与否以翻正反射消失为指标，即将小鼠背向下轻轻放在动物笼里，若仰位姿势保持30s以上，则认为小鼠翻正反射消失，记录给酒后小鼠翻正反射消失的潜伏时间和翻正反射的维持时间。
1.4开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠自由活动的影响
昆明种小鼠56只，随机分成7组，每组8只，禁食12h后，给药组分别ig开口箭95％乙醇提取物(5.4g/kg)，开口箭水提取物(5.4g/kg)，筒鞘蛇菰95％乙醇提物(6g/kg)，筒鞘蛇菰水提物(6g/kg)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20g，空白对照组ig等量的蒸馏水。20min后开始测定，于较暗而安静室内，将小鼠放入小鼠自主活动仪内测定5min内小鼠活动次数，以后每隔1h测定一次并记录各组活动次数。
1.5统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件，实验数据结果以平均值±标准差(
x±S)来表示，组间差异比较采用t检验，以P＝0.05为显著水平，判断组间是否存在差异性。
2.结果与分析
2.1小鼠致醉给酒量的测定
表1 给酒量对小鼠致醉情况的影响
| 组别 | 给酒量 | 小鼠只数 | 醉倒率(％) | 死亡率(％) |
| 12345 | 0.30ml/20g0.34ml/20g0.37ml/20g0.45ml/20g0.53ml/20g | 44444 | 257575100100 | 0075100100 |
由表1可知，给酒量为0.45ml/20g，0.53ml/20g时，虽然小鼠的醉倒率达到了100％，但死亡率也为100％。给酒量为0.37ml/20g时，小鼠的醉倒率和死亡率均为75％，而给酒量为0.34ml/20g时小鼠的醉倒率为75％，死亡率为0。为使后续实验得以完成，故选0.34ml/20g体重为39度白酒致醉给酒量。
2.2开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠翻正反射的影响
表2 小鼠翻正反射的实验结果(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 潜伏时间(min) | 维持时间(min) |
| 模型组康华酒友解酒晶开口箭醇提取物开口箭水提取物筒鞘蛇菰醇提取物筒鞘蛇菰水提取物 | -1.55.45.466 | 17.88±11.72842.00±25.790**19.63±11.79510.88±4.67346.88±24.908**30.00±18.724 | 130.38±13.51186.38±47.395*78.13±30.088*122.38±25.51768.00±42.156**78.00±63.385* |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
由表2知，观察潜伏时间即从灌酒到翻正反射消失的时间显示，开口箭醇提取物、水提取物作用并不明显；筒鞘蛇菰醇提取物较开口箭醇提取物、水提物组明显延长，且与康华酒友解酒晶的作用相当，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。从维持时间即从翻正反射消失到翻正反射恢复来看，开口箭醇提取物与开口箭水提取物相比明显缩短，且与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)；筒鞘蛇菰醇提取物与水提取均有很好的作用，但醇提取物的效果要比水提取物要好，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。
2.3开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠自由活动的影响
表3 小鼠自由活动实验结果(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 20min | 2h | 3h | 4h |
| 空白组模型组康华酒友解酒晶开口箭醇提取物开口箭水提取物筒鞘蛇菰醇提取物筒鞘蛇菰水提取物 | --1.55.45.466 | 250.63±26.55**125.75±41.36257.25±73.71**245.00±35.50**187.00±80.16276.50±86.05**131.75±89.81 | 232.75±30.40**122.00±48.78216.63±45.27**186.13±77.69166.88±69.40217.00±70.28**109.00±58.78 | 118.38±41.8395.50±55.86129.63±62.89128.25±45.2595.75±35.15166.13±96.22105.88±56.82 | 110.75±44.8263.75±36.0475.25±40.26102.00±51.7573.50±31.9892.38±76.0388.63±46.21 |
*P＜0.05，**P＜0.01vs NS
由表3可知，开口箭醇提取物比水提取物效果要好，20min时开口箭醇提取物与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)。而对于筒鞘蛇菰，其醇提取物作用也比水提取物的效果要好，且与模型组比较，在20min和2h均有极显著性差异(P＜0.01)。
由以上小鼠翻正反射实验和自由活动实验可以看出，开口箭和筒鞘蛇菰提取物有很好的醒酒效果，且醇提取物的醒酒效果要比水提取物的效果要好，故后续活性部位筛选，我们选取是开口箭和筒鞘蛇菰的95％乙醇提取物部分来进行。
二.开口箭、筒鞘蛇菰提取物醒酒作用活性部位的筛选
1实验方法
1.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物的制备
开口箭、筒鞘蛇菰药材于50℃干燥过夜，粉碎，将粉碎后的粉末放入圆底烧瓶中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭、筒鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，萃取液均旋转蒸发浓缩成浸膏。
1.2开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位筛选
昆明种小鼠72只，随机分成9组，每组8只，禁食12h后，给药组分别ig开口箭石油醚部分(5.4g/kg)，开口箭乙酸乙酯部分(5.4g/kg)，开口箭正丁醇部分(5.4g/kg)，筒鞘蛇菰石油醚部分(6g/kg)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(6g/kg)，筒鞘蛇菰正丁醇部分(6g/kg)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20g，空白对照组ig等量的蒸馏水。1h后开始测定，于较暗而安静室内，将小鼠放入小鼠自主活动仪内测定5min内小鼠活动次数，以后每隔1h测定一次并记录各组活动次数。
1.3开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位浓度的优化
昆明种小鼠72只，随机分成9组，每组8只，禁食12h后，给药组分别ig开口箭正丁醇部分(2.7g/kg)，开口箭正丁醇部分(5.4g/kg)，开口箭正丁醇部分(10.8g/g)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(3g/g)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(6g/kg)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(9g/kg)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20g，空白对照组ig等量的蒸馏水。1h后开始测定，于较暗而安静室内，将小鼠放入小鼠自主活动仪内测定5min内小鼠活动次数，以后每隔1h测定一次并记录各组活动次数。
1.4统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件，实验数据结果以平均值±标准差(
x±S)来表示，组间差异比较采用t检验，以P＝0.05为显著水平，判断组间是否存在差异性。
2.结果与分析
2.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位筛选
表1 开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位筛选结果(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 1h | 2h | 3h | 4h |
| 空白组模型组解酒晶开口箭石油醚开口箭乙酸乙酯开口箭正丁醇筒鞘蛇菰石油醚筒鞘蛇菰乙酸乙酯筒鞘蛇菰正丁醇 | --1.55.45.45.4666 | 169.50±23.43**55.00±43.71151.25±99.34*126.25±91.7675.00±36.52198.00±50.85**162.63±92.86**174.75±97.73**133.62±87.53* | 152.88±47.27**39.38±32.94116.00±107.83*85.14±60.3274.33±71.96158.38±76.49**150.17±76.45*149.50±99.70**90.14±86.21 | 118.13±44.84**37.63±35.13108.63±64.83*79.25±68.6162.38±46.46116.00±54.86**97.00±81.05*116.88±73.40**65.13±37.17 | 80.50±15.92*35.25±15.4077.88±47.95*70.38±48.4760.86±23.8561.63±28.7184.86±42.00*100.25±62.00**49.38±21.84 |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
由表1数据可知：开口箭三个部分中，正丁醇部分醒酒效果最好，且在1h、2h、3h时与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)；筒鞘蛇菰三个部分中，石油醚部分在1h与模型组相比有极显著性差异，在2h、3h、4h时与模型组相比有显著性差异。而乙酸乙酯部分在1h、2h、3h、4h与模型组相比均有极显著性差异。因此可以初步确定开口箭的活性部位为正丁醇部分，筒鞘蛇菰的活性部位为石油醚和乙酸乙酯部分，但筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分比筒鞘蛇菰石油醚部分醒酒效果要好，故后续实验筒鞘蛇菰选取的是乙酸乙酯部分。
2.2开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位浓度的优化
表2 开口箭、筒鞘蛇菰提取物活性部位浓度优化结果(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 1h | 2h | 3h | 4h |
| 空白组模型组解酒晶开口箭正丁醇开口箭正丁醇开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯筒鞘蛇菰乙酸乙酯筒鞘蛇菰乙酸乙酯 | --1.52.75.410.8369 | 167.38±18.82*77.75±21.47168.25±126.29*197.38±59.48***163.50±78.81**132.63±78.54138.88±75.56168.88±52.10*191.63±114.85*** | 137.50±30.20**62.50±32.62163.75±70.21***161.13±65.89***110.00±58.0569.00±51.57110.25±53.941124.13±41.236*145.38±62.01*** | 114.63±37.80u60.38±21.51141.25±79.89***109.50±70.20104.75±58.6063.50±57.0890.13±52.85105.38±58.43132.13±39.74u | 87.00±23.5456.38±19.57118.25±62.01*104.13±77.0690.13±52.0758.38±51.9474.50±64.0184.50±42.50114.88±28.59* |
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.005 vs NS
表2数据表明，开口箭低剂量、中剂量组明显好于高剂量组，其中低剂量组在1h、2h时与模型组相比，均有极显著性差异(P＜0.005)，活动次数明显高于中剂量组，而中剂量组仅在1h时与模型组相比有显著性差异，故开口箭最终选取的浓度为2.7g/kg；筒鞘蛇菰中剂量、高剂量组在效果明显好于低剂量组，而高剂量组在1h、2h与模型组相比均有极显著性差异(P＜0.005)，且在3h、4h与模型组相比也有显著性差异，但中剂量组仅在1h、2h与模型组相比有显著性差异。故筒鞘蛇菰最终选取的浓度为9g/kg。
三.开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠血中乙醇含量的影响
1.实验方法
1.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物的制备
开口箭、筒鞘蛇菰药材于50℃干燥过夜，粉碎，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，减压回收乙醇至小体积，冷冻干燥，得到开口箭、筒鞘蛇菰95％乙醇提取物干燥粉末。取一定量粉末水中悬浮，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，萃取液经旋转蒸发浓缩成浸膏。
1.2实验动物的处理
取昆明种小鼠168只，随机分成7组，每组24只，分别为不同剂量给药组，模型对照组，阳性对照组。小鼠禁食12小时后，给药组分别ig开口箭正丁醇部分(2.7g/kg)，简鞘蛇菰乙酸乙酯部分(9g/kg)，开口箭和筒鞘蛇菰复方(3∶10，3∶20，3∶5)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20g，在给酒后30min，60min，120min，180min，各组分别取6只小鼠眼眶静脉取血0.5ml，肝素抗凝，制成待测样本，然后用酸性重铬酸盐氧化法测定每个样本中乙醇含量。
1.3小鼠血液中乙醇含量的测定
1.3.1实验原理
酸性重铬酸盐氧化法[4]：酸性重铬酸盐氧化法的基本原理是血清(血浆)中乙醇在酸性溶液中被重铬酸盐氧化，重铬酸盐的还原量与所测的乙醇浓度成正比，其反应如下：
可通过测定在595nm处的吸光度，定量测定乙醇含量。
1.3.2标准曲线的绘制
用试管壁上涂有肝素的离心管接取新鲜小鼠的血6份，每份取500μl，用微量移液枪按0，0.5，1，2，3，4，5，6μl系列添加50％乙醇，分别加入500μ120％三氯乙酸沉淀蛋白，以6000r/min冷冻离心沉淀6min，取上清液各600μl，加重铬酸钾硫酸试剂1.8ml，100℃水浴加热10min，取出冷却至室温。用空白水做参比液，测其在595nm处的吸光度值。以吸光度为纵坐标，小鼠血液中乙醇含量为横坐标，作标准曲线，血液中乙醇含量在0-600μl/100ml有很好的线性关系，其回归方程为y＝0.17646+0.01178x，相关系数为0.9996。
1.3.3样本的检测
用移液枪准确吸取500μl血样于预先涂有抗凝肝素的有盖试管中，加入500μl 20％三氯乙酸沉淀蛋白，其余步骤同标准曲线操作。
1.4统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件，实验数据结果以平均值±标准差(
x±S)来表示，组间差异比较采用t检验，以P＝0.05为显著水平，判断组间是否存在差异性。
2.结果与分析
开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠血中乙醇含量的影响
表1 各组小鼠不同时间乙醇浓度(
x±S，n＝6)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 血中乙醇含量(μl/ml血液) | |||
| 30min | 60min | 120min | 180min | ||
| 模型组解酒晶开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯开口箭：筒鞘蛇菰(3∶10)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶20)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶5) | -1.52.79.05.96.94.8 | 2.84724±0.60001.6445±0.5433**1.7719±0.5648**1.7946±0.5322**1.7012±0.2325**1.7012±0.8330**1.1777±0.2056** | 2.0690±0.43421.4041±0.8640**1.1353±0.2485**1.4182±0.2912*1.3899±0.1733**1.6163±0.33851.4041±0.2079** | 2.2813±0.40061.9983±0.54221.5173±0.3548*1.8710±0.27771.6163±0.3671*1.9276±0.44082.1398±1.1573 | 2.2699±0.18401.5456±0.2440**1.4890±0.2989**1.6304±0.1834**1.5869±0.3016**1.5597±0.4962**1.8625±0.3825 |
*P＜0.05.**P＜0.01 vs NS
实验数据表明，开口箭、筒鞘蛇菰及复方各组在三个小时内与模型对照组相比，小鼠血液中乙醇含量均低于模型组，其中开口箭正丁醇组在30min、60min、180min与模型组相比均有极显著性差异(P＜0.01)，而在120min时与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)；筒鞘蛇菰乙酸乙酯组在30min、60min、180min与模型组相比均有显著性差异，且在30min、180min时，差异极显著(P＜0.01)；开口箭筒鞘蛇菰复方组在三小时内，对小鼠血液中乙醇含量有一定的影响，其中复方(3∶10)和(3∶5)在30min、60min可明显降低小鼠血液中乙醇含量，且与模型组相比有极显著性差异(P＜0.01)，而复方(3∶20)在30min、180min时也可明显地降低血液中乙醇含量，与模型组相比也有极显著性差异(P＜0.01)。
四.开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠旰中ADH与ALDH的影响
1实验方法
1.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物的制备
开口箭、筒鞘蛇菰药材于50℃干燥过夜，粉碎，将粉碎后的粉末放入圆底烧瓶中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭、简鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，萃取液均旋转蒸发浓缩成浸膏。
1.2乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活力测定
1.2.1乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的分离提取
取昆明种小鼠64只，随机分成8组，每组8只，分别为不同剂量给药组，模型对照组，阳性对照组。小鼠禁食12小时后，给药组分别ig开口箭正丁醇部分(2.7g/kg)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(9g/kg)，开口箭和筒鞘蛇菰复方(3∶10，3∶20，3∶5)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.34ml/20g ig给酒，空白对照组ig等量的蒸馏水。酒后1小时，处死各组小白鼠，取其肝脏。
将0.5g肝脏2ml蔗糖溶液的比例量取蔗糖溶液。肝脏先用生理盐水，后用蔗糖溶液冲洗，再放入已量好的蔗糖溶液中，在冰水浴中剪碎、匀浆，把匀浆液放入2ml离心管中。以600g离心10分钟，以除去细胞碎片、红细胞和核；小心地取出上清液，以9000g再次离心10分钟，得上清液用于ADH活力的测定，沉淀为线粒体，加入1ml蔗糖，制成悬浮液后可以进行ALDH活力的测定，整个离心操作过程保持在0-40℃温度下进行。
1.2.2小鼠肝脏ADH活力的测定
乙醇脱氢酶在有NAD+(氧化型辅酶I)存在的弱碱性范围内，催化乙醇的脱氢反应生成乙醛：
同时NAD+被还原成NADH(还原型辅酶I)。NADH在波长340nm处有一强吸收峰，我们可以通过测定340nm处NADH的A值(吸光度)每分钟的变化率来衡量ADH的活力，A的变化率越大说明ADH活力越高。
用移液管向1cm比色皿内移入2.5ml pH8.8焦磷酸钠缓冲液、0.3ml底物溶液和0.1ml氧化型辅酶I溶液，并恒温至25℃，加入0.10ml酶溶液，并按动秒表。在连续大约10min内，每隔1min读取340nm处的吸光度，直至每分钟吸光度的增大值达到稳定为止。
ADH活力测定步骤
| 加入比色皿中 | 样品(ml) | 对照(ml) |
| 焦磷酸钠缓冲溶液底物溶液辅酶溶液重蒸水 | 2.50.30.10 | 2.50.30.10.1 |
| 混合，恒温至25℃，加入 | ||
| 酶溶液 | 0.1 | 0 |
| 混合，按动秒表，测定340nm处每分钟吸光度增大值 | ||
ADH活力单位的定义：在25℃下，每分钟催化产生1tmol NADH的酶量为1个单位(U)，其计算公式如下：
式中am为摩尔消光系数，NADH在340nm的am＝6.22×106cm2/mol；
1cm.比色杯厚度；
ΔA：340nm处每分钟吸光度的增大值；
3：反应试液的总体积(ml)；
0.1：加入反应体系的ADH提取液体积(ml)；
2：肝组织匀浆体积(ml)；
1.2.3小鼠肝脏ALDH活力的测定
在乙醛脱氢酶的存在下，乙醛被氧化成醋酸的反应如下：
同样，可通过测定NADH在340nm处每分钟吸光度的变化率来表示ALDH的活力。
测定ALDH活力的具体步骤为：用移液管向1cm比色皿内移入2.2ml pH7.4焦磷酸钠缓冲液，0.2ml NAD+溶液，0.5ml乙醛底物，恒温至25℃，然后加入25℃上面制得悬浮酶液0.1ml，在连续大约10分钟内，每隔1分钟读取340nm处的吸光度，直至每分钟吸光度的增大值达到稳定时为止。
ALDH活力测定步骤
| 加入比色皿中 | 样品(ml) | 对照(ml) |
| 焦磷酸钠缓冲溶液底物溶液重蒸水辅酶溶液 | 2.20.500.2 | 2.20.50.10.2 |
| 混合，恒温至25℃，加入 | ||
| 酶溶液 | 0.10 | 0 |
| 混合，按动秒表，测定340nm处每分钟吸光度增大值 | ||
ALDH活力单位的定义：在25℃下，每分钟催化产生1μmol NADH的酶量为1个单位(U)，其计算公式如下：
式中am为摩尔消光系数，NADH在340nm的am＝6.22×106cm2/mol；
1cm：比色杯厚度；
ΔA：340nm处每分钟吸光度的增大值；
3：反应试液的总体积(ml)；
0.1：加入反应体系的ADH提取液体积(ml)；
2：肝组织匀浆体积(ml)；
1.3统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件，实验数据结果以平均值±标准差(
x±S)来表示，组间差异比较采用t检验，以P＝0.05为显著水平，判断组间是否存在差异性。
2结果与分析
2.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠旰中ADH活性的影响
表1 开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠肝中ADH活性的影响(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 肝中ADH活性(U/g) |
| 空白组模型组康华酒友解酒晶开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯 | --1.52.79.0 | 0.2006±0.0457*0.1405±0.030770.1734±0.025160.1906±0.040450.1853±0.05463 |
| 开口箭：筒鞘蛇菰(3∶10)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶20)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶5) | 5.96.94.8 | 0.2545±0.1149**0.1722±0.027670.2037±0.05047* |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
由表1数据可知，开口箭和筒鞘蛇菰均可增强乙醇脱氢酶的活性，并且开口箭和筒鞘蛇菰的复方(3∶10)对乙醇脱氢酶的活性有明显提高，且与模型组相比有极显著性差异(P＜0.01)。开口箭和筒鞘蛇菰的复方(3∶5)也对乙醇脱氢酶的活性有所提高，且与模型组相比有显著性差异(P＜0.05)。
2.2开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠旰中ALDH活性的影响
表2 开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠肝中ALDH活性的影响(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 肝中ALDH活性(U/g) |
| 空白组模型组康华酒友解酒晶开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯开口箭：筒鞘蛇菰(3∶10)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶20)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶5) | --1.52.79.05.96.94.8 | 0.09312±0.01437**0.02658±0.00798l0.04232±0.01521*0.05059±0.01431**0.03368±0.014830.03864±0.014530.04967±0.008967**0.04729±0.01746** |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
由表2可知，开口箭和筒鞘蛇菰均对乙醛脱氢酶的活性有所提高，其中开口箭正丁醇部分效果比较明显，与模型组相比有极显著性差异(P＜0.01)，开口箭和筒鞘蛇菰的复方(3∶20)和(3∶5)效果也较好，与模型组相比也有极显著性差异(P＜0.01)。
五.开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠肝中SOD和GSH-PX的影响
1实验方法
1.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物的制备
开口箭、筒鞘蛇菰药材于50℃干燥过夜，粉碎，将粉碎后的粉末放入圆底烧瓶中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭、筒鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，萃取液均旋转蒸发浓缩成浸膏。
1.2实验动物的处理
取昆明种小鼠64只，随机分成8组，每组8只，分别为不同剂量给药组，模型对照组，阳性对照组。小鼠禁食12小时后，给药组分别ig开口箭正丁醇部分(2.7g/kg)，筒鞘蛇菰乙酸乙酯部分(9g/kg)，开口箭和筒鞘蛇菰复方(3∶10，3∶20，3∶5)；阳性对照组ig康华酒友解酒晶(1.5g/kg)；模型对照组ig等量的生理盐水。30min后各组分别ig 39度金三星枝江大曲0.30ml/20gi给酒，空白对照组ig等量的蒸馏水。连续灌胃五天，最后一天灌酒后半小时，处死各组小白鼠，取其肝脏。
1.3肝组织匀浆的制备
取肝组织块(0.2-1g)用冰冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入已洗干净的组织匀浆器中。用移液管量取预冷的生理盐水，生理盐水的量应为组织块重量的9倍，用移液管或移液器将总量2/3的生理盐水移入组织匀浆器中，左手持匀浆器将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次(6-8分钟)，充分研碎，使组织匀浆化，然后将匀浆转移到5ml的离心管中，2000rpm离心10min，将离心好的匀浆留上清弃下面沉淀，即得到10％肝组织匀浆，最后将其分别稀释到1％和0.25％备用。
1.4小鼠肝组织SOD和GSH-PX活力的测定
将制备好的肝组织匀浆样本按照试剂盒的使用说明，分别采用黄嘌呤氧化酶法和DNTB(二硫代二硝基苯甲酸)比色法测定小鼠肝组织SOD和GSH-PX的活力。
1.5统计学处理
采用SPSS11.5统计软件，实验数据结果以平均值±标准差(
x±S)来表示，组间差异比较采用t检验，以P＝0.05为显著水平，判断组间是否存在差异性。
2结果与分析
2.1开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠肝中SOD活力的影响
表1 开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠肝中SOD活力的影响(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 肝中SOD活力(U/mg蛋白) |
| 空白组模型组康华酒友解酒晶开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯开口箭：筒鞘蛇菰(3∶10)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶20)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶5) | --1.55.49.05.96.94.8 | 215.5114±5.8817**101.5563±10.1316113.2592±4.4775529.0790±102.8371**295.4272±46.5913**222.7942±40.1675**173.8387±18.9927**179.7919±47.0409** |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
由表1可知，开口箭、筒鞘蛇菰提取物及它们的复方均可以提高小鼠肝中SOD的活力，并且与模型组相比，均有极显著性差异(P＜0.01)。
2.2开口箭、筒鞘蛇菰提取物对急性酒精中毒小鼠肝中GSH-PX活力的影响
表2 开口箭、筒鞘蛇菰提取物对小鼠肝中GSH-PX活力的影响(
x±S，n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 肝中GSH-PX活力(U/mg蛋白) |
| 空白组模型组康华酒友解酒晶开口箭正丁醇筒鞘蛇菰乙酸乙酯开口箭：筒鞘蛇菰(3∶10)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶20)开口箭：筒鞘蛇菰(3∶5) | --1.55.49.05.96.94.8 | 70.3800±32.5255*16.8115±11.882921.4672±19.0607128.0479±53.9951**75.7940±50.5514**63.7177±32.3522*15.5986±21.293625.6679±20.8085 |
*P＜0.05，**P＜0.01 vs NS
表2数据表明，开口箭、简鞘蛇菰提取物及它们的复方均可以提高小鼠肝中GSH-PX的活力，其中开口箭正丁醇部分以及简鞘蛇菰乙酸乙酯部分与模型组相比，均有极显著性差异(P＜0.01)；开口箭和筒鞘蛇菰的复方(3∶10)与模型组相比，有显著性差异(P＜0.05)。
第二部分开口箭、蛇菰提取物醒酒剂的制备
一.本发明药物片剂的制备
取开口箭正丁醇提取物0～3份、蛇菰乙酸乙酯提取物0-20份混合。取混合物1000份，加入淀粉和1％硬脂酸镁，压片，使每片含提取物5-10mg。(所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等片剂常用的辅料中的一种或几种)。
二.本发明药物胶囊剂的制备
取开口箭正丁醇提取物0～3份、蛇菰乙酸乙酯提取物0-20份混合。取混合物1000份，加入淀粉，制粒，整粒，装胶囊，每粒胶囊中含有皂苷5-10mg。(所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等胶囊剂常用的辅料中的一种或几种)。
Claims (6)
1、一种醒酒剂，其特征在于：它含有开口箭正丁醇提取物或筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物或开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物的混合物。
2、根据权利要求1所述的醒酒剂，其特征在于：醒酒剂含有以下重量配比的组份：开口箭正丁醇提取物0-3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物0-20份。
3、根据权利要求1或2所述的醒酒剂，其特征在于：醒酒剂含有以下重量配比的组份：开口箭正丁醇提取物3份，筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物10份。
4、一种醒酒剂的制备方法，其特征在于：
开口箭正丁醇提取物的制备：将开口箭干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到开口箭95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；
筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物的制备：将筒鞘蛇菰干燥，粉碎，将粉碎后的粉末放入容器中，加入95％乙醇，常压回流两小时，过滤，重复操作3次，合并滤液，冷冻干燥，得到筒鞘蛇菰95％乙醇提取物，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的乙酸乙酯萃取液旋转蒸发浓缩成浸膏；
将得到的开口箭正丁醇提取物和筒鞘蛇菰乙酸乙酯提取物混合后得到本醒酒剂。
5、根据权利要求4所述的醒酒剂的制备方法，其特征在于：开口箭、筒鞘蛇菰干燥温度为40-60度。
6、根据权利要求4或5所述的醒酒剂的制备方法，其特征在于：开口箭、筒鞘蛇菰功能成分提取溶剂为甲醇、乙醇、丁醇及其30％-100％浓度的水溶液。
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