CN1879638A - 一种纳米血塞通注射制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种纳米血塞通注射制剂及其制备方法；药理实验表明，本发明纳米血塞通注射制剂能很好的透过血脑屏障，具有缓释作用，且疗效比现有注射制剂有显著提高；质量标准考察实验表明，本发明制剂分散性好、包封率高、载药量大；安全性评价实验表明，本发明具有很好的注射给药安全性。

Description

一种纳米血塞通注射制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种纳米血塞通注射制剂及其制备方法。

技术背景

纳米中药主要是指运用纳米技术制造的，粒径小于100nm的中药有效成分、有效部位、原药及复方制剂。生物机体对药物的吸收、代谢是一个复杂的过程，中药制剂产生的药理效应不能仅仅归之于药物特有的化学组成还与该制剂的物理状态密切相关。因此，改变药物制剂的物理状态是新药研制的一种有效方法。在改变物理状态方面，改变药物的单元尺寸是十分有效的。当颗粒尺寸进入纳米量级时由于量子尺寸效应和表面效应，纳米粒子呈现出新奇的物理化学和生物学特性。这就是应用纳米技术于中药研究可能使药物活性和生物利用度提高乃至产生新的特性依据所在。

纳米中药的制备是研究纳米中药最基础的，也是最重要的问题。将纳米技术引入中药的研究时，必须考虑中药组方的多样性、中药成分的复杂性，例如：中药单味药可分为矿物药、植物药、动物药和菌物药等，中药的有效部位和有效成分又包括无机化合物和有机化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，针对不同的药物，在进行纳米化时必须采用不同的技术路线。纳米中药与中药新制剂关系十分密切，如何在中药理论的指导下进行纳米中药新制剂的研究，将中药制成高效、速效、长效、计量小、低毒、服用方便的现代制剂，也是进行中药纳米化时必须考虑的问题。

目前，纳米技术在中药研究中存在的问题也不能忽视的。第一，纳米中药的制备困难：我国虽已制备一些纳米级的中药，可是由于中药品种繁多，成分复杂，不同的成分由于其作用部位、作用机制及作用缓急的不同而要求其粒径大小、载体成分及给药剂量均有可能不同。同时纳米中药应该有它自己的一套质量标准，使其生产规范化。第二，纳米中药的毒副作用：药物制成纳米微粒，其物理性质和化学性质均发生了显著的变化，这些变化对人体是否有毒副反应均未有有关的研究报道。但由于纳米材料的特殊性，除了可穿透皮肤，还会进入细胞器内，是否会直接参与或作为催化剂扰乱机体正常的化学反应，均未见有关报道。此外，纳米中药还可以通过机体的屏障系统，那它是否会影响中枢神经系统，精子的生成及其活力、胎儿的发育等，这些问题均无法回避。第三，中药在纳米级粉碎后，纳米微粒表面积变大，由于纳米微粒表面的活性使他们很容易团聚在一起，这给纳米微粒的收集及其药效的稳定性带来很大的困难。第四，成本提高：由于现有技术水平及设备的限制，造成纳米中药在制备中的花费比传统中药的制备要高出不少。

现代中药的研究就是要在继承中药传统的基础上，充分利用现代科技手段，使中药具有先进的生产工艺和现代剂型，做到“有效、安全、可控”，将纳米技术应用于中药领域是现代中药发展的重要方向之一。纳米中药一般不是简单地将中药材进行粉碎至纳米量级，而是针对组成中药方剂的某味药的有效部位甚至是有效成分进行纳米技术加工处理，赋予传统中药以新的功能，如：提高生物利用度，增强靶向性；降低毒副作用；呈现新的药效，拓宽原药的适应证；丰富中药的剂型选择；减少用药量，节省中药资源等。

同传统中药相比，纳米中药具有以下特点：①提高了药物的利用度，减少用药量。②增强药物的靶向性。③具有缓释功能，将中药纳米粒进行一定的表面修饰后，可能使中药具有缓释作用。④呈现新的药效，拓宽原药适应症，中药加工至纳米尺寸时，由于其量子尺寸等效应导致其物理、化学特性的改变，从而可使中药呈现出新功能。⑤丰富中药的剂型选择，提升传统给药途径。

徐辉碧等检索了1998年～2000年美国专利中涉及纳米科技的专利，发现该类专利与生物医学相关的专利占总数的80％以上，杨孟君在2001年一年内申请了940多件纳米中药的专利，但其申请的大部分都是中药原料药进行纳米粉碎，其专利实用性不强。

目前纳米中药的研究主要集中于利用纳米技术对少数成分比较明确的单体有效成分进行纳米处理制成纳米制剂，或将原料药直接粉碎成纳米级，对大部分中药的纳米制剂研究还很少，主要是因为中药有效成分和有效部位特别是中药复方中有效部位本身就是一个“黑匣子”，中药中真正起药理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一个难题，而且由于中药成分比较复杂，所以将其制备成纳米制剂需要克服的困难较多，因此，中药纳米制剂及技术是医药科研工作者的重要研究课题。

三七总皂苷是三七芦头按一定工艺提制的总皂苷，具有活血祛瘀、通脉活络的功能，用于治疗心脑血管系统疾病，脑血管病后遗症等。以三七总皂苷为有效成分的注射制剂有血塞通注射液[部颁标准19册]和血塞通粉针(商品名：络泰)，自上市以来，在临床上虽然取得了一定的治疗效果，但是存在一个很大的问题，即药物透过血脑屏障的量很小，很难达到有效的血药浓度，所以治疗效果并不是很理想。所以，如何提高现有血塞通注射制剂的疗效，成了人们急待解决的问题。

在专利检索中未发现有关纳米血塞通注射制剂的任何报道。

发明内容

为了提高现有血塞通注射制剂的疗效，本发明研究人员经过大量的实验，研制出一种纳米血塞通注射制剂。药理实验表明，本发明纳米血塞通注射制剂能很好的透过血脑屏障，具有缓释作用，疗效比现有血塞通注射制剂有显著提高；质量标准考察实验结果表明，本发明纳米注射制剂分散性好、包封率高、载药量大；安全性评价实验结果表明，本发明具有很好的注射给药安全性。

本发明的一个目的是公开一种纳米血塞通注射制剂。

本发明的另一个目的是公开上述纳米血塞通注射制剂的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一、制备方法

(1)主药混悬液的制备

处方为：三七总皂苷1重量份、载体7-10重量份；

方法一：将三七总皂苷药粉、脂质和乳化剂，在通氮气条件下加热至80±5℃，得到组分A；将甘油和poloxamer188的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得。

方法二：称取脂质加入三七总皂苷，加热熔融作为油相；称取乳化剂，加少量吐温-80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相；将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1小时后超声分散，室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得。

方法三：取三七总皂苷，脂质和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂，微热使溶成有机相；另取乳化剂溶于适量水中，构成水相；将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4小时，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，继续搅拌2小时，即得。

方法四：取三七总皂苷，溶于50％-80％乙醇中；将脂质的一种或多种溶于烷烃，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转薄膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得。

方法五：将三七总皂苷药粉与载体，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相为1∶4(v/v)，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得。

(2)制剂的制备

水针制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支5ml的水针制剂。

输液制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。

粉针制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入水溶性注射用药用辅料，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。

上述制备方法中，其中固体脂质纳米粒中的载体包括脂质、乳化剂、助乳化剂；纳米囊中的载体为聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、壳聚糖、明胶中的一种或几种。

上述制备方法中，其中脂质为脂肪酸甘油酯类(包括三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、单硬脂酸甘油酯)、脂肪酸类(如硬脂酸、棕榈酸)中的一种或几种；乳化剂为磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及磷脂酰胆碱等)；泊洛沙姆、聚山梨醇(吐温-80等)、甘油中的一种或几种为助乳化剂。

上述制备方法中所述的稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮。

上述制备方法中所述的水溶性注射用药用辅料选自甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、乳糖中的一种或几种。

二、质量标准考察

标准依据：《中国药典》2005年版附录XIX E“微囊、微球与脂质体制剂指导原则”中的方法。H-7000型透射电镜仪(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相关光谱仪(英国Malvern公司)；LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-18G型台式高速离心机；5批本发明纳米血塞通注射制剂由广东天之骄药物开发有限公司提供。

1、形态观察及粒径

将5批本发明纳米血塞通注射制剂在透射电镜下进行形态观察，可见呈圆球体，大小较均匀，表面光滑，无粘连。根据光学显微照片测定了500个，平均粒径为55±12nm，最大粒径为84nm，最小粒径为22nm，且粒径分布符合正态分布规律。

2、包封率和载药量测定

采用薄层色谱法进行含量测定。

用下述公式计算包封率和载药量：

包封率(％)＝(投药量-游离药物量)/投药量×100％；

载药量(％)＝(投药量-游离药物量)/纳米药物的重量×100％。

结果：5批本发明纳米血塞通注射制剂中三七总皂苷包封率为86.5-93.4％，载药量为8.0-12.0％。

由上述实验数据可以看出，本发明纳米血塞通注射制剂中三七总皂苷为0.8-1.2重量份、载体为8.8-9.2重量份。

3、稳定性考察

将本发明纳米血塞通注射制剂分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3-5℃)、室温(20-25℃)和37℃(RH75％)的环境中放置，于0、1、2和3月观测纳米药物的外观、大小、再分散性等。

结果：平均粒径和颜色均未见明显变化，不同条件下的药物再分散性保持良好，无聚合现象的发生。结果见表1。

                 表1  稳定性实验结果

放置条件	观测指标	时间(月)
						0	1	2	3
		3-5℃	平均粒径(nm)	55	54					56	57
颜色	白色					白色	白色	白色
			20-25℃	平均粒径(nm)	55				57	55	58
颜色	白色	白色				白色	白色
				37℃(RH75％)	平均粒径(nm)			55	58	56	54
颜色	白色	白色	白色			白色

三、药理实施例

三七总皂苷为市售的同一批，标准符合[许海琴，等。常用天然提取物质量标准参考手册。化学工业出版社，2003，109]三七总皂苷项下的各项规定，其中三七总皂苷的含量为95.2％。阳性对照药血塞通注射液(100mg/支)按照[部颁标准19册]中血塞通注射液项下的制法制备而成，本发明纳米血塞通注射制剂(100mg/支)按照上述的方法制备而成。均由广东天之骄药物开发有限公司提供。

1、脑脊液中药物浓度的测定

取新西兰家兔6只，体重约2.5kg，雌雄不限，分为2组，即血塞通注射液组和本发明纳米血塞通注射制剂组。静脉注射给药，于给药后不同时间抽取0.5ml脑脊液进行实验，取样时间分别为注射药物后的5min、10min、20min、30min、60min，120min。取脑脊液0.25ml加适量溶剂混悬15min后，静置15min，以10000r/min离心1min，取上清液20μl进样，用高效液相色谱法测定。结果见表1。

                        表1  脑脊液中药物浓度的测定

组别	浓度(μg/g)
								5min	10min	20min	30min	60min	90min	120min
	12	0.0380.214	0.0460.262	0.0320.325	0.0200.245	0.0120.212	-0.188								-0.153

注：1为血塞通注射液，2为本发明纳米血塞通注射制剂；“-”表示检测不出。

由以上实验可以看出，本发明纳米血塞通注射制剂通过血脑屏障的药物量比现有血塞通注射制剂有显著提高，说明本发明纳米血塞通注射制剂透过血脑屏障的药物量明显增加，提高了脑组织中的血药浓度，因而会提高治疗效果；实验数据同时表明，本发明纳米血塞通注射制剂在组织中具有很好的缓释作用，因而本发明纳米血塞通注射制剂可以减少给药次数。

2、对大鼠血栓形成的影响

体重300-400g的大白鼠30只，随机分成3组，即对照组、血塞通注射液组、本发明纳米血塞通注射制剂组。每组10只，给药剂量均为500mg/kg，尾静脉注射给药，对照组给予等体积的生理盐水。连续给药5天，末次给药后半小时将大白鼠麻醉(戊巴比妥钠30-40mg/kg，ip)，仰卧位固定，分离气管，插入一塑料套管，并分离右颈总动脉及左颈外静脉，在聚乙烯管的中段放入一根长6厘米的丝线，以肝素生理盐水溶液，充满聚乙烯管，当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，由聚乙烯管准确的注入肝素抗凝，然后再将聚乙烯管的另一端插入右颈总动脉，打开动脉夹，血液从右颈总动脉流至聚乙烯管，返回左颈外静脉，开放血流15分钟后断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去丝线重量即得血栓重量。将空白组和另外三组给药组的动物血栓湿重进行记录，进行计算。结果见表3。

        表3  对血栓形成的影响(X)

组别

鼠只(只)

血栓湿重(mg)

对照组	10	1.85
			血塞通注射液组	10	1.16**
纳米血塞通注射制剂组	10	0.98**#

注：与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；与血塞通注射液组比较：#P＜0.05。

3、对小鼠缺氧耐力的影响实验

取健康昆明种小鼠30只，体重20-24g。即对照组、血塞通注射液组、本发明纳米血塞通注射制剂组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。给药剂量均为600mg/kg，尾静脉注射给药，对照组给生理盐水，1次/天，连续5天。于末次给药后0.5小时，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表4。

           表4  对小鼠常压缺氧的影响(X±S)

组别	鼠数(只)	平均存活时间(min)
			对照组	10	16.58±1.58
血塞通注射液组	10	23.24±2.14**
			纳米血塞通注射制剂组	10	26.66±2.38**#

注：与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；与血塞通注射液组比较：#P＜0.05。

4、对小鼠心肌缺氧的保护作用实验

取健康昆明种小鼠30只，体重18-22g，即对照组、血塞通注射液组、本发明纳米血塞通注射制剂组。每组雌雄各半，分笼饲养。给药剂量均为600mg/kg，尾静脉注射给药，对照组给生理盐水，1次/天，连续5天。于末次给药后半小时用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分离气管，以动脉夹夹闭气管，用心电仪观察心电，并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表5。

           表5  对小鼠心肌缺氧的影响(X±S)

组别	鼠数(只)	平均存活时间(min)
			对照组	10	5.36±0.76
血塞通注射液组	10	10.55±0.64**
			纳米血塞通注射制剂组	10	12.24±0.70**#

注：与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；与血塞通注射液组比较：#P＜0.05。

由上述实验可以看出，本发明纳米血塞通注射制剂比现有血塞通注射液有更好的药理作用。

四、安全性评价

1、血管刺激性考察

取健康大耳家兔3只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射本发明纳米血塞通注射制剂，于另一侧对应部位注射同一体积的等渗葡萄糖水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。

结果：试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明：给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。

2、溶血毒性考察

2％红细胞混悬液的制备：取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。

试验方法：取试管6支，按下表中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的药液(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。

                     表6  溶血试验设计

试管编号	2％红细胞混悬液(ml)	生理盐水溶液(ml)	药液(ml)
				123456	2.52.52.52.52.52.5	2.02.12.22.32.42.5	0.50.40.30.20.10

结果：以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本品不溶血，安全性好。

3、急性毒性实验

取健康小鼠40只，体重18-22g，，雌雄各半。分为血塞通注射液组、本发明纳米血塞通注射制剂组，尾静脉给药，给药剂量按照人给药剂量的50倍，按照体表面积换算成小鼠给药剂量，每天给药1次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，实验结果见表7。

                    表7  小鼠急性毒性实验

组别	动物数(只)	死亡数(只)	死亡率(％)
				血塞通注射液组纳米血塞通注射制剂组	2020	34	1520

通过上述实验表明，本发明纳米血塞通注射制剂具有很好的安全性。

五、制备实施例

实施例1

将三七总皂苷药粉1kg、三硬脂酸甘油酯3kg和大豆卵磷脂2kg，在通氮气条件下加热至80℃，得到组分A；将甘油2.5kg和poloxamer188 2.5kg的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在80℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得主药混悬液；

实施例2

将三七总皂苷药粉1kg、单硬脂酸甘油酯5kg和蛋黄卵磷脂1kg，在通氮气条件下加热至85℃，得到组分A；将甘油0.5kg和poloxamer188 1.0kg的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在85℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得主药混悬液；

实施例3

将三七总皂苷药粉1kg、硬脂酸2kg和磷脂酰胆碱3kg，在通氮气条件下加热至82℃，得到组分A；将甘油2kg和poloxamer188 2kg的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在82℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得主药混悬液；

实施例4

将三七总皂苷药粉1kg、三月桂酸甘油酯4kg和蛋黄卵磷脂2kg，在通氮气条件下加热至84℃，得到组分A；将甘油1.5kg和poloxamer188 0.5kg的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在84℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得主药混悬液；

实施例5

将三七总皂苷药粉1kg与聚氰基丙烯酸烷酯5kg、聚乳酸5kg，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相为1∶4(v/v)，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得主药混悬液。

实施例6

将三七总皂苷药粉1kg与聚丙交酯—乙交酯8kg，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相为1∶4(v/v)，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得主药混悬液。

实施例7

将三七总皂苷药粉1kg与壳聚糖6kg、明胶3kg，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相为1∶4(v/v)，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得主药混悬液。

实施例8

将三七总皂苷药粉1kg与聚乳酸2kg、聚丙交酯—乙交酯5kg，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相为1∶4(v/v)，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得主药混悬液。

实施例9

称取Witepsol H35 6kg加入三七总皂苷1kg，加热熔融作为油相；称取大豆卵磷脂3kg，加少量吐温-80 1kg，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相；再将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1小时后超声分散，室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得主药混悬液。

实施例10

取三七总皂苷1kg，三月桂酸甘油酯6kg和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入蛋黄卵磷脂2kg，微热使溶成有机相；另取蛋黄卵磷脂1kg溶于适量水中，构成水相；将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4小时，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，继续搅拌2小时，即得主药混悬液。

实施例11

取三七总皂苷1kg，溶于50％乙醇中；将硬脂酸10kg溶于正己烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转薄膜蒸发仪，控制压力0.1个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得主药混悬液。

实施例12

取三七总皂苷1kg，溶于80％乙醇中；将三月桂酸甘油酯8kg溶于正己烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转薄膜蒸发仪，控制压力0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得主药混悬液。

实施例13

取三七总皂苷1kg，溶于60％乙醇中；将单硬脂酸甘油酯9kg溶于正己烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转薄膜蒸发仪，控制压力0.15个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得主药混悬液。

实施例14

将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂聚乙烯吡咯烷酮，调pH值为5.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支5ml的水针制剂10000支。

实施例15

将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂聚乙烯吡咯烷酮，加入氯化钠调等渗，调pH值为7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂10000瓶。

实施例16

将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入甘露醇，调pH值为6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂10000支。

实施例17

将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入右旋糖苷，调pH值为5.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂10000支。

实施例18

将上述主药混悬液加入适量注射用水和聚乙烯吡咯烷酮，调pH值为6.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支5ml的水针制剂10000支。

实施例19

将上述主药混悬液加入适量注射用水和聚乙烯吡咯烷酮，加入葡萄糖调等渗，调pH值为5.8，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂10000瓶。

实施例20

将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入果糖，调pH值为6.2，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂10000支。

实施例21

将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入葡聚糖、乳糖，调pH值为6.7，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂10000支。

Claims (3)

1、一种纳米血塞通注射制剂，其特征在于它是将三七总皂苷配以载体制成纳米级的主药混悬液得到的注射制剂，其中三七总皂苷0.8-1.2重量份、载体8.8-9.2重量份。

2、根据权利要求1所述的纳米血塞通注射制剂，其特征在于所述的纳米级为22nm-84nm。

3、根据权利要求1或2所述的纳米血塞通注射制剂，其特征在于，其制备方法为：

(1)主药混悬液是用下述五种方法中的任何一种制备而成：

处方为：三七总皂苷1重量份、载体7-10重量份；

方法一：将三七总皂苷药粉、脂质和乳化剂，在通氮气条件下加热至80±5℃，得到组分A；将甘油和poloxamer188的水溶液，加热至与组分A相同的温度，得到组分B；在搅拌条件下将组分A加入到组分B中，制成粗乳，在80±5℃通氮气条件下用高压乳匀机载在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却，即得。

方法二：称取脂质加入三七总皂苷，加热熔融作为油相；称取乳化剂，加少量吐温-80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相；将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1小时后超声分散，室温，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得。

方法三：取三七总皂苷，脂质和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入乳化剂，微热使溶成有机相；另取乳化剂溶于适量水中，构成水相；将有机相在1000r/min搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4小时，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下1000r/min快速溶解于0-2℃的水相中，继续搅拌2小时，即得。

方法四：取三七总皂苷，溶于50％-80％乙醇中；将脂质的一种或多种溶于烷烃，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转薄膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得。

方法五：将三七总皂苷药粉与载体，同无水乙醇混合，摇匀，得油相；pH值为6的0.5％Pluronic F68的水溶液，为水相；在将两相保持温度为20℃，按油相∶水相体积比为1∶4，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用9-15μm玻砂漏斗过滤，即得。

(2)制剂的制备：

水针制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支5ml的水针制剂；

输液制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水和稳定剂，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂；

粉针制剂的制备：将上述主药混悬液加入适量注射用水，再加入水溶性注射用药用辅料，调pH值为5.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。